Name: quantification of antibody-dependent enhancement of the zika virus in primary human cells
Uploaded: 2019-01-18T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Quantification of Antibody-dependent Enhancement of the Zika Virus in Primary Human Cells at JoVE.com

Dit werk werd genereus ondersteund door de 1R21AI129881-01 (tot T.M.C.), start-up middelen uit de nationale opkomende besmettelijke ziekten-laboratoria, en de Boston University School of Medicine.

Serummonsters gebruikt in deze studie werden verkregen van de menselijke deelnemers van een cohort van Columbia. Sample collectie werd goedgekeurd door de interne review board (IRB) bij Universidad de Pamplona (Columbia, Zuid-Amerika) en Los Potios ziekenhuis8. De monsters werden anoniem verstrekt en onderzoekers hadden geen toegang tot informatie voor de patiënt. De serummonsters werden gecontroleerd voor het serotype DENV. De monsters werden verder bevestigd te neutraliseren DENV infectie i...

<ol>
	<li>Hayes, E. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zika+virus+outside+Africa.">Zika virus outside Africa.</a> Emerging Infectious Diseases. 15, 1347-1350 (2009).</li><li>Grard, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zika+virus+in+Gabon+(Central+Africa)+-+2007:+a+new+threat+from+Aedes+albopictus.">Zika virus in Gabon (Central Africa) - 2007: a new threat from Aedes albopictus.</a> PLoS Neglected Tropical Diseases. 8 (2), 2681 (2014).</li><li>Fauci, A. S., Morens, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zika+Virus+in+the+Americas--Yet+Another+Arbovirus+Threat.">Zika Virus in the Americas--Yet Another Arbovirus Threat.</a> New England Journal of Medicine. 374 (7), 601-604 (2016).</li><li>Hawkes, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhancement+of+the+Infectivity+of+Arboviruses+by+Specific+Antisera+Produced+in+Domestic+Fowls.">Enhancement of the Infectivity of Arboviruses by Specific Antisera Produced in Domestic Fowls.</a> Australian Journal of Experimental Biology and Medical Science. 42, 465-482 (1964).</li><li>Musso, D., Gubler, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zika+Virus.">Zika Virus.</a> Clinical Microbiology Reviews. 29 (3), 487-524 (2016).</li><li>Vaughn, D. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dengue+viremia+titer,+antibody+response+pattern,+and+virus+serotype+correlate+with+disease+severity.">Dengue viremia titer, antibody response pattern, and virus serotype correlate with disease severity.</a> The Journal of Infectious Diseases. 181 (1), 2-9 (2000).</li><li>Khandia, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulation+of+Dengue/Zika+Virus+Pathogenicity+by+Antibody-Dependent+Enhancement+and+Strategies+to+Protect+Against+Enhancement+in+Zika+Virus+Infection.">Modulation of Dengue/Zika Virus Pathogenicity by Antibody-Dependent Enhancement and Strategies to Protect Against Enhancement in Zika Virus Infection.</a> Frontiers of Immunology. 9, 597 (2018).</li><li>Londono-Renteria, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+relevant+in+vitro+human+model+for+the+study+of+Zika+virus+antibody-dependent+enhancement.">A relevant in vitro human model for the study of Zika virus antibody-dependent enhancement.</a> Journal of General Virology. 98 (7), 1702-1712 (2017).</li><li>Ganger, M. T., Dietz, G. D., Ewing, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+common+base+method+for+analysis+of+qPCR+data+and+the+application+of+simple+blocking+in+qPCR+experiments.">A common base method for analysis of qPCR data and the application of simple blocking in qPCR experiments.</a> BMC Bioinformatics. 18 (1), 534 (2017).</li><li>Renn, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+quantitative+real-time+RT-PCR+assay+for+determining+expression+profiles+of+types+I+and+III+interferon+subtypes.">High-throughput quantitative real-time RT-PCR assay for determining expression profiles of types I and III interferon subtypes.