Name: quantification of antibody-dependent enhancement of the zika virus in primary human cells
Uploaded: 2019-01-18T13:30:00
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Ce travail a été généreusement soutenu par 1R21AI129881-01 (de T.M.C.), des fonds de démarrage de Emerging Infectious maladies laboratoires nationaux et l’école de médecine de l’Université de Boston.

Des échantillons de sérum utilisés dans cette étude proviennent de participants humains d’une cohorte de la Colombie. Prélèvement de l’échantillon a été approuvé par la Commission de révision interne (CISR), Universidad de Pamplona (Colombie, Amérique du Sud) et l’hôpital de Los Potios8. Les échantillons ont été anonymement et les enquêteurs n’avaient pas accès à l’information du patient. Les échantillons de sérum ont été vérifiés pour le sérotype DENV. Les éch...

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	<li>Hayes, E. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zika+virus+outside+Africa.">Zika virus outside Africa.</a> Emerging Infectious Diseases. 15, 1347-1350 (2009).</li><li>Grard, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zika+virus+in+Gabon+(Central+Africa)+-+2007:+a+new+threat+from+Aedes+albopictus.">Zika virus in Gabon (Central Africa) - 2007: a new threat from Aedes albopictus.</a> PLoS Neglected Tropical Diseases. 8 (2), 2681 (2014).</li><li>Fauci, A. S., Morens, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zika+Virus+in+the+Americas--Yet+Another+Arbovirus+Threat.">Zika Virus in the Americas--Yet Another Arbovirus Threat.</a> New England Journal of Medicine. 374 (7), 601-604 (2016).</li><li>Hawkes, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhancement+of+the+Infectivity+of+Arboviruses+by+Specific+Antisera+Produced+in+Domestic+Fowls.">Enhancement of the Infectivity of Arboviruses by Specific Antisera Produced in Domestic Fowls.</a> Australian Journal of Experimental Biology and Medical Science. 42, 465-482 (1964).</li><li>Musso, D., Gubler, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zika+Virus.">Zika Virus.</a> Clinical Microbiology Reviews. 29 (3), 487-524 (2016).</li><li>Vaughn, D. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dengue+viremia+titer,+antibody+response+pattern,+and+virus+serotype+correlate+with+disease+severity.">Dengue viremia titer, antibody response pattern, and virus serotype correlate with disease severity.</a> The Journal of Infectious Diseases. 181 (1), 2-9 (2000).</li><li>Khandia, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulation+of+Dengue/Zika+Virus+Pathogenicity+by+Antibody-Dependent+Enhancement+and+Strategies+to+Protect+Against+Enhancement+in+Zika+Virus+Infection.">Modulation of Dengue/Zika Virus Pathogenicity by Antibody-Dependent Enhancement and Strategies to Protect Against Enhancement in Zika Virus Infection.</a> Frontiers of Immunology. 9, 597 (2018).</li><li>Londono-Renteria, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+relevant+in+vitro+human+model+for+the+study+of+Zika+virus+antibody-dependent+enhancement.">A relevant in vitro human model for the study of Zika virus antibody-dependent enhancement.</a> Journal of General Virology. 98 (7), 1702-1712 (2017).</li><li>Ganger, M. T., Dietz, G. D., Ewing, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+common+base+method+for+analysis+of+qPCR+data+and+the+application+of+simple+blocking+in+qPCR+experiments.">A common base method for analysis of qPCR data and the application of simple blocking in qPCR experiments.</a> BMC Bioinformatics. 18 (1), 534 (2017).</li><li>Renn, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+quantitative+real-time+RT-PCR+assay+for+determining+expression+profiles+of+types+I+and+III+interferon+subtypes.">High-throughput quantitative real-time RT-PCR assay for determining expression profiles of types I and III interferon subtypes.