Name: fluorescent silver staining of proteins in polyacrylamide gels
Uploaded: 2019-04-21T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Fluorescent Silver Staining of Proteins in Polyacrylamide Gels at JoVE.com

המחברים רוצה להודות פטריק צ'אן במרכז לאו וואי מינג תיקוני לרפואה, Institutet קרולינסקה, לתמיכה טכנית שלו. ס י הוא אסיר תודה על התמיכה של מועצת המחקר השבדי (מענק מס 2017-06344).

1. הכנת הג'ל
הערה: ההפגנה כדלקמן פרוטוקול רגיל להכין הג'ל מכתים זמן קצר לאחר מרחביות-דף12. בקצרה, השלבים הבאים מתארים את הכנת הדגימות, ג'ל אלקטרופורזה.
<ol><li>לבצע מרחביות-דף עם 4% - 12% Bis-טריס חלבון ג'ל (1 מ"מ, ובכן 15) באמצעות ג'ל מיני טנק מלא 2-(N -מורפולינו) ethanesulfonic חומ?...

<ol>
	<li>Chevalier, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highlights+on+the+capacities+of+&amp;#34;Gel-based&amp;#34;+proteomics.">Highlights on the capacities of &amp;#34;Gel-based&amp;#34; proteomics.</a> Proteome Science. 8 (1), (2010).</li><li>Harris, L. R., Churchward, M. A., Butt, R. H., Coorssen, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+detection+methods+for+gel-based+proteomic+analyses.">Assessing detection methods for gel-based proteomic analyses.</a> Journal of Proteome Research. 6 (4), 1418-1425 (2007).</li><li>Gauci, V. J., Wright, E. P., Coorssen, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+proteomics:+assessing+the+spectrum+of+in-gel+protein+detection+methods.">Quantitative proteomics: assessing the spectrum of in-gel protein detection methods.</a> Journal of Chemical Biology. 4 (1), 3-29 (2011).</li><li>Candiano, G., Bruschi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blue+silver:+A+very+sensitive+colloidal+Coomassie+G-250+staining+for+proteome+analysis.">Blue silver: A very sensitive colloidal Coomassie G-250 staining for proteome analysis.</a> Electrophoresis. 25 (9), 1327-1333 (2004).</li><li>Chevallet, M., Luche, S., Rabilloud, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Silver+staining+of+proteins+in+polyacrylamide+gels.">Silver staining of proteins in polyacrylamide gels.</a> Nature Protocols. 1 (4), 1852-1858 (2006).</li><li>Jin, L. T., Hwang, S. Y., Yoo, G. S., Choi, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensitive+silver+staining+of+protein+in+sodium+dodecyl+sulfate-polyacrylamide+gels+using+an+azo+dye,+calconcarboxylic+acid,+as+a+silver-ion+sensitizer.">Sensitive silver staining of protein in sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gels using an azo dye, calconcarboxylic acid, as a silver-ion sensitizer.</a> Electrophoresis. 25 (15), 2494-2500 (2004).</li><li>Celis, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Cell Biology: A Laboratory Handbook. , (2006).</li><li>Bartsch, H., Arndt, C., Koristka, S., Cartellieri, M., Bachmann, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Silver+Staining+Techniques+of+Polyacrylamide+Gels.">Silver Staining Techniques of Polyacrylamide Gels.</a> Methods in Molecular Biology. 869 (1), 481-486 (2012).</li><li>Rabilloud, T., Vuillard, L., Gilly, C., Lawrence, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Silver-staining+of+proteins+in+polyacrylamide+gels:+a+general+overview.">Silver-staining of proteins in polyacrylamide gels: a general overview.</a> Cellular and Molecular Biology. 40 (1), 57-75 (1994).</li><li>Zhou, M., Yu, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteomic+Analysis+by+Two-Dimensional+Polyacrylamide+Gel+Electrophoresis.">Proteomic Analysis by Two-Dimensional Polyacrylamide Gel Electrophoresis.</a> Advances in Protein Chemistry. 65 (1), 57-84 (2003).</li><li>Xie, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorogenic+Ag+-Tetrazolate+Aggregation+Enables+Efficient+Fluorescent+Biological+Silver+Staining.">Fluorogenic Ag+-Tetrazolate Aggregation Enables Efficient Fluorescent Biological Silver Staining.</a> Angewandte Chemie International Edition. 57 (20), 5750-5753 (2018).</li><li>. Protein gel electrophoresis technical handbook Available from: <a target="_blank" href="https://www.thermofisher.com/content/dam/LifeTech/global/Forms/PDF/protein-gel-electrophoresis-technical-handbook.pdf">https://www.thermofisher.com/content/dam/LifeTech/global/Forms/PDF/protein-gel-electrophoresis-technical-handbook.pdf</a> (2015)</li></ol>

