Name: effects of taste signaling protein abolishment on gut inflammation in an inflammatory bowel disease mouse model
Uploaded: 2018-11-09T15:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Effects of Taste Signaling Protein Abolishment on Gut Inflammation in an Inflammatory Bowel Disease Mouse Model at JoVE.com

يتم دعم هذا العمل من المنح المقدمة من الوطنية العلوم الطبيعية مؤسسة من الصين (81671016 و 31471008 و 31661143030)، والمعاهد الوطنية للصحة (DC010012، DC015819) ومؤسسة Siyuan.

جميع التجارب التي أجريت على الفئران تم استعراضها والموافقة عليها برعاية الحيوان المؤسسية واستخدام اللجان في جامعة تشجيانغ. ينصح بارتداء معدات الوقاية الشخصية المناسبة قبل تنفيذ هذا البروتوكول.
1-إعداد الفئران ومفاجآت صيف دبي
<ol><li>الاحتفاظ خروج المغلوب الفئران (α-جوستدوس?...

<ol>
	<li>Kaser, A., Zeissig, S., Blumberg, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammatory+Bowel+Disease.">Inflammatory Bowel Disease.</a> Annual Review of Immunology. 28 (1), 573-621 (2010).</li><li>Benoit, C., D, A. J., Madhu, M., Matam, V. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dextran+Sulfate+Sodium+(DSS)-Induced+Colitis+in+Mice.">Dextran Sulfate Sodium (DSS)-Induced Colitis in Mice.</a> Current Protocols in Immunology. 104 (1), 11-14 (2014).</li><li>Chassaing, B., Darfeuille-Michaud, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Commensal+Microbiota+and+Enteropathogens+in+the+Pathogenesis+of+Inflammatory+Bowel+Diseases.">The Commensal Microbiota and Enteropathogens in the Pathogenesis of Inflammatory Bowel Diseases.</a> Gastroenterology. 140 (6), 1720-1728 (2011).</li><li>Chandrashekar, J., Hoon, M. A., Ryba, N. J. P., Zuker, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+receptors+and+cells+for+mammalian+taste.">The receptors and cells for mammalian taste.</a> Nature. 444 (7117), 288-294 (2006).</li><li>Gilbertson, T. A., Khan, N. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+signaling+mechanisms+of+oro-gustatory+detection+of+dietary+fat:+Advances+and+challenges.">Cell signaling mechanisms of oro-gustatory detection of dietary fat: Advances and challenges.</a> Progress in Lipid Research. 53, 82-92 (2014).</li><li>Huang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=G&#947;13+colocalizes+with+gustducin+in+taste+receptor+cells+and+mediates+IP3+responses+to+bitter+denatonium.">G&#947;13 colocalizes with gustducin in taste receptor cells and mediates IP3 responses to bitter denatonium.</a> Nature Neuroscience. 2 (12), 1055-1062 (1999).</li><li>Perez, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+transient+receptor+potential+channel+expressed+in+taste+receptor+cells.">A transient receptor potential channel expressed in taste receptor cells.</a> Nature Neuroscience. 5 (11), 1169-1176 (2002).</li><li>Shigemura, N., Ninomiya, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+Advances+in+Molecular+Mechanisms+of+Taste+Signaling+and+Modifying.">Recent Advances in Molecular Mechanisms of Taste Signaling and Modifying.</a> International Review of Cell and Molecular Biology. 323, 71-106 (2016).</li><li>Bezen&#231;on, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+intestinal+cells+expressing+Trpm5+are+mostly+brush+cells+and+express+markers+of+neuronal+and+inflammatory+cells.">Murine intestinal cells expressing Trpm5 are mostly brush cells and express markers of neuronal and inflammatory cells.</a> Journal of Comparative Neurology. 509 (5), 514-525 (2008).</li><li>Lu, P., Zhang, C. -. H., Lifshitz, L. M., ZhuGe, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extraoral+bitter+taste+receptors+in+health+and+disease.">Extraoral bitter taste receptors in health and disease.