</a> Journal of Visualized Experiments. (97), e52650 (2015).</li><li>McArthur, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dengue+vaccines:+recent+developments,+ongoing+challenges+and+current+candidates.">Dengue vaccines: recent developments, ongoing challenges and current candidates.</a> Expert Review of Vaccines. 12 (8), 933-953 (2013).</li><li>Priyamvada, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humoral+cross-reactivity+between+Zika+and+dengue+viruses:+implications+for+protection+and+pathology.">Humoral cross-reactivity between Zika and dengue viruses: implications for protection and pathology.</a> Emerging Microbes and Infections. 6 (5), 33 (2017).</li><li>Dai, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+basis+of+antibody-mediated+neutralization+and+protection+against+flavivirus.">Molecular basis of antibody-mediated neutralization and protection against flavivirus.</a> IUBMB Life. 68 (10), 783-791 (2016).</li><li>Dai, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structures+of+the+Zika+Virus+Envelope+Protein+and+Its+Complex+with+a+Flavivirus+Broadly+Protective+Antibody.">Structures of the Zika Virus Envelope Protein and Its Complex with a Flavivirus Broadly Protective Antibody.</a> Cell Host &amp; Microbe. 19 (5), 696-704 (2016).</li><li>Sirohi, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+3.8+A+resolution+cryo-EM+structure+of+Zika+virus.">The 3.8 A resolution cryo-EM structure of Zika virus.</a> Science. 352 (6284), 467-470 (2016).</li><li>George, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prior+Exposure+to+Zika+Virus+Significantly+Enhances+Peak+Dengue-2+Viremia+in+Rhesus+Macaques.">Prior Exposure to Zika Virus Significantly Enhances Peak Dengue-2 Viremia in Rhesus Macaques.</a> Scientific Reports. 7 (1), 10498 (2017).</li><li>Morens, D. M., Halstead, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+antibody-dependent+infection+enhancement+of+four+dengue+virus+serotypes+by+monoclonal+and+polyclonal+antibodies.">Measurement of antibody-dependent infection enhancement of four dengue virus serotypes by monoclonal and polyclonal antibodies.</a> Journal of General Virology. 71, 2909-2914 (1990).</li><li>Dejnirattisai, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cross-reacting+antibodies+enhance+dengue+virus+infection+in+humans.">Cross-reacting antibodies enhance dengue virus infection in humans.</a> Science. 328 (5979), 745-748 (2010).</li><li>Priyamvada, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+antibody+responses+after+dengue+virus+infection+are+highly+cross-reactive+to+Zika+virus.">Human antibody responses after dengue virus infection are highly cross-reactive to Zika virus.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 113 (28), 7852-7857 (2016).</li><li>Charles, A. S., Christofferson, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Utility+of+a+Dengue-Derived+Monoclonal+Antibody+to+Enhance+Zika+Infection+In+Vitro.">Utility of a Dengue-Derived Monoclonal Antibody to Enhance Zika Infection In Vitro.</a> PLoS Currents. 8, (2016).</li><li>Swanstrom, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dengue+Virus+Envelope+Dimer+Epitope+Monoclonal+Antibodies+Isolated+from+Dengue+Patients+Are+Protective+against+Zika+Virus.">Dengue Virus Envelope Dimer Epitope Monoclonal Antibodies Isolated from Dengue Patients Are Protective against Zika Virus.</a> MBio. 7 (4), (2016).</li></ol>

Réaction croisée des anticorps DENV conduisant à l’ADE des autres sérotypes DENV a entravé le développement d’un vaccin efficace11. ZIKV appartient à la même famille des Flaviviridae et a une grande homologie avec autres flavivirus, surtout DENV12. La principale cible des anticorps neutralisants pour ZIKV et DENV est la protéine de l’enveloppe, qui partage une homologie de séquence de structurelles et quaternaire très élevé entre les deux virus<sup class=...

