Name: reproductive techniques for ovarian monitoring and control in amphibians
Uploaded: 2019-05-12T12:30:00
Duration: 4 min 37 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Reproductive Techniques for Ovarian Monitoring and Control in Amphibians at JoVE.com

נטלי Calatayud רוצה להודות לד ר ברברה דוראנט על הדרכה וסיוע באולטרסאונד ולחקור את הג דה איממובלס, דרום אמריקה (EISA) לצורך הענקת סיוע כספי לתפקיד עמיתי למחקר ב-SDZG. תודות ד ר קיילי קיין על הערות על כתב היד, כמו גם על הסוקרים הרשמיים (מי שהם לא יהיו). תודות ג'ונתן דיין שלנו 2018 בחור הקיץ שלנו, סן דייגו גן החיות המכון לחקר שימור לספק תמונות (איור 1A, B). מוניקה סטופס מרחיבה את ההערכה לאגודת גני החיות והקרן לשימור האקווריומים ולקרן דיסני ברחבי העולם למתן תמיכה כספית להקמת אוכלוסיית הנטוריוס השבויה. בנוסף, התקבלה התמיכה גם באמצעות תרומות פרטיות מעורך הדין האמפיבי גב' איריס דה לה מוטי. תודה, מוענק למר כריסטופר דזמור וד ר מארק קמפבל על תרומתו המשמעותית למחקר.