</a> The Journal of General Physiology. 149 (2), 181-197 (2017).</li><li>Wirtz, S., Neufert, C., Weigmann, B., Neurath, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemically+induced+mouse+models+of+intestinal+inflammation.">Chemically induced mouse models of intestinal inflammation.</a> Nature Protocols. 2, 541-546 (2007).</li><li>Chassaing, B., Aitken, J. D., Malleshappa, M., Vijay-Kumar, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dextran+sulfate+sodium+(DSS)-induced+colitis+in+mice.">Dextran sulfate sodium (DSS)-induced colitis in mice.</a> Current Protocols in Immunology. 104 (25), (2014).</li><li>Feng, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aggravated+gut+inflammation+in+mice+lacking+the+taste+signaling+protein+&#945;-gustducin.">Aggravated gut inflammation in mice lacking the taste signaling protein &#945;-gustducin.</a> Brain, Behavior, and Immunity. 71, 23-27 (2018).</li><li>Feng, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+cells+of+the+human+peripheral+taste+system:+Dominant+dendritic+cells+and+CD4+T+cells.">Immune cells of the human peripheral taste system: Dominant dendritic cells and CD4 T cells.</a> Brain, Behavior, and Immunity. 23 (6), 760-766 (2009).</li><li>Livak, K. J., Schmittgen, T. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+relative+gene+expression+data+using+real-time+quantitative+PCR+and+the+2(-Delta+Delta+C(T))+Method.">Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and the 2(-Delta Delta C(T)) Method.</a> Methods. 25 (4), 402-408 (2001).</li><li>Kim, J. J., Shajib, M. S., Manocha, M. M., Khan, W. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Investigating+Intestinal+Inflammation+in+DSS-induced+Model+of+IBD.">Investigating Intestinal Inflammation in DSS-induced Model of IBD.</a> Journal of Visualized Experiments. (60), 3678 (2012).</li><li>Axelsson, L. -. G., Landstr&#246;m, E., Goldschmidt, T. J., Gr&#246;nberg, A., Bylund-Fellenius, A. -. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dextran+sulfate+sodium+(DSS)+induced+experimental+colitis+in+immunodeficient+mice:+Effects+in+CD4+-cell+depleted,+athymic+and+NK-cell+depleted+SCID+mice.">Dextran sulfate sodium (DSS) induced experimental colitis in immunodeficient mice: Effects in CD4+-cell depleted, athymic and NK-cell depleted SCID mice.</a> Inflammation Research. 45 (4), 181-191 (1996).</li><li>Egger, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterisation+of+Acute+Murine+Dextran+Sodium+Sulphate+Colitis:+Cytokine+Profile+and+Dose+Dependency.">Characterisation of Acute Murine Dextran Sodium Sulphate Colitis: Cytokine Profile and Dose Dependency.</a> Digestion. 62 (4), 240-248 (2000).</li><li>Whittem, C. G., Williams, A. D., Williams, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+Colitis+Modeling+using+Dextran+Sulfate+Sodium+(DSS).">Murine Colitis Modeling using Dextran Sulfate Sodium (DSS).</a> Journal of Visualized Experiments. (35), 1652 (2010).</li><li>Howitt, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tuft+cells,+taste-chemosensory+cells,+orchestrate+parasite+type+2+immunity+in+the+gut.">Tuft cells, taste-chemosensory cells, orchestrate parasite type 2 immunity in the gut.</a> Science. 351 (6279), 1329-1333 (2016).</li></ol>

ويمكن استخدام هذا الأسلوب إلى كوانتيتيفيلي تحديد أثر طفرات الجينات تذوق محددة على التهاب في طراز ماوس المستحثة بمفاجآت بنك التنمية بين الأمريكتين. للاستفادة الكاملة، التعريف الأمثل لبنك التنمية بين الأمريكتين خطوة أساسية. تطوير التهاب القولون يتأثر بالعديد من العوامل، بما في ذلك سلالة ...