</a> Journal of Visualized Experiments. (97), e52650 (2015).</li><li>McArthur, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dengue+vaccines:+recent+developments,+ongoing+challenges+and+current+candidates.">Dengue vaccines: recent developments, ongoing challenges and current candidates.</a> Expert Review of Vaccines. 12 (8), 933-953 (2013).</li><li>Priyamvada, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humoral+cross-reactivity+between+Zika+and+dengue+viruses:+implications+for+protection+and+pathology.">Humoral cross-reactivity between Zika and dengue viruses: implications for protection and pathology.</a> Emerging Microbes and Infections. 6 (5), 33 (2017).</li><li>Dai, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+basis+of+antibody-mediated+neutralization+and+protection+against+flavivirus.">Molecular basis of antibody-mediated neutralization and protection against flavivirus.</a> IUBMB Life. 68 (10), 783-791 (2016).</li><li>Dai, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structures+of+the+Zika+Virus+Envelope+Protein+and+Its+Complex+with+a+Flavivirus+Broadly+Protective+Antibody.">Structures of the Zika Virus Envelope Protein and Its Complex with a Flavivirus Broadly Protective Antibody.</a> Cell Host &amp; Microbe. 19 (5), 696-704 (2016).</li><li>Sirohi, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+3.8+A+resolution+cryo-EM+structure+of+Zika+virus.">The 3.8 A resolution cryo-EM structure of Zika virus.</a> Science. 352 (6284), 467-470 (2016).</li><li>George, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prior+Exposure+to+Zika+Virus+Significantly+Enhances+Peak+Dengue-2+Viremia+in+Rhesus+Macaques.">Prior Exposure to Zika Virus Significantly Enhances Peak Dengue-2 Viremia in Rhesus Macaques.</a> Scientific Reports. 7 (1), 10498 (2017).</li><li>Morens, D. M., Halstead, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+antibody-dependent+infection+enhancement+of+four+dengue+virus+serotypes+by+monoclonal+and+polyclonal+antibodies.">Measurement of antibody-dependent infection enhancement of four dengue virus serotypes by monoclonal and polyclonal antibodies.</a> Journal of General Virology. 71, 2909-2914 (1990).</li><li>Dejnirattisai, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cross-reacting+antibodies+enhance+dengue+virus+infection+in+humans.">Cross-reacting antibodies enhance dengue virus infection in humans.</a> Science. 328 (5979), 745-748 (2010).</li><li>Priyamvada, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+antibody+responses+after+dengue+virus+infection+are+highly+cross-reactive+to+Zika+virus.">Human antibody responses after dengue virus infection are highly cross-reactive to Zika virus.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 113 (28), 7852-7857 (2016).</li><li>Charles, A. S., Christofferson, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Utility+of+a+Dengue-Derived+Monoclonal+Antibody+to+Enhance+Zika+Infection+In+Vitro.">Utility of a Dengue-Derived Monoclonal Antibody to Enhance Zika Infection In Vitro.</a> PLoS Currents. 8, (2016).</li><li>Swanstrom, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dengue+Virus+Envelope+Dimer+Epitope+Monoclonal+Antibodies+Isolated+from+Dengue+Patients+Are+Protective+against+Zika+Virus.">Dengue Virus Envelope Dimer Epitope Monoclonal Antibodies Isolated from Dengue Patients Are Protective against Zika Virus.</a> MBio. 7 (4), (2016).</li></ol>

Kruisallergie van DENV-antilichamen leidt tot het ADE van andere DENV-serotypes heeft de ontwikkeling van een doeltreffend vaccin11belemmerd. ZIKV behoort tot dezelfde familie, Flavivirus, en heeft een aanzienlijke homologie met andere flavivirussen, vooral DENV12. Het belangrijkste doel van neutraliserende antilichamen voor zowel ZIKV als DENV is de envelop eiwitten, die een zeer hoge structurele en quaternaire reeks homologie tussen de twee virussen13</s...