המוצג כאן כסף פלורסנט הרומן מכתימה שיטת חלבונים בג'לים לזיהוי. אסטרטגיה זו משלבת כתמי כסף קונבנציונאלי כתמי פלורסנט. מעלליו מכתימים הכריכה סלקטיבי של יון כסף חלבונים כמו כסף אחרים כתמים אך מעסיקה כסף fluorogenic רגישה מאוד בדיקה TPE-4TA כדי להאיר את החלבונים מאוגד כסף. מאז המכשיר fluorogenic <st...

שיטות מכתימים רבות היו בשימוש להמחיש חלבונים בעקבות בג'ל, לדוגמה באמצעות ערכי צבע מוחלטים צבעי כחול מבריק Coomassie, הכתם כסף, זריחה, או רדיואקטיבי תיוג1,2, 3 , 4. צביעת כסף נחשב לאחד הטכניקות הרגישים ביותר לגילוי חלבון הדורשים ריאגנטים פשוט וזול. יכולים להיות מסווגים לתוך שתי המשפחות הגדולות: הכתם כסף אמוני, של כסף חנקתי כתם5,6. השיטה כסף אמוני אלקליין, המתחם diamine בכסף הוא הפיק עם אמוניה, סודיום הידרוקסיד והוריד את כסף מטאלי במהלך הפיתוח באמצעות פתרון פורמלדהיד חומצי. הכתם להכיל ביעילות חלבונים בסיסי אבל מציגה הופעה פרוץ חלבונים חומצי ונייטרלי, הוא, יתר על כן, הוגבלו גליצין קלאסית ומערכות electrophoretic טאורין. לשם השוואה, לנצל הכתמים כסף חנקתי הביו-בזיקה גבוהה של יוני כסף לחלבון, בעיקר את sulfhydryl ואת carboxyl קבוצות מכל הכבלים צד ועל נוטים כתם חומצי חלבונים ביעילות רבה יותר7. לאחר יון כסף מחייב, פתרון המתפתח (בדרך כלל ממתכות פתרון קרבונט מתכת המכילים פורמלדהיד, נתרן thiosulphate) מוחל כדי לצמצם את יוני כסף מטאלי גרגירי כסף, אשר לבנות בצבע חום-כדי-כהה כדי להמחיש להקות חלבון.
למרות צביעת כסף היה ידוע שלו רב-תכליתיות, רגישות גבוהה מאז פיתוחה ב שנות השבעים8, השיטה לעתים קרובות נחשב מסובך. שיטות מכתים כסף יש זמן מוגבלת צעדים ולהראות הפארמצבטית נמוכה. מאז צבע הכתם כסף. בדרך כלל לא אחיד ובלתי תלויה השלב צמצום, אשר קשה לשלוט, הכתם כסף היא לא שיטה כמותית, לפיכך, אינה מומלצת ג'ל השוואה המחקר וחלבון כימות9. שיטות אופטימיזציה של רגישות עלולה לנצל את aldehydes אשר יכול גם לספק מדים יותר להכתים10. עם זאת, זה על חשבון הזרם ניתוח נוסף בשל crosslinking של חלבונים על-ידי aldehydes. פרוטוקולים מהיר בעיקר לשלב או לקצר שלבים כדי לצמצם את זמן, להתפשר על הפארמצבטית ואחידות של הכתם5. כתוצאה מכך, ישנם רבים כסף מכתים משתנים בתוך ג'ל חלבון מכתים, כל אחד בצורה מיטבית כדי שיתאימו בדרישות מסוימות; לדוגמה, פשטות, רגישות או פפטיד שחזור קצב לניתוח במורד הזרם. תכונות אלה עשויים גם להשפיע אחד על השני, והוא מספק את כל הדרישות באחד הפרוטוקולים יכול להיות קשה.
בעבודה זו, אנו מציגים כסף פלורסנט חדש מכתים שיטה לגילוי חלבון בג'ל לזיהוי. בשיטה זו, אנו משתמשים בדיקה fluorogenic על יוני כסף, TPE-4TA (איור 1), כדי להמחיש את החלבונים ספוג כסף11. TPE-4TA מיועד על פי. העיקרון הנוצרות על-ידי צבירת פליטה (קובי אשכנזי). זה בלתי-emissive נמס בתמיסה המימית, אבל הוא מאוד emissive בנוכחות יוני כסף. על-ידי החלפת הפיתוח הדפסות כסף בכתמי כסף המסורתי fluorogenic פיתוח שלב, מאפשרת השיטה כסף פלורסנט ההכתמה חזקים של חלבונים הכולל עם רקע מופחת.