الأشكال الرئيسية اثنين من مرض التهاب الأمعاء (بنك التنمية بين الأمريكتين) وداء كرون (CD)، والتهاب القولون التقرحي (UC) تتميز بالأمراض المزمنة التحريضية تحويلات أو التدريجي من الأمعاء مع المسببات المتعددة العوامل1،2 . يعتمد تطوير بنك التنمية بين الأمريكتين على الوراثية وكذلك بعض العوامل البيئية مثل النظام الغذائي، استخدام المضادات الحيوية، والأهم من ذلك الالتهابات المسببة للمرض. ومع ذلك، لا تزال غير واضحة بالمسببات والآليات الجزيئية التنظيمية الأساسية لبنك التنمية بين الأمريكتين. ومن ثم، تم شيدت المستحث كيميائيا العديد من النماذج الحيوانية بنك التنمية بين الأمريكتين وتطبيقها لتحدد المرضية والآليات التنظيمية، وتقييم مدى فعالية العلاجات البشرية3.
مستقبلات الذوق ز إلى جانب البروتين مستقبلات (جبكرس) وتصنف إلى نوعين رئيسيين: النوع الأول (T1Rs)، والنوع الثاني (T2Rs) الذي كشف الحلو، وقلبي، ومركبات المريرة. طعم إشارات الشلالات تبدأ بربط تاستانت إلى T1Rs أو T2Rs، تفعيل هيتيروتريميريك ز البروتينات تتألف من α-جوستدوسين وديمر Gβγ وتؤدي إلى الإفراج عن مفارز Gβγ. مجموعة Gβγ يحفز بدوره المستجيب المصب إنزيم phospholipase ج-β2 (PLC-β2). تنشيط المجلس التشريعي الفلسطيني-β2 ثم هيدروليزيس فوسفاتيديلينوسيتول-4، 5-بيسفوسفاتي في اثنين من السعاة الثانوي داخل الخلايا [اينوزيتول-1,4,5-تريسفوسفاتي (IP3) و diacylglycerol]، والملكية الفكرية3 يربط إلى وفتح لها IP مستقبلات قناة3 R3، إطلاق أيونات الكالسيوم من هيولى. وهذا يؤدي في النهاية إلى فتح مستقبلات عابر المحتملة أيون قناة Trpm5 وإطلاق سراح ATP العصبي على أعصاب تذوق4،،من56،7. حتى الآن، مسارات إشارات من اﻷذواق المالحة وتعكر مختلفة ومستقلة من الحلو وقلبي والأذواق المريرة8. وبالإضافة إلى ذلك، مكونات طعم جبكرس والبروتينات المتلقين للمعلومات موجودة في الأنسجة خارج الفم المختلفة. أشارت الدراسات التي أجريت مؤخرا إلى أن α-جوستدوسين، يتم العثور على المكون الرئيسي للذوق إشارة، يعبر عنه في مخاطية الأمعاء. إجراء المزيد من الدراسات ضرورية لفهم وظائف طعم هذه الإشارات المكونات في الأنسجة خارج الفم9،10.
يتم استخدام الأسلوب الموصوفة هنا لتوصيف وظائف البروتينات مما يشير إلى تذوق المعرب عنه في الأنسجة خارج الفم. أن نجمع بين خط المعدلة وراثيا ماوس المتقدمة لتحديد الشلالات الإشارات في براعم الذوق مع نموذج القولون المستحث كيميائيا. إلى حد كبير نظراً لبساطته الإجرائية والتشابه المرضية لالتهاب القولون التقرحي البشرية، ديكستران كبريتات الصوديوم (DSS)-المستحث نموذج بنك التنمية بين الأمريكتين قد استخدمت على نطاق واسع بين مختلف نماذج القولون المستحث كيميائيا11. في هذه الدراسة، استخدمنا α-جوستدوسين-ناقص الفئران كخط ماوس ممثل للكشف عن وظائف جديدة من α-جوستدوسين في القناة الهضمية حصانة المخاطي والتهاب 1) تحليل التغييرات الشكلية في الأنسجة و 2) فحص الاختلافات في التعبير عن السيتوكينات المتصلة بالتهاب في القولون. يمكن استخدام هذا الأسلوب كمياً ونوعيا تحديد مساهمات البروتينات مما يشير إلى تذوق (وغيرها من البروتينات التي أعرب عنها في القناة الهضمية) إلى تلف الأنسجة والتهاب الأمعاء، عند خطوط الماوس المعدلة وراثيا على جينات وتتوفر المصلحة. مزايا هذا الأسلوب هي تمكين المستخدمين من الحصول على بيانات متكاملة الناجمة عن تصرفات DSS الكيميائية ونقص الجينات للفائدة. يمكن زيادة تحسين هذا الأسلوب زيادة حساسيتها، وتكشف عن بعض التغييرات الطفيفة المعوية المستويات الخلوية والجزيئية.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:559px;" width="558">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:269px;">Antibody</td>
			<td style="width:139px;"></td>
			<td style="width:87px;"></td>
			<td style="width:64px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CD45</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>550539</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CD3</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>555273</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">B220</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>550286</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CD11b</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>550282</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ly6G</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>551459</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Reagent</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dextran Sulfate Sodium Salt (DSS)</td>
			<td>MP Biomedicals</td>
			<td>2160110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Streptavidin-HRP complex</td>
			<td>BD Pharmingen</td>
			<td>551011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">H&#38;E Staining Kit</td>
			<td>BBI Life Sciences</td>
			<td>E607318</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Phosphate Buffered Saline (PBS)</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>B548117</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">FastStart Universal SYBR Green Master(ROX)</td>
			<td>Roche</td>
			<td>4913850001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">MMLV Reverse Transcriptase, GPR</td>
			<td>Clontech,TaKaRa</td>
			<td>639574</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">TaKaRa MiniBEST Universal RNA Extraction Kit&#160;</td>
			<td>TaKaRa</td>
			<td>9767</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">BD 10 ml Syringe</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>309604</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Instruments and equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">balance</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">scissors&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">forceps</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">centrifuge</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">qPCR machine</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">staining jars</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Software</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Imag-Pro Plus&#160;</td>
			<td colspan="2">Media Cybernetics, Inc.&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

