Name: reproductive techniques for ovarian monitoring and control in amphibians
Uploaded: 2019-05-12T12:30:00
Duration: 4 min 37 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Reproductive Techniques for Ovarian Monitoring and Control in Amphibians at JoVE.com

Natalie Calatayud, SDZG 'deki araştırma ortağı pozisyonuna finansal yardım ödüllendirilmesi için ultrason ve Exploradora de ımmuebles, S.A. (EıSA) ile ilgili eğitim ve yardım için Dr. Barbara Durrant 'a teşekkür etmek istiyor. Dr Kylie Cane ve resmi yorumcular (kim onlar olabilir) hakkında yorum için teşekkür ederiz. Jonathan Dain bizim 2018 yaz Fellow, San Diego Zoo Enstitüsü koruma araştırma için fotoğraf sağlamak için teşekkürler (Şekil 1a, B). Monica Stoops, esir Necturus nüfusunun kurulması için mali destek sağlamak Için Hayvanat Bahçeleri ve Akvaryumlar koruma Bağış Fonu ve Disney Worldwide koruma fonu Derneği takdir uzatır. Ayrıca, destek de amfitisli savunucusu Bayan Iris de La Motte özel bağış yoluyla alındı. Teşekkürler, Bay Christopher DeChant ve Dr Mark Campbell araştırma için önemli katkıları için verilir.

