Name: reproductive techniques for ovarian monitoring and control in amphibians
Uploaded: 2019-05-12T12:30:00
Duration: 4 min 37 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Reproductive Techniques for Ovarian Monitoring and Control in Amphibians at JoVE.com

Natalie Calatayud vil gerne takke Dr. Barbara Durrant for uddannelse og assistance med ultralyd og Exploradora de Immuebles, S.A. (EISA) for tildeling af økonomisk støtte til min forskning Associate position på SDZG. Tak til Dr. Kylie Cane for kommentarer til manuskriptet samt til de officielle anmeldere (hvem de end måtte være). Tak til Jonathan Dain vores 2018 sommer stipendiat, San Diego Zoo Institut for bevaring forskning for at give billeder (figur 1a, B). Monica stoops udvider påskønnelse til sammenslutningen af zoologiske haver og akvarier Conservation fond og Disney verdensomspændende bevarings fond for at yde økonomisk støtte til at etablere den bundne Necturus befolkning. Desuden blev støtten også modtaget via private donationer fra padde Advocate MS. iris de la Motte. Tak, er givet til hr. Christopher DeChant og Dr. Mark Campbell for deres betydelige bidrag til forskningen.

Salamander procedurer blev godkendt af Cincinnati Zoo & botanisk have (CZBG) institutionelle pleje og brug udvalg (IACUC) protokoller 11-106, 13-110, 14-133, og 15-138. Alle Frog og TOAD procedurer blev godkendt af San Diego Zoo global (SDZG), institutionel pleje og brug Komité (IACUC) protokoller: 15-001, 16-005 og 18-003.
Pasning og behandling af dyr blev godkendt af det etiske udvalg for National Museum of Natural History (Paris) (Museum national d'Histoire Naturelle-Ménagerie du Jardin des Plantes (MNHN)), i overensstemmelse med de institutionelle og nationale retningslinjer (Kommissionen de génie Génétique, retning départementale des services vétérinaires, den Europæiske Unions direktiv 2010/63/EU, aftale afgørelse nr. C75-05-01-2 for den europæiske konvention om hvirveldyr, der anvendes til forsøg og andre videnskabelige formål. Alle de protokoller, der blev anvendt i dette studie, blev godkendt under referencenummeret 68-037.
1. ikke-invasive ovarie overvågningsteknikker
<ol><li>Visuel inspektion og palpering<ol>
<li>Hold den kvindelige Anuran på en af de tre måder, der er beskrevet nedenfor.<ol>
<li>Fastgør frøen eller toad's ben med ringen og lille finger, støtte Rygsiden (maven) af frøen krop med indekset og den midterste finger og den ventrale side med tommelfingeren (figur 1a).</li>
			<li>Hold frøen eller tudse i den dominerende hånd med en tommelfinger på maven og resten af fingrene sikre bagsiden af dyret. Brug den ikke-dominerende hånd til at palpere dyrets mave, føler, hvis der er subdermal ujævnhed (figur 1b).</li>
			<li>Hvil frøen eller toads mave på håndfladen, front arme draperet over pegefingeren og en tommelfinger på dens øvre ryg.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Da hale er fuldt akvatiske i naturen, udføre visuel inspektion af en af to metoder, der er beskrevet nedenfor.<ol>
<li>Flyt dyret til en separat 4 L beholder, der indeholder tank vand. Hold beholderen (låget sikret) op og skinne lommelygte på undersiden for at visualisere tilstedeværelsen/fravær af æg.</li>
			<li>Anesthetize i MS222 (0,5 g/L; Tricain methanesulfonat, bufferet med 0,5 M NaHCO3). Efter induktion, rotere dyret på ryggen og undersøge maven.</li>
		</ol>
</li>
	</ol></li>
	<li>Morphometriske vurderinger<ol>
<li>Padder Bemærk: anæstesi er ikke påkrævet.<ol>
<li>Brug kalibre, måle dyret fra spidsen af munden, langs midten af kroppen til spidsen af halen for at opnå SUL og SVL (figur 2a, B).</li>
			<li>Tara en plastikbeholder på en digital præcisions skala. Dyret placeres i en tareret beholder og vejes (figur 2c).</li>
			<li>For større dyr, som bullfrogs, eller når der opnås vægte i marken, bruge en hængende skala (figur 2D).</li>
			<li>Som i mange og arter, skelne R. muscosa voksne hunner fra mænd ved deres større størrelse og manglen på ægteskabs (tommelfinger) puder på hænderne (figur 3).</li>
			<li>Beregn kroppens tilstand, som en grundlæggende vurdering af den generelle sundhed ved følgende formel: Fulton's indeks: K = masse ÷ længde3 Bemærk: Fulton's index bruger en dimensionel balance af volumen relateret til masse og længde, hvor 3 er den skaleringseksponent, der relaterer masse og længde isometrisk.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Caudates<ol>
<li>Tara skala med en tom pose, før du placerer ikke-bedøvet dyr indeni. Pas på ikke at indføre overskydende vand (figur 2D) og handle hurtigt som dyr udskiller Slim som en stress respons på at blive tilbageholdende.</li>
			<li>Få voksne foranstaltninger ved at immobilisere enkeltpersoner i en lige position i bunden af en genforseglbar plastikpose eller i en separat plastikbeholder, der kan rumme ekspanderede kalibre.</li>
			<li>Mål kropslængden med kalibre (figur 2E).</li>
			<li>Mål hale fra spids af snude til spids af halen (SVL) for at overvåge væksten.</li>
		</ol>
</li>
	</ol></li>
	<li>Adfærdsmæssige observationer<ol>
<li>Fysisk observere dyr i realtid eller bruge et videokamera til at optage adfærd.</li>
		<li>Optag observationer af dyr kategorisere adfærd og konstruere en ethogram (figur 4).</li>
		<li>Klassificere reproduktions adfærd Bemærk: figur 4 eksemplificerer en type reproduktions adfærd observeret i anurans.</li>
	</ol></li>
	<li>Ultralyd Bemærk: ultralydstransducer valg, i dette tilfælde, 7,5 mHz lineær eller en multi-frekvens (10-6 mHz) mikro-konvekse, anbefales til Necturus og en 10 MHz sonde og vandopløselig, salt-fri gel til R. muscosa. Udførelse af ultralyd på salamandre kan kræve anæstesi (Se afsnit 1,5 for instruktioner).<ol>
<li>Padder<ol>
<li>Udfør ultralyd på R. muscosa ved hjælp af to personer (figur 5a).</li>
			<li>Første person: hold dyret med den dominerende hånd og anvende den vandopløselige, salt fri gel til dyrets abdomen.</li>
			<li>Anden person (Ultra-sonographer): Tag 10 MHz-sonden i den dominerende hånd, og Anvend den på maven og sørg for at gøre god kontakt mellem sonden og gelen.</li>
