Name: fluorescent silver staining of proteins in polyacrylamide gels
Uploaded: 2019-04-21T13:00:00
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लेखकों को अपने तकनीकी समर्थन के लिए, Reparative चिकित्सा, Karolinska Institutet के लिए मिंग वाई Lau केंद्र में पैट्रिक चान शुक्रिया अदा करना चाहूंगा । एस. एक्स स्वीडिश अनुसंधान परिषद (अनुदान No. 2017-06344) से समर्थन के लिए आभारी है ।

1. जेल की तैयारी
नोट: प्रदर्शन एक मानक प्रोटोकॉल इस प्रकार के लिए शीघ्र ही SDS के बाद धुंधला के लिए जेल तैयार-पृष्ठ12। संक्षेप में, निंनलिखित चरणों का वर्णन नमूनों की तैयारी और जेल electrophoresis ।</...

<ol>
	<li>Chevalier, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highlights+on+the+capacities+of+&amp;#34;Gel-based&amp;#34;+proteomics.">Highlights on the capacities of &amp;#34;Gel-based&amp;#34; proteomics.</a> Proteome Science. 8 (1), (2010).</li><li>Harris, L. R., Churchward, M. A., Butt, R. H., Coorssen, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+detection+methods+for+gel-based+proteomic+analyses.">Assessing detection methods for gel-based proteomic analyses.</a> Journal of Proteome Research. 6 (4), 1418-1425 (2007).</li><li>Gauci, V. J., Wright, E. P., Coorssen, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+proteomics:+assessing+the+spectrum+of+in-gel+protein+detection+methods.">Quantitative proteomics: assessing the spectrum of in-gel protein detection methods.</a> Journal of Chemical Biology. 4 (1), 3-29 (2011).</li><li>Candiano, G., Bruschi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blue+silver:+A+very+sensitive+colloidal+Coomassie+G-250+staining+for+proteome+analysis.">Blue silver: A very sensitive colloidal Coomassie G-250 staining for proteome analysis.</a> Electrophoresis. 25 (9), 1327-1333 (2004).</li><li>Chevallet, M., Luche, S., Rabilloud, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Silver+staining+of+proteins+in+polyacrylamide+gels.">Silver staining of proteins in polyacrylamide gels.</a> Nature Protocols. 1 (4), 1852-1858 (2006).</li><li>Jin, L. T., Hwang, S. Y., Yoo, G. S., Choi, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensitive+silver+staining+of+protein+in+sodium+dodecyl+sulfate-polyacrylamide+gels+using+an+azo+dye,+calconcarboxylic+acid,+as+a+silver-ion+sensitizer.">Sensitive silver staining of protein in sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gels using an azo dye, calconcarboxylic acid, as a silver-ion sensitizer.</a> Electrophoresis. 25 (15), 2494-2500 (2004).</li><li>Celis, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Cell Biology: A Laboratory Handbook. , (2006).</li><li>Bartsch, H., Arndt, C., Koristka, S., Cartellieri, M., Bachmann, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Silver+Staining+Techniques+of+Polyacrylamide+Gels.">Silver Staining Techniques of Polyacrylamide Gels.</a> Methods in Molecular Biology. 869 (1), 481-486 (2012).</li><li>Rabilloud, T., Vuillard, L., Gilly, C., Lawrence, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Silver-staining+of+proteins+in+polyacrylamide+gels:+a+general+overview.">Silver-staining of proteins in polyacrylamide gels: a general overview.</a> Cellular and Molecular Biology. 40 (1), 57-75 (1994).</li><li>Zhou, M., Yu, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteomic+Analysis+by+Two-Dimensional+Polyacrylamide+Gel+Electrophoresis.">Proteomic Analysis by Two-Dimensional Polyacrylamide Gel Electrophoresis.</a> Advances in Protein Chemistry. 65 (1), 57-84 (2003).</li><li>Xie, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorogenic+Ag+-Tetrazolate+Aggregation+Enables+Efficient+Fluorescent+Biological+Silver+Staining.">Fluorogenic Ag+-Tetrazolate Aggregation Enables Efficient Fluorescent Biological Silver Staining.</a> Angewandte Chemie International Edition. 57 (20), 5750-5753 (2018).</li><li>. Protein gel electrophoresis technical handbook Available from: <a target="_blank" href="https://www.thermofisher.com/content/dam/LifeTech/global/Forms/PDF/protein-gel-electrophoresis-technical-handbook.pdf">https://www.thermofisher.com/content/dam/LifeTech/global/Forms/PDF/protein-gel-electrophoresis-technical-handbook.pdf</a> (2015)</li></ol>