Salamander prosedürleri Cincinnati Zoo & Botanik Bahçesi (CZBG) kurumsal bakım ve kullanım Komitesi (ıesuc) protokolleri 11-106, 13-110, 14-133 ve 15-138 tarafından onaylanmıştır. Tüm kurbağa ve kurbağa prosedürleri San Diego Zoo Global (SDZG), kurumsal bakım ve kullanım Komitesi (ıDIUC) protokolleri tarafından onaylanmıştır: 15-001, 16-005 ve 18-003.
Hayvanların bakımı ve tedavisi, Ulusal Doğal Tarih Müzesi (Paris) (Müze Ulusal d 'Histoire Naturelle-Ménagerie du Jardin des Plantes (MNHN)) Etik Komitesi tarafından onaylanmış, kurumsal ve ulusal yönergelere uygun olarak (Komisyon de génie Génétique, Direction Départementale des Services vétérinaires, Avrupa Birliği Direktifi 2010/63/EU, anlaşma kararı No. C75-05-01-2, deneysel ve diğer bilimsel amaçlarla kullanılan vertebrat hayvanları için Avrupa Sözleşmesi. Bu çalışmada kullanılan tüm protokoller 68-037 referans numarası altında onaylandı.
1. Non-invazif ovaryalı izleme teknikleri
<ol><li>Görsel muayene ve palpasyon<ol>
<li>Dişi Anuran 'da aşağıda açıklanan üç yoldan birini tutun.<ol>
<li>Kurbağa veya kurbağa bacaklarını halka ve küçük parmağınızla sabitleyin, kurbağa vücudunun dorsal tarafını (karın) indeks ve orta parmak ile ventral tarafı başparmak ile destekler (Şekil 1a).</li>
			<li>Kurbağa veya kurbağa karın üzerinde bir başparmak ve hayvanın arkasına güvenli parmaklarının geri kalanı ile baskın elinde tutun. Hayvan karın palpe için baskın olmayan el kullanarak, subdermal kabartmayı olup olmadığını hissediyorum (Şekil 1B).</li>
			<li>El avuç üzerinde kurbağa veya kurbağa karın dinlenin, ön kollar indeks parmağı üzerinde drapeli ve üst arkası bir başparmak.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Caudates doğanın tam olarak Akuatik olduğundan, aşağıda açıklanan iki yöntemden biri ile görsel muayene gerçekleştirin.<ol>
<li>Hayvan tank suyu içeren ayrı bir 4 L konteyner taşıyın. Kap (kapak güvenli) yukarı tutun ve alt taraftaki el feneri parlıyor, yumurtaların varlığını/yokluğunda görselleştirmek için.</li>
			<li>Anestezize içinde MS222 (0,5 g/L; Trigren methanesulfonate, 0,5 M NaHCO ile tamponlu3). İndüksiyon takipte, hayvanı arkasına döndürün ve karını inceleyin.</li>
		</ol>
</li>
	</ol></li>
	<li>Morfometrik değerlendirmeler<ol>
<li>Semih çınar Not: anestezi gerekli değildir.<ol>
<li>Kaliperleri kullanarak, kuyunun ucunda vücudun merkezi boyunca, SUL ve SVL (Şekil 2a, B) elde etmek için kuyruk ucunu hayvan ölçmek.</li>
			<li>Dijital hassas ölçekte plastik bir konteyner Dara. Hayvanı tarlanmış bir kabın içine yerleştirin ve tartın (Şekil 2C).</li>
			<li>Bullkurbağa gibi daha büyük hayvanlar için, ya da alanda ağırlık elde ederken, bir asılı ölçek kullanın (Şekil 2D).</li>
			<li>Birçok hikaye türlerinde olduğu gibi, R. muscosa yetişkin kadınlarını erkeklerden daha büyük büyüklüğü ve eller üzerinde düğün (başparmak) pedleri eksikliği ile ayırt (Şekil 3).</li>
			<li>Aşağıdaki formül ile genel sağlık temel bir değerlendirme olarak, vücut durumu hesaplayın: Fulton 'un indeksi: K = kütle ÷ uzunluk3 Not: Fulton 's Index kütle ve uzunluk ile ilgili boyutlu bir hacim dengesi kullanır burada 3 kitle ve uzunluğu izometrically ilişkili ölçekleme üs olduğu.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Uyarı tarihi<ol>
<li>İçinde anestezileştirilmemiş hayvan yerleştirmeden önce boş bir torba ile Dara ölçeği. Aşırı su (Şekil 2D) tanıtmak değil ve hızlı bir stres tepki olarak hayvanlar salgılar mukus olarak hareket dikkatli olun.</li>
			<li>Yeniden mühürlenebilir plastik torba veya genişletilmiş kaliperleri barındırabilir ayrı bir plastik kap altında düz bir konumda bireyler immobilizing tarafından yetişkin önlemleri elde.</li>
			<li>Gövde uzunluğunu kaliperlerle ölçün (Şekil 2E).</li>
			<li>Büyüme izlemek için kuyruk ucunu (SVL) için burun ucunu ölçmek uyarı.</li>
		</ol>
</li>
	</ol></li>
	<li>Davranışsal gözlemler<ol>
<li>Fiziksel olarak gerçek zamanlı olarak hayvanları gözlemlemek veya davranış kaydetmek için bir video kamera kullanın.</li>
		<li>Hayvanlara yönelik gözlemler, davranışları kategorilere ayırır ve bir ethogram oluşturur (Şekil 4).</li>
		<li>Üreme davranışlarını sınıflandırmak Not: Şekil 4 anurans gözlenen üreme davranışları bir tür örneklendirir.</li>
	</ol></li>
	<li>Ultrason Not: ultrason dönüştürücü seçim, bu durumda, 7,5 mHz doğrusal veya Multi-Frequency (10-6 mHz) Mikro-konveks, Necturus ve 10 MHz prob ve su çözünebilir, R. muscosaiçin tuz içermeyen jel için tavsiye edilir. Semenderler üzerinde ultrason gerçekleştirme anestezi gerektirebilir (talimatlar için bkz. Bölüm 1,5).<ol>
<li>Semih çınar<ol>
<li>İki kişi kullanarak R. muscosa 'da ultrason gerçekleştirin (Şekil 5A).</li>
			<li>İlk kişi: baskın el ile hayvan tutun ve su çözünür, hayvan karın için tuz ücretsiz jel uygulayın.</li>
			<li>İkinci kişi (Ultra-sonographer): baskın elinde 10 MHz prob almak ve prob ve jel arasında iyi bir temas yapmak için emin olmak için karın uygulayın.</li>
			<li>Tüm yumurtlık görselleştirmek için hayvan karın orta çizgi merkezine doğru kol çukurunun hemen altında aşağı kaydırın.</li>
			<li>Ultra-sonographer: çerçeve dondurmak ve ultrason üzerinde istenen görüntüleri yakalamak için baskın olmayan el kullanın.</li>
			<li>4 (Tablo 2, şekil 5B-F) cinsi için kurulan sınıflandırma sistemi ile ovaryalı döngüsünün aşamasını kategorilere ayırın.</li>
			<li>Prosedürün sonunda herhangi bir jel hayvan kapalı durulayın.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Uyarı tarihi<ol>
<li>Anestezi içermeyen Necturus 'A 2 l tank suyuyla dolu 4 l dikdörtgen konteynırı aktarın.</li>
