Name: fluorescent silver staining of proteins in polyacrylamide gels
Uploaded: 2019-04-21T13:00:00
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Die Autoren möchten Patrick Chan bei Ming Wai Lau Zentrum für Reparative Medizin, Karolinska Institutet, für seine technische Unterstützung zu danken. S. X. ist dankbar für die Unterstützung von der schwedischen Forschungsrat (Grant No. 2017-06344).

1. Vorbereitung des Gels
Hinweis: Die Demonstration folgt ein standard Protokoll, um das Gel kurz nach SDS-PAGE12Färbung vorbereiten. Kurz gesagt, die folgenden Schritte beschreiben die Vorbereitung der Proben und gel-Elektrophorese.
<ol><li>SDS-PAGE mit 4 % - 12 % Bis-Tris Protein Gele (1 mm, 15-Brunnen) durchführen mit einem Mini-Gel Tank gefüllt mit 2-(N -Morpholino) Ethanesulfonic Säure (MES) Puffer.</li>
	<li>Verdünnen Sie die Proben mit einer Misch...

<ol>
	<li>Chevalier, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highlights+on+the+capacities+of+&amp;#34;Gel-based&amp;#34;+proteomics.">Highlights on the capacities of &amp;#34;Gel-based&amp;#34; proteomics.</a> Proteome Science. 8 (1), (2010).</li><li>Harris, L. R., Churchward, M. A., Butt, R. H., Coorssen, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+detection+methods+for+gel-based+proteomic+analyses.">Assessing detection methods for gel-based proteomic analyses.</a> Journal of Proteome Research. 6 (4), 1418-1425 (2007).</li><li>Gauci, V. J., Wright, E. P., Coorssen, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+proteomics:+assessing+the+spectrum+of+in-gel+protein+detection+methods.">Quantitative proteomics: assessing the spectrum of in-gel protein detection methods.</a> Journal of Chemical Biology. 4 (1), 3-29 (2011).</li><li>Candiano, G., Bruschi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blue+silver:+A+very+sensitive+colloidal+Coomassie+G-250+staining+for+proteome+analysis.">Blue silver: A very sensitive colloidal Coomassie G-250 staining for proteome analysis.</a> Electrophoresis. 25 (9), 1327-1333 (2004).</li><li>Chevallet, M., Luche, S., Rabilloud, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Silver+staining+of+proteins+in+polyacrylamide+gels.">Silver staining of proteins in polyacrylamide gels.</a> Nature Protocols. 1 (4), 1852-1858 (2006).</li><li>Jin, L. T., Hwang, S. Y., Yoo, G. S., Choi, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensitive+silver+staining+of+protein+in+sodium+dodecyl+sulfate-polyacrylamide+gels+using+an+azo+dye,+calconcarboxylic+acid,+as+a+silver-ion+sensitizer.">Sensitive silver staining of protein in sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gels using an azo dye, calconcarboxylic acid, as a silver-ion sensitizer.</a> Electrophoresis. 25 (15), 2494-2500 (2004).</li><li>Celis, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Cell Biology: A Laboratory Handbook. , (2006).</li><li>Bartsch, H., Arndt, C., Koristka, S., Cartellieri, M., Bachmann, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Silver+Staining+Techniques+of+Polyacrylamide+Gels.">Silver Staining Techniques of Polyacrylamide Gels.</a> Methods in Molecular Biology. 869 (1), 481-486 (2012).</li><li>Rabilloud, T., Vuillard, L., Gilly, C., Lawrence, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Silver-staining+of+proteins+in+polyacrylamide+gels:+a+general+overview.">Silver-staining of proteins in polyacrylamide gels: a general overview.</a> Cellular and Molecular Biology. 40 (1), 57-75 (1994).</li><li>Zhou, M., Yu, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteomic+Analysis+by+Two-Dimensional+Polyacrylamide+Gel+Electrophoresis.">Proteomic Analysis by Two-Dimensional Polyacrylamide Gel Electrophoresis.</a> Advances in Protein Chemistry. 65 (1), 57-84 (2003).</li><li>Xie, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorogenic+Ag+-Tetrazolate+Aggregation+Enables+Efficient+Fluorescent+Biological+Silver+Staining.">Fluorogenic Ag+-Tetrazolate Aggregation Enables Efficient Fluorescent Biological Silver Staining.</a> Angewandte Chemie International Edition. 57 (20), 5750-5753 (2018).</li><li>. Protein gel electrophoresis technical handbook Available from: <a target="_blank" href="https://www.thermofisher.com/content/dam/LifeTech/global/Forms/PDF/protein-gel-electrophoresis-technical-handbook.pdf">https://www.thermofisher.com/content/dam/LifeTech/global/Forms/PDF/protein-gel-electrophoresis-technical-handbook.pdf</a> (2015)</li></ol>

