Name: reproductive techniques for ovarian monitoring and control in amphibians
Uploaded: 2019-05-12T12:30:00
Duration: 4 min 37 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Reproductive Techniques for Ovarian Monitoring and Control in Amphibians at JoVE.com

Натали Calatayud хотел бы поблагодарить д-р Барбара Дюрант для обучения и помощи с ультразвуком и Exploradora де Immuebles, S.A. (EISA) для предоставления финансовой помощи на мою должность научного сотрудника в SD'G. Спасибо доктору Кайли Кейн за комментарии к рукописи, а также официальным рецензентам (кем бы они ни были). Благодаря Джонатан Dain наш 2018 Летний сотрудник, Сан-Диего зоопарк Институт исследований по сохранению для предоставления фотографий(Рисунок 1A, B). Моника Ступс выражает признательность Ассоциации зоопарков и аквариумов Фонда охраны природы и Всемирного фонда охраны природы Диснея за предоставление финансовой поддержки для создания популяции нектуруса в плене. Кроме того, поддержка была также получена за счет частных пожертвований от адвоката-амфибии г-жи Айрис де ла Мотт. Спасибо, дается г-н Кристофер DeChant и д-р Марк Кэмпбелл за их значительный вклад в исследования.

Авторам нечего раскрывать.

Непосредственное обращение, визуальное наблюдение и морфометрические меры обеспечивают неинвазивные методы и являются первыми критериями оценки для определения репродуктивной стадии женщин. Тем не менее, это исследование показывает, что gravid яичников не всегда могут быть надежно определены пальпации. В зависимости от вида, gravid яичников иногда может быть визуально обнаружены через полупрозрачные(рисунок 13A, B) или полностью полупрозрачной кожи на брюшной стороне животного (Рисунок 13C). Самки, которые завершили овипозиции может показать очевидные изменения в их внешний вид по сравнению с gravid женщин (например, свободная кожа и потеря до 30% от их массы тела, Рисунок 13D). Во время размножения, мужчины и женщины будут отображать определенные поведения, которые предоставляют информацию о близости к овуляции и овики. В случае R. muscosa указывает на то, что самка близка к овиспозиции начать с женщины ввода handstands.
Применение ультразвуковой технологии к ануранам и каудатам позволяет диагностировать наличие или отсутствие яйцеклеток и связано ли яйцеклетка с полным или частичным высвобожденным яйцеклетки. Таким образом, этот метод обеспечивает более полную и точную оценку репродуктивного статуса, не ограничиваясь определением статуса gravid/non-gravid с помощью метода визуализации, которая варьируется в зависимости от прозрачности брюшной кожи, или эпидермальной консистенции среди различных видов земноводных. Ультразвук может быть выполнен с относительной легкостью и с небольшим стрессом для животных(Рисунок 5 и Рисунок 13)и может быть использован для характеристики репродуктивных циклов и для определения репродуктивного статуса4. Очень важно ознакомиться с видами; однако, это исследование показало, что Necturus и R. muscosa имеют общие признаки развития в их репродуктивной модели, позволяющие для аналогичной классификации репродуктивной стадии (Рисунок 5). Благодаря этой технологии в настоящее время доказательства того, что развитие яйцеклеток является высоким в неволе Нектур и R. muscosa и что оба этих вида следуют сезонной модели. Хотя причины этих явлений неизвестны и требуют дальнейшего изучения, без использования ультразвука, несколько областей дисфункции яичников, таких как задержка яйцеклеток и частичная овипозиция, остались бы незамеченными. Будущие применения к этому методу будут использованы для того чтобы обусловить должны ли женщины быть выбраны для разводить в любом, котор дали годе и ли oviposition вполне.
Протокол сбора крови, как, например, представленный в R. muscosa, который является одновременно эффективным и вызывает минимальный уровень бедствия для животного, является оптимальным для изучения гормональных профилей в неволе и дико пойманных ануранов (Calatayud, неопубликованный). На сегодняшний день нет никакой информации о ежегодных гормональных профилей плена R. muscosa и, следовательно, никаких знаний о том, как гормоны влияют на их здоровье и размножение. Кроме того, с доказательствами того, что самки этого вида не могут быть годовыми заводчиками, гормональное профилирование будет еще одним методом для отслеживания циклов яичников. Вместе с ультразвуком, анализ инкрети может вести к более лучшему прогнозированию чего женщины будут готовы для oviposition. Кроме того, в прошлом году было зарегистрировано два случая интерсекса в популяции Р. Мускозы. Кроме того, развитие большого пальца колодки было отмечено на некоторых из старших женщин-основателей. Причины этого в настоящее время находятся под следствием, но первоначальные результаты показывают, что это может относиться к изменениям в уровнях тестостерона (Calatayud, неопубликованные). Различание гормональных циклов у женщин разных возрастов поможет нам понять, почему у женщин могут развиваться вторичные половые характеристики, связанные с мужчинами, и следует ли этого ожидать в стареющей популяции.
Экзогенная гормональная терапия была использована для преодоления репродуктивной дисфункции часто встречаются в неволе земноводных. Однако, для как R. muscosa, так и для популяций Нектура в этом исследовании, никаких значительных различий в яичке между гормонами и контрольных самок не было обнаружено в течение 2 и 5-летнего периода времени, соответственно. Это может означать, что гормональный протокол администрации, дозы, грунтовки и комбинации гормонов используется не было адекватного для вида. Более близкий анализ индивидуальных женских репродуктивных историй предполагает, что R. muscosa может не испытывать ежегодного размножения, что также может объяснить отсутствие гормонального эффекта, наблюдаемого у обработанных самок. Потому что определенный процент самок последовательно пропустил размножения каждый год, понимание естественной истории вида может помочь определить, есть ли необходимость в экзогенных гормонов и когда они могут быть наиболее эффективными. Процедуры, изложенные в этой статье, могут применяться к ряду видов (таблица 1) и для ануранов в диапазоне от 5 г до 150 г; более крупным животным могут потребоваться различные шприцы и иглы датчиков. Расположение инъекции варьируется с некоторыми гормонами, требующими внутримышечной, внутриперитонеальной, субкожной или интрейдерской инъекции(рисунок 7).
Хирургия для целей овариэктомии является распространенным методом, используемым в различных видах амфибий для получения яйцеклеток для эмбриональных исследований. Обариэктомия также может быть указана для контроля населения и медицинских вопросов, таких как задержка яйцеклеток. В случае частичной овариэктомии, в которой, сбор яйцеклеток выполняется в исследовательских целях, операция должна гарантировать, что животное остается репродуктивным. Администрация PGF2 "показал некоторые перспективы в решении удержания яйцеклеток у женщин R. muscosa. В нескольких физических лиц, PGF2 "вызвало полное осаждение ранее сохраненных яиц, но в других только частичное осаждение произошло требующих ручной зачистки, чтобы удалить все яйца. В то время как PGF2 "может служить альтернативой хирургии для удержания яйцеклеток в R. muscosa, его способность исправить аналогичные патологические условия у других земноводных потребует видов конкретных проверки. Когда хирургическое вмешательство санкционировано для пациента Anuran или Caudate, необходимо обеспечить адекватную плоскость анестезии прежде чем разрезы сделаны. Для оценки и мониторинга нормативных индукций и ответов на восстановление, изложенных в данном исследовании для каждой из таксонов, необходимы навыки наблюдения. После того, как один знакомы с конкретной анатомии, соответствующий хирургический подход, гемостаз, мягкие манипуляции ткани и адекватного послеоперационного управления, репродуктивные операции не представляют собой подавляющее препятствия.