Onder de muggen overgebrachte virale ziekten is Zika infectie een van de meest klinisch belangrijk1. De infectie wordt veroorzaakt door de flavivirus ZIKV met, in de meeste gevallen, Aedes aegypti als zijn voornaamste vector1,2. Echter, er zijn studies die door Aedes albopictus worden gerapporteerd als een primaire vector in sommige ZIKV uitbraken3. Hoewel de infectie asymptomatisch in veel gevallen is zijn de meest voorkomende symptomen koorts, hoofdpijn en spier pijn2. Er is geen behandeling of vaccin beschikbaar voor ZIKV infectie en de beschikbare behandeling is meestal ondersteunende. Recente uitbarstingen van ZIKV in Zuid-Amerika leidde tot ernstige gevallen van de ziekte en een ongeveer 20-fold toename van de neurologische stoornis in foetussen microcefalie2genoemd. Omdat Zuid-Amerika een gebied is endemisch in verschillende arboviruses zoals DENV en West-Nijl virus, is het van cruciaal belang om te onderzoeken of voorafgaande immuniteit aan andere flavivirus(es) een rol in de ernst van de ZIKV infecties en ziekte speelt.
Door de eeuwen heen, zijn virussen geëvolueerd verschillende strategieën om te vergroten hun kans op besmettelijkheid overnemen van de ontvangende cel machines te onderdrukken de antivirale reactie. Een van de meest fascinerende van alles is het gebruik van host vooraf immune antilichamen door virussen ter verbetering van hun replicatie met het fenomeen ADE4. ADE in alle vier serotypen van DENV geweest goed bestudeerd en aangetoond om virale titers en ziekte resultaat5,6,7te verhogen. In een vorige in vitro onderzoek, hebben we significante verhoging van ZIKV replicatie toe te schrijven aan de reeds bestaande DENV immuniteit in primaire menselijke immune cellen8aangetoond. We toonden ook aan een relevante in vitro methode om de mogelijkheid van DENV bestaande antilichamen te verbeteren ZIKV replicatie in primaire cellen te kwantificeren.
Het protocol dat wij hebben ontwikkeld maakt gebruik van menselijk serummonsters die zijn getest voor DENV neutralisatie in TCID-50 of plaque vermindering neutralisatie test (PRNT) testen, samen met ZIKV in biologisch relevante cellen of cellen die verkregen uit weefsels die ZIKV kunnen infecteren.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:773px;" width="773">
	<colgroup>
		<col />
		<col span="2" />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:259px;">Fetal Bovine Serum&#160;</td>
			<td style="width:119px;">GEMINI</td>
			<td style="width:119px;">100-106</td>
			<td style="width:277px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:259px;">iCycler&#160;</td>
			<td style="width:119px;">BioRad</td>
			<td style="width:119px;">785BR02188</td>
			<td>Model No. CFX96 Optics Module</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:259px;">Microfuge 18 Centrifuge</td>
			<td style="width:119px;">Beckman Coulter&#160;</td>
			<td style="width:119px;">367160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:259px;">Nanodrop-1000</td>
			<td style="width:119px;">Thermoscientific&#160;</td>
			<td style="width:119px;">1072</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:259px;">Quantifast SYBR-One step RT-PCR kit&#160;</td>
			<td style="width:119px;">Qiagen&#160;</td>
			<td style="width:119px;">204154</td>
			<td>Used for 1 step RT-qPCR</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:259px;">RNeasy RNA Isolation Kit&#160;</td>
			<td style="width:119px;">Qiagen&#160;</td>
			<td style="width:119px;">74106</td>
			<td>Used for RNA extraction</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:259px;">RPMI-medium&#160;</td>
			<td style="width:119px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">11875093</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

quantification of antibody-dependent enhancement of the zika virus in primary human cells

De recente opkomst van de flavivirus Zika en neurologische complicaties, zoals Guillain-Barré syndroom en microcefalie bij zuigelingen, heeft geleid tot bezorgdheid over de ernstige openbare veiligheid. Onder de risicofactoren vormt antilichaam-afhankelijke versterking (ADE) de belangrijkste bedreiging, zoals de recente re-opkomst van de Zika-virus (ZIKV) is vooral in gebieden waar de bevolking is blootgesteld en is in een staat van pre immuniteit aan andere nauw verwante flavivirussen, vooral dengue virus (DENV). Hier beschrijven we een protocol voor het kwantificeren van het effect van menselijk serum antilichamen tegen DENV op ZIKV infectie in primaire menselijke cellen of cellijnen.