Hier vorgestellten ist eine neuartige fluoreszierende silberne Färbung Methode für Proteine in Polyacrylamid-Gele. Diese Strategie integriert konventionellen Silber Flecken und fluoreszierende Flecken. Die Färbung Heldentaten die selektive Bindung von Silberionen an Proteine wie in anderen Silber Flecken aber beschäftigt eine hochempfindliche Fluorogenic Silber Sonde TPE-4TA , um die silberne gebundene Proteine Leuchten. Da die Fluorogenic Sonde TPE-4TA silberne-Ionen bei einer relat...

Viele Färbung Methoden wurden verwendet, um Proteine nach Gelelektrophorese, z. B. Verwendung von farbmetrischen Farbstoffen wie Coomassie Brilliant Blue, silbernen Fleck, Fluoreszenz zu visualisieren oder radioaktive Markierung1,2, 3 , 4. silberne Färbung gilt als eines der sensibelsten Techniken für Proteindetektion erfordern einfache und billige Reagenzien. Es kann in zwei große Gruppen unterteilt werden: der ammoniakalischen Silber Fleck und das Silbernitrat Flecken5,6. In der alkalischen ammoniakalischen Silber-Methode ist der Silber-Diamin-Komplex mit Ammoniak und Natriumhydroxid hergestellt und während der Entwicklung mit einer sauren Formaldehyd-Lösung zu metallischem Silber reduziert. Der Fleck beherbergt effizient für grundlegende Proteine aber zeigt eine kompromittierte Performance für saure und neutrale Proteine und ist darüber hinaus auf klassischen Glycin und Taurin elektrophoretischen Systemen beschränkt. Im Vergleich dazu die Silbernitrat Flecken nutzen die hohe Bio-Affinität von Silberionen an Protein, in erster Linie die Sulfhydryl Carboxylgruppen Gruppen aus den Seitenketten und tendenziell saure Proteine effizienter Fleck7. Nach Silberionen verbindlich, eine entwickelnde Lösung (in der Regel aus einer Metall-Karbonat-Lösung, die Formaldehyd und Natrium Thiosulphate) wird angewendet, um die Silberionen zu metallischem Silber Körner zu verringern, die eine braun-dunkel Farbe visualisieren bauen die Protein-Bänder.
Obwohl Silber Färbung bekannt für seine Vielseitigkeit und hohe Empfindlichkeit seit seiner Entwicklung in den 1970er Jahren8gewesen, wird die Methode häufig als schwierig angesehen. Silber-Färbung Methoden haben zeitlich begrenzte Schritte und zeigen niedrige Reproduzierbarkeit. Da die Farbe des silbernen Fleck in der Regel nicht ist einheitlich und Reduktionsschritt, die schwer zu kontrollieren ist abhängig, der silberne Fleck ist keine quantitative Methode und somit nicht für Gel Vergleich Studie und Protein Quantifizierung9empfohlen. Methoden in der Empfindlichkeit optimiert können Aldehyde verwenden, die auch eine gleichmäßigeren Färbung10anbieten können. Dies ist jedoch auf Kosten der weiteren nachgeschalteten Analyse durch die Vernetzung von Proteinen durch Aldehyde. Schnelle Protokolle meist kombinieren oder kürzen Sie Schritte zu verkürzen, die Reproduzierbarkeit und Einheitlichkeit der Fleck5zu beeinträchtigen. Infolgedessen gibt es zahlreiche Silber Färbung Varianten innerhalb Protein Gel Färbung, jeweils optimiert, um bestimmte Anforderungen zu entsprechen; zum Beispiel, Einfachheit, Sensibilität oder Peptid Verwertungsquote für nachgelagerte Analyse. Diese Attribute haben ebenfalls einen Einfluss auf einander, und erfüllt alle Anforderungen in einem Protokoll kann schwierig sein.