			<li>Oda ışıkları kapalı ve/veya kupa bir el hayvan başı üzerinde çevirerek hayvan hareketini minimize.</li>
			<li>Dönüştürücü 1-2 cm 'lik bir mesafeden gövde duvarından konumlandırın.</li>
			<li>Ön ayakları için ventral orta çizgi düzeyinde kalp bulun ve sonra distale dönüştürücü taşımak ve yumurtalı doku7incelemek.</li>
			<li>Kadınlarda sınıflandırma sistemine göre sınıflandırın4 cins için kurulan (Şekil 6a, B, C).</li>
			<li>Hayvanın vücudu dönüştürücü için bir açıyla (yani, doğrusal değil, ama hafif yay ise görüntüleri yakalayarak orta-geç Gravid aşamasında yumurta doğru önlemler elde; Şekil 6B). Aksi takdirde, çakışan foliküller, bireysel yumurta boyutunu ayırt etmek zorlaştırır.</li>
		</ol>
</li>
	</ol></li>
	<li>Anestezik indüksiyon ve iyileşme<ol>
<li>Semih çınar<ol>
<li>Anestezize içinde MS222 (0,5 g/L; Daha önce açıklandığı gibi trigren methanesulfonate (0,5 M NaHCO3) tamponlu.</li>
			<li>Hayvan anestezize haline gelmiştir derecesi birincil göstergesi olarak nişan refleks kullanın. Tam refleks kaybı derin anestezinin bir durumunu gösterir.</li>
			<li>Hayvan kaldırmak su banyo bazlı anestezi (MS-222) bir kez nişan refleks kaybolur.</li>
			<li>Hayvan ıslak (anestezik-ücretsiz de-chlorinated su) havlu ile yerleştirin.</li>
			<li>Tüm cerrahi prosedür sırasında hayvan nemli tutmak için emin olun.</li>
			<li>Kırmızı kauçuk kateter, unuffed tüpler veya klasik kelepçeli endotrakeal tüpler ile manşet küçük akübyalılar manşonu şişirme olmadan.</li>
			<li>Düşük oksijen debisi (0.5-0.75 L/dak) 0.5-1% Isoflurane sağlar.</li>
			<li>Prosedürden sonra Isoflurane durdurun ama oksijen akışını 1 dakika tutun.</li>
			<li>Hayvanı uzatabilir ve iki dakika boyunca anestezik olmayan adl su ile hayvanı iyice durulayın.</li>
			<li>Hayvanı sığ bir miktarda de-chlorinated su veya ıslak bir havluyla koyun.</li>
			<li>Yavaşça bir arka ekstremite üzerinde çekerek hayvan kurtarma değerlendir. Ekstremite herhangi bir tepki geri çekilme refleks gösterir.</li>
			<li>Diğer geri kazanım göstergelerini (Boğaz hareketi) ve nişan reflekslerini izleyin.</li>
			<li>Tüm refleksleri geri döndü ve kalp ve solunum oranları ön anestezik değerlere geri döndü zaman kurtarılan amfitiye düşünün.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Uyarı tarihi<ol>
<li>MS222 yılında anestezize Necturus ve amonkül (0,5 g/L tricaine methanesulfonate, 0,5 M NaHCO3ile tamponlu, (MS222) 4 L dikdörtgen tank.</li>
			<li>Tank içine bir hava taşı (1 inç) ve hava pompası yerleştirin ve yeterli oksijen sağlamak için sabit bir akışa açın.</li>
			<li>Ekstremite fonksiyonu ve nişan refleks kaybolduğunda, hayvan su-banyo tabanlı anestezi (MS-222) çıkarın ve ıslak (anestezik-ücretsiz de-chlorinated su) havlu ile hayvan koymak.</li>
			<li>Cilt ve güneş nemi bir sıkma şişesi tank suyu ile koruyun.</li>
			<li>Hayvanı kurtarmak için, dikkatle bir hava taşı ile 2 L tank suyu ile dolu 4 L plastik kap içinde ventral yan yere yerleştirin. Not: kurtarma güneş ışığı ile başlar, kuyruğunu hareket ettirme ve ileri ve son olarak ekstremite fonksiyonel hareketini ilerletme yeteneği izledi.</li>
			<li>Hayvanı orijinal konut tankına geri dönün ve sonraki 24 saat boyunca yakından izleyin. Not: amfitidyalılar için diğer anestezi yöntemleri var ve bunlar Wright ve Whitaker8' de açıklanmıştır.</li>
		</ol>
</li>
	</ol></li>
</ol>2. invaziv ovaryalı monitör ve kontrol teknikleri
Not: Bu prosedür Forzán et al.10' dan uyarlanmıştır.
<ol><li>Baskın elinde kurbağa tutun ve steril bir silme veya gazlı bez ile kurbağa yüzünün damara tarafı kuru DAB.</li>
	<li>Cilt üzerinde çok fazla dispersiyon kan önlemek için yüz kuru.</li>
	<li>İğne (26 G 1/2 "ve 27 G 1/2"), eğim yukarı bakacak şekilde, göz çevresindeki yükseltilmiş cilt ve üst çene sırtının bir üçgen (sarı anahat) noktası oluşturmak için bir araya gelen cilt yoluyla (şekil 7a) yakın vena facialis erişim vena veorbitalis posterior.</li>
	<li>Yüz damarı sağ gözün altında ve üst çene tepesinin üzerinde delinme, 1-2 arasında başlayarak göz orta çizgisinin geri mm (şekil 7a). Not: küçük kurbağalar Için (20 g altında), ekleme noktasını göz orta çizgisinin hemen altındaki bir pozisyona yaklaştırın.</li>
	<li>Açı mikrohematokrit tüp aşağı tüp içine kan akışına yardımcı yerçekimi sağlamak için. Kan delindikten hemen sonra akmalıdır (şekil 7b, C).</li>
	<li>Kan akışının ilk belirtisi olarak, delinme bölgesinde mikrohematokrit tüpünün ucunu yerleştirin ve 1-2 tam mikrohematokrit tüplerini toplama için uygun kaplarda kan ve yer tüpleri toplamak (şekil 7b, C).</li>
	<li>Kan kolayca akmaz, ya da hacim çok düşüktür, hafifçe iğne ekleme vardiya veya yüz diğer tarafına iğne takın.</li>
	<li>En az 20 s için delinme sitesine sıkıca gazlı bez basarak kanama durdurun.</li>
	<li>10 dakika boyunca kurbağayı suyun dışında bırakın ve delinme sitesini yeniden açmayın.</li>
	<li>Her kurbağa örneklenen için yeni bir iğne ve yeni mikrohematokrit tüpler kullanın.</li>
</ol>3. hormon indüksiyon
<ol><li>Hormon hazırlama<ol>
<li>Maksimum etkiyi sağlamak için hemen önce hormon enjeksiyonları hazırlayın.</li>
		<li>Tablo 1' de listelenen seçimden bir hormon seçin.</li>
		<li>Bir μL veya mL/g vücut ağırlığı16kullanılarak enjekte edilecek hormon konsantrasyonu belirleyin.</li>
		<li>Aşağıdaki bir hormonun seyreltilmeli: su, fosfat tamponlu tuz (PBS), tuzlu lofibi ringer çözeltisi (SARS) veya tuzlu.</li>
		<li>30-70 g ve 300 μL ağırlığında kurbağalar için 80-110 g (kişisel gözlem)16tartılması Için 200 μL enjeksiyon hacmini aşmayın.</li>