यहां प्रस्तुत polyacrylamide जैल में प्रोटीन के लिए एक उपंयास फ्लोरोसेंट चांदी धुंधला विधि है । इस रणनीति पारंपरिक चांदी के दाग और फ्लोरोसेंट दाग को एकीकृत करता है । धुंधला चांदी के रूप में अंय चांदी के दाग के र?...

जेल electrophoresis के बाद प्रोटीन कल्पना करने के लिए कई धुंधला तरीकों का इस्तेमाल किया गया है, उदाहरण के लिए coomassie शानदार नीले, चांदी दाग, प्रतिदीप्ति, या रेडियोधर्मी लेबलिंग1,2, जैसे वर्णमितीय रंजक का उपयोग 3 । , 4. चांदी धुंधला प्रोटीन का पता लगाने के लिए सबसे संवेदनशील तकनीकों में से एक माना जाता है सरल और सस्ते अभिकर्मकों की आवश्यकता है । यह दो प्रमुख परिवारों में वर्गीकृत किया जा सकता है: अमोनियाकल चांदी के दाग और चांदी नाइट्रेट दाग5,6। क्षारीय अमोनियाकी सिल्वर विधि में सिल्वर डाइऐमीन परिसर अमोनिया तथा सोडियम हाइड्रॉक्साइड से निर्मित होता है तथा अम्लीय फार्मलेडिहाइड विलयन के प्रयोग से विकास के दौरान धात्विक चांदी में कमी आती है । दाग बुनियादी प्रोटीन के लिए कुशलता से accommodates लेकिन अम्लीय और तटस्थ प्रोटीन के लिए एक समझौता प्रदर्शन से पता चलता है और है, इसके अलावा, शास्त्रीय glycine और taurine इलेक्ट्रोफोरेटिक सिस्टम तक ही सीमित है । इसकी तुलना में, सिल्वर नाइट्रेट के धब्बे सिल्वर आयनों की उच्च जैव-आत्मीयता का प्रोटीन से दोहन करते हैं, मुख्य रूप से साइड चेन से सल्फहाइडिल और कार्बोक्सिल समूह, और अम्लीय प्रोटीन को अधिक कुशलता से दाग देते हैं7. चांदी आयन बाइंडिंग के बाद, एक विकासशील समाधान (आम तौर पर एक धातु कार्बोनेट समाधान के निर्मित formaldehyde और सोडियम thiosulphate) चांदी आयनों धातु चांदी के दाने को कम करने के लिए लागू किया जाता है प्रोटीन बैंड ।
हालांकि चांदी धुंधला गया है अच्छी तरह से अपनी बहुमुखी प्रतिभा और उच्च संवेदनशीलता के लिए 1970 के दशकमें अपने विकास के बाद से जाना जाता है, विधि अक्सर मुश्किल के रूप में माना जाता है । सिल्वर-धुंधला विधियों में समय-प्रतिबंधित चरण होते हैं और निम्न पुनरुद्घनीयता दर्शाते हैं । चांदी के दाग के रंग के बाद से आम तौर पर एक समान नहीं है और कटौती कदम है, जो नियंत्रण मुश्किल है पर निर्भर है, चांदी के दाग एक मात्रात्मक विधि नहीं है और, इस प्रकार, जेल तुलना अध्ययन और प्रोटीन मात्रा9के लिए अनुशंसित नहीं है । संवेदनशीलता में अनुकूलित तरीकों aldehydes जो भी एक अधिक समान धुंधला10प्रदान कर सकते है का उपयोग कर सकते हैं । हालांकि, यह आगे डाउनस्ट्रीम aldehydes द्वारा प्रोटीन के crosslinking के कारण विश्लेषण की कीमत पर है । फास्ट प्रोटोकॉल ज्यादातर गठबंधन या समय को कम करने के लिए कदम छोटा, reproducibility और दाग5की एकरूपता समझौता । नतीजतन, प्रोटीन जेल धुंधला के भीतर कई चांदी धुंधला वेरिएंट हैं, प्रत्येक कुछ आवश्यकताओं के अनुरूप करने के लिए अनुकूलित; उदाहरण के लिए, सादगी, संवेदनशीलता, या डाउनस्ट्रीम विश्लेषण के लिए पेप्टाइड वसूली दर । इन विशेषताओं को भी एक दूसरे पर प्रभाव पड़ सकता है, और एक प्रोटोकॉल में सभी आवश्यकताओं को संतोषजनक मुश्किल हो सकता है ।