			<li>Skub indad fra lige under armpit mod midten af dyrets abdominale midterlinje for at visualisere hele æggestokkene.</li>
			<li>Ultra-sonographer: Brug ikke-dominerende hånd til at fryse ramme og fange de ønskede billeder på ultralyd.</li>
			<li>Kategorisere stadiet af ovarie cyklussen med det klassificeringssystem, der er fastsat for slægten4 (tabel 2, figur 5b-F).</li>
			<li>Skyl eventuelt gel fra dyret ved afslutningen af proceduren.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Caudates<ol>
<li>Overfør ikke-bedøvet Necturus til 4 l rektangulær beholder fyldt med 2 liter tank vand.</li>
			<li>Minimer dyrs bevægelse ved at slukke for rummet lys og/eller kop en hånd overhovedet af dyret.</li>
			<li>Placer transduceren i en afstand af 1-2 cm fra kropsvæg.</li>
			<li>Find hjertet på det ventrale midterlinje niveau til forbimene, og flyt derefter transduceren fikseres og Undersøg æggestokkene7.</li>
			<li>Kategoriser hunnerne efter klassificeringssystem, der er fastsat for slægten4 (figur 6a, B, C).</li>
			<li>Opnå nøjagtige målinger af æg i midten til slutningen gravid fase ved at optage billeder, når dyrets krop er i en vinkel til transduceren (dvs. ikke lineær, men let bue; Figur 6b). Ellers gør overlappende follikler det vanskeligt at differentiere individuelle ægstørrelser.</li>
		</ol>
</li>
	</ol></li>
	<li>Anæstesi induktion og nyttiggørelse<ol>
<li>Padder<ol>
<li>Anesthetize i MS222 (0,5 g/L; Tricain methanesulfonat Buffered (0,5 M NaHCO3) som tidligere beskrevet.</li>
			<li>Brug den opretterende refleks som en primær indikator for, i hvor høj grad dyret er blevet bedøvet. Komplet tab af refleks viser en tilstand af dyb anæstesi.</li>
			<li>Fjern dyret fra vandet-bad-baseret anæstesi (MS-222), når den opretterende refleks er tabt.</li>
			<li>Placer dyret på en våd (med anæstetikfri de-chlorerede vand) håndklæde.</li>
			<li>Sørg for at holde dyret fugtig under hele operationen.</li>
			<li>Intubate små padde med røde gummi katetre, uncuffed rør eller klassiske cuffed endotracheal tubus rør uden oppustethed manchetten.</li>
			<li>Give en lav strøm af ilt (0,5-0,75 L/min) med 0,5-1% isofluran.</li>
			<li>Stop isofluran efter proceduren, men holdstrømmen af ilt i 1 minut.</li>
			<li>Dyrt dyret, og skyl dyret grundigt med bedøvelses frit dechloreret vand i 2 minutter.</li>
			<li>Sæt dyret i en overfladisk mængde af de-chlorerede vand eller på et vådt håndklæde.</li>
			<li>Evaluer dyrets restitution ved forsigtigt at trække på en bagarm for at forlænge den. Enhver responderende sammentrækning af lemmer indikerer tilbagetræknings refleks.</li>
			<li>Overvåge andre indikatorer for nyttiggørelse såsom gular respirationer (hals bevægelse) og den opretnings refleks.</li>
			<li>Overvej amfibie genvundet, når alle reflekser er vendt tilbage, og hjerte og respiration satser er vendt tilbage til præ-bedøvelses værdier.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Caudates<ol>
<li>Anesthetize Necturus og Ambystoma i MS222 (0,5 g/L tricain methanesulfonat, bufferet med 0,5 M NaHCO3, (MS222) i en 4 L rektangulær tank.</li>
			<li>Placer en luft sten (1 tommer) og luftpumpe i tanken og drej den til en konstant strøm for at give tilstrækkelig iltning.</li>
			<li>Når lemmer funktion og den oprette refleks er tabt, fjerne dyret fra vandet-bad-baseret anæstesi (MS-222) og sætte dyret på en våd (med bedøvelses-fri de-chlorerede vand) håndklæde.</li>
			<li>Oprethold hud og Gill fugt med en klemme flaske af tank vand.</li>
			<li>For at genvinde dyret, forsigtigt placere det ventrale side ned i en 4 L plastikbeholder fyldt med 2 L af tanken vand med en luft sten. Bemærk: Recovery starter med Gill blinkende, efterfulgt af evnen til at flytte sin hale og fremdrive og endelig funktionelle bevægelse af lemmer.</li>
			<li>Returner dyret til dets oprindelige husets beholder og overvåger det nøje over de næste 24 timer. Bemærk: andre metoder til bedøvelse for padder findes, og disse er beskrevet i Wright og Whitaker8.</li>
		</ol>
</li>
	</ol></li>
</ol>2. invasive ovarie overvågning og kontrolteknikker
Bemærk: denne procedure er blevet tilpasset fra Forzán et al.10.
<ol><li>Hold frøen i den dominerende hånd, og dup tør venippunktur siden af Frøens ansigt med en steril serviet eller gaze.</li>
	<li>Tør ansigtet for at undgå, at blodet spredes for meget på tværs af huden.</li>
	<li>Indfør nålen (26 G 1/2 "og 27 G 1/2"), med facet opad, gennem huden, hvor den hævede hud omkring øjet og overkæbe ryggen mødes for at danne et punkt i en trekant (gul kontur) (figur 7a) adgang til Vena facialis nær Vena orbitalis posterior.</li>
	<li>Punktering ansigtet vene under det højre øje og over overkæbe ryggen, startende mellem 1-2 mm tilbage fra midterlinjen i øjet (figur 7a). Bemærk: for mindre frøer (under 20 g) skal du flytte indsætningspunktet tættere på en position direkte under øjets midterlinje.</li>
	<li>Vinkel microhematocrit røret nedad for at muliggøre tyngdekraften til at hjælpe blodtilførslen ind i røret. Blod skal flyde umiddelbart efter punktering (figur 7b, C).</li>
	<li>Ved det første tegn på blodgennemstrømning, Placer spidsen af microhematocrit røret på punkturstedet og indsamle 1-2 fuld microhematocrit rør af blod og placere rør i egnede beholdere til indsamling (figur 7b, C).</li>
	<li>Hvis blodet ikke flyder let, eller lydstyrken er meget lav, skal du flytte kanylen lidt eller sætte nålen ind i den anden side af ansigtet.</li>
	<li>Stop blødning ved at trykke gaze fast til punkturstedet for mindst 20 s.</li>
	<li>Efterlad Frog ud af vandet i 10 minutter for at bekræfte punkturstedet ikke genåbne.</li>
	<li>Brug en ny nål og nye microhematocrit rør til hver frø udtaget.</li>
</ol>3. hormon induktion
<ol><li>Hormonbehandling<ol>
<li>Forbered hormon injektioner umiddelbart før brug for at sikre maksimal effekt.</li>
		<li>Vælg et hormon fra det valg, der er anført i tabel 1.</li>
		<li>Bestem koncentrationen af hormonet, der skal injiceres ved hjælp af en μL eller mL/g legemsvægt16.</li>
