Name: quantification of antibody-dependent enhancement of the zika virus in primary human cells
Uploaded: 2019-01-18T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Quantification of Antibody-dependent Enhancement of the Zika Virus in Primary Human Cells at JoVE.com

وأيد هذا العمل سخاء 1R21AI129881-01 (إلى وماستريخت)، وأموال بدء التشغيل من الوطني المختبرات الأمراض المعدية الناشئة، وفي كلية الطب بجامعة بوسطن.

وتم الحصول على عينات الأمصال المستخدمة في هذه الدراسة من المشاركين البشرية من مجموعة من كولومبيا. وأقر المجلس الاستعراض الداخلي (IRB) في جامعة دي بامبلونا (كولومبيا، أمريكا الجنوبية) ومستشفى لوس بوتيوس8جمع العينات. قدمت العينات مجهولة والمحققين لم يكن الوصول إلى معلومات المري?...

<ol>
	<li>Hayes, E. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zika+virus+outside+Africa.">Zika virus outside Africa.</a> Emerging Infectious Diseases. 15, 1347-1350 (2009).</li><li>Grard, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zika+virus+in+Gabon+(Central+Africa)+-+2007:+a+new+threat+from+Aedes+albopictus.">Zika virus in Gabon (Central Africa) - 2007: a new threat from Aedes albopictus.</a> PLoS Neglected Tropical Diseases. 8 (2), 2681 (2014).</li><li>Fauci, A. S., Morens, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zika+Virus+in+the+Americas--Yet+Another+Arbovirus+Threat.">Zika Virus in the Americas--Yet Another Arbovirus Threat.</a> New England Journal of Medicine. 374 (7), 601-604 (2016).</li><li>Hawkes, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhancement+of+the+Infectivity+of+Arboviruses+by+Specific+Antisera+Produced+in+Domestic+Fowls.">Enhancement of the Infectivity of Arboviruses by Specific Antisera Produced in Domestic Fowls.</a> Australian Journal of Experimental Biology and Medical Science. 42, 465-482 (1964).</li><li>Musso, D., Gubler, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zika+Virus.">Zika Virus.</a> Clinical Microbiology Reviews. 29 (3), 487-524 (2016).</li><li>Vaughn, D. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dengue+viremia+titer,+antibody+response+pattern,+and+virus+serotype+correlate+with+disease+severity.">Dengue viremia titer, antibody response pattern, and virus serotype correlate with disease severity.</a> The Journal of Infectious Diseases. 181 (1), 2-9 (2000).</li><li>Khandia, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulation+of+Dengue/Zika+Virus+Pathogenicity+by+Antibody-Dependent+Enhancement+and+Strategies+to+Protect+Against+Enhancement+in+Zika+Virus+Infection.">Modulation of Dengue/Zika Virus Pathogenicity by Antibody-Dependent Enhancement and Strategies to Protect Against Enhancement in Zika Virus Infection.</a> Frontiers of Immunology. 9, 597 (2018).</li><li>Londono-Renteria, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+relevant+in+vitro+human+model+for+the+study+of+Zika+virus+antibody-dependent+enhancement.">A relevant in vitro human model for the study of Zika virus antibody-dependent enhancement.</a> Journal of General Virology. 98 (7), 1702-1712 (2017).</li><li>Ganger, M. T., Dietz, G. D., Ewing, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+common+base+method+for+analysis+of+qPCR+data+and+the+application+of+simple+blocking+in+qPCR+experiments.">A common base method for analysis of qPCR data and the application of simple blocking in qPCR experiments.</a> BMC Bioinformatics. 18 (1), 534 (2017).</li><li>Renn, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+quantitative+real-time+RT-PCR+assay+for+determining+expression+profiles+of+types+I+and+III+interferon+subtypes.">High-throughput quantitative real-time RT-PCR assay for determining expression profiles of types I and III interferon subtypes.