इस काम में, हम polyacrylamide जेल में प्रोटीन का पता लगाने के लिए एक नया फ्लोरोसेंट सिल्वर धुंधला विधि परिचय । इस विधि में, हम चांदी आयनों, Tpe-4TA (चित्रा 1), के लिए एक फ्लोरोजेनिक जांच का उपयोग करने के लिए चांदी-गर्भवती प्रोटीन11कल्पना । Tpe-4TA एकीकरण-प्रेरित उत्सर्जन (aie) सिद्धांत द्वारा बनाया गया है । यह जलीय विलयन में विलीन होने पर अउत्सर्जक होता है, परंतु चांदी आयनों की उपस्थिति में अत्यधिक उत्सर्जक होता है । एक फ्लोरोजेनिक विकासशील कदम के साथ पारंपरिक चांदी के दाग में chromogenic विकास की जगह से, फ्लोरोसेंट चांदी विधि एक कम पृष्ठभूमि के साथ कुल प्रोटीन की मजबूत धुंधला हो जाता है ।
इसके अलावा, फ्लोरोसेंट चांदी दाग प्रोटीन परिमाणन, जो व्यापक रूप से इस्तेमाल किया SYPRO रूबी दाग और पारंपरिक चांदी के दाग के साथ प्राप्त नहीं के साथ तुलनीय है के लिए एक अच्छा गतिशील रैखिक रेंज दिखाया । जेल कई जैविक प्रयोगशालाओं में आमतौर पर इस्तेमाल किया जेल प्रलेखन सिस्टम पर एक पराबैंगनी लैंप (excitation तरंगदैर्ध्य: 302/365 एनएम चैनल; उत्सर्जन: ~ ४९०-५३० एनएम) के साथ imaged किया जा सकता है ।

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td> 
			LDS Sample Buffer (4X)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>NP0007</td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td> 
			4-12% Bis-Tris Protein Gels, 1.0 mm, 15-well</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>NP0323BOX</td>
			<td>Precast gel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sample Reducing Agent (10X)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>NP0004</td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MES SDS Running Buffer (20X)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>NP0002</td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mini Gel Tank</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A25977</td>
			<td>Equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>300W Power Supply (230 VAC)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>PS0301</td>
			<td>Equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Unstained Protein Ladder</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>26614</td>
			<td>Sample</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silver nitrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>31630-25G-R</td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Bragg and co.</td>
			<td>42520J</td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetic acid</td>
			<td>J.T. Baker</td>
			<td>103201A</td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Milli-Q Synthesis A10</td>
			<td>Merk</td>
			<td>-</td>
			<td>Provides 18.2 M&#937;.cm water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>gel documentation system (c600 model)</td>
			<td>Azure biosystems</td>
			<td>-</td>
			<td>Equipment</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