		<li>Fortynd hormonet i en af følgende: vand, fosfat bufferet saltvandsopløsning (PBS), saltvandsopløsning amfibie Ringer's Solution (SARS) eller saltopløsning.</li>
		<li>Må ikke overskride en Injektionsvolumen på 200 μL for frøer, som vejer 30-70 g og 300 μL for frøer, som vejer 80-110 g (personlig observation)16.</li>
		<li>For korrekt opbevaring af et dyr under hormon administration af ethvert dyr, der spænder fra 10-100 g, skal du bruge en af de relevante metoder til opbevaring beskrevet i punkt 1,1.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Padder<ol>
<li>Beregn den krævede koncentration pr. individ ved hjælp af et gram pr. legemsvægt beregning (g/legemsvægt).</li>
		<li>Lige før administration, rekonstruere i en steril fortynder valg.</li>
		<li>Sørg for, at der ikke er bobler tilbage i sprøjten før injektion.</li>
		<li>Hold dyret forsvarligt i den ikke-dominerende hånd, og Injicer injektionen med en dominerende hånd.</li>
		<li>Injicer injektion efter hormon specifikationer. De mest almindeligt forekommende injektioner i padder er subkutane, intra peritonealdialyse eller intra muskuløs (figur 8).</li>
		<li>Administrere IP-injektioner i den nedre del af maven eller i den nedre sektion af ryggens side af kroppen nær bagbenet (figur 9).</li>
		<li>Indgiv intra-muskuløse injektioner fortrinsvis i bagbenene.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Hale (Necturus)<ol>
<li>Rekonstruere hormon valg i sterilt vand i henhold til gram per kropsvægt metode beskrevet ovenfor.</li>
		<li>I tilfælde af Necturus anvendes doser på 1,7-2,3 μg GnRH/g legemsvægt.</li>
		<li>Fjern Necturus fra bedøvelse kammer og sted på en 45 ° overflade dækket med kirurgisk Drape.</li>
		<li>Placer dyret med hovedet pegende nedad.</li>
		<li>Nærmer sig posterior kvadrant af maven (hale af bageste ben) i en 15-20 ° vinkel. Vær omhyggelig med ikke at indføre luft i sprøjten.</li>
		<li>Injicer (IP) ved hjælp af en insulin sprøjte og 27-30 G nål.</li>
		<li>Injicer hormonet ved hjælp af en insulin sprøjte og 27-30 G nål.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. kirurgi
<ol><li>Generel kirurgisk forberedelse og procedure<ol>
<li>For at opretholde aseptiske procedurer skal du bruge klare sterile plastik gardiner til at isolere operationsstedet. Reducer fordampning ved at holde den omgivende hud fugtig.</li>
		<li>Fugt alle materialer, der vil kontakte dyrets hud med sterilt vand. Lav hud indsnit med en nummer 15 eller nummer 11 skalpel klinge. Bemærk: en kombination af kold stål, radio kirurgi eller Diode Laser. Hæmostase i mild hæmoragisk procedure kan opnås ved elektrocauter eller Diode Laser.</li>
		<li>Brug bomulds tippet spyd eller applikatorer til at tillade anvendelse af lokaliserede tryk til små fartøjer holde styr på blodtab.</li>
		<li>Brug bomulds tippet Spears eller applikatorer til at styre små lukkede rum i stedet standard gaze firkanter.</li>
		<li>Brug mikro-instrumenter, ligesom oftalmologiske instrumenter, med fine, små spidser, når de udfører kirurgi på dyr, der vejer mindre end 1 kg.</li>
		<li>Brug plastik, selv opgående retraktorer (f. eks. Lone Star retractor) til at passe til forskellige størrelser af indsnit.</li>
		<li>Brug øjenlåg retraktorer til at trække coelomic incisioner.</li>
		<li>Brug forstørrelses instrumenter, hvor det er nødvendigt for at udføre kirurgi på mindre patienter. Bemærk: Analgesia er påkrævet med enhver kirurgisk procedure i padder. Manglende administration af tilstrækkelig analgesi under operationen har været forbundet med forsinket tilbagevenden af normale funktioner. Desuden, analgesi potenserer virkningerne af bedøvelsesmidler (tabel 3)34.</li>
	</ol></li>
	<li>Padder<ol>
<li>Når X. laevis er blevet bedøvet som beskrevet i trin 1.5.1, skal dyret positionere sig i ryggens fordybelighed (figur 10A, C).</li>
		<li>Forbered kirurgisk felt aseptisk ved at tørre fugtig steril gaze med fortyndet povidon-jod opløsning (1/10) på stedet for 10-15 s eller 0,75% chlorhexidin opløsning på operationsstedet i mindst 10 min før operationen35.</li>
		<li>Lav en 3 mm paramedian hud indsnit i midten coelom (mellem skuldrene og cloaca) med en fed slagtilfælde efterlader et rent snit ved hjælp af en no. 15 eller No. 11 skalpel. Bemærk: man kan bruge en Diode Laser også til hud incisioner.</li>
		<li>Løft abdominal membranen, lav og indsnit og dissekere omhyggeligt ved hjælp af en no. 15 eller No. 11 skalpel. (Figur 10b, D).</li>
		<li>Trække de coelomic indsnit med øjenlåg retraktorer (eller passende udstyr).</li>
		<li>Punktafgiftspligtige en del af ægmassen uden at ligere blodkarrene.</li>
		<li>For komplet ovariektomi, ætse omgivende blodkar ved elektro kautery eller laser Diode (Figur 11).</li>
		<li>Ved hjælp af Monofilament sutur, tæt celiotomi indsnit med en afbrudt, everting sutur mønster.</li>
	</ol></li>
	<li>Caudates<ol>
<li>Once A. mexicanum er blevet bedøvet, placere det i den rigtige laterale recumbency, med venstre bækken lemmer simpelthen placeret mod halen base.</li>
		<li>Forbered det kirurgiske felt aseptisk ved at placere fugtig steril gaze med fortyndet povidon-jod-opløsning (1:10) på stedet for 10-15 s. Alternativt kan du bruge steril gaze gennemblødt i 0,75% chlorhexidin opløsning og placere på operationsstedet i mindst 10 min før operationen (figur 12a)36,37 .</li>
		<li>Tegn en linje mellem skulderen og bagbenene for at opdele kroppen i tre lige store dele (figur 12B).</li>
		<li>Gør incisionsstedet mellem den anden og tredje del.</li>
		<li>Tag fat i den underliggende muskel og løft væk fra den coelomic Viscera.</li>
		<li>Forsigtigt tvinge små produkter gennem den coelomic muskulatur og ind i det coelomic hulrum.</li>
		<li>Træk de coelomic indsnit med øjenlåg retraktorer (eller eventuelt passende materiale) tilbage (figur 12C).</li>
		<li>For komplet ovariektomi, ætse omgivende blodkar ved elektro kautery eller laser Diode (figur 12D).</li>
		<li>Ved hjælp af Monofilament sutur, tæt celiotomi indsnit med en afbrudt, everting sutur mønster.</li>
	</ol></li>
</ol>