</a> Journal of Visualized Experiments. (97), e52650 (2015).</li><li>McArthur, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dengue+vaccines:+recent+developments,+ongoing+challenges+and+current+candidates.">Dengue vaccines: recent developments, ongoing challenges and current candidates.</a> Expert Review of Vaccines. 12 (8), 933-953 (2013).</li><li>Priyamvada, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humoral+cross-reactivity+between+Zika+and+dengue+viruses:+implications+for+protection+and+pathology.">Humoral cross-reactivity between Zika and dengue viruses: implications for protection and pathology.</a> Emerging Microbes and Infections. 6 (5), 33 (2017).</li><li>Dai, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+basis+of+antibody-mediated+neutralization+and+protection+against+flavivirus.">Molecular basis of antibody-mediated neutralization and protection against flavivirus.</a> IUBMB Life. 68 (10), 783-791 (2016).</li><li>Dai, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structures+of+the+Zika+Virus+Envelope+Protein+and+Its+Complex+with+a+Flavivirus+Broadly+Protective+Antibody.">Structures of the Zika Virus Envelope Protein and Its Complex with a Flavivirus Broadly Protective Antibody.</a> Cell Host &amp; Microbe. 19 (5), 696-704 (2016).</li><li>Sirohi, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+3.8+A+resolution+cryo-EM+structure+of+Zika+virus.">The 3.8 A resolution cryo-EM structure of Zika virus.</a> Science. 352 (6284), 467-470 (2016).</li><li>George, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prior+Exposure+to+Zika+Virus+Significantly+Enhances+Peak+Dengue-2+Viremia+in+Rhesus+Macaques.">Prior Exposure to Zika Virus Significantly Enhances Peak Dengue-2 Viremia in Rhesus Macaques.</a> Scientific Reports. 7 (1), 10498 (2017).</li><li>Morens, D. M., Halstead, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+antibody-dependent+infection+enhancement+of+four+dengue+virus+serotypes+by+monoclonal+and+polyclonal+antibodies.">Measurement of antibody-dependent infection enhancement of four dengue virus serotypes by monoclonal and polyclonal antibodies.</a> Journal of General Virology. 71, 2909-2914 (1990).</li><li>Dejnirattisai, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cross-reacting+antibodies+enhance+dengue+virus+infection+in+humans.">Cross-reacting antibodies enhance dengue virus infection in humans.</a> Science. 328 (5979), 745-748 (2010).</li><li>Priyamvada, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+antibody+responses+after+dengue+virus+infection+are+highly+cross-reactive+to+Zika+virus.">Human antibody responses after dengue virus infection are highly cross-reactive to Zika virus.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 113 (28), 7852-7857 (2016).</li><li>Charles, A. S., Christofferson, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Utility+of+a+Dengue-Derived+Monoclonal+Antibody+to+Enhance+Zika+Infection+In+Vitro.">Utility of a Dengue-Derived Monoclonal Antibody to Enhance Zika Infection In Vitro.</a> PLoS Currents. 8, (2016).</li><li>Swanstrom, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dengue+Virus+Envelope+Dimer+Epitope+Monoclonal+Antibodies+Isolated+from+Dengue+Patients+Are+Protective+against+Zika+Virus.">Dengue Virus Envelope Dimer Epitope Monoclonal Antibodies Isolated from Dengue Patients Are Protective against Zika Virus.</a> MBio. 7 (4), (2016).</li></ol>