. למחברים אין מה לגלות

טיפול ישיר, תצפית חזותית ואמצעים מורמטרים מספקים שיטות שאינן פולשנית והם הקריטריונים הראשונים הערכה לקביעת שלב הרבייה הנשית. עם זאת, מחקר זה מראה כי שחלות gravid לא יכול תמיד להיות מזוהה באופן אמין על ידי מישוש. בהתאם מינים, שחלות gravid יכול לפעמים להתגלות חזותית דרך חצי שקוף (איור 13a, B) או עור שקוף לחלוטין על הצד הגחוני של בעל החיים (איור 13a). נקבות שסיימו את ההטלה יכול להראות שינויים ברורים למראה שלהם בהשוואה לנקבות gravid (למשל, עור רופף ואובדן של עד 30% ממסת הגוף שלהם, איור 13D). במהלך הרבייה, זכרים ונקבות יציגו התנהגויות מסוימות המספקות מידע על קירבה לביוץ וההטלה. במקרה של ר. מוסקוצה מצביע על כך שנקבה קרובה לתנוחת ההטלה מתחילה עם הנקבה הנכנסת לעמדות הידיים.
היישום של טכנולוגיית אולטרה סאונד כדי אנאנים ו Caudates מאפשר אבחנה של נוכחות או העדר של ביצים, אם ההטלה היה קשור עם שחרור מלאה או חלקית של ביצים מפותחות. כך, שיטה זו מספקת הערכה מלאה ומדויקת יותר של מצב הרבייה מבלי להיות מוגבל לקביעת מעמד gravid/non-gravid באמצעות טכניקה ויזואליזציה המשתנה על ידי שקיפות העור בבטן, או עקביות באפידרמיס בין הזן האמפיבי השונה. ניתן לבצע אולטרסאונד בקלות יחסית ובמעט מתח לבעלי חיים (איור 5 ואיור 13) וניתן להשתמש בו לאפיון מחזורי הרבייה ולקביעת מצב הרבייה4. חשוב להכיר את המינים; עם זאת, מחקר זה הראה כי Necturus ו -R. מוסקוסה לשתף סימנים התפתחותיים שכיחים דפוסי הרבייה שלהם ומאפשר סיווג דומה של הרבייה (איור 5). באמצעות טכנולוגיה זו יש כעת ראיות כי התפתחות ביצה גבוה בשבי Necturus ו R. מוסקוסה ושני המינים הללו בעקבות דפוס עונתי. למרות שהסיבות לתופעות אלה אינן ידועות ודורשות חקירה נוספת, ללא שימוש באולטרסאונד, מספר תחומים של תפקוד לקוי של השחלות, כגון החזקת ביצים ומיקום ההטלה החלקי, לא היתה מזוהה. יישומים עתידיים לטכניקה זו ישמשו כדי לקבוע אם יש לבחור את הנקבות להתרבות בכל שנה נתונה והאם תושלם ההטלה.
פרוטוקול לאיסוף דם, כגון זה המוצג ב -R. מוסקוסה, שהוא גם יעיל וגורם למצוקה מינימלית לבעל החיים, הוא אופטימלי ללמוד פרופילי הורמונים בשבי ובעל אנאנים שנתפסו בפראות (Calatayud, לא פורסם). עד כה, לא קיים מידע בנוגע לפרופילי ההורמונים השנתיים של מוסקוסה השבויה, ולכן אין ידע על האופן שבו ההורמונים משפיעה על בריאותם והרבייה שלהם. יתר על כן, עם ראיות כי נשים ממין זה לא יכול להיות מגדלים שנתיים, פרופיל הורמונלי יהיה שיטה נוספת למעקב אחר מחזורי השחלות. יחד עם אולטרסאונד, ניתוח הורמון עלול להוביל לחיזוי טוב יותר של מה הנקבות יהיו מוכנים מיקום ההטלה. יתרה מזו, בשנה האחרונה תועדו שני מקרים של אינטרסקס באוכלוסיית השבויה ר. מוסקוסה . בנוסף לכך, התפתחות רפידות האגודל נרשמה על כמה מהנקבות המייסדות הבוגרות יותר. הסיבות לכך הן כרגע בחקירה אך תוצאות ראשוניות מרמזות שהוא עשוי להתייחס לשינויים ברמות הטסטוסטרון (Calatayud, לא פורסם). מחזורי הורמונלי הבחנה אצל נקבות בגילאים שונים יסייעו לנו להבין מדוע הנקבות יכולות לפתח מאפיינים מיניים משניים הקשורים לגברים, ואם זה צפוי באוכלוסיה מזדקנת.
טיפול הורמונלי אקסוגני שימש להתגבר על תפקוד הרבייה לעתים קרובות נתקל דו-חיים בשבי. עם זאת, עבור אוכלוסיית מוסקוסה והנטוריוס במחקר זה, לא הבדלים משמעותיים בתנוחת ההטלה בין הורמונים שטופלו ושליטה התגלו במשך תקופה של 2 ו -5 שנים של זמן, בהתאמה. הדבר עשוי להצביע על כך שפרוטוקול ניהול הורמון, מינונים, הטרמה ושילוב הורמונלי שימוש לא היה מספיק עבור המינים. ניתוח מקרוב של היסטוריית הרבייה הפרט הנשי מציע R. מוסקוסא לא יכול לחוות רבייה שנתית, אשר יכול גם להסביר את חוסר ההשפעה ההורמונלית שנצפו בנקבות מטופלים. מכיוון שאחוז מסוים של נקבות בעקביות דילג על הרבייה בכל שנה, הבנת ההיסטוריה הטבעית של המינים יכולים לעזור לקבוע אם יש צורך בהורמונים אקסוגניים וכאשר הם יכולים להיות יעילים ביותר. ההליכים המתוארים במאמר זה ניתן להחיל על מספר מינים, (טבלה 1) והם עבור אנאנים החל 5 g כדי 150 g; בעלי חיים גדולים יותר עשויים לדרוש מזרקים שונים ומאבחנים מחט. המיקום של הזריקה משתנה עם כמה הורמונים הדורשים פנים שרירי, פנים הצפק, תת עורית או הזרקה בתוך עורי (איור 7).
כירורגיה למטרת כריתת אונוקטומיה היא שיטה נפוצה המשמשת במינים אמפיחיים שונים כדי להשיג אוציטים למחקרים embryological. בנוסף, ניתן לציין את האונוקטומיה עבור בקרת אוכלוסיה וסוגיות רפואיות כגון שימור ביצים. במקרה של כריתת המוח החלקית שבה, הקציר oocyte מבוצע למטרות מחקר, ניתוח חייב להבטיח כי החיה נשאר רבייה. המינהל של PGF2α הראה כמה הבטחה בפתרון החזקת ביציות ב נקבה R. מוסקוסא. בכמה אנשים, PGF2α מעורר הסרה מלאה של ביצים שנשמרו בעבר, אבל באחרים רק התצהיר חלקית התרחש בדרישה להתפשט ידנית כדי להסיר את כל הביצים. בעוד PGF2α עשוי לשמש כחלופה לניתוח עבור החזקת ביצים ב -R. מוסקוסה, יכולתה לתקן את התנאים הפתולוגיים דומים בדו חיים אחרים ידרשו אימות ספציפי למינים. כאשר התערבות כירורגית מאושפזת עבור החולה אנין או Caudate, יש צורך להבטיח מטוס מספיק של הרדמה לפני שנעשו חתכים. מיומנויות תצפית נבונה נדרשות כדי להעריך ולנטר את תגובות התגובה הנורמטיבית וההתאוששות כמתואר במחקר זה עבור כל אחד מהטקא. ברגע שאחד מכיר את האנטומיה הספציפית, גישה כירורגית מתאימה, הומוסטזיס, מניפולציה רקמות עדין וניהול מתאים postאופרטיבית, ניתוחי הרבייה להוות מכשולים מוחץ.