Forfatterne har intet at afsløre.

Direkte håndtering, visuel observation og morphometriske foranstaltninger giver ikke-invasive teknikker og er de første vurderingskriterier for bestemmelse af kvindelig reproduktionsfase. Denne undersøgelse viser dog, at gravid ovarier ikke altid kan identificeres pålideligt ved palpation. Afhængigt af arten kan gravid æggestokke undertiden påvises visuelt gennem semi-gennemskinnelig (figur 13a, B) eller fuldstændig gennemsigtig hud på den ventrale side af dyret (figur 13c). Kvinder, der har afsluttet oviposition kan vise tydelige ændringer i deres udseende sammenlignet med gravid kvinder (f. eks løs hud og tab af op til 30% af deres kropsmasse, figur 13D). Under avl, hanner og hunner vil vise visse adfærd, der giver oplysninger om nærhed til ægløsning og oviposition. I tilfælde af R. muscosa indikationer på, at en kvindelig er tæt på oviposition begynde med den kvindelige ind i hånd stande.
Anvendelsen af ultralyd teknologi til Anurans og Caudates tillader diagnosticering af tilstedeværelse eller fravær af æg og om oviposition var forbundet med fuldstændig eller delvis frigivelse af udviklede æg. Således giver denne metode en mere fuldstændig og præcis vurdering af reproduktiv status uden at være begrænset til bestemmelse gravid/ikke-gravid status via en visualisering teknik, der varierer efter abdominal hud gennemsigtighed, eller epidermal konsistens blandt de forskellige amfibie arter. Ultralyd kan udføres med relativ lethed og med lidt stress til dyrene (figur 5 og Figur 13) og kan bruges til at karakterisere reproduktive cyklusser og til at bestemme reproduktions status4. Det er afgørende at blive fortrolig med arterne; denne undersøgelse viste imidlertid, at Necturus og R. muscosa har fælles udviklingsmæssige tegn i deres reproduktions mønstre, der giver mulighed for en tilsvarende klassificering af reproduktions stadiet (figur 5). Gennem denne teknologi er der nu beviser for, at ægudvikling er høj i fangenskab Necturus og R. muscosa , og at begge disse arter følger en sæsonbestemt mønster. Selv om årsagerne til disse fænomener er ukendte og kræver yderligere undersøgelse, uden brug af ultralyd, flere områder af æggestokkene dysfunktion, såsom æg retention og delvis oviposition, ville have gået uopdaget. Fremtidige anvendelser til denne teknik vil blive brugt til at afgøre, om kvinder skal udvælges til avl i et givet år, og om oviposition er komplet.
En blod indsamlings protokol, som den, der præsenteres i R. muscosa, som er både effektiv og forårsager minimal lidelse for dyret, er optimal til at studere hormon profiler i fangenskab og Vildtfangede anuraner (Calatayud, ikke offentliggjort). Til dato foreligger der ingen oplysninger om de årlige hormon profiler af captive R. muscosa og derfor ingen viden om, hvordan hormoner påvirker deres helbred og reproduktion. Desuden, med bevis for, at kvinder af denne art ikke kan være årlige opdrættere, hormonelle profilering vil være en anden metode til sporing af æggestokkene cyklusser. Sammen med ultralyd, hormon analyse kan føre til bedre forudsigelse af, hvad kvinder vil være klar til oviposition. Desuden er to tilfælde af interkønnet i den bundne R. muscosa -population blevet dokumenteret i det forløbne år. Desuden er udviklingen af tommelfinger Pads blevet noteret på nogle af de ældre stiftende kvinder. Årsagerne til dette er i øjeblikket under undersøgelse, men de første resultater tyder på, at det kan vedrøre ændringer i testosteronniveauer (Calatayud, ikke offentliggjort). Kræsne hormonelle cyklusser hos kvinder i forskellige aldre vil hjælpe os med at forstå, hvorfor kvinder kan udvikle mand-associerede sekundære seksuelle karakteristika, og om dette forventes i en aldrende befolkning.
Udefrakommende hormonbehandling er blevet brugt til at overvinde reproduktive dysfunktioner ofte stødt på fangenskab amfibier. Men for både R. muscosa og necturus populationer i denne undersøgelse, ingen signifikante forskelle i oviposition mellem hormon-behandlede og kontrol hunner blev påvist over en 2 og 5-årig periode, hhv. Dette kan indikere, at hormon administration protokol, doser, priming og hormon kombination anvendes ikke var tilstrækkelig for arten. En nærmere analyse af de enkelte kvindelige reproduktions historier antyder, at R. muscosa ikke kan opleve en årlig avl, hvilket også kan være en følge af den manglende hormonelle virkning hos behandlede kvinder. Fordi en vis procentdel af kvinder konsekvent sprunget avl hvert år, forstå den naturlige historie af arterne kan hjælpe med at afgøre, om der er behov for udefrakommende hormoner, og når de kan være mest effektive. De procedurer, der er skitseret i denne artikel kan anvendes på en række arter, (tabel 1) og er for anurere spænder fra 5 g til 150 g; større dyr kan kræve forskellige sprøjter og nåle målere. Injektionsstedet varierer med nogle hormoner, der kræver intra-muskuløs, intra-peritoneal, subkutan eller intradermal injektion (figur 7).
Kirurgi med henblik på ovariektomi er en almindelig metode, der anvendes i forskellige amfibie arter for at opnå oocytter til embryologiske undersøgelser. Ovariektomi kan også være indiceret til populations kontrol og medicinske spørgsmål såsom ægretention. I tilfælde af partielle ovariectomier, hvor der udføres oocyt-høst til forskningsformål, skal operationen sikre, at dyret forbliver reproduktions ligt. Administration af PGF2α har vist nogle løfte om at løse ægretention i kvindelige R. muscosa. I flere individer fremkaldte PGF2α fuldstændig deposition af tidligere opbevarede æg, men i andre var der kun delvis aflejring, som krævede manuel stripping for at fjerne alle æggene. Mens PGF2α kan tjene som et alternativ til kirurgi for Ægretention i R. muscosa, dens evne til at afhjælpe lignende patologiske tilstande i andre padder vil kræve artsspecifik validering. Når kirurgisk indgreb er bemyndiget til Anuran eller hale patient, er det nødvendigt at sikre et passende plan for anæstesi, før indsnit er lavet. Astute observation færdigheder er nødvendige for at vurdere og overvåge de normative induktion og nyttiggørelse svar som skitseret i denne undersøgelse for hver af taxa. Når man er fortrolig med den specifikke anatomi, en passende kirurgisk tilgang, hæmostase, blid vævs manipulation og passende postoperative forvaltning, reproduktive operationer udgør ingen overvældende forhindringer.