יתר על כן, הכתם כסף פלורסנט הראה טווח דינמי טוב ליניארי על כימות חלבון, שהוא דומה עם הכתם עברית בשימוש נרחב וגם לא בר השגה עם כתמי כסף מסורתי. הג'ל יכול לדימות במערכות תיעוד ג'ל נפוץ עם מנורת אולטרה סגול (אורך גל עירור: ערוץ nm 302/365; פליטה: ~ 490-530 ננומטר) במעבדות ביולוגיות רבות.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td> 
			LDS Sample Buffer (4X)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>NP0007</td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td> 
			4-12% Bis-Tris Protein Gels, 1.0 mm, 15-well</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>NP0323BOX</td>
			<td>Precast gel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sample Reducing Agent (10X)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>NP0004</td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MES SDS Running Buffer (20X)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>NP0002</td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mini Gel Tank</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A25977</td>
			<td>Equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>300W Power Supply (230 VAC)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>PS0301</td>
			<td>Equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Unstained Protein Ladder</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>26614</td>
			<td>Sample</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silver nitrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>31630-25G-R</td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Bragg and co.</td>
			<td>42520J</td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetic acid</td>
			<td>J.T. Baker</td>
			<td>103201A</td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Milli-Q Synthesis A10</td>
			<td>Merk</td>
			<td>-</td>
			<td>Provides 18.2 M&#937;.cm water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>gel documentation system (c600 model)</td>
			<td>Azure biosystems</td>
			<td>-</td>
			<td>Equipment</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

fluorescent silver staining of proteins in polyacrylamide gels

צביעת כסף היא טכניקה ערכי צבע מוחלטים בשימוש נרחב כדי להמחיש להקות חלבון בג'לים לזיהוי בעקבות נתרן dodecyl סולפט-לזיהוי בג'ל (מרחביות-עמוד). כתמי כסף קלאסי יש חסרונות מסוימים, כגון רקע מכתים, חלבון המסכן התאוששות, הפארמצבטית נמוך, טווח דינמי צר ליניארי עבור כימות ותאימות מוגבלת עם ספקטרומטר מסה (MS). עכשיו, עם השימוש של בדיקה Ag+ fluorogenic, TPE-4TA, פיתחנו כסף פלורסנט מכתים שיטת עבור הפריט החזותי הכולל חלבון ב לזיהוי ג'לים. הכתם החדש הזה מונע הצעד הפחתת כסף בעייתי כתמי כסף מסורתי. יתר על כן, הכתם כסף פלורסנט מדגים הפארמצבטית טוב, רגישות, כימות ליניארי בזיהוי חלבון, שהופך אותו כתם ג'ל חלבון שימושי ומעשי.