In Figuur 1is er een stapsgewijze Schematische illustratie van de stappen voor het uitvoeren van het ADE-protocol. Het is een schematisch diagram toont de hele procedure van ADE van ZIKV als gevolg van reeds bestaande immuniteit aan DENV. Figuur 2 toont hoe menselijk serum monsters werden onderverdeeld in drie verschillende groepen: DENV besmetting-bevestigd monsters worden aangeduid als de groep DENV-geïnfecteerde, DENV antilic...

Watch this Scientific Journal Video about Quantification of Antibody-dependent Enhancement of the Zika Virus in Primary Human Cells at JoVE.com

Quantification of Antibody-dependent Enhancement of the Zika Virus in Primary Human Cells

Beschrijven we een methode om te evalueren van het effect van reeds bestaande immuniteit tegen dengue virus op de Zika-virus-infectie met behulp van menselijk serum, primaire menselijke cellen en kwantificering van de infectie door kwantitatieve real-time polymerasekettingreactie.

Kwantificering van antilichaam-afhankelijke versterking van het Zika-Virus in primaire menselijke cellen

The recent emergence of the flavivirus Zika and neurological complications, such as Guillain-Barr&#233; syndrome and microcephaly in infants, has brought ...

Deze methode kan worden gebruikt om de effecten van reeds bestaande immuniteit tegen denguevirus op Zika virus infectie te evalueren, met behulp van de werkelijke menselijke patiënt serum en primaire menselijke immuuncellen. Het gebruik van de werkelijke menselijke patiënt serum monsters en menselijke primaire cellen bieden dieper inzicht in het antilichaam afhankelijke verbetering van het Zika-virus door pre-immuun sera en antilichamen. Deze methode geeft inzicht in het vermogen van antilichamen in het bloed van een patiënt om een virusinfectie in andere menselijke cellen te verbeteren.Het is belangrijk om ervoor te zorgen dat de virale infectie niveaus zijn hoog genoeg voor detectie, maar laag genoeg om niet te overweldigen de cellen of om te interfereren met de interpretatie van de gegevens. Begin met het zaaien van drie keer tien tot de vierde cellen in 100 microliters van celkweek medium per goed in een steriele, platte bodem 96-put plaat. Wanneer alle cellen zijn verguld, plaats de plaat in een 37 graden Celsius en 5% kooldioxide incubator en maak 10 voudige seriële verdunningen van ontdooide menselijke serummonsters in serumvrij medium.Zorg ervoor dat u de serumverdunning en verdunningsfactor constant houdt voor alle voor-immuunserums voordat u de verdunningen toevoegt aan de virusoplossingen en de cellen. Vervolgens, dooi Zika virus stammen voorraad oplossing in een 37 graden Celsius water bad voor een tot twee minuten voordat snel de overdracht van de voorraad naar ijs. Voeg een 0,1 multipliciteit van infectie equivalent volume van het Zika-virus aan het serum aliquots en plaats de plaat in de celcultuur incubator voor een uur om de dengue virus antilichamen te vormen complexen met de Zika virions.Aan het einde van de incubatie, was de cellen met 100 microliter PBS per put en voeg 50 microliters immuuncomplex aan elke put. Na de twee uur incubatie, verwijder het medium en was de putten twee keer met 100 microliters van PBS per put om de immuuncomplexen en eventuele niet-verbonden virions volledig te verwijderen. Voer vervolgens de cellen met 100 microliter per celkweekmedium aangevuld met 10%foetaal runderserum.Breng de cellen vervolgens 48 uur terug naar de celkweek incubator. Twee dagen na de infectie, was de cellen twee keer met 100 microliter steriele PBS per goed alvorens 250 microliters van cellyse buffer met 10% beta mercaptothanol aan elke put toe te voegen. Pipet minstens vijf keer op en neer met krassen om het lyseproces te versnellen en de cellysates over te zetten op steriele gelabelde buizen van 1,5 milliliter.Voeg een gelijk volume van 70% ethanol toe aan elke buis en pipet de lysate oplossing op en neer vier tot vijf keer. Wanneer de lysaatsuspensies helder zijn, breng elke oplossing in gelabelde silica-gebaseerde