Amfibier har længe været anerkendt som vigtige biologiske og medicinske modeller af en bred vifte af forskningsdiscipliner. Data indhentet ved at studere særlige arter såsom Xenopus laevis og X. tropicalis, Leopard Frog (Lithobates (tidligere Rana) Pipiens) og Axolotler (Ambystoma mexicanum) er blevet anvendt til en række andre hvirveldyr, herunder mennesker. De veterinære, husdyrhold og assisteret reproduktive teknikker, der er opstået ved at studere disse og andre padder yde bistand til dem, som har til opgave at udvikle vellykket pleje, vedligeholdelse og bæredygtighed af sjældnere populationer i fangenskab 1 , 2 , 3 , 4.
Interessen er stigende for den samtidige brug af in og ex situ bevarings baserede tilgange til at vende strømmen af udryddelse for mange i fare amfibie arter1,2. Denne artikel indeholder de metoder, der i øjeblikket er tilgængelige til at overvåge og kontrollere amfibie ovariefunktionen i model arter af Anuraner og hale. Desuden, eksisterende teknikker til at løse en fælles reproduktive patologi af ægopbevaring er præsenteret.
Som i mange taksonomiske grupper involverer Padde Ovarie kontrol en række tæt synkroniserede interaktioner mellem miljø og fysiologi. Temperatur og fotoperioden (kendt som nærtmere signaler) afkodes af øjet og hjernen, hvor de hurtigt omdannes til genetiske, hormonelle og cirkadiske processer (ultimative signaler)3,4. Metoderne til overvågning og kontrol af ovariefunktionen, der er omfattet af denne artikel, omfatter invasive og ikke-invasive teknikker. Institutionel dyrepleje-og anvendelses udvalg (IACUC) forsknings-og undervisnings krav definerer ikke-invasive teknikker som dem, der vil forårsage minimal til ingen fysisk smerte eller psykisk lidelse og kræver ingen smertestillende medicin5. Her omfatter ikke-invasive teknikker visuel inspektion og palpation, adfærdsmæssige observationer, morphometriske vurderinger og ultralyd. Tværtimod, de teknikker til blod opsamling, hormon administration og kirurgi (ovariektomi og fjernelse af opbevarede æg) er klassificeret som invasive, da de kan resultere i nogle smerter eller ubehag og kræver anæstesi eller post-proceduremæssig lægemiddelbehandling.
Ikke-invasive ovarie overvågningsteknikker kan nemt inkorporeres i den daglige pleje rutine for de fleste fanget padder. Afhængig af arten, æggestokkene graviditet kan ofte bestemmes ved simpel visuel inspektion (glas Frog). I andre tilfælde kan palpering indikere, om en kvindelig er gravid. Forskellige krops tilstands indekser (BCI) såsom vægt, snude urostyle længde (Sul), snude-vent længde (SVL) og standard Mass Index (SMI) er til rådighed for at forudsige tilstedeværelsen eller fraværet af æg4,6,7, 8,9. Dog bør man være forsigtig med fortolkningen af resultaterne, da de fleste ikke betragter alder, kropsform eller sammensætning (f. eks. vand tilbageholdt versus ovarie masse eller fedt)6. Definitive reproduktive diagnoser kan opnås via ultralyd med mere dybtgående viden om ægudvikling og iscenesættelse af æggestokkene cyklus4,7. Ultralyd giver også et middel til at bekræfte og overvåge reproduktive patologier og tilknyttede fysiologiske forhold4,8.
Ud over at give oplysninger om helbredstilstand, kan blodprøvetagning anvendes til at måle reproduktive hormoner. Hvis hormon profilering er det endelige mål, det er vigtigt at undgå stress-relaterede påvirkninger, der kan tolerere systemiske steroid data. Mens et potentielt kraftfuldt overvågningsværktøj, der er endnu ikke at være en undersøgelse viser medfødte Endokrinologiske reaktioner på eksogene hormon administration i nogen amfibie arter. Blod kan sikkert tages fra flere steder; i frøer dette omfatter ventrale abdominal vene, linguale plexus, femoral vene og hjerte9,10. I Caudates opsamles blod fra den ventrale hale vene. Graden af invasivitet, mængden af tilbageholdenhed kræves, behovet for bedøvelsesmiddel, delikatesse af organet er målrettet, og størrelsen af dyret er faktorer, der skal overvejes, når du vælger en samling teknik til amfibie patienten. Denne artikel vil præsentere teknikken til blod opsamling fra ansigtet maxillær eller musculocutaneous vene af frøer som oprindeligt beskrevet af Forzan et al.9.
Ovarie kontrol er artsspecifik og, som sådan, hormon protokoller bør testes og optimeres. Bortset fra sæsonudsving og det tilhørende cirkulerende hormon miljø kan ovarie kontrol også være tæt knyttet til alder, tid i fangenskab og udsættelse for gentagen hormon administration, hvor der kun er få oplysninger i litteraturen11 , 12 , 13. gennemførelsen af hormon behandlinger for at fremkalde reproduktiv adfærd, gamet produktion, modning og oviposition er blevet en meget rapporteret tilgang til at løse fælles reproduktive problemer forbundet med fangenskab4, 8,14,15,16. Da mekanismerne til kontrol af reproduktion i hvirveldyr er stærkt bevaret, findes der en række hormoner, neuropeptider og kommercielt tilgængelige lægemidler, der anvendes terapeutisk i andre taksonomiske grupper, som også kan anvendes pålideligt i en række amfibie arter (tabel 1). Gonadotropin releasing hormon (GnRH) og humant choriongonadotropin (HCG) (eller variationer heraf, dvs. PMSG og EKG)17,18, enten individuelt eller i kombination, har været anvendt i udstrakt grad i amfibie bundne avlsprogrammer, herunder: det sydlige Rocky Mountain Boreal (anaxyrus Boreas Boreas)4,19,20; TOAD, Dusky Gopher Frog, Rana sevosa (Langhorne et al., ikke offentliggjort)7; Gulf Coast waterdog, Necturus beyeri20; Wyoming TOAD, Anaxyrus baxteri18; Bullfrog, Rana Rana21; den amerikanske TOAD, Anaxyrus americanus22; græs frøen, Lymnodyaster tasmaniensis23; Coqui, Eleutherodactylus Coqui24; Xenopus, xenopus laevis25; Gunthers toadlet, Pseduophryne guentheri26; den nordlige Leopard Frog, Lithobates pipiens; den argentinske horned-Frog, Ceratophrys udsmykkede; cranwell's hornede frø, C. cranwelli; den amerikanske jord-Frog, odontophrynus americanus27; og branden Salamander (Salamandra)228. Steroid hormoner, ligesom progesteron (P4), er mindre almindeligt rapporterede, men har vist god effekt i eliciterer ægløsning og oviposition i nogle arter af padder16,18,29. Prostaglandiner (især prostaglandin 2-alpha (PGF2α)) er involveret i ægløsning sammen med kortikosteroider30,31,32,34 og når høje niveauer under den ovulatoriske fase31.