effects of taste signaling protein abolishment on gut inflammation in an inflammatory bowel disease mouse model

مرض التهاب الأمعاء (بنك التنمية بين الأمريكتين) هو واحد من الاضطرابات المعوية المتصلة بجهاز المناعة، بما في ذلك التهاب القولون التقرحي وداء كرون، الذي يؤثر على نوعية حياة الملايين من الناس في جميع أنحاء العالم. وتشمل أعراض بنك التنمية بين الأمريكتين الأم في البطن وإسهال ونزيف المستقيم، التي قد تنجم عن التفاعلات بين الحجمية القناة الهضمية والمكونات الغذائية، والخلايا الظهارية المعوية، والخلايا المناعية. أنها ذات أهمية خاصة لتقييم كيفية تأثير كل الجينات الرئيسية المعرب عنها في الخلايا الظهارية والمناعة المعوية التهاب في القولون. ز مستقبلات الذوق إلى جانب البروتين، بما في ذلك ز البروتين الوحيدات α-جوستدوسين وغيرها من البروتينات إرسال الإشارات، وقد تم العثور عليها في الأمعاء. هنا، نحن نستخدم α-جوستدوسين كممثل ووصف ديكستران كبريتات صوديوم (DSS)-التي يسببها نموذج بنك التنمية بين الأمريكتين لتقييم أثر طفرات الجينات تطرب على حصانة المخاطي الأمعاء والتهاب. هذا الأسلوب يجمع بين تكنولوجيا الجينات خروج المغلوب مع نموذج بنك التنمية بين الأمريكتين المستحث كيميائيا، وهكذا يمكن تطبيقها لتقييم نتائج إبطال الجين تطرب، فضلا عن الجينات الأخرى التي قد تكون اكسبيريت أو تثبيط الاستجابة المناعية الناجمة عن مفاجآت في القولون. وتدار الفئران متحولة مع إدارة السلامة والأمن لفترة زمنية معينة ترصد وتسجل خلالها وزن الجسم، والبراز، ونزيف المستقيم. في تيميبوينتس مختلفة أثناء الإدارة، هي euthanized بعض الفئران، ثم يتم قياس الأحجام والأوزان الطحال والفواصل وأنسجة القناة الهضمية وتم جمعها وتجهيزها لغذائها وتحليل التعبير الجيني. تظهر البيانات أن النتائج خروج المغلوب α-جوستدوسين في فقدان الوزن الزائد والإسهال والنزيف المعوي، وتلف الأنسجة والتهاب مقابل الفئران البرية من نوع. نظراً لشدة التهاب المستحث يتأثر بسلالات الماوس والبيئة السكنية، والنظام الغذائي، الاستغلال الأمثل لمفاجآت صيف دبي مدة التركيز والإدارة في تجربة رائدة مهم بشكل خاص. عن طريق ضبط هذه العوامل، يمكن تطبيق هذا الأسلوب لتقييم الآثار التحريضية المضادة والمحترفين على حد سواء.