Амфибии уже давно признаны в качестве важных биологических и медицинских моделей по широкому кругу научно-исследовательских дисциплин. Данные, полученные путем изучения конкретных видов, таких как Xenopus laevis и X. tropicalis, леопардовая лягушка (Ранее Рана) pipiens) и аксолотл (Ambystoma mexicanum) были применены к ряда других видов позвоночных, включая людей. Ветеринарные, животноводства и вспомогательные репродуктивные методы, возникшие в результате изучения этих и других земноводных, оказывают помощь тем, кому поручено успешное лечение, содержание и устойчивость более редких популяций в неволе 1 , 2 , 3 , 4.
Интерес приобретает для одновременного использования в и ex situ сохранения на основе подходов, чтобы обратить вспять волну вымирания для многих в опасности амфибий видов1,2. В этой статье представлены методологии, доступные в настоящее время для мониторинга и контроля функции яичников-амфибий в модельных видах ануран и каудат. Кроме того, представлены существующие методы для решения общей репродуктивной патологии удержания яйцеклеток.
Как и во многих таксономических группах, контроль яичников-амфибий включает в себя ряд тесно синхронизированных взаимодействий между окружающей средой и физиологией. Температура и фотопериод (известный как неподанные сигналы) расшифровываются глазом и мозгом, где они быстро преобразуются в генетические, гормональные и циркадные процессы (конечные сигналы)3,4. Методы мониторинга и контроля функции яичников, охватываемые в этой статье включают инвазивные и неинвазивные методы. Институциональные уход за животными и использования комитета (IACUC) научно-исследовательских и учебных требований определить неинвазивные методы, как те, которые вызовут минимальные без каких-либо физической боли или психического расстройства и не требуют обезболивающих препаратов5. Здесь неинвазивные методы включают визуальный осмотр и пальпацию, поведенческие наблюдения, морфометрические оценки и УЗИ. Напротив, методы сбора крови, гормонального введения и хирургии (овариэктомия и удаление сохраненных яйцеклеток) классифицируются как инвазивные, поскольку они могут привести к некоторой боли или дискомфорту и требуют анестезии или пост-процедурной медикаментозной терапии.
Неинвазивные методы мониторинга яичников могут быть легко включены в повседневную процедуру ухода для большинства пленных земноводных. В зависимости от вида, гравидность яичников часто может быть определена простым визуальным осмотром (стеклянная лягушка). В других случаях, пальпация может указывать, является ли самка gravid. Различные показатели состояния тела (BCI), такие как вес, морда urostyle длина (SUL), морда-вентиляционные длины (SVL) и стандартный индекс массы (SMI) доступны для прогнозирования наличия или отсутствия яиц4,6,7, 8,9. Тем не менее, следует принимать меры с интерпретацией результатов, поскольку большинство из них не учитывают возраст, форму тела или состав (например, вода сохраняется по сравнению с массой яичников или жира)6. Окончательные репродуктивные диагнозы могут быть достигнуты с помощью ультразвука с более глубокими знаниями, полученными в отношении развития яйцеклеток и постановки яичников цикла4,7. Ультразвук также предоставляет средства для подтверждения и мониторинга репродуктивных патологий и связанных с ними физиологических условий4,8.
В дополнение к предоставлению информации о состоянии здоровья, анализ крови может быть использован для измерения репродуктивных гормонов. Если гормон профилирования является конечной целью, важно, чтобы избежать стресса, связанных с влияниями, которые могут свести с ума системные данные стероидов. В то время как потенциально мощный инструмент мониторинга, есть еще предстоит исследование, демонстрирующее врожденные эндокринологические ответы на экзогенные гормоны администрации в любой амфибии видов. Кровь можно безопасно взять с нескольких участков; у лягушек это включает в себя вентральную брюшную вену, лингвистовое сплетение, бедренную вену и сердце9,10. В Каудатах кровь собирается из венальной хвостовой вены. Степень инвазивности, количество удерживающих требуется, необходимость анестезии, деликатность органа мишенью, и размер животного являются факторами, которые должны быть рассмотрены при выборе метода сбора для амфибии пациента. В этой статье будет представлена техника сбора крови из лицевой верхнечелюстной или мускуластной вены лягушек, как первоначально описано Forzan et al.9.