I in vitro undersøgelser, PGF2α er en potent induktor af ægløsning31, mens in vivo det kan inducere oviposition af opbevarede æg i Rana muscosa4,30,32. Hypofyse ekstrakter er også effektive induktorer af ægløsning15,16,34; bekymringer vedrørende biosikkerhed og potentialet for sygdomsoverførsel er imidlertid ofte afskrækkende for avls kolonier i fangenskab, når de overvejer denne fremgangsmåde35.
Den sidste del af denne artikel detaljer kirurgiske procedurer og giver alternative tilgange til at udvide æggestokkene undersøgelser eller støtte med opløsningen af reproduktive patologier. Ovariectomies udføres oftest i padder for at få oocytter til embryo logisk forskning. Men, det kan også give et middel mod lagrede æg, når en anden muligheder mislykkes. Selv om denne procedure er invasiv, kræver fuld anæstesi og indsnit til at udsætte ægge masserne, det kræver ikke eutanasi. Desuden, efter partiel ovariektomi, dyr kan gøre en fuld helbredelse og fortsætte med at være reproductivt aktivpost-kirurgi8,36.
Protokollerne beskrevet nedenfor skitserer invasive og ikke-invasive metoder til ovarie kontrol og monitorering i Anuraner og hale. De specifikke arter, der udvælges til at illustrere teknikker i Anurans omfatter R. slimhinde og X. laevis. Necturus maculosus, n. beyeri, n. alabamensis, og A. mexicanum omfatter de arter, der anvendes til tilsvarende beskrive teknikker i caudates.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>GE logiq Book XP and 8C-RS probe 4e10 MHz GE Medical Systems</td>
			<td>GE medical systems</td>
			<td>GE logiq Book XP</td>
			<td>Ultrasound</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aloka 500 7.5mHz linear or IBEX multi-frequency (10-6mHz) micro-convex</td>
			<td>GE medical systems</td>
			<td>8C-RS (10 MHz)</td>
			<td>Ultrasound probe</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD disposable U-100 insulin syringe (28-29 G needle)</td>
			<td>Mettler Electronics Corp CA</td>
			<td>Sonigel</td>
			<td>Ultrasound gel (water soluble, salt-free)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hormone</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gonadotropin releasing hormone</td>
			<td>BACHEM</td>
			<td>4012028</td>
			<td>synonym: [Des-Gly10, D-Ala6, Pro-NHEt9]-GnRH acetate 
			abbreviation: GnRH</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lutenizing hormone releasing hormone</td>
			<td>BACHEM, Sigma-Aldrich</td>
			<td>4033013;&#160;&#160;&#160;&#160; L1898</td>
			<td>synonym: Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2 acetate salt; 
			[D-Ala6}-LHRH acetate salt hydrate 
			abbreviation: LHRH</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human chorionic gonadotropin</td>
			<td>BACHEM, Sigma-Aldrich</td>
			<td>4030270, 4018894; C1063, CG5, CG10</td>
			<td>synonym: Chorionic gonadotropin-&#946; (109-145)(109-119); Choriogonin, HCG (2,500IU, 5,000IU, 10,000IU) 
			abbreviation: hCG</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prostaglandin 2&#945;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P40424;</td>
			<td>synonym: (5Z,9&#945;,11&#945;,13E,15S)-9,11,15-Trihydroxyprosta-5,13-dienoic acid tris salt, PGF2&#945;&#8722;Tris; 
			abbreviation: PGF2&#945;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Follicle-stimulating hormone</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F4021, F8174</td>
			<td>synonym: porcine, sheep 
			abbreviation: FSH</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Progesterone</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>46665;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; P7556</td>
			<td>synonym: Vetranal; P4 water soluble 
			abbreviation: P4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pituitary extract</td>
			<td>na</td>
			<td></td>
			<td>synonym: Check papers for amphibian species derivation 
			abbreviation: PE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pregnant Mare Serum Gonadotropin</td>
			<td>Prospec;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; Lee Biosolutions; Sigma-Aldrich</td>
			<td>HOR-272;&#160;&#160;&#160; 493-10; 9002-70-4</td>
			<td>synonym: Pregnant Mare Serum Gonadotropin 
			abbreviation: PMSG</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metaclopromide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M0763</td>
			<td>synonym: 4-Amino-5-chloro-N-[2-(diethylamino)ethyl]-2-methoxybenzamide, Methoxychloroprocainamide 
			abbreviation: MET</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lucrin</td>
			<td>BACHEM; Sigma-Aldrich</td>
			<td>4033014;&#160;&#160; L0399</td>
			<td>synonym: Leuprorelin acetate 
			abbreviation: Lucrin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lutalyse</td>
			<td>Pfizer</td>
			<td></td>
			<td>synonym: PGF2&#945; - Dinoprost tromethamine 
			abbreviation: Lut</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pimozide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P1793</td>
			<td>synonym: 1-[1-[4,4-bis(4-Fluorophenyl)butyl]-4-piperidinyl]-1,3-dihydro-2H-benzimidazol-2-one 
			abbreviation: PZ</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amphiplex</td>
			<td>see above</td>
			<td></td>
			<td>synonym: Gonadotropin releasing hormone + metoclopramide 
			abbreviation: GnRH + MET</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ovopel</td>
			<td>Ovopel</td>
			<td>na</td>
			<td>synonym: GnRHa + dopamine receptor antagonist (administered 1 pellet/ kg) 
			abbreviation: Ovo</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ovaprim</td>
			<td>Pentair aquatic eco-systems</td>
			<td>Ova10</td>
			<td>synonym: Salmon gonadotropin + domperidone 
			abbreviation: Ova</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Domperidone</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D122</td>
			<td>synonym: 4-(5-Chloro-2-oxo-1-benzimidazolinyl)-1-[3-(2-oxobenzimidazolinyl)propyl]piperidine 
			abbreviation: DOM</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