أنشئ إجراء بنك التنمية بين الأمريكتين المستحثة بمفاجآت صيف دبي بإدارة 3% مفاجآت في مياه الشرب إلى α-جوستدوسين-خروج المغلوب (كو) والفئران البرية من نوع (وزن). مقارنة بوزن الفئران، أظهرت الفئران خروج المغلوب القولون الحاد أكثر مع فقدان الوزن المفرط، والإسهال والنزيف المعوي ...

Watch this Scientific Journal Video about Effects of Taste Signaling Protein Abolishment on Gut Inflammation in an Inflammatory Bowel Disease Mouse Model at JoVE.com

Effects of Taste Signaling Protein Abolishment on Gut Inflammation in an Inflammatory Bowel Disease Mouse Model

نقدم هنا بروتوكولا للتحقيق أثر إبطال الجينات المتعلقة جوستيشن على الاستجابات المناعية في ديكستران كبريتات صوديوم (DSS)-التي يسببها التهاب الأمعاء المرض (بنك التنمية بين الأمريكتين) طراز الماوس.

آثار الذوق مما يشير إلى إلغاء البروتين على التهاب الأمعاء في طراز ماوس مرض التهاب الأمعاء

Inflammatory bowel disease (IBD) is one of the immune-related gastrointestinal disorders, including ulcerative colitis and Crohn's disease, that affects ...

يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال التهابات الحيوية حول التهاب القولون التقرحي ومرض كرون. والميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنه يمكن استخدامها لتقييم الآثار المضادة الأولى والضميرية للبروتينات الإشارات. الآثار المترتبة على هذه التقنية يمتد مسح الغاز في التقدم الجديد والالتهاب.على الرغم من أن هذه الطريقة يمكن أن توفر رؤى في التأثير الوراثي على التهاب الأمعاء. ويمكن أيضا أن تطبق على عوامل أخرى مثل الوجبات الغذائية والميكروبيوم. عموما، سوف الأفراد الجدد لهذا الفصل الدراسي النضال لأن معالجة مرض ندبا هو صعب.المرئية مظاهرة من هذه الطريقة أمر بالغ الأهمية كما تشريح وخطوات إعداد الأنسجة من الصعب تعلم لأن الغموض وهياكل أنسجة الخلية قد تتغير. للحث على كبريتات الدكستران، أو التهاب القولون DDS، استبدال مياه الشرب العادية مع حل DSS 3٪، إضافة libidium لمدة سبعة أيام. قياس وزن الجسم لكل من الماوس، واستهلاك حل DSS، وإنتاج البراز يوميا.في نهاية العلاج لمدة سبعة أيام، ضع الفأر في موضعه supine واستخدم مقص صغيرًا لإجراء شق متوسط بطول ثلاثة سنتيمترات في البطن. حصاد الطحال وقياس حجمه. ثم استخدام ملقط لرفع القولون للسماح لها أن تكون منفصلة عن mesentery المحيطة بها.واستخراج القولون كله حتى cecum والمستقيم مرئية. احول النسيج عند هامش القولون. وعميق داخل الحوض لتحرير القولون القريب والهد، على التوالي.قياس وتسجيل طول القولون المعزول. واستخدم حقنة 10 ملليلتر مجهزة بإبرة غافاج لطرد القولون بـ 10 ملليلترات من الثلج البارد PBS لإزالة البراز والدم حتى تصبح الإضاءة واضحة. لتحديد النسيج، تقسيم عينات الأنسجة إلى أقسام متساوية الحجم في نطاقات، متوسطة، وقاطعة.وأصلح الأنسجة في 4٪ شبه شكلي بين عشية وضحاها عند 4 درجات مئوية. للهماتروسيلين وosin تلطيخ أنسجة القولون المعزولة، في صباح اليوم التالي، غمر قطع الأنسجة في 30٪ السكروز وبرنامج تلفزيوني بين عشية وضحاها في أنابيب 15 ملليلتر الفردية لحماية التبريد من العينات. في اليوم التالي، تضمين الأنسجة في درجة حرارة القطع المثلى أو مركب OCT.وتبريد الأنسجة في ناقص 20 درجة مئوية حتى تصلب أكتوبر. ضع كتل OCT في التبريد وتعيين الطلب السماك إلى 12 ميكرومتر. ثم شريحة وجمع 12 micrometer سميكة المقاطع المجمدة على الشرائح المجهر الزجاج.عندما تم تقسيم جميع الأنسجة، وتسخين الشرائح في 65 درجة مئوية على لوحة ساخنة لمدة 20 دقيقة. وغسل المقاطع ساخنة لفترة وجيزة في الماء المقطر قبل تلطيخ مع حل تلطيخ الهماوكسيلين لمدة خمس دقائق. إزالة حل الهماوكسيلين الزائدة وتشغيلها في مياه الصنبور لمدة خمس دقائق.وتفرق الأقسام مع 0.5٪ حمض الهيدروكلوريك في الإيثانول لمدة 30 ثانية، تليها شطف دقيقة واحدة تحت مياه الصنبور الجارية. بعد ذلك، قم بغسل العينات لمدة دقيقة واحدة في برنامج تلفزيوني. تليها غسل خمس دقائق أخرى تحت مياه الصنبور الجارية.في نهاية الغسيل، غمر الأنسجة في سلسلة الإيثانول التصاعدي لمدة 10 ثوان في الغمر. تليها مكافحة الاحتواء في إيوسين لمدة دقيقتين. للجفاف من العينات، غمر الشرائح في 95٪ الإيثانول واثنين من التغييرات من 100٪ الإيثانول لمدة خمس دقائق لكل غمر.تليها المقاصة مع اثنين أو خمس تغييرات دقيقة في إكسيلين. ثم يسجل تلف الأنسجة إلى القولون القريب والمتوسط والعصى لكل مجموعة تجريبية. للتحليل الكيميائي المناعي ، بعد تسخين الأقسام لمدة 20 دقيقة على اللوحة الساخنة ، قم بغسل الشرائح ثلاث مرات في PBS لمدة 10 دقائق لكل غسيل.