Контроль яичников специфичен для видов и, как таковой, гормональные протоколы должны быть проверены и оптимизированы. Помимо сезонности и связанных циркулирующих гормонов среды, контроль яичников также может быть тесно связана с возрастом, время, проведенное в неволе и воздействие повторных гормональных администраций, для которых мало информации в литературе11 , 12 Лет , 13. Внедрение гормональной терапии для выяснения репродуктивного поведения, производства гамет, созревания и овисты стало широко известный подход к решению общих репродуктивных проблем, связанных с неволем4, 8,14,15,16. Поскольку механизмы контроля воспроизводства позвоночных сильно сохраняются, существует ряд гормонов, нейропептидов и коммерчески доступных препаратов, используемых терапевтически в других таксономических группах, которые также могут быть надежно использованы в ряде видов амфибий(таблица 1). Гонадотропин высвобождая гормон (GnRH) и человека хорионический гонадотропин (ХГЧ) (или вариации из них, т.е., PMSG и ЭКГ)17,18, либо индивидуально или в комбинации, были широко использованы в амфибии в неволе программы разведения в том числе: южной Скалистых горах бореальной(Anaxyrus boreas)4,19,20; жаба, Dusky Gopher лягушки, Рана севоза (Langhorne и др., неопубликованные)7; побережье Мексиканского залива Уотердог, Нектурус Бейери20; Вайоминг жаба, Anaxyrus baxteri18; бык, Рана catesbiana21; американская жада, Anaxyrus americanus22; трава лягушки, Lymnodyaster tasmaniensis23; Coqui, Eleutherodactactylus coqui24; Ксенопус, Ксенопус лаевис25; жабо Гюнтера, Pseduophryne guentheri26; Северная лягушка леопарда, Lithobates pipiens; аргентинский рогатый лягушка, Ceratophrys богато; рогатая лягушка Крэнуэлла, C. cranwelli; американская земляная лягушка, Odontophrynus americanus27; и пожарная саламандра (Саламандра )228. Стероидные гормоны, как прогестерон (P4), реже сообщается, но продемонстрировали хорошую эффективность в вызвавов овуляции и овипозиции у некоторых видов ануран16,18,29. Простагландин (особенно Простагландин 2-альфа (PGF2 )участвуют в овуляции вместе с кортикостероидами30,31,32,34 и достичь высокого уровня во время овуляторная фаза31.
В исследованиях in vitro, PGF2 "является мощным индуктором овуляции31, в то время как in vivo это может вызвать овиспозицию сохраненных яиц в Rana muscosa4,30,32. Гипофизэкстракты экстракты также эффективны индукторов овуляции15,16,34; однако, проблемы, связанные с биобезопасностью и потенциалом для передачи болезни, часто являются сдерживающим фактором для колоний размножения в неволе при рассмотрении этого подхода35.
В последнем разделе этой статьи подробно описаны хирургические процедуры и предусмотрены альтернативные подходы к расширению исследований яичников или помощи с разрешением репродуктивных патологий. Обариэктомии чаще всего выполняются в амфибии для получения яйцеклеток для эмбриональных исследований. Тем не менее, он также может обеспечить средство для сохраненных яиц, когда другие варианты неудачу. Хотя эта процедура является инвазивной, требуя полной анестезии и разрезов, чтобы разоблачить яйцеклетки массы, она не требует эвтаназии. Кроме того, после частичной овариэктомии, животные могут сделать полное выздоровление и продолжать быть репродуктивно активной после операции8,36.
В описанных ниже протоколах излагаются инвазивные и неинвазивные методы контроля и мониторинга яичников в Ануранах и Каудатах. Конкретные виды, выбранные для иллюстрации методов в Anurans включают R. слизистой оболочки и X. laevis. Necturus maculosus, N. beyeri, N. alabamensis, и A. mexicanum составляют виды, используемые для аналогичного описания методов в Каудатах.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>GE logiq Book XP and 8C-RS probe 4e10 MHz GE Medical Systems</td>
			<td>GE medical systems</td>
			<td>GE logiq Book XP</td>
			<td>Ultrasound</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aloka 500 7.5mHz linear or IBEX multi-frequency (10-6mHz) micro-convex</td>
			<td>GE medical systems</td>
			<td>8C-RS (10 MHz)</td>