הלהקות חלבון מוכתמת הכתם כסף פלורסנט התערוכה של קרינה פלואורסצנטית ירוק עז תחת מנורת UV nm 365. חלבון 14 כל להקות (10-200 kDa), מלמעלה למטה, נראו בבירור, מתאם טוב עם אלה שצבעו אדום 14 מוכתמת צבען (איור 2)10עברית.
לגבי זיהוי ח...

Watch this Scientific Journal Video about Fluorescent Silver Staining of Proteins in Polyacrylamide Gels at JoVE.com

Fluorescent Silver Staining of Proteins in Polyacrylamide Gels

כאן, אנו מתארים את פרוטוקול מפורט חלוקה לרמות של פלורסנט חדש מכתים טכניקה לגילוי חלבון סה בג'לים לזיהוי. הפרוטוקול מנצל בדיקה קרינה פלואורסצנטית ספציפיים יון כסף מדליק, אשר מגלה Ag+-חלבון מכלולי ומונע הגבלות מסוימות של כתמי כסף הדפסות כסף מסורתי.

צביעת כסף פלורסנט של חלבונים בג'לים לזיהוי

Silver staining is a colorimetric technique widely used to visualize protein bands in polyacrylamide gels following sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide ...

זוהי שיטה חדשנית להכתמת ג'ל שמשתמשת בגשוש כסף פלואורוגני כדי להמיר את כתמי הכסף המסורתיים לכתמי כסף פלואורסצנטיים. שיטה זו הראתה ביצועים משופרים בהשוואה לכתמי חנקת כסף קונבנציונליים וכתמי רובי SYPRO תוך שימוש בפרוטוקול פשוט וישיר ללא אלדהידים. הדגמת ההליך תהיה אלכס וונג, עוזר מחקר מהמעבדה שלי.כדי להתחיל בהליך זה, לדלל את דגימות החלבון עם פתרון המכיל מים מזוקקים, מאגר LDS, וסוכן להפחתת מדגם. הגדר מיכל ג'ל מיני מלא חיץ MES לבצע SDS-PAGE עם 4-12% ג'ל חלבון ביס-טריס. לטעון את בארות עם מדגם חלבון מוכן, ולאחר מכן להפעיל את הג'ל במתח קבוע של 200 וולט במשך 30 דקות.לאחר אלקטרופורזה, מטביעים את הג'ל בתמצית של 100 מיליליטר המכילה אתנול וחומצה אצטית על שייקר מסלולית ודגירה פעמיים במשך 30 דקות כל אחת בטמפרטורת החדר תוך כדי רעידות ב-50 סל"ד. לאחר מכן, לשטוף את הג'ל שלוש פעמים עם מים אולטרה-חמים במיכל נקי עם כל שטיפה נמשך 10 דקות. ראשית, להמיס 0.01 גרם של חנקת כסף ב 10 מיליליטר של מים אולטרה חוץ כדי להכין פתרון מלאי עם ריכוז של 0.1% להוסיף 100 microliters של פתרון המניה לתוך 100 מיליליטר של מים אולטרה פים כדי להפוך את פתרון העבודה חנקתי כסף.ברדס אדים, להטביע את הג'ל ב 100 מיליליטר של פתרון עבודה חנקתי כסף בתא זכוכית אטום. השתמש בנייר אלומיניום כדי להגן על הג'ל מפני אור במהלך ההסרה והדגירה במשך שעה אחת תוך טלטול ב 50 סל"ד על שייקר מסלולית. לאחר מכן, לשטוף את הג'ל פעמיים עם מים אולטרה-חמים במיכל נקי, כאשר כל שטיפה משתמשת בכ-100 מיליליטר מים ונמשך 60 שניות.