fluorescent silver staining of proteins in polyacrylamide gels

सिल्वर धुंधला एक वर्णमितीय तकनीक व्यापक रूप से polyacrylamide जैल में प्रोटीन बैंड कल्पना के बाद सोडियम डोडेसिल सल्फेट-polyacrylamide जेल वैद्युतकणसंचलन (एसडीएस-पृष्ठ) का उपयोग किया जाता है । क्लासिक चांदी दाग ऐसी उच्च पृष्ठभूमि धुंधला के रूप में कुछ कमियां हैं, गरीब प्रोटीन वसूली, कम reproducibility, परिमाण के लिए एक संकीर्ण रैखिक गतिशील रेंज, और मास स्पेक्ट्रोमेट्री (एमएस) के साथ सीमित संगतता. अब, एक फ्लोरोजेनिक एजी+ जांच, tpe-4taके उपयोग के साथ, हम polyacrylamide जैल में कुल प्रोटीन दृश्य के लिए एक फ्लोरोसेंट चांदी धुंधला विधि विकसित की है । इस नए दाग पारंपरिक चांदी के दाग में परेशानी चांदी में कमी कदम से बचा जाता है । इसके अलावा, फ्लोरोसेंट चांदी दाग अच्छा reproducibility, संवेदनशीलता को दर्शाता है, और प्रोटीन का पता लगाने में रैखिक प्रमात्रीकरण, यह एक उपयोगी और व्यावहारिक प्रोटीन जेल दाग बना ।

फ्लोरोसेंट सिल्वर दाग़ के द्वारा दाग प्रोटीन बैंड एक ३६५ एनएम यूवी लैंप के तहत एक तीव्र हरी प्रतिदीप्ति प्रदर्शन । सभी 14 प्रोटीन बैंड (10-200 केडीए), ऊपर से नीचे तक, स्पष्ट रूप से दिखाई दे रहे थे, 1...

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Fluorescent Silver Staining of Proteins in Polyacrylamide Gels

यहां, हम polyacrylamide जैल में कुल प्रोटीन का पता लगाने के लिए एक नया फ्लोरोसेंट धुंधला तकनीक रूपरेखा एक विस्तृत प्रोटोकॉल का वर्णन । प्रोटोकॉल एक चांदी आयन विशिष्ट प्रतिदीप्ति बारी पर जांच, जो एजी का पता लगाता है का उपयोग करता है+-प्रोटीन परिसरों, और पारंपरिक chromogenic चांदी के दाग की कुछ सीमाएं समाप्त ।

Polyacrylamide जैल में फ्लोरोसेंट चांदी के प्रोटीन के धुंधला

Silver staining is a colorimetric technique widely used to visualize protein bands in polyacrylamide gels following sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide ...