reproductive techniques for ovarian monitoring and control in amphibians

Ovarie kontrol og monitorering i padder kræver en mangesidet tilgang. Der er flere applikationer, der med succes kan fremkalde reproduktive adfærd og erhvervelse af kønsceller og embryoner til fysiologisk eller Molekylær forskning. Padder bidrager til en-12:45-tredjedel af hvirveldyr forskning, og af interesse i denne sammenhæng er deres bidrag til det videnskabelige samfunds viden om reproduktive processer og embryo logisk udvikling. Men det meste af denne viden er afledt af et lille antal arter. I den seneste tid, decimering af padder over hele kloden har krævet øget intervention af konservationister. Den bundne genopretning og sikkerhed kolonier, der fortsætter med at dukke op som reaktion på udryddelse risiko gøre eksisterende forskning og kliniske anvendelser uvurderlige for overlevelse og reproduktion af amfibier holdes under menneskelig pleje. Succes for enhver bundet befolkning er baseret på dens sundhed og reproduktion og evnen til at udvikle levedygtige afkom, der viderefører den mest forskelligartede genetiske repræsentation af deres arter. For forskere og dyrlæger er evnen til at overvåge og kontrollere ovarie udvikling og sundhed derfor bydende nødvendig. Fokus i denne artikel er at fremhæve de forskellige assisteret reproduktionsteknikker, der kan anvendes til at overvåge og, hvor det er relevant eller nødvendigt, kontrollere ovariefunktionen i padder. Ideelt set bør alle reproduktive og sundhedsmæssige spørgsmål reduceres gennem korrekt fangenskab, men som med ethvert dyr, er spørgsmål om sundhed og reproduktive patologier uundgåelige. Ikke-invasive teknikker omfatter adfærdsmæssige vurderinger, visuel inspektion og palpering og morphometriske målinger til beregning af krops tilstands indekser og ultralyd. Invasive teknikker omfatter hormonelle injektioner, blodprøvetagning, og kirurgi. Ovarie kontrol kan udøves på en række måder afhængigt af den ønskede applikation og arter af interesse.

Watch this Scientific Journal Video about Reproductive Techniques for Ovarian Monitoring and Control in Amphibians at JoVE.com

Reproductive Techniques for Ovarian Monitoring and Control in Amphibians

Studiet af amfibie biologi giver værdifulde oplysninger om de reproduktive, fysiologiske, embryologiske og udviklingsmæssige processer, der drev organismer i mange taksonomiske grupper. Her præsenterer vi en omfattende vejledning om forskellige metoder, der kan bruges til at studere ovarie kontrol og overvågning i padder.

Reproduktive teknikker til overvågning og kontrol af æggestokkene i padde

Ovarian control and monitoring in amphibians require a multi-faceted approach. There are several applications that can successfully induce reproductive ...