דו-חיים מזוהים זמן רב כמודלים ביולוגיים ורפואיים חשובים על ידי מגוון רחב של דיסציפלינות מחקר. נתונים שהושגו על ידי לימוד מינים מסוימים כגון קסנופוס זריזה ו -X. " הצפרדע המנומרת " (לפני רנא) פיפינס(לשעבר ראנה) והאקלילית (אמליסטומה מקסינום) הוחלו על מספר מינים אחרים של בעלי חוליות, כולל בני אדם. וטרינרי, הגידול וסיוע טכניקות הרבייה כי התפתחה מלמידה אלה דו חיים אחרים לספק סיוע אלה המוטל עם פיתוח טיפול מוצלח, תחזוקה וקיימות של אוכלוסיות נדירות בשבי מיכל בן , מיכל השני , מיכל שלוש , ד.
הריבית היא צובר לשימוש במקביל של באתרו ולשעבר שימור גישות מבוססות כדי להפוך את הגאות של הכחדה עבור רבים בסיכון מינים אמפיבי1,2. מאמר זה מספק את המתודולוגיות זמין כיום כדי לפקח ולשלוט על תפקוד השחלות האמפיבי במיני מודל של אנאנס ו Caudates. בנוסף, טכניקות קיימות לטיפול בפתולוגיה הרבייה המשותפת של החזקת ביצים מוצגת.
כמו בקבוצות מטקמיים רבים, בקרת השחלות האמפיבי כרוכה בסדרה של אינטראקציות מסונכרנות היטב בין הסביבה והפיזיולוגיה. הטמפרטורה ואת photoperiod (המכונה אותות הפרוטמליים) מפוענח על ידי העין ואת המוח שבו הם מומרים במהירות לתוך גנטי, תהליכים הורמונליים מעגליות (האותות האולטימטיבי)3,4. שיטות ניטור ושליטה תפקוד השחלות מכוסה במאמר זה כוללים טכניקות פולשנית ולא פולשנית. טיפול מוסדי בעלי חיים והשתמש הוועדה (IACUC) מחקר ודרישות ההוראה להגדיר טכניקות שאינן פולשני כמו אלה שיגרמו מינימלי לכאב פיזי או מצוקה נפשית לא דורשים תרופות להקלה על הכאב5. כאן, טכניקות שאינן פולשנית כוללות בדיקה חזותית ומישוש, תצפיות התנהגותיות, הערכות מורמטריות ואולטרסאונד. להיפך, הטכניקות של איסוף דם, הורמון הממשל ניתוח (ovariectomy ריתת והסרה של ביצים שנשמרו) מסווגים פולשנית מאז הם עלולים לגרום לכאב או אי נוחות מסוימים ודורשים הרדמה או טיפול בסמים שלאחר פרוצדורליים.
לא פולשנית טכניקות ניטור השחלות ניתן לשלב בקלות את שגרת הטיפול היומי עבור דו-חיים השבויה ביותר. בהתאם למין, השחלות יכולות לעיתים קרובות להיקבע על ידי בדיקה חזותית פשוטה (צפרדע זכוכית). במקרים אחרים, מישוש עשוי להעיד אם נקבה הוא מאפיר. מדדי מערך גוף שונים (bci) כגון משקל, אורך בצורת החוטם האפור (SUL), אורך החוטם (svl) ואינדקס מסה סטנדרטי (smi) זמינים לחיזוי הנוכחות או העדר של ביצים4,6,7, 8,9. עם זאת, טיפול צריך להילקח עם פרשנות של תוצאות כמו רוב לא לשקול גיל, גוף צורה או הרכב (למשל, מים הנשמרים לעומת מסה השחלות או שומן)6. אבחנות הרבייה סופי ניתן להשיג באמצעות אולטרסאונד עם יותר ידע מעמיק שנצבר בנוגע לפיתוח ביצה הזמני של מחזור השחלות4,7. אולטרסאונד גם מספק אמצעים כדי לאשר ולנטר פתווגיות הרבייה משויכים תנאים פיזיולוגיים4,8.
בנוסף למתן מידע בנוגע למצב בריאותי, דגימת דם יכולה לשמש למדידת הורמוני הרבייה. אם הורמון הפרופיל הוא המטרה הסופית, חשוב למנוע השפעות הקשורות ללחץ שעשוי לבלבל את הנתונים סטרואידים מערכתית. בעוד כלי ניטור פוטנציאלי חזק, יש עוד להיות מחקר הוכחת תגובות endocrinological מולדים למינהל הורמון אקסוסוגני במין אמפיבי כלשהו. דם ניתן לקחת בבטחה ממספר אתרים; בצפרדעים זה כולל וריד הבטן הגחוני, מקלעת לשוני, וריד הירך והלב9,10. ב הזנב, הדם נאסף מתוך הווריד האחורי הגחוני. דרגת האיפוק, כמות הריסון הדרושה, הצורך בהרדמה, בעדינות האיבר המכוון, ובגודל הבעל החיים הם גורמים להיחשב בעת בחירת טכניקת איסוף עבור החולה האמפיבי. מאמר זה יציג את הטכניקה של איסוף הדם מן הלסת הראשונה או musculocutaneous ווריד של צפרדעים כפי שתוארה במקור על ידי Forzan ואח '9.