		<li>10-100 g arasında değişen herhangi bir hayvanın hormon yönetimi sırasında bir hayvanın doğru tutma için, Bölüm 1,1 açıklanan tutmak için uygun yöntemlerden herhangi birini kullanın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Semih çınar<ol>
<li>Her bir gram vücut ağırlığı hesaplaması (g/vücut ağırlığı) kullanılarak birey başına gerekli konsantrasyonu hesaplayın.</li>
		<li>Hemen önce yönetim, tercih steril seyreltilme yeniden oluşturur.</li>
		<li>Enjeksiyondan önce şırıngaya hiçbir kabarcıklar bırakılmadığından emin olun.</li>
		<li>Baskın olmayan elinde hayvan güvenli tutun ve baskın el ile enjeksiyon yönetmek.</li>
		<li>Hormon özelliklerine göre enjeksiyon yönetin. Anurans en yaygın enjeksiyonları alt-kutanöz vardır, intra periton veya intra kas (Şekil 8).</li>
		<li>Karın alt kısmında veya arka bacak yakın vücudun dorsal tarafındaki alt bölümünde IP enjeksiyonları yönetin (Şekil 9).</li>
		<li>İntra-kas enjeksiyonları tercihen arka bacaklara yönetin.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Caudates (Necturus)<ol>
<li>Yukarıda açıklanan vücut ağırlık yöntemine göre gram başına steril suda tercih edilen hormonu yeniden oluşturur.</li>
		<li>Necturus durumunda, 1.7-2.3 μg GnRH/g vücut ağırlığının dozlarını kullanın.</li>
		<li>Anestezi odasından Necturus kaldırın ve 45 ° yüzey cerrahi örtü ile kaplı bir yere yerleştirin.</li>
		<li>Kafasını aşağı doğru işaret eden hayvanı konumlandırın.</li>
		<li>Bir 15-20 ° açısında karın (arka bacak caudal) arka çeyreği yaklaşım. Şırıngaya hava tanıtmamaya dikkat edin.</li>
		<li>Bir insülin şırınga ve 27-30 G iğne kullanarak enjekte (IP).</li>
		<li>İnsülin şırınga ve 27-30 G iğne kullanarak hormon enjekte.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. cerrahi
<ol><li>Genel cerrahi hazırlık ve prosedür<ol>
<li>Aseptik prosedürleri korumak için, cerrahi site izole etmek için temiz steril plastik perdeler kullanın. Çevreleyen cildi nemli tutarak buharlaşma azaltın.</li>
		<li>Hayvan cildi steril su ile temasa geçecektir herhangi bir malzeme nemlendirin. 15 veya 11 numaralı neşter bıçağı ile cilt kesi yapın. Not: soğuk çelik, radyocerrahi veya Diode lazer kombinasyonu. Hafif hemorajik prosedürde hemostaz electrocauter veya Diode lazer ile elde edilebilir.</li>
		<li>Küçük damarlara kan kaybını takip etmek için lokalize basınç uygulanması için pamuk uçlu mızrak veya apilatörler kullanın.</li>
		<li>Küçük sınırlı alanları yerine standart gazlı bez kareler yönetmek için pamuk uçlu mızraklar veya aptiyörler kullanın.</li>
		<li>Göz molojik enstrümanlar gibi Micro-Instruments kullanın, ince, küçük ipuçları, hayvanlar üzerinde ameliyat yaparken ' 1 kg 'dan daha az tartım.</li>
		<li>Farklı boyutlarda kesikler sığdırmak için plastik, kendinden istinat retraktörler (örneğin, Lone Star RETRACTOR) kullanın.</li>
		<li>Koelomik kesikler geri çekilerek için göz kapağı retraktörler kullanın.</li>
		<li>Daha küçük hastalarda ameliyat yapmak için gerektiğinde büyütme araçlarını kullanın. Not: analjeziye herhangi bir cerrahi prosedür ile ihtiyaç duyulur. Cerrahi sırasında yeterli analjezi yönetmek için başarısızlık normal fonksiyonların gecikmeli dönüş ile ilişkilidir. Dahası, analjezi anestezik ilaçların etkilerini güçlendirir (Tablo 3)34.</li>
	</ol></li>
	<li>Semih çınar<ol>
<li>X. laevis , adım 1.5.1 ' de açıklandığı gibi anestezi yaptıktan sonra hayvanı dorsal vurgulanmakla (Şekil 10A, C) olarak konumlandırın.</li>
		<li>Cerrahi alan aseptik seyreltik povidone ile nemli steril gazlı bez silerek hazırlayın-iyot çözeltisi (1/10) için sitede 10-15 s veya% 0,75 klorheksidin solüsyon cerrahi sitede en az 10 dakika ameliyat önce35.</li>
		<li>Orta koelom (omuz ve Cloaca arasında) bir 3 mm paramedian cilt kesi yapmak bir kalın inme bir No. 15 veya No. 11 neşter kullanarak temiz bir kesi bırakarak. Not: bir diyot lazer de cilt kesikler için kullanabilirsiniz.</li>
		<li>Karın membranı yükseltin, yapmak ve kesi ve dikkatle bir No. 15 veya No. 11 neşter kullanarak gözden. (Şekil 10B, D).</li>
		<li>Koelomik kesikler göz kapağı retraktörler (veya herhangi bir uygun ekipman) ile geri çekin.</li>
		<li>Herhangi bir kan damarına bağlanmadan yumurta kitlesi bir kısmını biriktir.</li>
		<li>Tam ovariektomi için, çevre kan damarlarını elektrootografya veya lazer diyot ile dağlamak et (Şekil 11).</li>
		<li>Monofilament sütür kullanarak, kesilen, çevirici dikiş deseni ile yakın celiotomi kesi.</li>
	</ol></li>
	<li>Uyarı tarihi<ol>
<li>Bir kez. mexicanum anestezize edilmiştir, sağ lateral recumbency yerleştirin, sol pelvik ekstremite ile sadece kuyruk tabanına karşı yerleştirilir.</li>
		<li>Cerrahi alan aseptik seyreltik povidone ile nemli steril gazlı bez yerleştirerek hazırlayın-iyot çözümü (1:10) 10-15 s için sitede. alternatif olarak,% 0,75 klorheksidin çözeltisi içinde ıslatılmış steril gazlı bez ve cerrahi sitede en az 10 dakika boyunca yer kullanın Ameliyattan önce (Şekil 12A)36,37 .</li>
		<li>Vücudu üç eşit parçaya bölmek için omuz ve arka ekstremite arasında bir çizgi çizin (Şekil 12B).</li>
		<li>İkinci ve üçüncü parçalar arasında kesi site olun.</li>
		<li>Temel kas kavramak ve coelomic Viscera uzak yükseltir.</li>
		<li>Küçük hemoistatistikleri, coelomik kas yoluyla ve koelomik boşluğa yavaşça zorlayın.</li>
		<li>Koelomik kesikler göz kapağı retraktörler (veya herhangi bir uygun malzeme) ile geri çekin (Şekil 12C).</li>
		<li>Tam ovariektomi için, çevre kan damarlarını elektrootografya veya lazer diyot ile dağlamak et (Şekil 12D).</li>
		<li>Monofilament sütür kullanarak, kesilen, çevirici dikiş deseni ile yakın celiotomi kesi.</li>
	</ol></li>
</ol>