חשוב להשתמש במים אולטרה-חמים לניקוי הג'ל לאחר שלב ההפלה הכסוף כדי למזער את כתמי הרקע. ראשית, להוסיף 50 מיליליטר של מים אולטרה פים לשלושה מיליגרם של צבע TPE-4TA. Sonicate הפתרון במשך שלוש דקות ולהוסיף חמישה microliters של פתרון נתרן הידרוקסיד טוחנת אחת בין כל מפגש sonication כדי לעזור להמיס את הצבע, בדרך כלל עד שלוש פעמים.לאחר מכן בדוק את הפלואורסצנטיות של הפתרון תחת מנורת UV 365 ננומטר כדי להבטיח כי הצבע מומס במלואו. רק פתרונות חלשים או לא פליטים מצביעים על פירוק מלא. כדי להכין את פתרון פיתוח פלואורוגניים, להוסיף 10 מיליליטר של פתרון מלאי TPE-4TA ל 90 מיליליטר של מים אולטרה פנורמיים.השתמש במד pH כדי לבדוק את ה- pH של הפתרון. כוונן את הפתרון ל- pH בין 7 ל - 9, באמצעות פתרון הידרוקסיד נתרן מדולל או חומצה אצטית אם ה- pH נמצא מחוץ לטווח. לאחר מכן מעבירים את הג'ל למיכל נקי ואטום עם 100 מיליליטר של פתרון פיתוח פלואורוגני ומבטיחים כי הג'ל שקוע לחלוטין.לאטום את המיכל ולכסות אותו כדי להגן עליו מפני אור. לנער את המיכל לילה על שייקר מסלולית ב 50 סל"ד ו בטמפרטורת החדר. מעבירים את הג'ל למיכל נקי ומעבירים אותו ל-100 מיליליטר של 10% אתנול למשך 30 דקות.לאחר מכן שוטפים את הג'ל במים אולטרה-חמים במשך חמש דקות. ניתן לדמיין את הג'ל על טרנסילומינטור על הספסל או לדמיין אותו על מכונת תיעוד ג'ל בערוץ 365 ננומטר או בערוץ 302 ננומטר. במחקר זה, שיטת כתמי כסף פלואורסצנטי רומן משמש כתם חלבונים ג'ל פוליאקרילמיד.רצועות החלבון המוכתמות בכתם הכסף הפלואורסצנטי מציגות ירוק עז תחת מנורת UV 365 ננומטר. כל 14 רצועות החלבון נראות בבירור ומתאימות היטב לרצועות בצבע אדום המוכתמות על ידי צבע רובי SYPRO. נראה שלשיטת הכתמת כסף פלואורסצנטי זה יש רזולוציה גבוהה.עבור כמה להקות חלבון, הרגישות של כתם כסף פלואורסצנטי הוא גם קצת יותר טוב מזה של כתם SYPRO רובי פלואורסצנטי. בפרט הביצועים של כתם זה משופר עבור רצועות החלבון בין 10 ל 40 קילודלטון, אשר מציין כי השיטה החדשה שימושית במיוחד לגילוי חלבונים עם משקל מולקולרי נמוך. כפי שניתן לראות, הנתונים גם מראים כי כתם כסף פלואורסצנטי נותן ליניאריות טובה ואחידות עבור כל 14 חלבונים על פני מגוון רחב יחסית של כימות חלבון.בעוד כתם החנקה הכסוף נתן רמה גבוהה של אות רקע ופסגות מעוותות, כתם הכסף הפלואורסצנטי זיהה את הרצועות עם ניגודיות טובה והפצה אחידה בעוצמה דומה לכתם רובי SYPRO על פני כל 14 החלבונים. צעדי כביסה חשובים כפי שהם מגבילים את פתרון קיבוע שיורית משבשת חדירת כסף או התפתחות פלואורוגנית. בעת שימוש בחנקת כסף, יש להימנע ממגע בעור.לנקות את כל השפכים באופן מיידי. ללבוש ביגוד מגן וכפפות ולהיפטר כמו פסולת כימית.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Characterization of Multi-subunit Protein Complexes of Human MxA Using Non-denaturing Polyacrylamide Gel-electrophoresis