والقضاء على بيروكسيديز الذاتية مع حضانة بيروكسيد الهيدروجين 3 دقيقة 3٪. في نهاية الحضانة، وغسل العينات ثلاث مرات في برنامج تلفزيوني كما هو موضح ومنع أي ربط غير محددة مع عازلة حظر لمدة ساعة واحدة على الأقل في درجة حرارة الغرفة. ثم، استبدال العازلة حظر مع كوكتيل الأجسام المضادة الأساسية من الفائدة.لاحتضان بين عشية وضحاها في 4 درجات مئوية. في صباح اليوم التالي، الطامح محلول الأجسام المضادة الأولية الزائدة وغسل الشرائح ثلاث مرات في برنامج تلفزيوني. بعد الغسيل الأخير، احتضان الشرائح مع كوكتيل الأجسام المضادة الثانوية ذات الحيوية المناسبة.تليها وضع العلامات مع streptavidin مجمع بيروكسيديز الفجل في درجة حرارة الغرفة. لتصور الخلايا النشطة المناعية، قم بتسمية العينات باستخدام الداب حتى يتطور لون بني فاتح أو داكن. و counterstain الأقسام مع الهماوكسيلين و 0.3٪ الأمونيا المخففة.عندما تجفف الشرائح، استخدم مجهرًا خفيفًا للحصول على صور حقل ساطعة لأقسام الأنسجة تحت التكبير 10x. واستخدام برنامج معالجة الصور لتحديد وقياس عدد سكان الخلايا المناعية ملحوظ في كل من ظهارة وبربريا لامينا. لتحليل التعبير الجيني في DSS معالجة القولون، استخراج RNA من ناقص 80 درجة مئوية عينات الأنسجة القولونية المذاب وفقا لبروتوكولات استخراج الحمض النووي الريبي القياسية.وخلط ميكروغرام واحد مع الجيش الملكي النيبالي الكلي مع 2.5 ميكرولترات من 20 ملليمولار oligo deoxythymidine 12 من خلال 18 التمهيدية وميكر واحد من مولولي ميرين سرطان الدم فيروس عكس النسخ العكسي. بعد حضانة 60 دقيقة في 42 درجة مئوية، مزيج ميكرولتر واحد من cDNA مع 0.5٪ microliters من الابايات PCR الكمية المناسبة إلى الأمام وعكس لcytokines من الفائدة و 2x صبغة خضراء فلورية. ثم تشغيل PCR الكمية تحت المعلمات المناسبة وحساب التعبير الجيني النسبي وفقا للبروتوكولات القياسية.بالمقارنة مع الفئران wildtype، ألفا gustducin الفئران خروج المغلوب المعرض التهاب القولون أكثر شدة مع فقدان الوزن المفرط والإسهال والنزيف المعوي. بعد سبعة أيام من إدارة DSS ، يكشف التحليل النسيجي لأقسام القولون عن تلف الأنسجة الأكثر تفاقمًا داخل القولون القريب والمتوسط والهدّي للفئران خروج المغلوب ، مقارنة بنظرائهم من النوع البري. يؤدي هذا التنشيط المناعي المفرط إلى تحريض التهاب القولون مع تسلل قوي للخلايا الالتهابية المختلفة في القولون الحيواني بالضربة القاضية كما لوحظ من خلال التحليل المناعي الكيميائي.علاوة على ذلك، التحليل الكمي PCR يوضح مستويات أعلى من TNF ألفا وferon غاما التعبير ولكن التعبير أقل من IL-5، 10، و 13، في خروج المغلوب مقارنة مع القولون الماوس wildtype مع عدم وجود فرق في بيتا TGF تعبير واحد لوحظ. أثناء محاولة هذا الإجراء, من المهم أن نتذكر لتحسين textorous جرعة الصوديوم southvater ومدة مظاهرة. إعادة توجيه هذا الإجراء، يمكن تنفيذ طريقة أخرى مثل الحصول على الثقافة من أجل فهم أسئلة إضافية مثل تأثير التهاب في أصل الأنسجة المعوية.بعد تطورها ، تمهد هذه التقنية طريقة للباحثين في مجال التهاب الأمعاء لاستكشاف مساهمات الطفرات الجينية في شدة تآكل البيوديس وغيرها من الفقاريات. لا ننسى أن العمل مع أنسجة الأمعاء المرض ومحتوياته يمكن أن تكون خطرة للغاية، وتداعيات مثل ارتداء الأشياء التي هي مناسبة، والحماية الشخصية الدائمة ينبغي دائما أن تؤخذ أثناء تنفيذ هذا الإجراء.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Trichuris muris Infection: A Model of Type 2 Immunity and Inflammation in the Gut