			<td>Ultrasound probe</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD disposable U-100 insulin syringe (28-29 G needle)</td>
			<td>Mettler Electronics Corp CA</td>
			<td>Sonigel</td>
			<td>Ultrasound gel (water soluble, salt-free)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hormone</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gonadotropin releasing hormone</td>
			<td>BACHEM</td>
			<td>4012028</td>
			<td>synonym: [Des-Gly10, D-Ala6, Pro-NHEt9]-GnRH acetate 
			abbreviation: GnRH</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lutenizing hormone releasing hormone</td>
			<td>BACHEM, Sigma-Aldrich</td>
			<td>4033013;&#160;&#160;&#160;&#160; L1898</td>
			<td>synonym: Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2 acetate salt; 
			[D-Ala6}-LHRH acetate salt hydrate 
			abbreviation: LHRH</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human chorionic gonadotropin</td>
			<td>BACHEM, Sigma-Aldrich</td>
			<td>4030270, 4018894; C1063, CG5, CG10</td>
			<td>synonym: Chorionic gonadotropin-&#946; (109-145)(109-119); Choriogonin, HCG (2,500IU, 5,000IU, 10,000IU) 
			abbreviation: hCG</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prostaglandin 2&#945;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P40424;</td>
			<td>synonym: (5Z,9&#945;,11&#945;,13E,15S)-9,11,15-Trihydroxyprosta-5,13-dienoic acid tris salt, PGF2&#945;&#8722;Tris; 
			abbreviation: PGF2&#945;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Follicle-stimulating hormone</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F4021, F8174</td>
			<td>synonym: porcine, sheep 
			abbreviation: FSH</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Progesterone</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>46665;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; P7556</td>
			<td>synonym: Vetranal; P4 water soluble 
			abbreviation: P4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pituitary extract</td>
			<td>na</td>
			<td></td>
			<td>synonym: Check papers for amphibian species derivation 
			abbreviation: PE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pregnant Mare Serum Gonadotropin</td>
			<td>Prospec;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; Lee Biosolutions; Sigma-Aldrich</td>
			<td>HOR-272;&#160;&#160;&#160; 493-10; 9002-70-4</td>
			<td>synonym: Pregnant Mare Serum Gonadotropin 
			abbreviation: PMSG</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metaclopromide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M0763</td>
			<td>synonym: 4-Amino-5-chloro-N-[2-(diethylamino)ethyl]-2-methoxybenzamide, Methoxychloroprocainamide 
			abbreviation: MET</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lucrin</td>
			<td>BACHEM; Sigma-Aldrich</td>
			<td>4033014;&#160;&#160; L0399</td>
			<td>synonym: Leuprorelin acetate 
			abbreviation: Lucrin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lutalyse</td>
			<td>Pfizer</td>
			<td></td>
			<td>synonym: PGF2&#945; - Dinoprost tromethamine 
			abbreviation: Lut</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pimozide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P1793</td>
			<td>synonym: 1-[1-[4,4-bis(4-Fluorophenyl)butyl]-4-piperidinyl]-1,3-dihydro-2H-benzimidazol-2-one 
			abbreviation: PZ</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amphiplex</td>
			<td>see above</td>
			<td></td>
			<td>synonym: Gonadotropin releasing hormone + metoclopramide 
			abbreviation: GnRH + MET</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ovopel</td>
			<td>Ovopel</td>
			<td>na</td>
			<td>synonym: GnRHa + dopamine receptor antagonist (administered 1 pellet/ kg) 
			abbreviation: Ovo</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ovaprim</td>
			<td>Pentair aquatic eco-systems</td>
			<td>Ova10</td>
			<td>synonym: Salmon gonadotropin + domperidone 
			abbreviation: Ova</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Domperidone</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D122</td>
			<td>synonym: 4-(5-Chloro-2-oxo-1-benzimidazolinyl)-1-[3-(2-oxobenzimidazolinyl)propyl]piperidine 
			abbreviation: DOM</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