وقد أعاق ه DENV الأجسام المضادة مما يؤدي إلى ADE اللقاح DENV الأخرى تطوير لقاح فعال11. وينتمي إلى نفس العائلة، فيروسات مصفرة، زيكف التماثل كبير مع فلافيفيروسيس الأخرى، لا سيما DENV12. والهدف الرئيسي لتحييد الأجسام المضادة لكل من زيكف و DENV هو البروتين المغلف، الذي أسهم الت?...

من بين الأمراض الفيروسية المنقولة بالبعوض، العدوى Zika واحد من أكثر سريرياً هامة1. بسبب العدوى مصفر زيكف التي، في معظم الحالات، يستخدم بعوض الزاعجة المصرية ك ناقل الابتدائي1،2. ومع ذلك، هناك الدراسات التي أبلغت عن Aedes albopictus كناقل الأولية في بعض حالات تفشي زيكف3. على الرغم من أن الإصابة أعراض في كثير من الحالات، الأعراض الأكثر شيوعاً هي الحمى والصداع و الأم العضلات2. لا تتوفر أي علاج أو لقاح للإصابة زيكف والعلاج المتاحة في معظمها داعمة. الأخيرة تفشي زيكف في أمريكا الجنوبية أدت إلى الحالات الشديدة من المرض، وزيادة الاضطرابات النمائية في الأجنة يدعى صعل2برنامج تقريبا. كما أن أمريكا الجنوبية منطقة مستوطنة إلى سيتناقش عدة مثل الفيروس DENV وغرب النيل، من الأهمية بمكان للتحقيق في ما إذا كانت الحصانة السابقة إلى أخرى flavivirus(es) يلعب دوراً في شدة زيكف العدوى والمرض.
على مر العصور، تطورت الفيروسات استراتيجيات مختلفة لزيادة فرصهم للعدوى من أجل السيطرة على آليات الخلية المضيفة وقمع استجابة الأدوية المضادة للفيروسات. واحدة من أروع من كل ما هو استخدام الأجسام المضادة المناعية قبل المضيف بالفيروسات لتعزيز تكرارها مع ظاهرة ADE4. ADE عبر جميع اللقاح أربعة من DENV وقد درست بشكل جيد وأظهر زيادة التتر الفيروسية والأمراض نتيجة5،،من67. في دراسة سابقة في المختبر، وقد أظهرنا زيادة كبيرة في زيكف النسخ المتماثل بسبب الموجودة مسبقاً DENV الحصانة في الخلايا المناعية البشرية الأولية8. كما أظهرنا أسلوب ذات صلة في المختبر لقياس قدرة DENV الموجودة من قبل الأجسام المضادة لتحسين النسخ المتماثل زيكف في الخلايا الأولية.
يستخدم البروتوكول الذي وضعنا عينات مصل الدم البشري الذي يتم اختباره لتحييد DENV في تسيد-50 أو فحوصات البلاك الحد من تحييد الاختبار (طباعة)، جنبا إلى جنب مع زيكف في ذات الصلة بيولوجيا الخلايا أو الخلايا المشتقة من الأنسجة التي يمكن أن تصيب زيكف.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:773px;" width="773">
	<colgroup>
		<col />
		<col span="2" />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:259px;">Fetal Bovine Serum&#160;</td>
			<td style="width:119px;">GEMINI</td>
			<td style="width:119px;">100-106</td>
			<td style="width:277px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:259px;">iCycler&#160;</td>
			<td style="width:119px;">BioRad</td>
			<td style="width:119px;">785BR02188</td>
			<td>Model No. CFX96 Optics Module</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:259px;">Microfuge 18 Centrifuge</td>
			<td style="width:119px;">Beckman Coulter&#160;</td>
			<td style="width:119px;">367160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:259px;">Nanodrop-1000</td>
			<td style="width:119px;">Thermoscientific&#160;</td>
			<td style="width:119px;">1072</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:259px;">Quantifast SYBR-One step RT-PCR kit&#160;</td>
			<td style="width:119px;">Qiagen&#160;</td>
			<td style="width:119px;">204154</td>
			<td>Used for 1 step RT-qPCR</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:259px;">RNeasy RNA Isolation Kit&#160;</td>
			<td style="width:119px;">Qiagen&#160;</td>
			<td style="width:119px;">74106</td>
			<td>Used for RNA extraction</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:259px;">RPMI-medium&#160;</td>
			<td style="width:119px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">11875093</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

quantification of antibody-dependent enhancement of the zika virus in primary human cells

وادي ظهور مصفر Zika والمضاعفات العصبية، مثل متلازمة غيلان-باريه وصغر الرأس عند الرضع، الشواغل المتعلقة بالسلامة العامة الخطيرة. من بين عوامل الخطر، يشكل تعزيز تعتمد على جسم (ADE) التهديد الأكثر أهمية، كما الأخيرة ظهور الفيروس Zika (زيكف) أساسا في المجالات التي تعرضت فيها السكان وفي حالة من الحصانة السابقة إلى أخرى وثيقة الصلة flaviviruses، وبخاصة فيروس حمى الدنج (DENV). هنا، يمكننا وصف بروتوكول للتحديد الكمي لأثر أضداد المصل البشري DENV على الإصابة زيكف في الخلايا البشرية الرئيسية أو خطوط الخلايا.

في الشكل 1، هناك مثال خطوة بخطوة البيانية لجميع الخطوات التي تنطوي عليها لتنفيذ البروتوكول ADE. ورسم تخطيطي يظهر الإجراء بأكمله "أدى زيكف" بسبب الحصانة موجودة مسبقاً إلى DENV. ويبين الشكل 2 المصل الإنسان كيف تم تصنيف العينات إلى ثلاث مجموعات م?...