Yazarların ifşa etmesi gereken hiçbir şey yok.

Doğrudan taşıma, görsel gözlem ve morfometrik önlemler non-invaziv teknikler sağlar ve kadın üreme aşamasının belirlenmesi için ilk değerlendirme kriterlerdir. Ancak bu çalışmada, Gravid yumurtalıkların her zaman palpasyon ile güvenilir bir şekilde tanımlanamaz olduğunu gösterir. Türe bağlı olarak, Gravid yumurtalıkları bazen yarı saydam (Şekil 13A, B) veya hayvanın ventral tarafında tamamen saydam cilt aracılığıyla görsel olarak tespit edilebilir (Şekil 13c). Yumurtalarını tamamlayan kadın, Gravid dişilere kıyasla görünüşlerinde belirgin değişiklikler gösterebilir (örn., gevşek cilt ve vücut kütlelerinin% 30 ' una kadar kaybı, Şekil 13D). Üreme sırasında, erkek ve kadın yumurtlama ve oviposition yakınlığı hakkında bilgi sağlayan bazı davranışlar gösterecektir. R. muscosa ENDİKASYONUNDA, bir dişi ovada yakın olduğunu belirtmekte olan kadın, el stantlarına girerek başlar.
Bir ultrason teknolojisinin anurans ve caudates uygulamasına uygulanması, yumurtaların varlığı veya yokluğu ve yumurtlama engelleyici 'in geliştirilen yumurtaların tam veya kısmi salınımı ile ilişkili olup olmadığına dair tanıya izin verir. Böylece, bu yöntem, abdominal cilt saydamlığına göre değişen bir görselleştirme tekniği yoluyla Gravid/non-Gravid durumunun belirlenmesi ile sınırlı kalmadan üreme durumunun daha eksiksiz ve doğru bir şekilde değerlendirilmesi sağlar, ya da arasında epidermal tutarlılık farklı amfitbiya türleri. Ultrason bağıl kolaylığı ile yapılabilir ve hayvanlar için az stres ile (Şekil 5 ve Şekil 13) ve üreme döngüleri karakterize etmek ve üreme durumu belirlemek için kullanılabilir4. Bu tür aşina olmak için önemlidir; Ancak bu çalışmada, Necturus ve R. muscosa 'nın üreme aşamasında benzer sınıflama aşamalarına izin veren ortak gelişim belirtileri olduğunu gösterdi (Şekil 5). Bu teknoloji sayesinde, yumurta gelişiminin esir Necturus ve R. muscosa 'da yüksek olduğunu ve bu türlerin her ikisi de mevsimsel bir deseni takip ettiğini kanıtıdır. Bu fenomen nedenleri bilinmiyor ve daha fazla soruşturma gerektirir rağmen, ultrason kullanmadan, yumurta tutma ve kısmi oviposition gibi yumurtalı disfonksiyon, çeşitli alanlarda, tespit edilmemiş gitmiş olurdu. Bu tekniğe gelecek uygulamalar, kadınların herhangi bir yıl içinde üreme için seçilip belirlenmeyeceğini ve yumurtlama engelleyici 'in tam olup olmadığını belirlemek için kullanılacaktır.
Bu R. muscosasunulan gibi bir kan toplama protokolü, hem etkili ve hayvan en az sıkıntı nedenleri, esir ve vahşi yakalandı anurans (Calatayud, yayımlanmamış) hormon profillerini incelemek için idealdir. Bugüne kadar, hiçbir bilgi esir R. muscosa yıllık hormon profilleri ile ilgili var ve bu nedenle, hormonlar sağlık ve üreme nasıl etkilediğini hakkında hiçbir bilgi. Dahası, bu türlerin kadınların yıllık yetiştiriciler olmayabilir kanıtlar ile, hormonal profil yumurtlama döngüleri izlemek için başka bir yöntem olacaktır. Ultrason ile birlikte, hormon Analizi kadın oviposition için hazır olacak ne daha iyi tahmin neden olabilir. Ayrıca, geçtiğimiz yıl, esir R. muscosa nüfusunun iki interseks vakası belgelenmiştir. Buna ek olarak, başparmak pedleri gelişimi bazı eski kurucu kadınlarda belirtilmiştir. Bunun nedenleri şu anda soruşturma altında ancak ilk sonuçlar bu testosteron düzeyleri (Calatayud, yayımlanmamış) değişikliklerle ilgili olabilir önerir. Farklı çağların kadınlarda yüksek hormonal döngüleri bize neden kadın erkek ilişkili ikincil cinsel özellikleri ve bu bir yaşlanma nüfusu beklenecek olup olmadığını anlamak yardımcı olacaktır.
Eksojen hormon tedavisi sıklıkla esir amfitiyoslarında karşılaşılan üreme işlevlerinin üstesinden gelmek için kullanılmıştır. Bununla birlikte, bu çalışmada hem R. muscosa hem de necturus nüfusu için, sırasıyla 2 ve 5 yıllık bir süre içinde hormon tedavi edilen ve kontrol eden kadın arasındaki yumurtlama engelleyici üzerinde önemli bir fark saptanmadı. Bu hormon Yönetim Protokolü, dozlar, astar ve hormon kombinasyonu kullanılan türü için yeterli değildi gösterebilir. Bireysel kadın üreme geçmişlerin Closer Analizi R. muscosa da tedavi edilen kadınlarda gözlenen hormonal etkisi eksikliği için hesap olabilir yıllık üreme, deneyim olmayabilir öneriyor. Çünkü kadınların belirli bir yüzdesi sürekli olarak her yıl üreme atlandı, türlerin doğal tarihini anlamak eksojen hormonlar için bir ihtiyaç olup olmadığını belirlemek yardımcı olabilir ve ne zaman en etkili olabilir. Bu makalede özetlenen prosedürler türlerin bir dizi uygulanabilir, (Tablo 1) ve 5 g 150 g arasında değişen anurans için; daha büyük hayvanlar farklı şırıngalar ve iğne göstergeleri gerektirebilir. Enjeksiyon yeri intra-kas gerektiren bazı hormonlar ile değişir, intra-peritoneal, alt-Kutanöz veya intradermal enjeksiyon (Şekil 7).
Ovariektomi amacıyla cerrahi, embriyolojik çalışmalar için oositler elde etmek için çeşitli amfitiyosit türlerinde kullanılan ortak bir yöntemdir. Ovariektomi de nüfus kontrolü ve yumurta tutma gibi tıbbi konularda endikasyon olabilir. Kısmi ovariectomies durumunda, oocayt hasat araştırma amacıyla gerçekleştirilir, cerrahi hayvan üreme kalmasını sağlamak gerekir. PGF2α yönetimi, dişi R. muscosa'da yumurta tutulumu çözmede bazı söz gösterdi. Birkaç bireyde, PGF2α daha önce tutulan yumurtaların tam birikmesini ortaya çıkarmıştır, ancak diğerlerinde sadece kısmi biriktirme, tüm yumurtaları kaldırmak için manuel sıyırma gerektiriyordu. PGF2α , R. muscosa'da yumurta tutma ameliyatı için alternatif olarak hizmet verirken, diğer amfitobilerde benzer patolojik koşulları gidermek için türlerin spesifik doğrulama gerektirecektir. Cerrahi müdahale Anuran veya caudate hasta için görevlendirilmiş olduğunda, kesikler yapılmadan önce yeterli bir anestezi uçağı sağlamak için gereklidir. Her taxa için bu çalışmada özetlendiği gibi normatif indüksiyon ve kurtarma yanıtlarını değerlendirmek ve izlemek için Astute gözlem becerileri gereklidir. Bir kez spesifik anatomi, uygun bir cerrahi yaklaşım, hemostaz, nazik doku manipülasyon ve yeterli postoperatif yönetimi aşina, üreme ameliyatları ezici bir engel teşkil.