שליטה השחלות הוא מיני ספציפי, וככזה, פרוטוקולי ההורמונים צריך להיבדק ואופטימיזציה. מלבד העונתיות והקשורים הורמון מחזורי במחזור, שליטה השחלות עשוי גם להיות קשור הדוק לגיל, הזמן בילה בשבי וחשיפה לניהול הורמון חוזר, אשר יש מעט מידע בספרות11 , מיכל בן 12 , 13. יישום של טיפולים הורמונים לעורר התנהגויות רבייה, ייצור המשחק, התבגרות וההטלה הפכה להיות גישה נרחבת דיווח לפתרון בעיות הרבייה הקשורים בשבי4, . שמונה,14,15,16 מכיוון שהמנגנונים השולטים ברבייה בעלי החוליות נשמרים במידה רבה, ישנם מספר הורמונים, נוירופפטידים ותרופות מסחריות המשמשות לשימוש תרופתי בקבוצות מיונים אחרות שיכולות לשמש גם באופן אמין במספר מין אמפיבי (שולחן 1). גונדוטרופין משחרר הורמון (gnrh) ו גונדוטרופין כוריוני אנושי (hCG) (או וריאציות ממנו, כלומר, pmsg ו-א)17,18, או בנפרד או בשילוב, שימשו בהרחבה בשבי אמפיבי תוכניות רבייה כולל: בוריאל הדרומי של ההר הסלעי (anaxyrusבוריאס בוריאס)4,19,20; הקרפדה, צפרדע גופר sevosa, רנא (לנגורן ואח ', לא פורסם)7; חוף המפרץ ווטרדוג 20; , קרפדת ויומינג. אנקסרוס באקס18 צפרדע השוורים, רנא קטביאנה21; הקרפדה האמריקנית, אמריקה האמריקאית אנאקיורוס22; הצפרדע הדשא, לימסט-מאניאנסיס23; הקוטקי, Eleutherodactylusקי24; הקספוס, קספוס לאוארט25; את פטריית הרעל של גונתר, פסיידופרנה גואנטיי26; הצפרדע הצפון-מנומר, ליטוטים פיפינס; הצפרדע הארגנטינאי, מקושטת בצפרדעים ; הצפרדע הקרה של קראנבאר, ג. קראנלי; האדמה האמריקנית-צפרדע, Odontophrynus אמריקאנוס27; וסלמנדרה האש (Salamandra)228. הורמונים סטרואידים, כמו הפרוגסטרון (P4), מדווחים בדרך כלל פחות אך הפגינו יעילות טובה באמצעות ביוץ ומיקום ההטלה במינים מסוימים של אנאנים16,18,29. Prostaglandins (במיוחד prostaglandins 2-alpha (pgf2α)) מעורבים בביוץ יחד עם קורטיקוסטרואידים30,31,32,34 ולהגיע לרמות גבוהות במהלך שלב31של הovulatory.
ב לימודי חוץ גופית, pgf2α הוא השראה חזקה של ביוץ31, בעוד vivo זה יכול לגרום ההטלה של ביצים שנשמרו רנא מוסקוסה4,30,32. תמציות יותרת ההיפופיזה הם גם השראות יעיל של הביוץ15,16,34; עם זאת, חששות סביב biosecurity ופוטנציאל העברת המחלה הם לעתים קרובות הרתעה מושבות הרבייה בשבי כאשר בהתחשב גישה זו35.
החלק האחרון של מאמר זה פרטי הליכים כירורגיים ומספק גישות חלופיות כדי להרחיב את מחקרי השחלות או סיוע ברזולוציה של הפתווגיות הרבייה. כריתת הovariectomies מבוצעת בדרך כלל דו-חיים כדי לקבל אוציטים למחקר embryological. עם זאת, הוא יכול גם לספק תרופה לשמירת ביצים כאשר אפשרויות אחרות נכשלות. למרות הליך זה הוא פולשני, המחייב הרדמה מלאה חתכים כדי לחשוף את הגושים ביצה, זה לא דורש המתת חסד. יתר על כן, לאחר כריתת הערמונית חלקית, בעלי חיים יכולים לעשות החלמה מלאה ולהמשיך להיות פעיל מחדש לאחר ניתוח8,36.
הפרוטוקולים המתוארים להלן המתאר את שיטות פולשנית ולא פולשנית של שליטה וניטור השחלות ב אנאנס ו Caudates. המינים הספציפיים שנבחרו להמחיש טכניקות באנאנים כוללים R. רירית ו -X. זריזה. נטוריוס מאקולוסוס, נ. בארי, נ. אלבאמזיס, ו -A. מקסינום מהווים את המינים המשמשים לתיאור דומה בטכניקות של הקותמרים.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>GE logiq Book XP and 8C-RS probe 4e10 MHz GE Medical Systems</td>
			<td>GE medical systems</td>
			<td>GE logiq Book XP</td>
			<td>Ultrasound</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aloka 500 7.5mHz linear or IBEX multi-frequency (10-6mHz) micro-convex</td>
			<td>GE medical systems</td>
			<td>8C-RS (10 MHz)</td>
			<td>Ultrasound probe</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD disposable U-100 insulin syringe (28-29 G needle)</td>
			<td>Mettler Electronics Corp CA</td>
			<td>Sonigel</td>
			<td>Ultrasound gel (water soluble, salt-free)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hormone</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gonadotropin releasing hormone</td>
			<td>BACHEM</td>
			<td>4012028</td>
			<td>synonym: [Des-Gly10, D-Ala6, Pro-NHEt9]-GnRH acetate 
			abbreviation: GnRH</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lutenizing hormone releasing hormone</td>
			<td>BACHEM, Sigma-Aldrich</td>
			<td>4033013;&#160;&#160;&#160;&#160; L1898</td>