Trichuris muris Infection: A Model of Type 2 Immunity and Inflammation in the Gut

المسلكة الفأرية العدوى : نموذج من الحصانة من النوع 2 والتهاب في القناة الهضمية

Trichuris muris is a natural pathogen of mice and is biologically and antigenically similar to species of Trichuris that 
infect humans and livestock1. ...

Differentiating Functional Roles of Gene Expression from Immune and Non-immune Cells in Mouse Colitis by Bone Marrow Transplantation

التفريق الأدوار الوظيفية في التعبير الجيني من الخلايا المناعية وغير المناعية في التهاب القولون الماوس عن طريق زرع نخاع العظم

To understand the role of a gene in the development of colitis, we compared the responses of wild-type mice and gene-of-interest deficient knockout mice ...

A Mouse Model for Pathogen-induced Chronic Inflammation at Local and Systemic Sites

نموذج الفأر لالتهاب الناجم عن مسببات الأمراض المزمنة في مواقع المحلية والجهازية

Chronic inflammation is a major driver of pathological tissue damage and a unifying characteristic of many chronic diseases in humans including ...

Co-immunoprecipitation of the Mouse Mx1 Protein with the Influenza A Virus Nucleoprotein

شارك في مناعي من البروتين ماوس MX1 مع الأنفلونزا من الفيروسات البروتين النووي

Studying the interaction between proteins is key in understanding their function(s). A very powerful method that is frequently used to study interactions ...

An Optimized Method for Isolating and Expanding Invariant Natural Killer T Cells from Mouse Spleen

والطريقة الأمثل لعزل وتوسيع قسما ثابتا الطبيعية الخلايا التائية القاتلة من الماوس الطحال

The ability to rapidly secrete cytokines upon stimulation is a functional characteristic of the invariant natural killer T (iNKT) cell lineage. iNKT cells ...

Cortical Actin Flow in T Cells Quantified by Spatio-temporal Image Correlation Spectroscopy of Structured Illumination Microscopy Data

القشرية أكتين تدفق في خلايا T كميا بواسطة المكانية والزمانية صورة الارتباط الطيفي للهيكلة الإضاءة المجهر البيانات

Filamentous-actin plays a crucial role in a majority of cell processes including motility and, in immune cells, the formation of a key cell-cell ...

Establishment of a High-throughput Setup for Screening Small Molecules That Modulate c-di-GMP Signaling in Pseudomonas aeruginosa

Establishment of a High-throughput Setup for Screening Small Molecules That Modulate c-di-GMP Signaling in Pseudomonas aeruginosa

إنشاء إعداد إنتاجية عالية لفحص الجزيئات الصغيرة التي تعدل ج-دي-GMP في اشارة<em&gt; الزائفة الزنجارية</em

Bacterial resistance to traditional antibiotics has driven research attempts to identify new drug targets in recently discovered regulatory pathways. ...

Visualizing the Effects of Sputum on Biofilm Development Using a Chambered Coverglass Model

تصور آثار البلغم للتنمية بيوفيلم باستخدام نموذج غرف ساترة

Biofilms consist of groups of bacteria encased in a self-secreted matrix. They play an important role in industrial contamination as well as in the ...

Precision-cut Mouse Lung Slices to Visualize Live Pulmonary Dendritic Cells

الرئة ماوس شرائح لتصور لايف الخلايا الجذعية الرئوي قطع الدقة

Inhalation of allergens and pathogens elicits multiple changes in a variety of immune cell types in the lung. Flow cytometry is a powerful technique for ...

An IL-8 Transiently Transgenized Mouse Model for the In Vivo Long-term Monitoring of Inflammatory Responses

An IL-8 Transiently Transgenized Mouse Model for the In Vivo Long-term Monitoring of Inflammatory Responses

و إيل-8 عابر نموذج الماوس المعدلة وراثيا ل<em&gt; في فيفو</em&gt; رصد طويل الأمد للردود الالتهابية

Airway inflammation is often associated with bacterial infections and represents a major determinant of lung disease. The in vivo determination of the ...