kolommen in twee milliliter opvangbuizen voor centrifugatie. Gooi de doorstroom weg met de kolommen in dezelfde opvangbuizen en voeg 700 microliter van Wash Buffer 1 toe aan elke kolom voor een tweede centrifugatie.Na het verwijderen van de flow-through, spoel de kolommen nog twee keer met 500 microliters van Wash Buffer twee per wasbeurt. Breng na de tweede wasbeurt de kolommen over op nieuwe twee milliliter opvangbuizen voor nog een centrifugatie. Voeg 30 microliter van 42 graden Celsius RNase-Vrij water toe aan het midden van elke kolom voor centrifugatie en herstel het eluted RNA.Voor kwantitatieve real-time polymerase kettingreactie of QRTPCR analyse voeg een microliter van gen specifieke voorwaartse en omgekeerde primers van 10 micromolar voorraden samen met 0,25 microliters van omgekeerde transcriptase mix per reactie. Merk op dat primers die Zika virus genetisch materiaal te herkennen zal detecteren virale genen en zorgen voor infectie kwantificering. Voeg vervolgens 12,5 microliter SYBR Green Mix toe, gevolgd door 25 microliter water aan elke reactie en voeg 15 microliter mastermix toe in elke bron van 96-bron QPCR-plaat.Voeg bij het gebruik van een Master Mix 100 nanogram van het RNA-monster toe aan de mix en pipet de Master Mix in afzonderlijke putten van de QRTPCR-plaat. Houd er rekening mee dat monsters in drievoud moeten worden uitgevoerd op dezelfde QRTPCR-plaat. Voer vervolgens de monsters uit op een kwantitatieve PCR-machine volgens de parameters die in de tabel worden beschreven.Klik op het tabblad smeltcurve in de systeemsoftware om de smeltcurve te controleren. De smeltcurve toont enkele piek in alle monsters voor een bepaald gen om de aanwezigheid van slechts één amplicon te bevestigen. Voor optimale resultaten gebruikt u temperatuurverhogingen van 0,5 graden Celsius tussen stappen en een minimale houdtijd van 10 seconden in het melt curve protocol.Klik vervolgens op het tabblad kwantificeringsgegevens om een kwantitatieve cyclus voor elk monster te verkrijgen en exporteer de gegevens naar een spreadsheet voor verdere kwantificeringsanalyse. De menselijke serummonsters kunnen worden gecategoriseerd in drie verschillende groepen: dengue virus infectie bevestigde monsters, dengue virus antilichaam bevestigde monsters, en gezonde sera zonder dengue virus neutraliseren antilichamen of RNA. Na 48 uur infectie, QRTPCR analyse toont aan dat de meeste sera met dengue virus serotype een tot vier antilichamen in staat zijn om Zika virus replicatie te verbeteren op verschillende niveaus.De hoogste toename van Zika virus titers wordt gevonden in macrofagen behandeld met sera-bevattende dengue virus serotype twee en vier antilichamen in vergelijking met serotype een en drie die een relatief lagere inductie van het Zika-virus vertonen. Het is belangrijk om een steriele omgeving te behouden, de juiste persoonlijke beschermingsmiddelen te dragen en om de ontdooide virusserummonsters en QPCR-reagentia altijd op ijs te houden. Dit protocol kan eenvoudig worden aangepast om antilichaam-afhankelijke verbetering van andere flavivirus zoals geelkoortsvirus, denguevirus, of het virus van de Nijl van het Westen te bestuderen gebruikend een paneel van geduldig serum.Deze techniek zal zeer nuttig zijn voor het uitvoeren van toekomstige antilichaam-afhankelijke verbetering studies in het arbovirus of virologie velden. Juiste bioveiligheid niveau twee persoonlijke bescherming apparatuur moet worden gebruikt te allen tijde en al het virale afval moet worden ontsmet in 10% bleekmiddel gedurende 30 minuten voor verwijdering.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

piggyBac Transposon System Modification of Primary Human T Cells

piggyBac Transposon System Modification of Primary Human T Cells

piggyBac Transposon Systeem Wijziging van primaire menselijke T-cellen

The piggyBac transposon system is naturally active, originally derived from the cabbage looper moth1,2. This non-viral system is plasmid based, most ...