			<td>synonym: Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2 acetate salt; 
			[D-Ala6}-LHRH acetate salt hydrate 
			abbreviation: LHRH</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human chorionic gonadotropin</td>
			<td>BACHEM, Sigma-Aldrich</td>
			<td>4030270, 4018894; C1063, CG5, CG10</td>
			<td>synonym: Chorionic gonadotropin-&#946; (109-145)(109-119); Choriogonin, HCG (2,500IU, 5,000IU, 10,000IU) 
			abbreviation: hCG</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prostaglandin 2&#945;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P40424;</td>
			<td>synonym: (5Z,9&#945;,11&#945;,13E,15S)-9,11,15-Trihydroxyprosta-5,13-dienoic acid tris salt, PGF2&#945;&#8722;Tris; 
			abbreviation: PGF2&#945;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Follicle-stimulating hormone</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F4021, F8174</td>
			<td>synonym: porcine, sheep 
			abbreviation: FSH</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Progesterone</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>46665;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; P7556</td>
			<td>synonym: Vetranal; P4 water soluble 
			abbreviation: P4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pituitary extract</td>
			<td>na</td>
			<td></td>
			<td>synonym: Check papers for amphibian species derivation 
			abbreviation: PE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pregnant Mare Serum Gonadotropin</td>
			<td>Prospec;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; Lee Biosolutions; Sigma-Aldrich</td>
			<td>HOR-272;&#160;&#160;&#160; 493-10; 9002-70-4</td>
			<td>synonym: Pregnant Mare Serum Gonadotropin 
			abbreviation: PMSG</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metaclopromide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M0763</td>
			<td>synonym: 4-Amino-5-chloro-N-[2-(diethylamino)ethyl]-2-methoxybenzamide, Methoxychloroprocainamide 
			abbreviation: MET</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lucrin</td>
			<td>BACHEM; Sigma-Aldrich</td>
			<td>4033014;&#160;&#160; L0399</td>
			<td>synonym: Leuprorelin acetate 
			abbreviation: Lucrin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lutalyse</td>
			<td>Pfizer</td>
			<td></td>
			<td>synonym: PGF2&#945; - Dinoprost tromethamine 
			abbreviation: Lut</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pimozide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P1793</td>
			<td>synonym: 1-[1-[4,4-bis(4-Fluorophenyl)butyl]-4-piperidinyl]-1,3-dihydro-2H-benzimidazol-2-one 
			abbreviation: PZ</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amphiplex</td>
			<td>see above</td>
			<td></td>
			<td>synonym: Gonadotropin releasing hormone + metoclopramide 
			abbreviation: GnRH + MET</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ovopel</td>
			<td>Ovopel</td>
			<td>na</td>
			<td>synonym: GnRHa + dopamine receptor antagonist (administered 1 pellet/ kg) 
			abbreviation: Ovo</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ovaprim</td>
			<td>Pentair aquatic eco-systems</td>
			<td>Ova10</td>
			<td>synonym: Salmon gonadotropin + domperidone 
			abbreviation: Ova</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Domperidone</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D122</td>
			<td>synonym: 4-(5-Chloro-2-oxo-1-benzimidazolinyl)-1-[3-(2-oxobenzimidazolinyl)propyl]piperidine 
			abbreviation: DOM</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