Watch this Scientific Journal Video about Quantification of Antibody-dependent Enhancement of the Zika Virus in Primary Human Cells at JoVE.com

Quantification of Antibody-dependent Enhancement of the Zika Virus in Primary Human Cells

يصف لنا طريقة لتقييم أثر الحصانة موجودة مسبقاً ضد فيروس حمى الدنج في عدوى فيروس زيكا باستخدام مصل الدم البشري وخلايا الإنسان الأولية، والكمي العدوى بالكمية في الوقت الحقيقي تفاعل البوليميراز المتسلسل.

التحديد الكمي لتعزيز تعتمد على جسم مضاد الفيروس Zika في خلايا الإنسان الأولية

The recent emergence of the flavivirus Zika and neurological complications, such as Guillain-Barr&#233; syndrome and microcephaly in infants, has brought ...

ويمكن استخدام هذه الطريقة لتقييم آثار المناعة الموجودة من قبل ضد فيروس حمى الضنك على عدوى فيروس زيكا، باستخدام مصل المريض البشري الفعلي والخلايا المناعية الأساسية للإنسان. إن استخدام عينات مصل المرضى البشريين الفعلية والخلايا الأولية البشرية يوفر نظرة أعمق على تعزيز الجسم المضاد لفيروس زيكا بواسطة سيرا والأجسام المضادة قبل جهاز المناعة. توفر هذه الطريقة نظرة ثاقبة على قدرة الأجسام المضادة داخل دم المريض على تعزيز عدوى الفيروس في الخلايا البشرية الأخرى.من المهم التأكد من أن مستويات العدوى الفيروسية عالية بما يكفي للكشف ولكنها منخفضة بما يكفي لعدم إرهاق الخلايا أو التدخل في تفسير البيانات. تبدأ بذر ثلاث مرات عشر إلى الخلايا الرابعة في 100 ميكرولترات من خلية ثقافة المتوسطة في بئر في العقيمة، أسفل 96-جيدا لوحة. عندما تم مطلي جميع الخلايا، ضع لوحة في 37 درجة مئوية وحاضنة ثاني أكسيد الكربون 5٪ وجعل 10 أضعاف التخفيفات التسلسلية من عينات مصل الدم ذوبان الإنسان في المتوسطة خال من المصل.تأكد من الحفاظ على تخفيف الأمصال وعامل التخفيف ثابت لجميع الأمصال قبل المناعة قبل إضافة التخفيفات إلى حلول الفيروسات والخلايا. بعد ذلك، ذوبان فيروس زيكا سلالات الأسهم حل في حمام الماء 37 درجة مئوية لمدة دقيقة إلى دقيقتين قبل نقل الأسهم بسرعة إلى الجليد. إضافة 0.1 تعدد من حجم معادل العدوى من فيروس زيكا إلى aliquots المصل ووضع لوحة في حاضنة ثقافة الخلية لمدة ساعة واحدة للسماح للأجسام المضادة لفيروس حمى الضنك لتشكيل مجمعات مع فيروس زيكا.في نهاية الحضانة، وغسل الخلايا مع 100 ميكرولترات من برنامج تلفزيوني في البئر وإضافة 50 ميكرولترات من مجمع المناعة لكل بئر. بعد الحضانة ساعتين، وإزالة المتوسطة وغسل الآبار مرتين مع 100 ميكرولترات من برنامج تلفزيوني في بئر لإزالة تماما المجمعات المناعية وأي فيرات غير مرتبط. ثم تغذية الخلايا مع 100 ميكرولترات لكل بئر من خلية ثقافة المتوسطة تكملها 10٪ مصل البقرة الجنينية.ثم ارجع الخلايا إلى حاضنة ثقافة الخلية لمدة 48 ساعة. بعد يومين من العدوى، وغسل الخلايا مرتين مع 100 ميكرولترات من برنامج تلفزيوني عقيمة في بئر قبل إضافة 250 ميكرولترات من العازلة تحلل الخلية مع 10٪ بيتا mercaptoethanol إلى كل بئر. الماصات صعودا وهبوطا خمس مرات على الأقل مع الخدش لتسريع عملية تحلل ونقل الخلايا إلى أنابيب معقم المسمى 1.5 ملليلتر.إضافة حجم متساو من الإيثانول 70٪ إلى كل أنبوب وماصة حل lysate صعودا وهبوطا أربع إلى خمس مرات. عندما تكون التعليقات الواضحة، قم بنقل كل حل إلى أعمدة تسمى أساس السيليكا في أنبوبين جمع مليلتر للطرد المركزي. تجاهل التدفق من خلال حفظ الأعمدة في نفس أنابيب جمع وإضافة 700 ميكرولترات من غسل العازلة 1 إلى كل عمود للطرد المركزي الثاني.