אפיון של קומפלקסים חלבונים Multi-למקטע של MxA האדם שימוש ללא denaturing polyacrylamide ג&#39;ל אלקטרופורזה

The formation of oligomeric complexes is a crucial prerequisite for the proper structure and function of many proteins. The interferon-induced antiviral ...

Voltage-clamp Fluorometry in Xenopus Oocytes Using Fluorescent Unnatural Amino Acids

Voltage-clamp Fluorometry in Xenopus Oocytes Using Fluorescent Unnatural Amino Acids

מתח הידוק פלואומטריה ב<em&gt; קסנופוס</em&gt; ביציות באמצעות חומצות אמינו פלואורסצנטי לא טבעי

Voltage-Clamp Fluorometry (VCF) has been the technique of choice to investigate the structure and function of electrogenic membrane proteins where ...

Isolation of Glomeruli and In Vivo Labeling of Glomerular Cell Surface Proteins

Isolation of Glomeruli and In Vivo Labeling of Glomerular Cell Surface Proteins

בידוד של Glomeruli, In Vivo תיוג של חלבונים פני שטח התא Glomerular

Proteinuria results from the disruption of the glomerular filter that is composed of the fenestrated endothelium, glomerular basement membrane, and ...

How to Quantify the Fraction of Photoactivated Fluorescent Proteins in Bulk and in Live Cells

כיצד ניתן לכמת את השבר של Photoactivated פלורסנט חלבונים בכמות גדולה, תאים חיים

Photoactivatable and -convertible fluorescent proteins (PA-FPs) have been used in fluorescence live-cell microscopy for analyzing the dynamics of cells ...

Structure Solution of the Fluorescent Protein Cerulean Using MeshAndCollect

מבנה תמיסת Cerulean חלבון פלואורסצנטי באמצעות MeshAndCollect

X-ray crystallography is the major technique used to obtain high resolution information concerning the 3-dimensional structures of biological ...

Use of Recombinant Fusion Proteins in a Fluorescent Protease Assay Platform and Their In-gel Renaturation

השימוש פיוז'ן רקומביננטי חלבונים פלטפורמה Assay פרוטאז פלורסנט, Renaturation שלהם בג'ל

Proteases are intensively studied enzymes due to their essential roles in several biological pathways of living organisms and in pathogenesis; therefore, ...

Fluorescent Visualization of Mango-tagged RNA in Polyacrylamide Gels via a Poststaining Method

הדמיית פלורסנט של מנגו-מתויג RNA ב-Pvc פוליאקרילאמיד באמצעות שיטת Poststaining

Native and denaturing polyacrylamide gels are routinely used to characterize ribonucleoprotein (RNP) complex mobility and to measure RNA size, ...

Localization of SUMO-modified Proteins Using Fluorescent Sumo-trapping Proteins

לוקליזציה של חלבונים ששונו באמצעות סומו פלורסנט-השמנה חלבונים

Here we are presenting a novel method to study the sumoylation of proteins and their sub-cellular localization in mammalian cells and nematode oocytes. ...

Characterizing Cellular Proteins with In-cell Fast Photochemical Oxidation of Proteins

אפיון חלבונים סלולריים עם החמצון בתוך תא מהיר לפוטוכימיקלים של חלבונים

Fast photochemical oxidation of proteins (FPOP) is a hydroxyl radical protein footprinting method used to characterize protein structure and interactions. ...

Transverse Sectioning of Mature Rice (Oryza sativa L.) Kernels for Scanning Electron Microscopy Imaging Using Pipette Tips as Immobilization Support