Amfitisyalılar uzun araştırma disiplinlerinin geniş bir yelpazede tarafından önemli biyolojik ve tıbbi modeller olarak tanınmıştır. Xenopus laevis ve X. Tropicalisgibi belirli türler okurken elde edilen veriler, leopar kurbağası (Lithobates (formerly Rana) pipiens) ve Axolotl insanlar da dahil olmak üzere diğer omurga türleri, bir dizi. Bu ve diğer amfitolans okuyan ortaya çıkmıştır veteriner, Hayvancılık ve yardımlı üreme teknikleri bu başarılı bakım, bakım ve koruma nadir nüfusun sürdürülebilirliği geliştirme ile görevli yardım sağlar 1 , 2 , 3 ' ü , 4' ü yapın.
Faiz in ve ex situ koruma tabanlı yaklaşımlar eşzamanlı kullanımı için risk amfitbian türleri1,2birçok için yok olma gelgit ters kazanıyor. Bu makale anurans ve caudates modeli türlerinde amfibi yumurtalık fonksiyonunu izlemek ve kontrol etmek için şu anda kullanılabilir metodolojileri sağlar. Ayrıca, yumurta tutma ortak üreme patolojisini ele almak için mevcut teknikler sunulmaktadır.
Birçok taksononomik gruplarda olduğu gibi, amfitojen ovaryalı kontrol çevre ve Fizyoloji arasında sıkı senkronize etkileşimler bir dizi içerir. Sıcaklık ve fotoperiod (sıra sinyalleri olarak bilinir), hızla genetik, hormonal ve sirkadiyen süreçlere (Ultimate sinyaller)3,4' e dönüştürüldüğü göz ve beyin tarafından çözülür. Bu makalede yer alan ovaryalı fonksiyonu izlemek ve kontrol etmek için yöntemler invazif ve non-invaziv teknikler içerir. Kurumsal hayvan bakımı ve kullanım Komitesi (IACUC) araştırma ve öğretim gereksinimleri, hiçbir fiziksel ağrı veya zihinsel sıkıntı için minimal neden olacak ve ağrı giderici ilaçlar5gerektirmez gibi non-invaziv teknikleri tanımlayın. Burada, non-invaziv teknikler görsel muayene ve palpasyon, davranışsal gözlemler, morfometrik değerlendirmeler ve ultrason içerir. Aksine, kan toplama teknikleri, hormon yönetimi ve cerrahi (ovariektomi ve tutulan yumurtaların çıkarılması) bazı ağrı veya rahatsızlık neden olabilir ve anestezi veya sonrası-prosedürel ilaç tedavisi gerektiren invaziv olarak sınıflandırılır.
Non-invazif ovaryalı izleme teknikleri, çoğu esir amfitezya için günlük bakım rutinine kolayca eklenebilir. Türe bağlı olarak, yumurtalık gravida genellikle basit görsel muayene (cam kurbağa) tarafından belirlenebilir. Diğer durumlarda, palpasyon bir dişi Gravid olup olmadığını gösterebilir. Çeşitli vücut durumu Endeksleri (BCI) gibi ağırlık, burun urostyle uzunluğu (Sul), burun-Vent uzunluğu (SVL) ve standart kitle endeksi (SMI) yumurta varlığı veya yokluğunda tahmin etmek için kullanılabilir4,6,7, 8,9. Ancak, çoğu yaş, vücut şekli veya kompozisyon (örneğin, su Over kütle veya yağ)6göz önünde bulundurmayın gibi sonuçların yorumu ile bakım alınmalıdır. Kesin üreme tanılar, yumurtalar döngüsü4,7ile ilgili yumurta gelişimi ve evreleme ile ilgili kazanılan derinlik bilgisi ile ultrason yoluyla elde edilebilir. Ultrason da onaylamak ve üreme patolojileri ve ilişkili fizyolojik koşullar4,8izlemek için bir yol sağlar.
Sağlık durumu ile ilgili bilgi sağlamaya ek olarak, kan örnekleme üreme hormonları ölçmek için kullanılabilir. Eğer hormon profil oluşturma son hedeftir, sistemik steroid veri konabilir stres ile ilgili etkileri önlemek için önemlidir. Potansiyel olarak güçlü bir izleme aracı olmakla beraber, herhangi bir amfitiyolojik türün eksojen hormon yönetimine doğuştan gelen endokrinolojik tepkiler gösteren bir çalışma henüz bulunmamaktadır. Kan güvenle çeşitli sitelerinden alınabilir; kurbağalar bu ventral karın ven içerir, dilli plekbe, femoral ven ve kalp9,10. Caudates 'de kan ventral kuyruk damarından toplanır. İnvasiveness derecesi, gerekli kısıtlama miktarı, anestezi için ihtiyaç, organ hedeflenmekte olan incelik, ve hayvanın büyüklüğü, amfitiye hasta için bir toplama tekniği seçerken dikkate alınması gereken faktörlerdir. Bu makalede, ilk olarak Forzan ve ark.9tarafından açıklanan kurbağaların yüz maksiller veya muskülokutan ven kan toplama tekniği sunacak.
Ovaryalı kontrol türlere özeldir ve hormon protokolleri test edilip optimize edilmelidir. Mevsimsellik ve ilişkili dolaşım hormonu ortamı dışında, yumurtalık kontrolü de sıkıca yaşa bağlı olabilir, zaman esaret ve tekrarlayan hormon yönetimi maruz harcanan, literatürde az bilgi olduğu için11 , 12 tane , 13. üreme davranışları, gamet üretimi, olgunlaşma ve yumurtlama engelleyici için hormon terapilerinin uygulanması, esaret4ile ilişkili ortak üreme sorunlarının çözülmesi için yaygın olarak bildirilen bir yaklaşım haline gelmiştir, 8,14,15,16. Omurgadan üreme kontrol mekanizmaları son derece güvenli olduğundan, çeşitli hormonlar, nöropeptit ve ticari olarak kullanılabilir ilaçlar da güvenilir bir dizi kullanılabilir diğer taksonomik gruplar halinde kullanılan (Tablo 1). Gonadotropin serbest hormon (GnRH) ve insan koryononik gonadotropin (hCG) (veya varyasyonları, yani, pMsg ve eCG)17,18, ya da bireysel olarak ya da kombinasyon halinde, yaygın olarak kullanılmıştır amfitiyoton esir dahil üreme programları: Güney kayalık dağ Boreal (anaxyrus Boreas Boreas)4,19,20; kurbağa, Dusky Gopher kurbağa, Rana sevosa (Langhorne ve ark., yayımlanmamış)7; Gulf Coast waterdog, necturus Beverinin20; Wyoming Toad, Anaxyrus baxteri18; Bullfrog, Rana catesbiana21; Amerikan kurbağası, Anaxyrus americanus22; çim kurbağa, Lymnodyaster tasmaniensis23; Coqui, Eleutherodactylus Coqui24; Xenopus, Xenopus laevis25; Gunther 's toadlet, Pseduophryne guentheri26; Kuzey leoparı kurbağa, Lithobates pipiens; Arjantin Horned-kurbağa, Ceratophrys süslü; Cranwell 'in boynuzlu kurbağa, C. cranwelli; Amerikan toprak-kurbağa, odontophrynus americanus27; ve yangın Salamander (Salamandra)228. Steroid hormonları, progesteron gibi (P4), daha az yaygın olarak bildirilmiştir ama anurans bazı türler ovülasyon ve yumurtlama engelleyici sergileyen iyi bir etkinlik göstermiştir16,18,29. Prostaglandinler (özellikle prostaglandin 2-Alpha (PGF2α)), kortikosteroidler ile birlikte ovulasyona katılıyor30,31,32,34 ve sırasında yüksek seviyelere ulaşmak ovulatuar faz31.
İn vitro çalışmalarda, PGF2α ovülasyon31güçlü bir İndükleme olduğunu, In vivo o Rana muscosaiçinde tutulan yumurta yumurtlama engelleyici teşvik edebilir4,30,32. Hipofiz özler de ovülasyon etkili indükleyiciler vardır15,16,34; Ancak, Biyogüvenlik ve hastalık iletimi için potansiyel çevreleyen endişeleri genellikle bu yaklaşım35göz önüne alındığında esir ıslahı koloniler için caydırıcı vardır.
Bu makalenin son bölümünde cerrahi prosedürler detayları ve yumurtalı çalışmalar veya üreme patolojileri çözünürlüğü ile yardım genişletmek için alternatif yaklaşımlar sağlar. Ovariectomies en yaygın embriyolojik araştırma için oosit elde etmek için amfitiyosit gerçekleştirilir. Ancak, başka bir seçenek başarısız olduğunda da tutulan yumurta için bir çare sağlayabilir. Bu prosedür invazif olmasına rağmen, yumurta kitlelerini açığa çıkarmak için tam anestezi ve kesikler gerektiren, ötenazi gerektirmez. Ayrıca, kısmi ovariektomi sonrası, hayvanlar tam bir iyileşme yapabilir ve yeniden ameliyat sonrası aktif olmaya devam edebilir8,36.
Aşağıda açıklanan protokoller anurans ve Caudates 'de ovaryalı kontrol ve izleme için invaziv ve non-invaziv yöntemleri özetliyor. Anurans teknikleri göstermek için seçilen belirli türler R. mukoza ve X. laevisiçerir. Necturus maculosus, n. Beverinin, n. alabamensis, ve A. mexicanum benzer şekilde caudates teknikleri açıklamak için kullanılan türler içerir.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>GE logiq Book XP and 8C-RS probe 4e10 MHz GE Medical Systems</td>
			<td>GE medical systems</td>
			<td>GE logiq Book XP</td>
			<td>Ultrasound</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aloka 500 7.5mHz linear or IBEX multi-frequency (10-6mHz) micro-convex</td>
			<td>GE medical systems</td>
			<td>8C-RS (10 MHz)</td>
			<td>Ultrasound probe</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD disposable U-100 insulin syringe (28-29 G needle)</td>
			<td>Mettler Electronics Corp CA</td>
			<td>Sonigel</td>
			<td>Ultrasound gel (water soluble, salt-free)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hormone</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gonadotropin releasing hormone</td>
			<td>BACHEM</td>
			<td>4012028</td>
			<td>synonym: [Des-Gly10, D-Ala6, Pro-NHEt9]-GnRH acetate 
			abbreviation: GnRH</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lutenizing hormone releasing hormone</td>
			<td>BACHEM, Sigma-Aldrich</td>
			<td>4033013;&#160;&#160;&#160;&#160; L1898</td>
			<td>synonym: Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2 acetate salt; 
			[D-Ala6}-LHRH acetate salt hydrate 
			abbreviation: LHRH</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human chorionic gonadotropin</td>
			<td>BACHEM, Sigma-Aldrich</td>
			<td>4030270, 4018894; C1063, CG5, CG10</td>
			<td>synonym: Chorionic gonadotropin-&#946; (109-145)(109-119); Choriogonin, HCG (2,500IU, 5,000IU, 10,000IU) 
			abbreviation: hCG</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prostaglandin 2&#945;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P40424;</td>
			<td>synonym: (5Z,9&#945;,11&#945;,13E,15S)-9,11,15-Trihydroxyprosta-5,13-dienoic acid tris salt, PGF2&#945;&#8722;Tris; 
			abbreviation: PGF2&#945;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Follicle-stimulating hormone</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F4021, F8174</td>
			<td>synonym: porcine, sheep 
			abbreviation: FSH</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Progesterone</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>46665;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; P7556</td>
			<td>synonym: Vetranal; P4 water soluble 
			abbreviation: P4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pituitary extract</td>
			<td>na</td>
			<td></td>
			<td>synonym: Check papers for amphibian species derivation 
			abbreviation: PE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pregnant Mare Serum Gonadotropin</td>
			<td>Prospec;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; Lee Biosolutions; Sigma-Aldrich</td>
			<td>HOR-272;&#160;&#160;&#160; 493-10; 9002-70-4</td>
			<td>synonym: Pregnant Mare Serum Gonadotropin 
			abbreviation: PMSG</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metaclopromide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M0763</td>
			<td>synonym: 4-Amino-5-chloro-N-[2-(diethylamino)ethyl]-2-methoxybenzamide, Methoxychloroprocainamide 
			abbreviation: MET</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lucrin</td>
			<td>BACHEM; Sigma-Aldrich</td>
			<td>4033014;&#160;&#160; L0399</td>
			<td>synonym: Leuprorelin acetate 
			abbreviation: Lucrin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lutalyse</td>
			<td>Pfizer</td>
			<td></td>
			<td>synonym: PGF2&#945; - Dinoprost tromethamine 
			abbreviation: Lut</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pimozide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P1793</td>
			<td>synonym: 1-[1-[4,4-bis(4-Fluorophenyl)butyl]-4-piperidinyl]-1,3-dihydro-2H-benzimidazol-2-one 
			abbreviation: PZ</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amphiplex</td>
			<td>see above</td>
			<td></td>
			<td>synonym: Gonadotropin releasing hormone + metoclopramide 
			abbreviation: GnRH + MET</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ovopel</td>
			<td>Ovopel</td>
			<td>na</td>
			<td>synonym: GnRHa + dopamine receptor antagonist (administered 1 pellet/ kg) 
			abbreviation: Ovo</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ovaprim</td>
			<td>Pentair aquatic eco-systems</td>
			<td>Ova10</td>
			<td>synonym: Salmon gonadotropin + domperidone 
			abbreviation: Ova</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Domperidone</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D122</td>
			<td>synonym: 4-(5-Chloro-2-oxo-1-benzimidazolinyl)-1-[3-(2-oxobenzimidazolinyl)propyl]piperidine 
			abbreviation: DOM</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