In dieser Arbeit stellen wir eine neue fluoreszierende silberne Färbung Methode zur Proteindetektion Polyacrylamid-Gel. Bei dieser Methode verwenden wir Fluorogenic Sonde für Silberionen, TPE-4TA (Abbildung 1), die Silber-imprägnierte Proteine11zu visualisieren. TPE-4TA richtet sich nach dem Prinzip der Aggregation-induzierte Emission (AIE). Es ist nicht emissiven, in wässriger Lösung aufgelöst, jedoch höchst emissiven in Anwesenheit von Silber-Ionen. Indem die chromogene Entwicklung im traditionellen silbernen Flecken mit einer Fluorogenic Entwicklung Schritt ermöglicht die fluoreszierende silberne Methode die robuste Färbung des gesamten Proteine mit einem reduzierten Hintergrund.
Darüber hinaus zeigte die fluoreszierende silberne Fleck eine gute lineare Dynamik für Protein Quantifizierung, die vergleichbar mit den weit verbreiteten SYPRO Ruby Fleck und mit traditionellen silbernen Flecken nicht erreichbar ist. Das Gel kann auf häufig verwendete Gel-Dokumentation-Systeme mit einer UV-Lampe abgebildet (Erregung Wellenlänge: 302/365 nm Kanal; Emission: ~ 490-530 nm) bei vielen biologischen Labs.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td> 
			LDS Sample Buffer (4X)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>NP0007</td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td> 
			4-12% Bis-Tris Protein Gels, 1.0 mm, 15-well</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>NP0323BOX</td>
			<td>Precast gel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sample Reducing Agent (10X)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>NP0004</td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MES SDS Running Buffer (20X)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>NP0002</td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mini Gel Tank</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A25977</td>
			<td>Equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>300W Power Supply (230 VAC)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>PS0301</td>
			<td>Equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Unstained Protein Ladder</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>26614</td>
			<td>Sample</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silver nitrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>31630-25G-R</td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Bragg and co.</td>
			<td>42520J</td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetic acid</td>
			<td>J.T. Baker</td>
			<td>103201A</td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Milli-Q Synthesis A10</td>
			<td>Merk</td>
			<td>-</td>
			<td>Provides 18.2 M&#937;.cm water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>gel documentation system (c600 model)</td>
			<td>Azure biosystems</td>
			<td>-</td>
			<td>Equipment</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

fluorescent silver staining of proteins in polyacrylamide gels

Silberne Färbung ist ein kolorimetrischen Verfahren häufig verwendet, um Protein-Bands in Polyacrylamid-Gele nach Sodium Dodecyl Sulfat-Polyacrylamid-Gelelektrophorese (SDS-PAGE) zu visualisieren. Der klassische silberne Flecken haben bestimmte Nachteile wie hoher Hintergrund Färbung, schlechte Proteingewinnung, niedrige Reproduzierbarkeit, einen schmalen linearen Dynamikbereich zur Quantifizierung und begrenzte Kompatibilität mit der Massenspektrometrie (MS). Jetzt, mit dem Einsatz einer Fluorogenic Ag+ Sonde, TPE-4TA, entwickelten wir eine fluoreszierende silberne Färbung Methode für die Gesamt-Protein-Visualisierung in Polyacrylamid-Gele. Dieser neue Fleck vermeidet das lästige Silber Reduktionsschritt in traditionellen silbernen Flecken. Darüber hinaus zeigt der fluoreszierende silberne Fleck gute Reproduzierbarkeit, Sensibilität und lineare Quantifizierung in Protein-Erkennung, so dass es einen nützliches und praktisches Protein Gel Fleck.