reproductive techniques for ovarian monitoring and control in amphibians

Контроль яичников и мониторинг у земноводных требуют многогранного подхода. Есть несколько приложений, которые могут успешно вызвать репродуктивное поведение и приобретение гамет и эмбрионов для физиологических или молекулярных исследований. Амфибии вносят свой вклад в одну четверть до одной трети исследований позвоночных, и интерес в этом контексте представляет их вклад в знания научного сообщества о репродуктивных процессах и эмбриональном развитии. Тем не менее, большая часть этих знаний происходит от небольшого числа видов. В последнее время уничтожение земноводных по всему миру потребовало все более широкого вмешательства со стороны защитников природы. Колонии восстановления и обеспечения в неволе, которые продолжают появляться в ответ на риск исчезновения, делают существующие исследования и клинические приложения бесценными для выживания и воспроизводства земноводных, нахаемых под присмотром человека. Успех любой популяции в неволе основан на ее здоровье и воспроизводстве и способности развивать жизнеспособное потомство, которое переносит наиболее разнообразное генетическое представление их видов. Поэтому для исследователей и ветеринаров способность контролировать и контролировать развитие и здоровье яичников является императивом. Основное внимание в этой статье, чтобы выделить различные вспомогательные репродуктивные методы, которые могут быть использованы для мониторинга и, где это уместно или необходимо, контроль яичников функции в земноводных. В идеале, любые вопросы репродуктивного здоровья должны быть сокращены за счет надлежащего неволе, но, как и с любым животным, вопросы здоровья и репродуктивной патологии неизбежны. Неинвазивные методы включают поведенческие оценки, визуальный осмотр и пальпацию и морфометрические измерения для расчета показателей состояния тела и ультразвука. Инвазивные методы включают гормональные инъекции, анализ крови и хирургическое вмешательство. Контроль яичников может осуществляться несколькими способами в зависимости от требуемого применения и видов, представляющих интерес.