reproductive techniques for ovarian monitoring and control in amphibians

שליטה וניטור השחלות בדו-חיים דורשים גישה רבת פנים. ישנם מספר יישומים שיכולים לגרום בהצלחה התנהגויות רבייה ורכישת גמטות ועוברים עבור מחקר פיזיולוגי או מולקולרי. דו-חיים תורמים לאחד-12:45-שליש מחקר בעלי חוליות, והעניין בהקשר זה הוא תרומתם לידיעת הקהילה המדעית של תהליכי הרבייה ופיתוח embryological. עם זאת, רוב הידע הזה נגזר ממספר קטן של מינים. בזמנים האחרונים, ההחלטה של דו-חיים ברחבי העולם דרשה התערבות גוברת של השימור. ההתאוששות בשבי ומושבות הביטחון להמשיך לצוץ בתגובה לסיכון הכחדה לעשות מחקר קיימים יישומים קליניים לא יסולא בפז הישרדות ורבייה של דו-חיים שנערך תחת הטיפול האנושי. ההצלחה של כל אוכלוסיה בשבי מבוססת על בריאותו ועל הרבייה והיכולת לפתח צאצאים בני קיימא המעבירים את הייצוג הגנטי המגוון ביותר של המינים שלהם. עבור חוקרים וטרינרים, היכולת לפקח ולשלוט בפיתוח השחלות ובריאות היא, לכן, הכרחי. המוקד של מאמר זה הוא להדגיש את טכניקות שונות הרבייה בסיוע שניתן להשתמש בהם כדי לפקח, איפה המתאים או הכרחי, שליטה בתפקוד השחלות בדו. באופן אידיאלי, כל בעיות הרבייה והבריאות צריך להיות מופחת באמצעות הטיפול השבוי הנכון, אבל, כמו עם כל בעל חיים, סוגיות של בריאות ופתווגיות הרבייה הם בלתי נמנעים. טכניקות לא פולשנית כוללות הערכות התנהגותיות, בדיקה חזותית מישוש ומדידות מורמטריות לחישוב מדדי מצב הגוף ואולטרסאונד. טכניקות פולשנית כוללות זריקות הורמונליות, דגימת דם וניתוח. שליטה בשחלות ניתן לתרגל במספר דרכים בהתאם ליישום נדרש מינים של עניין.

Watch this Scientific Journal Video about Reproductive Techniques for Ovarian Monitoring and Control in Amphibians at JoVE.com

Reproductive Techniques for Ovarian Monitoring and Control in Amphibians

המחקר של ביולוגיה אמפיבי מספק מידע רב ערך על תהליכים הרבייה, פיסיולוגיים, embryological והתפתחותיים הנוהגים אורגניזמים של קבוצות מטקתיות רבות. כאן, אנו מציגים מדריך מקיף על מתודולוגיות שונות, כי ניתן להשתמש כדי ללמוד שליטה בשחלות וניטור דו-חיים.