Parmi les maladies virales transmises par les moustiques, Zika infection est l’un des plus cliniquement importants1. L’infection est causée par le flavivirus ZIKV qui, dans la plupart des cas, utilise l’Aedes aegypti comme son principal vecteur1,2. Cependant, il y a des études qui ont signalé l’Aedes albopictus comme vecteur principal dans certains foyers ZIKV3. Bien que l’infection est asymptomatique dans de nombreux cas, les symptômes les plus courants sont la fièvre, maux de tête et de douleurs musculaires2. Il n’y a aucun remède ou vaccin disponible pour une infection ZIKV et le traitement disponible est le plus souvent favorable. Les flambées récentes de ZIKV en Amérique du Sud a conduit à des cas graves de la maladie et une augmentation d’environ 20 fois dans le trouble neurologique du développement chez les foetus nommé microcéphalie2. Comme l’Amérique du Sud est une zone endémique de plusieurs arbovirus telles que le virus DENV et du Nil occidental, il est crucial d’étudier si l’immunité préalable aux autres flavivirus(es) joue un rôle dans la sévérité des infections de ZIKV et de la maladie.
Au cours des âges, les virus ont évolué différentes stratégies pour augmenter leurs chances d’infectiosité afin de prendre en charge le mécanisme cellulaire et de réprimer la réponse antivirale. L’un des plus fascinants de tous est l’utilisation d’anticorps préalablement immunisée hôte par des virus pour améliorer leur réplication avec le phénomène ADE4. ADE à travers les quatre sérotypes du ministère de l’environnement a été bien étudiée et démontrée pour augmenter des titres viraux et maladie issue5,6,7. Dans une précédente étude in vitro, nous avons montré une amélioration significative de la réplication en raison préexistants DENV l’immunité dans des cellules immunitaires humaines primaires8ZIKV. Nous avons aussi démontré une méthode in vitro pertinente afin de quantifier la capacité des anticorps préexistants DENV afin d’améliorer la réplication dans les cellules primaires ZIKV.
Le protocole que nous avons développé utilise des échantillons de sérum humain qui sont testés pour la neutralisation DENV DECT-50 ou test de neutralisation de réduction plaque (PRNT) épreuves biologiques, ainsi que ZIKV dans les cellules biologiquement pertinentes ou de cellules provenant de tissus qui peuvent infecter les ZIKV.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:773px;" width="773">
	<colgroup>
		<col />
		<col span="2" />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:259px;">Fetal Bovine Serum&#160;</td>
			<td style="width:119px;">GEMINI</td>
			<td style="width:119px;">100-106</td>
			<td style="width:277px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:259px;">iCycler&#160;</td>
			<td style="width:119px;">BioRad</td>
			<td style="width:119px;">785BR02188</td>
			<td>Model No. CFX96 Optics Module</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:259px;">Microfuge 18 Centrifuge</td>
			<td style="width:119px;">Beckman Coulter&#160;</td>
			<td style="width:119px;">367160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:259px;">Nanodrop-1000</td>
			<td style="width:119px;">Thermoscientific&#160;</td>
			<td style="width:119px;">1072</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:259px;">Quantifast SYBR-One step RT-PCR kit&#160;</td>
			<td style="width:119px;">Qiagen&#160;</td>
			<td style="width:119px;">204154</td>
			<td>Used for 1 step RT-qPCR</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:259px;">RNeasy RNA Isolation Kit&#160;</td>
			<td style="width:119px;">Qiagen&#160;</td>
			<td style="width:119px;">74106</td>
			<td>Used for RNA extraction</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:259px;">RPMI-medium&#160;</td>
			<td style="width:119px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">11875093</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

quantification of antibody-dependent enhancement of the zika virus in primary human cells

L’émergence récente des flavivirus Zika et des complications neurologiques, tels que syndrome de Guillain-Barré et une microcéphalie chez les nourrissons, a apporté une sécurité publique sérieusement. Parmi les facteurs de risque, mise en valeur dépendante des anticorps (ADE) pose la menace la plus importante, comme la récente résurgence du virus Zika (ZIKV) est principalement dans les zones où la population a été exposée et se trouve dans un état d’immunité avant d’autres étroitement associés flavivirus, notamment le virus de la dengue (DENV). Nous décrivons ici un protocole de quantification de l’effet des anticorps de sérum humain contre le ministère de l’environnement sur l’infection ZIKV dans des cellules humaines primaires ou de lignées cellulaires.