Die Protein-Bands befleckt durch fluoreszierende silberne Flecken zeigen ein intensives grün fluoreszieren unter 365 nm UV-Licht. Alle 14 Protein Bänder (10-200 kDa), waren von oben nach unten, deutlich sichtbar, korreliert gut mit den 14 rote Flecken von SYPRO Ruby Farbstoff (Abbildung 2)10.
In Bezug auf quantitative Proteindetektion die Gele wurden durch ein Gel imaging-S...

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Fluorescent Silver Staining of Proteins in Polyacrylamide Gels

Hier beschreiben wir ein detailliertes Protokoll umreißt eine neue fluoreszierende Färbung Technik für Gesamt-Protein Nachweis in Polyacrylamid-Gele. Das Protokoll nutzt eine Sonde, Silber Ionen-spezifische Fluoreszenz Turn-on, die Ag+erkennt-Proteinkomplexe, und gewisse Einschränkungen der traditionellen chromogenen Silber Flecken beseitigt.

Fluoreszierende silberne Färbung von Proteinen im Polyacrylamid-Gele

Silver staining is a colorimetric technique widely used to visualize protein bands in polyacrylamide gels following sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide ...

Dies ist eine neuartige Gelfärbungsmethode, die eine fluorogene Silbersonde verwendet, um die traditionelle Silberfärbung in eine fluoreszierende Silberfärbung umzuwandeln. Diese Methode zeigte eine verbesserte Leistung im Vergleich zu herkömmlichen Silbernitratfärbung und SYPRO Ruby Färbung, während ein einfaches und einfaches Protokoll ohne Aldehyde verwendet. Demonstriert wird das Verfahren von Alex Wong, einem wissenschaftlichen Mitarbeiter aus meinem Labor.Um dieses Verfahren zu beginnen, verdünnen Sie die Proteinproben mit einer Lösung, die destilliertes Wasser, EINEN LDS-Puffer und ein Probenreduktionsmittel enthält. Richten Sie einen Mini-Geltank mit MES-Puffer ein, um SDS-PAGE mit einem 4-12%Bis-Tris Proteingel durchzuführen. Laden Sie die Brunnen mit der vorbereiteten Proteinprobe, dann führen Sie das Gel mit einer konstanten Spannung von 200 Volt für 30 Minuten.Nach der Elektrophorese tauchen Sie das Gel in eine 100-Milliliter-Lösung, die Ethanol und Essigsäure enthält, auf einem Orbitalshaker unter und inkubieren Sie das Gel zweimal für jeweils 30 Minuten bei Raumtemperatur, während sie bei 50 U/min schütteln. Als nächstes waschen Sie das Gel dreimal mit reinem Wasser in einem sauberen Behälter mit jeder Wäsche von 10 Minuten. Lösen Sie zunächst 0,01 Gramm Silbernitrat in 10 Milliliter Reinstwasser auf, um eine Stammlösung mit einer Konzentration von 0,1% herzustellen, fügen Sie 100 Mikroliter der Stammlösung in 100 Milliliter Reinstwasser, um die Silbernitrat-Arbeitslösung zu machen.In einer Dunstabzugshaube tauchen Sie das Gel in 100 Milliliter der Silbernitrat-Arbeitslösung in eine versiegelte Glaskammer. Verwenden Sie Aluminiumfolie, um das Gel während der Imprägnierung vor Licht zu schützen und eine Stunde lang zu brüten, während Sie bei 50 Umdrehungen pro Minute auf einem Orbital-Shaker schütteln. Danach das Gel zweimal mit reinem Reinstwasser in einem sauberen Behälter waschen, wobei jede Wäsche etwa 100 Milliliter Wasser und eine Dauer von 60 Sekunden beträgt.Es ist wichtig, reines Wasser zu verwenden, um das Gel nach dem Silberimprägnierungsschritt zu reinigen, um die Hintergrundfärbung zu minimieren. Fügen Sie zunächst 50 Milliliter Reinstwasser zu drei Milligramm TPE-4TA-Farbstoff hinzu. Beschallen Sie die Lösung für drei Minuten und fügen Sie fünf Mikroliter ein-molar Natriumhydroxid-Lösung zwischen jeder Beschallungssitzung, um den Farbstoff aufzulösen, in der Regel bis zu dreimal.