Neutrophil Isolation and Analysis to Determine their Role in Lymphoma Cell Sensitivity to Therapeutic Agents

Neutrofielen Isolatie en analyse van hun rol in de Lymphoma Cell Gevoeligheid voor therapeutische middelen te bepalen

Neutrophils are the most abundant (40% to 75%) type of white blood cells and among the first inflammatory cells to migrate towards the site of ...

Zika Virus Infectious Cell Culture System and the In Vitro Prophylactic Effect of Interferons

Zika Virus Infectious Cell Culture System and the In Vitro Prophylactic Effect of Interferons

Zika Virus Besmettelijke celcultuur en de<em&gt; In Vitro</em&gt; Profylactisch effect van interferonen

Zika Virus (ZIKV) is an emerging pathogen that is linked to fetal developmental abnormalities such as microcephaly, eye defects, and impaired growth. ZIKV ...

Dextran Enhances the Lentiviral Transduction Efficiency of Murine and Human Primary NK Cells

Dextran verbetert de efficiëntie van de lentivirale transductie van lymfkliertest en menselijke primaire NK-cellen

The efficient transduction of specific genes into natural killer (NK) cells has been a major challenge. Successful transductions are critical to defining ...

Rescue and Characterization of Recombinant Virus from a New World Zika Virus Infectious Clone

Redding en karakterisering van het recombinante virus van een nieuwe infectieuze kloon van de Zika Virus

Infectious cDNA clones allow for genetic manipulation of a virus, thus facilitating work on vaccines, pathogenesis, replication, transmission and viral ...

Zika Virus Specific Diagnostic Epitope Discovery

Zika Virus specifieke diagnostische Epitope ontdekking

High-density peptide microarrays allow screening of more than six thousand peptides on a single standard microscopy slide. This method can be applied for ...

A Simple Flow Cytometry Based Assay to Determine In Vitro Antibody Dependent Enhancement of Dengue Virus Using Zika Virus Convalescent Serum

A Simple Flow Cytometry Based Assay to Determine In Vitro Antibody Dependent Enhancement of Dengue Virus Using Zika Virus Convalescent Serum

Een eenvoudige Stroom Cytometry gebaseerd Assay om te bepalen In Vitro antilichaam afhankelijk verbetering van Dengue Virus met behulp van de herstellende Serum Zika-Virus

Antibody dependent enhancement of infection has been shown to play a major role in Dengue viral pathogenesis. Traditional assays that measure the capacity ...

Evaluation of Zika Virus-specific T-cell Responses in Immunoprivileged Organs of Infected Ifnar1-/- Mice

Evaluation of Zika Virus-specific T-cell Responses in Immunoprivileged Organs of Infected Ifnar1-/- Mice

Evaluatie van Zika Virus-specifieke T-cel reacties in Immunoprivileged organen van besmette Ifnar1- / - muizen

The Zika virus (ZIKV) can induce inflammation in immunoprivileged organs (e.g., the brain and testis), leading to the Guillain-Barr&#233; syndrome and ...

Quantification of Efferocytosis by Single-cell Fluorescence Microscopy

Kwantificering van Efferocytosis door eencellige fluorescentie microscopie

Studying the regulation of efferocytosis requires methods that are able to accurately quantify the uptake of apoptotic cells and to probe the signaling ...

Isolation and Quantification of Zika Virus from Multiple Organs in a Mouse

Isolatie en kwantificering van het Zikavirus van meerdere organen in een muis

The methods being presented demonstrate laboratory procedures for the isolation of organs from Zika virus infected animals and the quantification of viral ...