reproductive techniques for ovarian monitoring and control in amphibians

Anfasya 'da ovaryalı kontrol ve izleme çok yönlü bir yaklaşım gerektirir. Başarılı bir şekilde üreme davranışlarını ve fizyolojik veya moleküler araştırmalar için gamet ve embriyoların satın alınmasına neden olabilecek birkaç uygulama vardır. Anobiyanlar vertebrat araştırma bir-12:45-üçte katkı ve bu bağlamda ilgi bilimsel toplumun üreme süreçleri ve embriyolojik gelişim bilgisine katkılarından biridir. Ancak, bu bilginin çoğu türlerin az sayıda türetilir. Son zamanlarda, dünyanın dört bir yanından amfibiler Decimation muhafazakar tarafından artan müdahale gerekli. Yok olma riskine yanıt olarak ortaya çıkmaya devam eden kurtarma ve güvence kolonileri, mevcut araştırma ve klinik uygulamaları insan bakımı altında tutulan amfitinyalılar için değerli hale getirmek ve yeniden üreme açısından paha biçilmez yapar. Herhangi bir esir nüfusun başarısı, sağlık ve üreme ve onların türünün en farklı genetik temsili ileri taşıyan uygun yavru geliştirmek için yeteneği üzerinde kurulmuştur. Araştırmacılar ve veterinerler için, yumurtalı gelişimi ve sağlığını izleme ve kontrol etme yeteneği, bu nedenle, zorunludur. Bu makalenin odağı izlemek için kullanılan farklı destekli üreme teknikleri vurgulamak için ve, nerede uygun veya gerekli, amfitezya içinde kontrol ovaryalı fonksiyonu. İdeal olarak, herhangi bir üreme ve sağlık sorunları uygun esir yetiştiriciliği ile azaltılmalıdır, ancak, herhangi bir hayvan gibi, sağlık ve üreme patolojileri sorunları kaçınılmaz. Non-invaziv teknikler davranış değerlendirmeleri, görsel muayene ve palpasyon ve vücut durumu endeksleri ve ultrason hesaplanması için morfometrik ölçümleri içerir. İnvaziv teknikler arasında hormonal enjeksiyonlar, kan örnekleme ve cerrahi sayılabilir. Yumurtalı kontrol, gerekli uygulamaya ve ilgi türlerine bağlı olarak bir dizi şekilde kullanılabilir.

Watch this Scientific Journal Video about Reproductive Techniques for Ovarian Monitoring and Control in Amphibians at JoVE.com

Reproductive Techniques for Ovarian Monitoring and Control in Amphibians

Amfitiyoloji biyolojisinin incelenmesi, birçok taksononomik grubun organizmalarını kullanan üreme, fizyolojik, embriyolojik ve gelişimsel süreçler hakkında değerli bilgiler sağlar. Burada, biz ayı kontrol ve amfitezya izleme incelemek için kullanılabilecek farklı metodolojiler üzerinde kapsamlı bir rehber sunuyoruz.

Anbürlerde Ovaryalı Izleme ve kontrol için üreme teknikleri

Ovarian control and monitoring in amphibians require a multi-faceted approach. There are several applications that can successfully induce reproductive ...