Überprüfen Sie dann die Fluoreszenz der Lösung unter einer 365-Nanometer-UV-Lampe, um sicherzustellen, dass der Farbstoff vollständig gelöst ist. Nur schwache oder nicht emissive Lösungen deuten auf eine vollständige Auflösung hin. Um die fluorogene Entwicklungslösung vorzubereiten, fügen Sie 10 Milliliter der TPE-4TA-Stammlösung zu 90 MilliliterReinstwasser hinzu.Verwenden Sie ein pH-Messgerät, um den pH-Wert der Lösung zu überprüfen. Stellen Sie die Lösung auf einen pH-Wert zwischen 7 und 9 ein, indem Sie verdünnte Natriumhydroxidlösung oder Essigsäure verwenden, wenn der pH-Wert anicht eatoriert ist. Als nächstes das Gel in einen sauberen und verschließbaren Behälter mit 100 Millilitern der fluorogenen Entwicklungslösung übertragen und sicherstellen, dass das Gel vollständig eingetaucht ist.Versiegeln Sie den Behälter und bedecken Sie ihn, um ihn vor Licht zu schützen. Schütteln Sie den Behälter über Nacht auf einem Orbital-Shaker bei 50 Umdrehungen von Euro/Min. und bei Raumtemperatur. Das Gel in einen sauberen Behälter geben und 30 Minuten lang in 100 Milliliter 10% Ethanol entführen.Dann spülen Sie das Gel in reinem Wasser für fünf Minuten. Das Gel kann auf einem Tischtransilluminator visualisiert oder auf einer Geldokumentationsmaschine am 365-Nanometer-Kanal oder dem 302-Nanometer-Kanal abgebildet werden. In dieser Studie wird eine neuartige fluoreszierende Silberfärbungsmethode verwendet, um Proteine in Polyacrylamidgelen zu färben.Die Proteinbänder, die durch den fluoreszierenden Silberfleck gebeizt werden, weisen ein intensives Grün unter einer 365-Nanometer-UV-Lampe auf. Alle 14 Proteinbänder sind deutlich sichtbar und korrelieren gut mit den rot gefärbten Bändern des SYPRO Ruby Farbstoffs. Diese fluoreszierende Silberfärbungsmethode scheint eine hohe Auflösung zu haben.Bei einigen Proteinbändern ist die Empfindlichkeit des fluoreszierenden Silberflecks auch etwas besser als die des fluoreszierenden SYPRO Ruby-Fleckens. Insbesondere die Leistung dieses Fleckens wird für die Proteinbänder zwischen 10 und 40 Kilodalton verbessert, was darauf hindeutet, dass die neue Methode besonders nützlich für den Nachweis von Proteinen mit niedrigem Molekulargewicht ist. Wie man sieht, deuten die Daten auch darauf hin, dass der fluoreszierende Silberfleck eine gute und gleichmäßige Linearität für alle 14 Proteine über ein relativ breites Spektrum an Proteinquantifizierung ergibt.Während der Silbernitratfleck ein hohes Maß an Hintergrundsignal und verzerrte Spitzen lieferte, erfasste der fluoreszierende Silberfleck die Bänder mit gutem Kontrast und gleichmäßiger Intensitätsverteilung, vergleichbar mit dem SYPRO Ruby Fleck über alle 14 Proteine. Waschschritte sind wichtig, da sie die Restfixierungslösung durch Unterbrechung der Silberimprägnierung oder fluorogenen Entwicklung einschränken. Bei verwendung von Silbernitrat hautkontaktvermeiden.Reinigen Sie alle Verschüttungen sofort. Tragen Sie Schutzkleidung und Handschuhe und entsorgen Sie sie als chemische Abfälle.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Characterization of Multi-subunit Protein Complexes of Human MxA Using Non-denaturing Polyacrylamide Gel-electrophoresis

Charakterisierung von Multi-Untereinheit Proteinkomplexe der Menschen MxA Verwendung von nicht-denaturierendes Polyacrylamidgel-Elektrophorese

The formation of oligomeric complexes is a crucial prerequisite for the proper structure and function of many proteins. The interferon-induced antiviral ...