טכניקות הרבייה ניטור ובקרה של השחלות

Ovarian control and monitoring in amphibians require a multi-faceted approach. There are several applications that can successfully induce reproductive ...

טכניקת כריתת השחלות משתמשת בהליך כירורגי בר-שחזור להשגת ביציות דו-חיים למחקר הרפואי שלנו או ליישום אחר להתגברות על המצב הפתולוגי של ביצים שמורות. זה לא דורש המתת חסד כדי להשיג oocytes דו-חיים למטרות מחקר. למעשה, לאחר כריתת השחלות חלקית נושא הדו-חיים יכול להיות פעיל הרבייה לאחר ההתאוששות.לאחר אישור חוסר תגובה קמצוץ איברי האגן, מניחים anuran נקבה הרדמה בתמונת שקע הגב, ולהשתמש גזה לחה, סטרילית כדי לנגב את השדה הכירורגי עם פתרון povidone-יוד במשך 10 עד 15 שניות. מניחים וילון פלסטיק ברור וסטרילי מעל האזור הכירורגי ומפחיתים את האידוי על ידי שמירה על העור שמסביב לח, לפני השימוש בלהב אזמל מספר 15 או 11 כדי לבצע חתך בעור חיץ של 3 מילימטרים באמצע הקלום בין הכתפיים לקלוקה. השתמשו במוליכים בעלי קצה כותנה כדי להפעיל לחץ מקומי על כל כלי קטן סביב החתך לפי הצורך, ולרומם את קרום הבטן לחתך ממברנה רצוף.השתמשו במפיצי עפעפיים כדי לבטל את החתכים המנכ"לים, ובלו חלק מסיסת הביצה מבלי ללטף כלי דם. עבור כריתת השחלות המלאה, לצרוב את כלי הדם שמסביב, ולהשתמש תפר מונו-filament כדי לסגור את החתך ceoliotomy עם דפוס תפר אי פעם מופרע. מינים שונים של דו-חיים, כגון נקטורוס וצפרדע הזכוכית, מפגינים דרגות שונות של שקיפות העור, ומשפיעים על היכולת לדמיין את מצב הרבייה שלהם באופן רוחבי.במינים מסוימים, ניתן לזהות הבדלים מורפולוגיים בין נקבות כי הם gravid, לעומת בעלי חיים oviposited לאחרונה. בדוגמה זו, נקבה ראנה muscosa כי יש לאחרונה oviposited ניתן להבדיל בין נקבה gravid על ידי פתיתים של העור שלה ואת המראה הדק שלה. השלבים ההתנהגותיים של ההתמזמזות בראנה מוסקוסה כוללים חיזור, שבו זכר רודף באופן פעיל אחר נקבה ואמבלקוס, שבמהלכו הזכר ראנה מוסקוסה עולה ואוכפים בחוזקה על גבה של הנקבה.במהלך amplexus, הזכר סוחט את הנקבה בצורה שאיבה רכה. נקבת ראנה מוסקוסה מסתובבת ומציגה התנהגויות עמידת ידיים לסירוגין, ובסופו של דבר נשענת על משטחים שניתן להידבק אליהם ביצים, בעוד הזכר שואב את בטנה במרץ. מיד לאחר ההתהוות, השחלות הנשיות חוזרות לקטגוריה שלב 1.במהלך תקופה זו, זקיקים קשה לדמיין בעת ביצוע אולטרסאונד. השלב השני מיוצג על ידי הופעת נקודות אקוגניות המפוזרות לאורך השחלה. השלב השלישי נקבע על ידי נוכחות של נקודות אקוגניות גדולות ועגולות יותר עם מרכזים כהים, המעידים על זקיקים בוגרים וחלמונים.בהערכה מייצגת זו, בת ארבע שנים, של נקבת נקטורוס השבויה, התפתחות הביצים הייתה גבוהה, אך לא הובטחה אוביונצה. כמה נקבות עם ביצים שמורות במקביל לרווח נוזל בחלל הגוף, הראו היקף מוגזם ונפיחות, יחד עם כמה סימנים של כלי דם פרץ, כגון זה המוצג אלה מושפע ראנה ו Necturus. למרות הגישה הכירורגית יכולה לשמש לניהול פתולוגיה השחלות, טכניקה זו עשויה להיות מעורבת גם במחקר גמט טבור.לאחר הניתוח, המטפל יכול לחזור לפרוטוקול הראשון המתואר בכתב יד זה לניטור הבריאות הכללית המתמשכת של הנבדק הדו-חיים.