यह एक उपन्यास जेल-धुंधला विधि है जो पारंपरिक चांदी के धुंधला को फ्लोरोसेंट चांदी के धुंधला में बदलने के लिए फ्लोरोजेनिक चांदी की जांच का उपयोग करती है। इस विधि ने पारंपरिक सिल्वर नाइट्रेट स्टेनिंग और एसवाईप्रो रूबी स्टेनिंग की तुलना में बेहतर प्रदर्शन दिखाया, जबकि एल्डिहाइड के बिना एक सरल और सीधा प्रोटोकॉल का उपयोग किया। प्रक्रिया का प्रदर्शन एलेक्स वोंग, मेरी प्रयोगशाला से एक अनुसंधान सहायक होगा ।इस प्रक्रिया को शुरू करने के लिए, आसुत पानी, एलडीएस बफर, और एक नमूना को कम करने वाले एजेंट वाले समाधान के साथ प्रोटीन के नमूनों को पतला करें। 4-12% बीआईएस-ट्रिस प्रोटीन जेल के साथ एसडीएस-पेज करने के लिए एमईएस बफर से भरा एक मिनी जेल टैंक सेट करें। तैयार प्रोटीन नमूने के साथ कुओं लोड, तो 30 मिनट के लिए 200 वोल्ट की एक निरंतर वोल्टेज पर जेल चलाते हैं।इलेक्ट्रोफोरेसिस के बाद, एक कक्षीय शेखर पर इथेनॉल और एसिटिक एसिड युक्त 100-मिलीलीटर समाधान में जेल को जलमग्न करें और 50 आरपीएम पर मिलाते हुए कमरे के तापमान पर प्रत्येक 30 मिनट के लिए दो बार इनक्यूबेट करें। इसके बाद, जेल को एक साफ कंटेनर में अल्ट्रापुरे पानी के साथ तीन बार धोएं, प्रत्येक धोने के साथ 10 मिनट तक चलने वाला। सबसे पहले, 0.01 ग्राम चांदी नाइट्रेट को अल्ट्रापुरे पानी के 10 मिलीलीटर में घोलकर 0.1% की एकाग्रता के साथ स्टॉक समाधान तैयार करने के लिए स्टॉक समाधान के 100 माइक्रोलीटर को अल्ट्रापुरे पानी के 100 मिलीलीटर में जोड़ें ताकि सिल्वर नाइट्रेट वर्किंग सॉल्यूशन बनाया जा सके।एक धूम हुड में, एक सील ग्लास कक्ष में चांदी नाइट्रेट काम समाधान के 100 मिलीलीटर में जेल को जलमग्न करें। एक कक्षीय शेखर पर 50 आरपीएम पर मिलाते हुए एक घंटे के लिए गर्भवती और इनक्यूबेट के दौरान जेल को प्रकाश से बचाने के लिए एल्यूमीनियम पन्नी का उपयोग करें। इसके बाद, एक साफ कंटेनर में अल्ट्रापुरे पानी के साथ दो बार जेल धोएं, प्रत्येक धोने के साथ लगभग 100 मिलीलीटर पानी का उपयोग करके और 60 सेकंड तक चलने वाले।पृष्ठभूमि धुंधला को कम करने के लिए चांदी के गर्भवती कदम के बाद जेल को साफ करने के लिए अल्ट्रापुरे पानी का उपयोग करना महत्वपूर्ण है। सबसे पहले, टीपीई-4टीए डाई के तीन मिलीग्राम में 50 मिलीलीटर अल्ट्रापुरे पानी जोड़ें। तीन मिनट के लिए समाधान को सोनिकेट करें और डाई को भंग करने में मदद करने के लिए प्रत्येक सोनिकेशन सत्र के बीच में एक-मोलर सोडियम हाइड्रोक्साइड समाधान के पांच माइक्रोलीटर जोड़ें, आमतौर पर तीन बार तक।फिर यह सुनिश्चित करने के लिए कि डाई पूरी तरह से भंग हो गई है, 365-नैनोमीटर यूवी लैंप के तहत समाधान के फ्लोरेसेंस की जांच करें। केवल कमजोर या गैर-दूत समाधान पूर्ण विघटन का संकेत देते हैं। फ्लोरोजेनिक विकासशील समाधान तैयार करने के लिए, 90 मिलीलीटर अल्ट्रापुरे पानी में टीपीई-4TA स्टॉक समाधान के 10 मिलीलीटर जोड़ें।