Dans la Figure 1, il y a une illustration schématique étape par étape de toutes les étapes nécessaires effectuer le protocole de l’ADE. C’est un schéma montrant l’ensemble de la procédure de l’ADE de ZIKV en raison de l’immunité préexistante à DENV. La figure 2 montre comment sériques échantillons ont été classées en trois groupes différents : échantillons d’infection confirmés DENV sont appelées l...

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Quantification of Antibody-dependent Enhancement of the Zika Virus in Primary Human Cells

Les auteurs décrivent une méthode pour évaluer l’effet d’immunité préexistante contre le virus de la dengue sur l’infection par le virus Zika à l’aide de sérum humain, des cellules humaines primaires et quantification de l’infection par PCR en temps réel quantitative.

Quantification de l’amélioration dépendante des anticorps du Virus dans les cellules humaines primaires Zika

The recent emergence of the flavivirus Zika and neurological complications, such as Guillain-Barr&#233; syndrome and microcephaly in infants, has brought ...

Cette méthode peut être utilisée pour évaluer les effets de l’immunité préexistant contre le virus dengue sur l’infection par le virus Zika, à l’aide du sérum humain réel et des cellules immunitaires humaines primaires. L’utilisation d’échantillons réels de sérum humain et de cellules primaires humaines donne un aperçu plus approfondi de l’amélioration dépendante des anticorps du virus Zika par le sera préimmunisé et les anticorps. Cette méthode donne un aperçu de la capacité des anticorps dans le sang d’un patient à améliorer une infection virale dans d’autres cellules humaines.Il est important de s’assurer que les niveaux d’infection virale sont suffisamment élevés pour être détectés, mais suffisamment bas pour ne pas submerger les cellules ou interférer avec l’interprétation des données. Commencez par ensemencement trois fois dix à la quatrième cellule dans 100 microlitres de milieu de culture cellulaire par puits dans une plaque stérile et plate de 96 puits. Lorsque toutes les cellules ont été plaquées, placez la plaque dans un incubateur de 37 degrés Celsius et de 5 % de dioxyde de carbone et faites 10 dilutions périodiques d’échantillons de sérum humain décongelés dans un milieu sans sérum.Assurez-vous de garder les dilutions sériques et le facteur de dilution constants pour tous les sérums préimmuns avant d’ajouter les dilutions aux solutions virales et aux cellules. Ensuite, le virus Zika dégele la solution de stock dans un bain d’eau de 37 degrés Celsius pendant une à deux minutes avant de transférer rapidement le stock sur la glace. Ajouter une multiplicité de 0,1 volume équivalent d’infection du virus Zika aux aliquots sériques et placer la plaque dans l’incubateur de culture cellulaire pendant une heure pour permettre aux anticorps contre le virus de la dengue de former des complexes avec les virions Zika.À la fin de l’incubation, laver les cellules avec 100 microlitres de PBS par puits et ajouter 50 microlitres de complexe immunitaire à chaque puits. Après l’incubation de deux heures, retirer le milieu et laver les puits deux fois avec 100 microlitres de PBS par puits pour enlever complètement les complexes immunitaires et les virions non attachées. Puis nourrir les cellules avec 100 microlitres par puits de culture cellulaire moyen complété par 10% sérum bovin fœtal.Retournez ensuite les cellules à l’incubateur de culture cellulaire pendant 48 heures. Deux jours après l’infection, lavez les cellules deux fois avec 100 microlitres de PBS stérile par puits avant d’ajouter 250 microlitres de tampon de lyse cellulaire avec 10% de mercaptoéthanol bêta à chaque puits. Pipette de haut en bas au moins cinq fois avec des rayures pour accélérer le processus de lyse et de transférer les lysates cellulaires à stérile étiquetés tubes de 1,5 millilitre.Ajoutez un volume égal de 70% d’éthanol à chaque tube et pipette la solution lysate de haut en bas quatre à cinq fois. Lorsque les suspensions