Research

JoVE Journal

Biology

Microinjection Techniques for Studying Mitosis in the Drosophila melanogaster Syncytial Embryo

Microinjection Techniques for Studying Mitosis in the Drosophila melanogaster Syncytial Embryo

Microinjection טכניקות לימוד מיטוזה ב תסיסנית melanogaster סינסיציאלי עובריים

This protocol describes the use of the Drosophila melanogaster syncytial embryo  for studying mitosis1.  Drosophila has useful genetics with a sequenced ...

Techniques for Imaging Ca2+ Signaling in Human Sperm

Techniques for Imaging Ca2+ Signaling in Human Sperm

טכניקות הדמיה Ca 2 + איתות זרע אנושי

Fluorescence microscopy of cells loaded with fluorescent, Ca2+-sensitive dyes is used for measurement of spatial and temporal aspects of Ca2+ signaling in ...

Patch Clamp and Perfusion Techniques for Studying Ion Channels Expressed in Xenopus oocytes

Patch Clamp and Perfusion Techniques for Studying Ion Channels Expressed in Xenopus oocytes

הצמד תיקון וטכניקות זלוף עבור לימוד תעלות יונים מתבטא Xenopus ביציות

The protocol presented here is designed to study the activation of the large conductance, voltage- and Ca2+-activated K+ (BK) channels. The protocol may ...

Long-term Lethal Toxicity Test with the Crustacean Artemia franciscana

Long-term Lethal Toxicity Test with the Crustacean Artemia franciscana

לטווח ארוך רעילות מבחן קטלני עם לסרטן הארטמיה franciscana</em

Our research activities target the use of biological methods for the evaluation of environmental quality, with particular reference to saltwater/brackish ...

In Vivo Microinjection and Electroporation of Mouse Testis

In Vivo Microinjection and Electroporation of Mouse Testis

בVivo Microinjection וElectroporation של אשך העכבר

This video and article contribution gives a comprehensive description of microinjection and electroporation of mouse testis in vivo. This particular ...

Dried Blood Spots - Preparing and Processing for Use in Immunoassays and in Molecular Techniques

כתמי דם מיובשים - הכנה ועיבוד לשימוש ב- Immunoassays וב -טכניקות מולקולריות

The idea of collecting blood on a paper card and subsequently using the dried blood spots (DBS) for diagnostic purposes originated a century ago. Since ...

Techniques for Imaging Prometaphase and Metaphase of Meiosis I in Fixed Drosophila Oocytes

Techniques for Imaging Prometaphase and Metaphase of Meiosis I in Fixed Drosophila Oocytes

טכניקות הדמיה prometaphase ו Metaphase של המיוזה ואני קבוע<em&gt; תסיסנית</em&gt; ביציות

Chromosome segregation in human oocytes is error prone, resulting in aneuploidy, which is the leading genetic cause of miscarriage and birth defects. The ...

Simple and Effective Administration and Visualization of Microparticles in the Circulatory System of Small Fishes Using Kidney Injection

ניהול פשוטה ויעילה והדמיה של Microparticles במערכת הדם של דגים קטנים באמצעות הזרקת כליות

The systemic administration of micro-size particles into a living organism can be applied for vasculature visualization, drug and vaccine delivery, ...

Micron-scale Phenotyping Techniques of Maize Vascular Bundles Based on X-ray Microcomputed Tomography

טכניקות Phenotyping בקנה מידה מיקרון של חבילות וסקולריים תירס מבוסס על צילום רנטגן טומוגרפיה Microcomputed

It is necessary to accurately quantify the anatomical structures of maize materials based on high-throughput image analysis techniques. Here, we provide a ...

Single Cell Collection of Trophoblast Cells in Peri-implantation Stage Human Embryos

אוסף תאים בודדים של תאי טרופוביסט בעוברים אנושיים שלב השתלה פרי

Human implantation, the apposition and adhesion to the uterine surface epithelia and subsequent invasion of the blastocyst into the maternal decidua, is a ...