समाधान के पीएच की जांच करने के लिए पीएच मीटर का उपयोग करें। यदि पीएच सीमा से बाहर है तो पतला सोडियम हाइड्रोक्साइड समाधान या एसिटिक एसिड का उपयोग करके, 7 और 9 के बीच पीएच के समाधान को ट्यून करें। अगला जेल को फ्लोरोजेनिक विकासशील समाधान के 100 मिलीलीटर के साथ एक स्वच्छ और सीलबंद कंटेनर में स्थानांतरित करें और यह सुनिश्चित करें कि जेल पूरी तरह से डूबे हुए हैं।कंटेनर को सील करें और इसे प्रकाश से बचाने के लिए कवर करें। 50 आरपीएम पर और कमरे के तापमान पर एक कक्षीय शेखर पर रात भर कंटेनर हिला। जेल को एक साफ कंटेनर में स्थानांतरित करें और इसे 30 मिनट के लिए 10% इथेनॉल के 100 मिलीलीटर में डिस्टरबें करें।इसके बाद पांच मिनट तक अल्ट्रापुरे पानी में जेल को कुल्ला करें। जेल को बेंचटॉप ट्रांसिलुमिनेटर पर कल्पना की जा सकती है या 365-नैनोमीटर चैनल या 302-नैनोमीटर चैनल पर जेल प्रलेखन मशीन पर इमेजकिया जा सकता है। इस अध्ययन में पॉलीएक्रीलामाइड जैल में प्रोटीन को दाग देने के लिए एक उपन्यास फ्लोरोसेंट सिल्वर स्टेनिंग विधि का इस्तेमाल किया जाता है।फ्लोरोसेंट सिल्वर दाग से सना प्रोटीन बैंड ३६५-नैनोमीटर यूवी लैंप के तहत एक तीव्र हरे रंग का प्रदर्शन करता है । सभी 14 प्रोटीन बैंड स्पष्ट रूप से दिखाई दे रहे है और लाल रंग SYPRO रूबी डाई द्वारा दाग बैंड के साथ अच्छी तरह से सहसंबंधित । इस फ्लोरोसेंट सिल्वर स्टेनिंग विधि में उच्च संकल्प प्रतीत होता है।कुछ प्रोटीन बैंड के लिए फ्लोरोसेंट सिल्वर दाग की संवेदनशीलता भी फ्लोरोसेंट एसवाईप्रो रूबी दाग की तुलना में थोड़ी बेहतर होती है। विशेष रूप से इस दाग के प्रदर्शन में 10 और 40 किलोडडलटन के बीच प्रोटीन बैंड के लिए सुधार किया जाता है, जो इंगित करता है कि नई विधि कम आणविक वजन वाले प्रोटीन का पता लगाने के लिए विशेष रूप से उपयोगी है। जैसा कि देखा जा सकता है, आंकड़ों से यह भी पता चलता है कि फ्लोरोसेंट चांदी का दाग प्रोटीन क्वांटिफिकेशन की अपेक्षाकृत व्यापक रेंज में सभी 14 प्रोटीन के लिए एक अच्छा और एक समान रैखिकता देता है ।जबकि चांदी नाइट्रेट दाग पृष्ठभूमि संकेत और विकृत चोटियों के एक उच्च स्तर दिया, फ्लोरोसेंट चांदी दाग सभी 14 प्रोटीन भर में SYPRO रूबी दाग के बराबर अच्छा विपरीत और एक समान तीव्रता वितरण के साथ बैंड का पता चला । धोने के कदम महत्वपूर्ण हैं क्योंकि वे अवशिष्ट निर्धारण समाधान को चांदी के गर्भवती या फ्लोरोजेनिक विकास को बाधित करने से सीमित करते हैं। सिल्वर नाइट्रेट का इस्तेमाल करते समय स्किन कॉन्टैक्ट से बचें।किसी भी बिखराव को तुरंत साफ करें। सुरक्षात्मक कपड़े और दस्ताने पहनें और रासायनिक कचरे के रूप में निपटाएं।