Watch this Scientific Journal Video about Reproductive Techniques for Ovarian Monitoring and Control in Amphibians at JoVE.com

Reproductive Techniques for Ovarian Monitoring and Control in Amphibians

Изучение биологии амфибий дает ценную информацию о репродуктивных, физиологических, эмбриологических и развития процессах, которые управляют организмами многих таксономических групп. Здесь мы представляем всеобъемлющее руководство по различным методологиям, которые могут быть использованы для изучения контроля яичников и мониторинга в земноводных.

Репродуктивные методы мониторинга и контроля яичников у амфибий

Ovarian control and monitoring in amphibians require a multi-faceted approach. There are several applications that can successfully induce reproductive ...

Этот метод овязи использует восстанавливаемую хирургическую процедуру для получения ооцитов-амфибий для наших медицинских исследований или другого применения для преодоления патологическое состояние сохраненных яйцеклеток. Она не требует эвтаназии для получения яйцеклеток-амфибий для исследовательских целей. В самом деле, после частичной овязи субъекта амфибии может быть репродуктивно активным после восстановления.После подтверждения отсутствия реакции на щепотку тазовых конечностей, поместите анестезированную самку анурана в спинное лежачее положение, и используйте влажную, стерильную марлю, чтобы протереть хирургическое поле раствором повидоне-йода в течение 10-15 секунд. Поместите четкую, стерильную пластиковую драпировку над хирургической областью и уменьшите испарение, сохраняя окружающую кожу влажной, прежде чем использовать лезвие скальпеля номер 15 или 11, чтобы сделать 3-миллиметровый перимедианский разрез кожи в середине коломы между плечами и клоакой. Используйте хлопчатобумажные аппликаторы для применения локализованного давления на любые мелкие сосуды вокруг разреза по мере необходимости, и поднять брюшную мембрану для последовательного мембранного разреза.Используйте втягиватели век, чтобы удалить цеоломные разрезы, и акциз часть яичной массы без лигатирования каких-либо кровеносных сосудов. Для полной овязиэктомии, прижигать окружающие кровеносные сосуды, и использовать моно-филамент шов, чтобы закрыть разрез ceoliotomy с прерванным everting шов шаблон. Различные виды земноводных, такие как эти Necturus и стеклянная лягушка, проявляют различную степень прозрачности кожи, влияющих на способность визуализировать их репродуктивного статуса трансдермально.У некоторых видов, морфологические различия могут быть обнаружены между самками, которые gravid, по сравнению с недавно oviposited животных. В этом примере, самка Rana muscosa, которая недавно oviposited можно отличить от gravid женщины по вялости ее кожи и ее тоньше внешний вид. Поведенческие этапы овипозиции в Rana muscosa включают в себя суд, в котором мужчина активно преследует самку и амплексуса, во время которого rana muscosa мужской монтируется и твердо застежки на спине женщины.Во время амплекса самец сжимает самку мягкой накачкой. Самка Rana muscosa передвигаться и отображать прерывистый handstand поведения, в конечном итоге прислонившись к поверхностям, что яйца могут быть застряли на, в то время как мужчины насосы ее живот энергично. Сразу после яйцеклетки женские яичники возвращаются в категорию первой стадии.В течение этого времени, фолликулы трудно визуализировать при выполнении ультразвука. Второй этап представлен появлением эхогенных точек, рассеянных по всему яичнику. Третий этап определяется наличием больших, более круглых эхогенных точек с темными центрами, указывающих на желток, зрелые фолликулы.В этой репрезентативной четырехлетней оценке пленной самки Нектур развитие яйцеклеток было высоким, но овипозиция не была обеспечена. Некоторые самки с сохраниввшимися яйцами, сопутствующих образованию жидкости в полости тела, проявляли чрезмерный обхват и отек, а также некоторые признаки разрыва кровеносных сосудов, например, которые проявлялись в этих пострадавших Ране и Нектуре. Хотя хирургический подход может быть использован для управления патологией яичников, этот метод также может быть вовлечен в gamet и пуповины исследований.После операции практикующий врач может вернуться к первому протоколу, изложенного в этой рукописи для мониторинга текущего общего состояния здоровья субъекта амфибии.