بعد التخلص من التدفق من خلال، شطف الأعمدة مرتين أكثر مع 500 ميكرولترات من غسل العازلة اثنين في غسل. بعد الغسيل الثاني، قم بنقل الأعمدة إلى أنابيب جمع ميليلتر جديدة للطرد المركزي. إضافة 30 ميكرولترات من 42 درجة مئوية RNase-المياه الخالية إلى مركز كل عمود للطرد المركزي واستعادة الجيش الملكي النيبالي مائل.بالنسبة للتفاعل الكمي في الوقت الحقيقي البوليميراز سلسلة أو تحليل QRTPCR إضافة ميكرولتر واحد من الجينات محددة إلى الأمام وعكس التمهيديات من 10 مخزون micromolar جنبا إلى جنب مع 0.25 ميكرولترات من مزيج النسخ العكسي لكل رد فعل. لاحظ أن القرّاءات التي تتعرف على المواد الوراثية لفيروس زيكا ستكتشف الجينات الفيروسية وتسمح بالتعرف الكمي للعدوى. المقبل، إضافة 12.5 ميكرولترات من SYBR الأخضر ميكس تليها 25 ميكرولترات من المياه إلى كل رد فعل إضافة 15 ميكرولترات من ماجستير ميكس في كل بئر من 96 جيدا QPCR لوحة.عند استخدام ماجستير ميكس، إضافة 100 نانوغرام من عينة RNA إلى مزيج والميصة ميكس ماجستير في الآبار الفردية من لوحة QRTPCR. لاحظ أنه يجب تشغيل العينات في ثلاث ية على نفس لوحة QRTPCR. ثم قم بتشغيل العينات على جهاز PCR كمي وفقاً للبارامترات الموضحة في الجدول.النقر على علامة التبويب منحنى الذوبان في برنامج النظام لمراقبة منحنى الذوبان. سوف منحنى تذوب تظهر ذروة واحدة في جميع العينات لجين معين لتأكيد وجود أمبيركون واحد فقط. للحصول على أفضل النتائج، استخدم 0.5 درجة مئوية زيادة في درجة الحرارة بين الخطوات والحد الأدنى من وقت عقد 10 ثوان في بروتوكول منحنى تذوب.ثم انقر فوق علامة التبويب بيانات القياس الكمي للحصول على دورة كمية لكل عينة وتصدير البيانات إلى جدول بيانات لمزيد من تحليل القياس الكمي. يمكن تصنيف عينات المصل البشري إلى ثلاث مجموعات مختلفة: تأكيد عدوى فيروس حمى الضنك العينات، وأكد الأجسام المضادة لفيروس حمى الضنك العينات، وصحية سيرا مع أي فيروس حمى الضنك تحييد الأجسام المضادة أو RNA. بعد 48 ساعة من العدوى، يوضح تحليل QRTPCR أن معظم السراجة التي تحتوي على فيروس حمى الضنك من نوع المصل من واحد إلى أربعة أجسام مضادة قادرة على تعزيز تكرار فيروس زيكا على مختلف المستويات.وتوجد أعلى زيادة في تترُض فيروس زيكا في الضامة المعالجة بفيروس حمى الضنك المحتوي على الـ sera الذي يحتوي على نوعين وأربعة أجسام مضادة مقارنة بالنمط المصلي الأول وثلاثة أجسام تظهر تحريضًا أقل نسبيًا لفيروس زيكا. من المهم الحفاظ على بيئة معقمة، وارتداء معدات الحماية الشخصية المناسبة، والحفاظ دائما على عينات مصل الفيروس المذاب والكواشف QPCR على الجليد. ويمكن تعديل هذا البروتوكول بسهولة لدراسة تعزيز تعتمد على الأجسام المضادة من الفيروسات الفلافية الأخرى مثل فيروس الحمى الصفراء، وفيروس حمى الضنك، أو فيروس غرب النيل باستخدام لوحة من مصل المرضى.هذه التقنية ستكون مفيدة للغاية لتنفيذ دراسات تعزيز تعتمد على الأجسام المضادة في المستقبل في حقول arbovirus أو الفيروسات. يجب استخدام مستوى السلامة الحيوية السليم اثنين من معدات الحماية الشخصية في جميع الأوقات وينبغي أن تكون جميع النفايات الفيروسية تطهيرها في 10٪ التبييض لمدة 30 دقيقة قبل التخلص منها.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