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Characterization of Multi-subunit Protein Complexes of Human MxA Using Non-denaturing Polyacrylamide Gel-electrophoresis

मानव MXA की बहु सबयूनिट प्रोटीन परिसरों की विशेषता गैर denaturing polyacrylamide जेल-वैद्युतकणसंचलन का उपयोग

The formation of oligomeric complexes is a crucial prerequisite for the proper structure and function of many proteins. The interferon-induced antiviral ...

Voltage-clamp Fluorometry in Xenopus Oocytes Using Fluorescent Unnatural Amino Acids

Voltage-clamp Fluorometry in Xenopus Oocytes Using Fluorescent Unnatural Amino Acids

वोल्टेज क्लैंप फ्लोराइट्री में<em&gt; Xenopus</em&gt; फ्लोरोसेंट अस्वास्थ्यकर एमिनो एसिड का प्रयोग करने वाले ओक्साइट्स

Voltage-Clamp Fluorometry (VCF) has been the technique of choice to investigate the structure and function of electrogenic membrane proteins where ...

Isolation of Glomeruli and In Vivo Labeling of Glomerular Cell Surface Proteins

Isolation of Glomeruli and In Vivo Labeling of Glomerular Cell Surface Proteins

अलगाव की Glomeruli और Vivo में Glomerular सेल सतह प्रोटीन की लेबलिंग

Proteinuria results from the disruption of the glomerular filter that is composed of the fenestrated endothelium, glomerular basement membrane, and ...

How to Quantify the Fraction of Photoactivated Fluorescent Proteins in Bulk and in Live Cells

कैसे थोक में और जीने की कोशिकाओं में Photoactivated फ्लोरोसेंट प्रोटीन के अंश को बढ़ाता है

Photoactivatable and -convertible fluorescent proteins (PA-FPs) have been used in fluorescence live-cell microscopy for analyzing the dynamics of cells ...

Structure Solution of the Fluorescent Protein Cerulean Using MeshAndCollect

MeshAndCollect का उपयोग कर फ्लोरोसेंट प्रोटीन सेरुलियन की संरचना समाधान

X-ray crystallography is the major technique used to obtain high resolution information concerning the 3-dimensional structures of biological ...

Use of Recombinant Fusion Proteins in a Fluorescent Protease Assay Platform and Their In-gel Renaturation

एक फ्लोरोसेंट चिढ़ा परख मंच में रिकॉमबिनेंट फ्यूजन प्रोटीन का उपयोग करें और उनके जेल Renaturation

Proteases are intensively studied enzymes due to their essential roles in several biological pathways of living organisms and in pathogenesis; therefore, ...

Fluorescent Visualization of Mango-tagged RNA in Polyacrylamide Gels via a Poststaining Method

पॉलीऐक्रिलमाइड जेल्स में एक पोस्टस्टेनिंग विधि के माध्यम से आम-टैग किए गए आरएनए का फ्लोरोसेंट विजुअलाइजेशन

Native and denaturing polyacrylamide gels are routinely used to characterize ribonucleoprotein (RNP) complex mobility and to measure RNA size, ...

Localization of SUMO-modified Proteins Using Fluorescent Sumo-trapping Proteins

सुमो का स्थानीयकरण-संशोधित फ्लोरोसेंट सूमो-फँसाने प्रोटीन का उपयोग कर प्रोटीन

Here we are presenting a novel method to study the sumoylation of proteins and their sub-cellular localization in mammalian cells and nematode oocytes. ...

Characterizing Cellular Proteins with In-cell Fast Photochemical Oxidation of Proteins

प्रोटीन के इन-सेल फास्ट फोटोकेमिकल ऑक्सीकरण के साथ सेलुलर प्रोटीन की विशेषता

Fast photochemical oxidation of proteins (FPOP) is a hydroxyl radical protein footprinting method used to characterize protein structure and interactions. ...

Transverse Sectioning of Mature Rice (Oryza sativa L.) Kernels for Scanning Electron Microscopy Imaging Using Pipette Tips as Immobilization Support

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परिपक्व चावल के अनुप्रस्थ विभाजन(Oryza sativa एल.) स्कैनिंग इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी इमेजिंग के लिए कर्नेल्स स्थिरीकरण समर्थन के रूप में पिपेट युक्तियाँ का उपयोग कर