Research

JoVE Journal

Biology

Microinjection Techniques for Studying Mitosis in the Drosophila melanogaster Syncytial Embryo

Microinjection Techniques for Studying Mitosis in the Drosophila melanogaster Syncytial Embryo

Микроинъекция методы для изучения митоза в Дрозофилы Синцитиальный эмбрионов

This protocol describes the use of the Drosophila melanogaster syncytial embryo  for studying mitosis1.  Drosophila has useful genetics with a sequenced ...

Techniques for Imaging Ca2+ Signaling in Human Sperm

Techniques for Imaging Ca2+ Signaling in Human Sperm

Методы для работы с изображениями Ca 2 + Сигнализация в человеческой спермы

Fluorescence microscopy of cells loaded with fluorescent, Ca2+-sensitive dyes is used for measurement of spatial and temporal aspects of Ca2+ signaling in ...

Patch Clamp and Perfusion Techniques for Studying Ion Channels Expressed in Xenopus oocytes

Patch Clamp and Perfusion Techniques for Studying Ion Channels Expressed in Xenopus oocytes

Зажим Patch и перфузии Методы изучения ионных каналов, выраженные в Xenopus Ооцитов

The protocol presented here is designed to study the activation of the large conductance, voltage- and Ca2+-activated K+ (BK) channels. The protocol may ...

Long-term Lethal Toxicity Test with the Crustacean Artemia franciscana

Long-term Lethal Toxicity Test with the Crustacean Artemia franciscana

Долгосрочные Смертельное испытания токсичности с ракообразных Артемия franciscana</em

Our research activities target the use of biological methods for the evaluation of environmental quality, with particular reference to saltwater/brackish ...

In Vivo Microinjection and Electroporation of Mouse Testis

In Vivo Microinjection and Electroporation of Mouse Testis

В Vivo микроинъекции и электропорации мыши яичка

This video and article contribution gives a comprehensive description of microinjection and electroporation of mouse testis in vivo. This particular ...

Dried Blood Spots - Preparing and Processing for Use in Immunoassays and in Molecular Techniques

Засохшей крови пятна - подготовка и обработки для использования в Immunoassays и молекулярных методов

The idea of collecting blood on a paper card and subsequently using the dried blood spots (DBS) for diagnostic purposes originated a century ago. Since ...

Techniques for Imaging Prometaphase and Metaphase of Meiosis I in Fixed Drosophila Oocytes

Techniques for Imaging Prometaphase and Metaphase of Meiosis I in Fixed Drosophila Oocytes

Методы для работы с изображениями прометафазе и метафазе мейоза I в фиксированных<em&gt; Drosophila</em&gt; ооциты

Chromosome segregation in human oocytes is error prone, resulting in aneuploidy, which is the leading genetic cause of miscarriage and birth defects. The ...

Simple and Effective Administration and Visualization of Microparticles in the Circulatory System of Small Fishes Using Kidney Injection

Простое и эффективное управление и визуализация микрочастиц в системе кровообращения малых рыб с помощью инъекций почек

The systemic administration of micro-size particles into a living organism can be applied for vasculature visualization, drug and vaccine delivery, ...

Micron-scale Phenotyping Techniques of Maize Vascular Bundles Based on X-ray Microcomputed Tomography

Мкм шкала фенотипирование методы кукурузы сосудистых пучков, основанный на Microcomputed рентгеновская томография

It is necessary to accurately quantify the anatomical structures of maize materials based on high-throughput image analysis techniques. Here, we provide a ...

Single Cell Collection of Trophoblast Cells in Peri-implantation Stage Human Embryos

Одноклеточная коллекция трофибластных клеток в пери-имплантации этапе человеческих эмбрионов

Human implantation, the apposition and adhesion to the uterine surface epithelia and subsequent invasion of the blastocyst into the maternal decidua, is a ...