Bu ovariektomi tekniği, tıbbi araştırmalarımız için amfibi oositler elde etmek için kurtarılabilir bir cerrahi yöntem veya tutulan yumurtaların patolojik durumunun üstesinden gelmek için başka bir uygulama uygular. Araştırma amacıyla amfibi oosit elde etmek için ötenazi gerektirmez. Aslında, kısmi bir ovariektomi sonra amfibi konu üreme sonrası kurtarma aktif olabilir.Pelvik ekstremite kıskacına yanıt eksikliğini doğruladıktan sonra, bir dorsal recumbent pozisyonda anestezili bir kadın anuran yerleştirin ve 10 ila 15 saniye povidon-iyot solüsyonu ile cerrahi alanı silmek için nemli, steril gazlı bez kullanın. Cerrahi alan üzerinde net, steril plastik perde yerleştirin ve çevreleyen cilt nemli tutarak buharlaşmayı azaltmak, omuzlar ve cloaca arasında orta coelom bir 3 milimetre perimedian deri kesi yapmak için bir sayı 15 veya 11 neşter bıçak kullanmadan önce. Gerektiğinde kesi çevresindeki herhangi bir küçük damarlara lokalize basınç uygulamak ve ardışık membran kesi için karın zarını yükseltmek için pamuk uçlu aplikatörler kullanın.Ceolomik kesileri geri çekmek için göz kapağı retraktörleri kullanın ve herhangi bir kan damarları bağlamadan yumurta kütlesinin bir kısmını çıkarmak. Tam bir ovariektomi için, çevreleyen kan damarlarını kauterize, ve bir kesme everting dikiş deseni ile ceoliotomi kesi kapatmak için bir mono-filament sütür kullanın. Bu Necturus ve cam kurbağa gibi farklı amfibiler türleri, cilt şeffaflık değişen derecelerde sergileyen, transdermally üreme durumunu görselleştirmek için yeteneğini etkileyen.Bazı türlerde, gravid olan dişiler ile yakın zamanda oviposited hayvanlar arasında morfolojik farklılıklar tespit edilebilir. Bu örnekte, son zamanlarda oviposited olan bir kadın Rana muscosa cildinin sarkıklığı ve ince görünümü ile gravid kadın ayırt edilebilir. Rana muscosa oviposition davranışsal aşamaları kur dahil, hangi bir erkek aktif bir kadın ve amplexus takip, sırasında Rana muscosa erkek bağlar ve sıkıca dişin sırtına tokalar.Amplexus sırasında, erkek yumuşak bir pompalama şekilde kadın sıkıyor. Kadın Rana muscosa etrafında hareket ve aralıklı handstand davranışları görüntülemek, sonunda yumurta üzerine sıkışmış olabilir yüzeylere yaslanmış, erkek şiddetle karnını pompalar iken. Oviposition hemen sonra, kadın yumurtalıklar bir aşama bir kategoriye geri dönün.Bu süre zarfında ultrason yaparken folikülleri görselleştirmek zordur. İkinci aşama, yumurtalık boyunca dağılmış ekojenik nokta görünümü ile temsil edilir. Üçüncü aşama, koyu ortalara sahip daha büyük, yuvarlak ekojenik noktaların varlığı ile belirlenir, sarısı, olgun foliküllerin göstergesidir.Bu temsili dört yıllık tutsak dişi Necturus değerlendirmesinde yumurta gelişimi yüksekti, ancak ovipozisyon sağlanamadı. Vücut boşluğunda sıvı kazancı ile birlikte korunmuş yumurta ile bazı kadınlar, aşırı çevresi ve şişme gösterdi, patlama kan damarlarının bazı belirtileri ile birlikte, Bu etkilenen Rana ve Necturus gösterildiği gibi. Cerrahi yaklaşım yumurtalık patolojisi yönetmek için kullanılabilir rağmen, bu teknik de gamet ve göbek araştırma dahil olabilir.Ameliyattan sonra, uygulayıcı amfibi deneğin devam eden genel sağlığını izlemek için bu el yazmasında özetlenen ilk protokole geri dönebilir.

Research

JoVE Journal

Biology

Microinjection Techniques for Studying Mitosis in the Drosophila melanogaster Syncytial Embryo

Microinjection Techniques for Studying Mitosis in the Drosophila melanogaster Syncytial Embryo

Mitoz incelenmesi için Mikroenjeksiyon Teknikleri Drosophila melanogaster Sinsityal Embriyo

This protocol describes the use of the Drosophila melanogaster syncytial embryo  for studying mitosis1.  Drosophila has useful genetics with a sequenced ...

Techniques for Imaging Ca2+ Signaling in Human Sperm

Techniques for Imaging Ca2+ Signaling in Human Sperm

Görüntüleme Ca Teknikleri 2 + İnsan Sperm sinyal

Fluorescence microscopy of cells loaded with fluorescent, Ca2+-sensitive dyes is used for measurement of spatial and temporal aspects of Ca2+ signaling in ...

Patch Clamp and Perfusion Techniques for Studying Ion Channels Expressed in Xenopus oocytes

Patch Clamp and Perfusion Techniques for Studying Ion Channels Expressed in Xenopus oocytes

İyon Kanalları incelenmesi için yama Kelepçe ve Perfüzyon Teknikleri cinsinden ifade edilir Xenopus Oosit

The protocol presented here is designed to study the activation of the large conductance, voltage- and Ca2+-activated K+ (BK) channels. The protocol may ...

Long-term Lethal Toxicity Test with the Crustacean Artemia franciscana

Long-term Lethal Toxicity Test with the Crustacean Artemia franciscana

Kabuklu uzun vadeli Lethal Toksisite Testi Artemia Franciscana</em

Our research activities target the use of biological methods for the evaluation of environmental quality, with particular reference to saltwater/brackish ...

In Vivo Microinjection and Electroporation of Mouse Testis

In Vivo Microinjection and Electroporation of Mouse Testis

Fare Testis İn Vivo Mikroenjeksiyon ve Elektroporasyon

This video and article contribution gives a comprehensive description of microinjection and electroporation of mouse testis in vivo. This particular ...

Dried Blood Spots - Preparing and Processing for Use in Immunoassays and in Molecular Techniques

Kurumuş kan lekeleri - hazırlanması ve uzun ve moleküler teknikleri kullanmak için işleme

The idea of collecting blood on a paper card and subsequently using the dried blood spots (DBS) for diagnostic purposes originated a century ago. Since ...

Techniques for Imaging Prometaphase and Metaphase of Meiosis I in Fixed Drosophila Oocytes

Techniques for Imaging Prometaphase and Metaphase of Meiosis I in Fixed Drosophila Oocytes

Sabit Görüntüleme prometafaz ve Metafaz Mayoz ve I Teknikleri<em&gt; Drosophila</em&gt; Oositler

Chromosome segregation in human oocytes is error prone, resulting in aneuploidy, which is the leading genetic cause of miscarriage and birth defects. The ...

Simple and Effective Administration and Visualization of Microparticles in the Circulatory System of Small Fishes Using Kidney Injection

Basit ve etkili yönetim ve küçük balıklar böbrek enjeksiyon kullanarak dolaşım sistemi içinde Microparticles görselleştirme

The systemic administration of micro-size particles into a living organism can be applied for vasculature visualization, drug and vaccine delivery, ...

Micron-scale Phenotyping Techniques of Maize Vascular Bundles Based on X-ray Microcomputed Tomography

X-ışını Microcomputed tomografi üzerinde dayalı Mısır Vaskular demetleri mikron çaplı fenotipleme teknikleri

It is necessary to accurately quantify the anatomical structures of maize materials based on high-throughput image analysis techniques. Here, we provide a ...

Single Cell Collection of Trophoblast Cells in Peri-implantation Stage Human Embryos

Peri-implantasyon Aşamasında Trophoblast Hücrelerinin Tek Hücre Li Hücre Koleksiyonu İnsan Embriyoları

Human implantation, the apposition and adhesion to the uterine surface epithelia and subsequent invasion of the blastocyst into the maternal decidua, is a ...