Forschung

Biochemie

Voltage-clamp Fluorometry in Xenopus Oocytes Using Fluorescent Unnatural Amino Acids

Voltage-clamp Fluorometry in Xenopus Oocytes Using Fluorescent Unnatural Amino Acids

Spannklemme Fluorometrie in<em&gt; Xenopus</em&gt; Oozyten mit fluoreszierenden unnatürlichen Aminosäuren

Voltage-Clamp Fluorometry (VCF) has been the technique of choice to investigate the structure and function of electrogenic membrane proteins where ...

Isolation of Glomeruli and In Vivo Labeling of Glomerular Cell Surface Proteins

Isolation of Glomeruli and In Vivo Labeling of Glomerular Cell Surface Proteins

Isolierung der Glomeruli und In Vivo Kennzeichnung der glomerulären Zelle Oberflächenproteine

Proteinuria results from the disruption of the glomerular filter that is composed of the fenestrated endothelium, glomerular basement membrane, and ...

How to Quantify the Fraction of Photoactivated Fluorescent Proteins in Bulk and in Live Cells

Wie den Anteil der photoaktiviert fluoreszierende Proteine in großen Mengen und in lebenden Zellen zu quantifizieren

Photoactivatable and -convertible fluorescent proteins (PA-FPs) have been used in fluorescence live-cell microscopy for analyzing the dynamics of cells ...

Structure Solution of the Fluorescent Protein Cerulean Using MeshAndCollect

Struktur-Lösung von den fluoreszierenden Proteins Himmelblau mit MeshAndCollect

X-ray crystallography is the major technique used to obtain high resolution information concerning the 3-dimensional structures of biological ...

Use of Recombinant Fusion Proteins in a Fluorescent Protease Assay Platform and Their In-gel Renaturation

Einsatz von rekombinanten Fusionsproteinen in eine fluoreszierende Protease-Assay-Plattform und ihre In-Gel-Renaturierung

Proteases are intensively studied enzymes due to their essential roles in several biological pathways of living organisms and in pathogenesis; therefore, ...

Fluorescent Visualization of Mango-tagged RNA in Polyacrylamide Gels via a Poststaining Method

Fluoreszierende Visualisierung von Mango-markierter RNA in Polyacrylamidgelen über eine Poststaining-Methode

Native and denaturing polyacrylamide gels are routinely used to characterize ribonucleoprotein (RNP) complex mobility and to measure RNA size, ...

Localization of SUMO-modified Proteins Using Fluorescent Sumo-trapping Proteins

Lokalisierung von SUMO-modifizierten Proteinen mit fluoreszierenden Sumo-Fallen Proteinen

Here we are presenting a novel method to study the sumoylation of proteins and their sub-cellular localization in mammalian cells and nematode oocytes. ...

Characterizing Cellular Proteins with In-cell Fast Photochemical Oxidation of Proteins

Charakterisierung zellulärer Proteine mit in-zelliger schneller photochemischer Oxidation von Proteinen

Fast photochemical oxidation of proteins (FPOP) is a hydroxyl radical protein footprinting method used to characterize protein structure and interactions. ...

Transverse Sectioning of Mature Rice (Oryza sativa L.) Kernels for Scanning Electron Microscopy Imaging Using Pipette Tips as Immobilization Support

Transverse Sectioning of Mature Rice Oryza sativa L. Kernels for Scanning Electron Microscopy Imaging Using Pipette Tips as Immobilization Support

Querschnitt von reifem Reis (Oryza sativa L.) Kerne für die Rasterelektronenmikroskopie-Bildgebung mit Pipettenspitzen als Immobilisierungsunterstützung