Denne ovariektomi teknik beskæftiger en genoprettelig kirurgisk procedure for at opnå padder oocytter til vores medicinske forskning eller en anden ansøgning om at overvinde den patologiske tilstand af tilbageholdte æg. Det kræver ikke aktiv dødshjælp at opnå padde oocytter til forskningsformål. Faktisk, efter en delvis ovariektomi padder emne kan være reproduktivt aktive efter opsving.Efter at have bekræftet en manglende reaktion på bækken lemmer knivspids, placere en bedøvet kvindelig anuran i en dorsal liggende position, og bruge fugtig, steril gaze til at tørre det kirurgiske felt med povidone-jod opløsning i 10 til 15 sekunder. Placer en klar, steril plast drapere over det kirurgiske område og reducere fordampning ved at holde den omgivende hud fugtig, før du bruger en række 15 eller 11 skalpel klinge til at gøre en 3 millimeter perimedian hud snit i midten coelom mellem skuldrene og cloaca. Brug bomuld-tippet applikatorer til at anvende lokaliseret tryk på eventuelle små fartøjer omkring snittet efter behov, og ophøje abdominalmembranen for en efterfølgende membran snit.Brug øjenlåg retractors at trække ceolomic indsnit, og punktafgifter en del af ægmassen uden ligating nogen blodkar. For en komplet ovariektomi, ætse de omkringliggende blodkar, og bruge en mono-filament sutur til at lukke ceoliotomy snit med en afbrudt stadigt sutur mønster. Forskellige padder arter, som disse Necturus og glas frøen, udviser varierende grader af huden gennemsigtighed, påvirker evnen til at visualisere deres reproduktive status transdermally.Hos nogle arter kan der påvises morfologiske forskelle mellem hunner, der er gravide, versus nyligt oviposited dyr. I dette eksempel, en kvindelig Rana muscosa, der for nylig oviposited kan skelnes fra en gravid kvinde ved slaphed af hendes hud og hendes tyndere udseende. Den adfærdsmæssige stadier af oviposition i Rana muscosa omfatter bejle, hvor en mandlig aktivt forfølger en kvindelig og amplexus, hvor Rana muscosa mandlige mounts og fast hægter på kvindens ryg.Under amplexus, den mandlige klemmer hunnen i en blød pumpemåde. Kvinde Rana muscosa bevæge sig rundt og vise intermitterende håndstand adfærd, i sidste ende lænede sig op mod overflader, at æg kan sidde fast på, mens den mandlige pumper hendes mave kraftigt. Umiddelbart efter oviposition vender kvindelige æggestokke tilbage til en fase et kategori.I løbet af denne tid, follikler er svære at visualisere, når de udfører ultralyd. Fase to er repræsenteret ved fremkomsten af ekkogene prikker spredt over hele æggestokken. Fase tre bestemmes af tilstedeværelsen af større, rundere ekkogene prikker med mørke centre, der indikerer æggeblomme, modne follikler.I denne repræsentative fireårige vurdering af necturus i fangenskab var udviklingen af ægget høj, men der blev ikke sikret oviposition. Nogle hunner med tilbageholdte æg samtidig med væskegevinst i kroppen hulrum, viste overdreven omkreds og hævelse, sammen med nogle tegn på burst blodkar, som vist i disse berørte Rana og Necturus. Selv om den kirurgiske tilgang kan bruges til styring af ovariepatologi, denne teknik kan også være involveret i gamet og navlestrengsforskning.Efter operationen kan den praktiserende læge vende tilbage til den første protokol, der er skitseret i dette manuskript til overvågning af den igangværende generelle sundhed padder emne.

Research

JoVE Journal

Biology

Microinjection Techniques for Studying Mitosis in the Drosophila melanogaster Syncytial Embryo

Microinjection Techniques for Studying Mitosis in the Drosophila melanogaster Syncytial Embryo

This protocol describes the use of the Drosophila melanogaster syncytial embryo  for studying mitosis1.  Drosophila has useful genetics with a sequenced ...

Techniques for Imaging Ca2+ Signaling in Human Sperm

Techniques for Imaging Ca2+ Signaling in Human Sperm

Fluorescence microscopy of cells loaded with fluorescent, Ca2+-sensitive dyes is used for measurement of spatial and temporal aspects of Ca2+ signaling in ...

Patch Clamp and Perfusion Techniques for Studying Ion Channels Expressed in Xenopus oocytes

Patch Clamp and Perfusion Techniques for Studying Ion Channels Expressed in Xenopus oocytes

The protocol presented here is designed to study the activation of the large conductance, voltage- and Ca2+-activated K+ (BK) channels. The protocol may ...

Long-term Lethal Toxicity Test with the Crustacean Artemia franciscana

Long-term Lethal Toxicity Test with the Crustacean Artemia franciscana

Langsigtet dødelige toksicitet Test med krebsdyr Artemia franciscana</em

Our research activities target the use of biological methods for the evaluation of environmental quality, with particular reference to saltwater/brackish ...

In Vivo Microinjection and Electroporation of Mouse Testis

In Vivo Microinjection and Electroporation of Mouse Testis

In vivo Mikroinjektion og Elektroporation af Mouse Testis

This video and article contribution gives a comprehensive description of microinjection and electroporation of mouse testis in vivo. This particular ...

Dried Blood Spots - Preparing and Processing for Use in Immunoassays and in Molecular Techniques

Tørrede blod pletter - forberedelse og forarbejdning til brug i immunassays og molekylærbiologiske teknikker

The idea of collecting blood on a paper card and subsequently using the dried blood spots (DBS) for diagnostic purposes originated a century ago. Since ...

Techniques for Imaging Prometaphase and Metaphase of Meiosis I in Fixed Drosophila Oocytes

Techniques for Imaging Prometaphase and Metaphase of Meiosis I in Fixed Drosophila Oocytes

Teknikker til Imaging prometafasen og Metafase af Meiose I i Fast<em&gt; Drosophila</em&gt; oocyter

Chromosome segregation in human oocytes is error prone, resulting in aneuploidy, which is the leading genetic cause of miscarriage and birth defects. The ...

Simple and Effective Administration and Visualization of Microparticles in the Circulatory System of Small Fishes Using Kidney Injection

Enkel og effektiv Administration og visualisering af mikropartikler i kredsløbet af små fisk ved hjælp af nyre injektion

The systemic administration of micro-size particles into a living organism can be applied for vasculature visualization, drug and vaccine delivery, ...

Micron-scale Phenotyping Techniques of Maize Vascular Bundles Based on X-ray Microcomputed Tomography

Micron-skala fænotyper teknikker af majs kardiovaskulære bundter baseret på X-ray Microcomputed tomografi

It is necessary to accurately quantify the anatomical structures of maize materials based on high-throughput image analysis techniques. Here, we provide a ...

Single Cell Collection of Trophoblast Cells in Peri-implantation Stage Human Embryos

Enkeltcellesamling af trophoblastceller i peri-implantationsstadium menneskelige embryoner

Human implantation, the apposition and adhesion to the uterine surface epithelia and subsequent invasion of the blastocyst into the maternal decidua, is a ...