lysate sont claires, transférez chaque solution dans des colonnes à base de silice étiquetées dans deux tubes de collecte millilitres pour centrifugation. Jetez le flow-through en gardant les colonnes dans les mêmes tubes de collecte et ajoutez 700 microlitres de Wash Buffer 1 à chaque colonne pour une deuxième centrifugation.Après avoir jeté le flow-through, rincer les colonnes deux fois de plus avec 500 microlitres de Wash Buffer deux par lavage. Après le deuxième lavage, transférer les colonnes dans de nouveaux tubes de collecte de deux millilitres pour une autre centrifugation. Ajouter 30 microlitres d’eau sans RNase de 42 degrés Celsius au centre de chaque colonne pour la centrifugation et récupérer l’ARN éduqué.Pour la réaction quantitative en temps réel de chaîne de polymése ou l’analyse de QRTPCR ajoutent un microlitre des amorces avant et inverse spécifiques de gène de 10 stocks de micromolaire avec 0.25 microlitres du mélange inverse de transcriptase par réaction. Notez que les amorces qui reconnaissent le matériel génétique du virus Zika détecteront les gènes viraux et permettront la quantification des infections. Ensuite, ajoutez 12,5 microlitres de SYBR Green Mix suivis de 25 microlitres d’eau à chaque réaction en ajoutant 15 microlitres de Master Mix dans chaque puits de plaque QPCR de 96 puits.Lors de l’utilisation d’un Master Mix, ajouter 100 nanogrammes de l’échantillon d’ARN au mélange et pipette le Master Mix dans les puits individuels de la plaque QRTPCR. Notez que les échantillons doivent être exécutés en triplicate sur la même plaque QRTPCR. Ensuite, exécutez les échantillons sur une machine PCR quantitative en fonction des paramètres décrits dans le tableau.En cliquant sur l’onglet courbe de fusion dans le logiciel du système pour surveiller la courbe de fusion. La courbe de fonte affichera un pic unique dans tous les échantillons pour qu’un gène particulier confirme la présence d’un seul amplicon. Pour obtenir des résultats optimaux, utilisez des incréments de température de 0,5 degré Celsius entre les étapes et un temps de détention minimum de 10 secondes dans le protocole de la courbe de fusion.Cliquez ensuite sur l’onglet données de quantification pour obtenir un cycle quantitatif pour chaque échantillon et exporter les données vers une feuille de calcul pour une analyse de quantification plus poussée. Les échantillons de sérum humain peuvent être classés en trois groupes différents : l’infection par le virus de la dengue a confirmé des échantillons, les échantillons confirmés d’anticorps du virus de la dengue et le sera sain sans anticorps neutralisant le virus de la dengue ou arn. Après 48 heures d’infection, l’analyse QRTPCR démontre que la plupart des sérotypes du virus de la dengue d’un à quatre sont capables d’améliorer la réplication du virus Zika à différents niveaux.L’augmentation la plus forte du nombre de titres du virus Zika se trouve dans les macrophages traités par le virus de la dengue contenant du sérotype deux et quatre anticorps par rapport au sérotype un et trois qui montrent une induction relativement plus faible du virus Zika. Il est important de maintenir un environnement stérile, de porter l’équipement de protection personnelle approprié, et de toujours garder les échantillons de sérum de virus décongelés et les reagents QPCR sur la glace. Ce protocole peut facilement être modifié pour étudier l’amélioration dépendante des anticorps d’autres flavivirus tels que le virus de la fièvre jaune, le virus de la dengue ou le virus du Nil occidental à l’aide d’un panneau de sérum patient.Cette technique sera très utile pour mener à bien de futures études d’amélioration dépendantes des anticorps dans les domaines de l’arbovirus ou de la virologie. Un équipement de protection individuelle de niveau de biosécurité approprié deux doit être utilisé en tout temps et tous les déchets viraux doivent être décontaminés dans 10 % d’eau de Javel pendant 30 minutes avant l’élimination.

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