piggyBac Transposon System Modification of Primary Human T Cells

piggyBac Transposon System Modification of Primary Human T Cells

piggyBac تعديل النظام الأساسي للخلايا ينقول T الإنسان

The piggyBac transposon system is naturally active, originally derived from the cabbage looper moth1,2. This non-viral system is plasmid based, most ...

Neutrophil Isolation and Analysis to Determine their Role in Lymphoma Cell Sensitivity to Therapeutic Agents

عزل وتحليل العدلة لتحديد ما دورها في الغدد اللمفاوية حساسية الخلية وكلاء العلاجية

Neutrophils are the most abundant (40% to 75%) type of white blood cells and among the first inflammatory cells to migrate towards the site of ...

Zika Virus Infectious Cell Culture System and the In Vitro Prophylactic Effect of Interferons

Zika Virus Infectious Cell Culture System and the In Vitro Prophylactic Effect of Interferons

زيكا الفيروسات نظام المعدية خلية الثقافة و<em&gt; في المختبر</em&gt; وقائية تأثير الانترفيرونات

Zika Virus (ZIKV) is an emerging pathogen that is linked to fetal developmental abnormalities such as microcephaly, eye defects, and impaired growth. ZIKV ...

Dextran Enhances the Lentiviral Transduction Efficiency of Murine and Human Primary NK Cells

ديكستران يعزز كفاءة توصيل لينتيفيرال الخلايا ناغورني كاراباخ الابتدائي مورين والبشرية

The efficient transduction of specific genes into natural killer (NK) cells has been a major challenge. Successful transductions are critical to defining ...

Rescue and Characterization of Recombinant Virus from a New World Zika Virus Infectious Clone

إنقاذ وتوصيف الفيروسات المؤتلف من عالم جديد زيكا الفيروسات استنساخ العدوى

Infectious cDNA clones allow for genetic manipulation of a virus, thus facilitating work on vaccines, pathogenesis, replication, transmission and viral ...

Zika Virus Specific Diagnostic Epitope Discovery

اكتشاف حانمه تشخيصية محددة الفيروس Zika

High-density peptide microarrays allow screening of more than six thousand peptides on a single standard microscopy slide. This method can be applied for ...

A Simple Flow Cytometry Based Assay to Determine In Vitro Antibody Dependent Enhancement of Dengue Virus Using Zika Virus Convalescent Serum

A Simple Flow Cytometry Based Assay to Determine In Vitro Antibody Dependent Enhancement of Dengue Virus Using Zika Virus Convalescent Serum

قياس تدفق بسيط على أساس التحليل تحديد في المختبر جسم تعزيز التابعة لفيروس حمى الضنك باستخدام مصل فيروس Zika النقاهة

Antibody dependent enhancement of infection has been shown to play a major role in Dengue viral pathogenesis. Traditional assays that measure the capacity ...

Evaluation of Zika Virus-specific T-cell Responses in Immunoprivileged Organs of Infected Ifnar1-/- Mice

Evaluation of Zika Virus-specific T-cell Responses in Immunoprivileged Organs of Infected Ifnar1-/- Mice

تقييم الاستجابات الخاصة بفيروس زيكا تي خلية في أجهزة إيمونوبريفيليجيد من الفئران المصابة Ifnar1-/-

The Zika virus (ZIKV) can induce inflammation in immunoprivileged organs (e.g., the brain and testis), leading to the Guillain-Barr&#233; syndrome and ...

Quantification of Efferocytosis by Single-cell Fluorescence Microscopy

التحديد الكمي افيروسيتوسيس بالفحص المجهري Fluorescence خلية واحدة

Studying the regulation of efferocytosis requires methods that are able to accurately quantify the uptake of apoptotic cells and to probe the signaling ...

Isolation and Quantification of Zika Virus from Multiple Organs in a Mouse

عزل وتقدير كمية لفيروس زيكا من أجهزة متعددة في الماوس

The methods being presented demonstrate laboratory procedures for the isolation of organs from Zika virus infected animals and the quantification of viral ...