Name: quantification of antibody-dependent enhancement of the zika virus in primary human cells
Uploaded: 2019-01-18T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Quantification of Antibody-dependent Enhancement of the Zika Virus in Primary Human Cells at JoVE.com

עבודה זו נתמכה בנדיבות על ידי 1R21AI129881-01 (ל T.M.C.), סטארט-אפ קרנות לאומיות המתעוררים זיהומיות מחלות המעבדות, ואת הספר לרפואה של אוניברסיטת בוסטון.

הדוגמאות סרום השתמשו במחקר זה התקבלו ממשתתפים האנושי של עמית מאוניברסיטת קולומביה. אוסף דגימה אושרה על ידי ועדת הבדיקה הפנימית (IRB) למד דה פמפלונה (קולומביה, דרום אמריקה) ואת בית החולים לוס Potios8. הדגימות נמסרו באופן אנונימי והיה החוקרים אין גישה אל המידע למטופל. הדוגמאות סרום ה?...

<ol>
	<li>Hayes, E. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zika+virus+outside+Africa.">Zika virus outside Africa.</a> Emerging Infectious Diseases. 15, 1347-1350 (2009).</li><li>Grard, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zika+virus+in+Gabon+(Central+Africa)+-+2007:+a+new+threat+from+Aedes+albopictus.">Zika virus in Gabon (Central Africa) - 2007: a new threat from Aedes albopictus.</a> PLoS Neglected Tropical Diseases. 8 (2), 2681 (2014).</li><li>Fauci, A. S., Morens, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zika+Virus+in+the+Americas--Yet+Another+Arbovirus+Threat.">Zika Virus in the Americas--Yet Another Arbovirus Threat.</a> New England Journal of Medicine. 374 (7), 601-604 (2016).</li><li>Hawkes, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhancement+of+the+Infectivity+of+Arboviruses+by+Specific+Antisera+Produced+in+Domestic+Fowls.">Enhancement of the Infectivity of Arboviruses by Specific Antisera Produced in Domestic Fowls.</a> Australian Journal of Experimental Biology and Medical Science. 42, 465-482 (1964).</li><li>Musso, D., Gubler, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zika+Virus.">Zika Virus.</a> Clinical Microbiology Reviews. 29 (3), 487-524 (2016).</li><li>Vaughn, D. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dengue+viremia+titer,+antibody+response+pattern,+and+virus+serotype+correlate+with+disease+severity.">Dengue viremia titer, antibody response pattern, and virus serotype correlate with disease severity.</a> The Journal of Infectious Diseases. 181 (1), 2-9 (2000).</li><li>Khandia, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulation+of+Dengue/Zika+Virus+Pathogenicity+by+Antibody-Dependent+Enhancement+and+Strategies+to+Protect+Against+Enhancement+in+Zika+Virus+Infection.">Modulation of Dengue/Zika Virus Pathogenicity by Antibody-Dependent Enhancement and Strategies to Protect Against Enhancement in Zika Virus Infection.</a> Frontiers of Immunology. 9, 597 (2018).</li><li>Londono-Renteria, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+relevant+in+vitro+human+model+for+the+study+of+Zika+virus+antibody-dependent+enhancement.">A relevant in vitro human model for the study of Zika virus antibody-dependent enhancement.</a> Journal of General Virology. 98 (7), 1702-1712 (2017).</li><li>Ganger, M. T., Dietz, G. D., Ewing, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+common+base+method+for+analysis+of+qPCR+data+and+the+application+of+simple+blocking+in+qPCR+experiments.">A common base method for analysis of qPCR data and the application of simple blocking in qPCR experiments.</a> BMC Bioinformatics. 18 (1), 534 (2017).</li><li>Renn, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+quantitative+real-time+RT-PCR+assay+for+determining+expression+profiles+of+types+I+and+III+interferon+subtypes.">High-throughput quantitative real-time RT-PCR assay for determining expression profiles of types I and III interferon subtypes.</a> Journal of Visualized Experiments. (97), e52650 (2015).</li><li>McArthur, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dengue+vaccines:+recent+developments,+ongoing+challenges+and+current+candidates.">Dengue vaccines: recent developments, ongoing challenges and current candidates.</a> Expert Review of Vaccines. 12 (8), 933-953 (2013).</li><li>Priyamvada, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humoral+cross-reactivity+between+Zika+and+dengue+viruses:+implications+for+protection+and+pathology.">Humoral cross-reactivity between Zika and dengue viruses: implications for protection and pathology.</a> Emerging Microbes and Infections. 6 (5), 33 (2017).</li><li>Dai, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+basis+of+antibody-mediated+neutralization+and+protection+against+flavivirus.">Molecular basis of antibody-mediated neutralization and protection against flavivirus.</a> IUBMB Life. 68 (10), 783-791 (2016).</li><li>Dai, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structures+of+the+Zika+Virus+Envelope+Protein+and+Its+Complex+with+a+Flavivirus+Broadly+Protective+Antibody.">Structures of the Zika Virus Envelope Protein and Its Complex with a Flavivirus Broadly Protective Antibody.</a> Cell Host &amp; Microbe. 19 (5), 696-704 (2016).</li><li>Sirohi, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+3.8+A+resolution+cryo-EM+structure+of+Zika+virus.">The 3.8 A resolution cryo-EM structure of Zika virus.</a> Science. 352 (6284), 467-470 (2016).</li><li>George, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prior+Exposure+to+Zika+Virus+Significantly+Enhances+Peak+Dengue-2+Viremia+in+Rhesus+Macaques.">Prior Exposure to Zika Virus Significantly Enhances Peak Dengue-2 Viremia in Rhesus Macaques.</a> Scientific Reports. 7 (1), 10498 (2017).</li><li>Morens, D. M., Halstead, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+antibody-dependent+infection+enhancement+of+four+dengue+virus+serotypes+by+monoclonal+and+polyclonal+antibodies.">Measurement of antibody-dependent infection enhancement of four dengue virus serotypes by monoclonal and polyclonal antibodies.</a> Journal of General Virology. 71, 2909-2914 (1990).</li><li>Dejnirattisai, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cross-reacting+antibodies+enhance+dengue+virus+infection+in+humans.">Cross-reacting antibodies enhance dengue virus infection in humans.</a> Science. 328 (5979), 745-748 (2010).</li><li>Priyamvada, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+antibody+responses+after+dengue+virus+infection+are+highly+cross-reactive+to+Zika+virus.">Human antibody responses after dengue virus infection are highly cross-reactive to Zika virus.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 113 (28), 7852-7857 (2016).</li><li>Charles, A. S., Christofferson, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Utility+of+a+Dengue-Derived+Monoclonal+Antibody+to+Enhance+Zika+Infection+In+Vitro.">Utility of a Dengue-Derived Monoclonal Antibody to Enhance Zika Infection In Vitro.</a> PLoS Currents. 8, (2016).</li><li>Swanstrom, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dengue+Virus+Envelope+Dimer+Epitope+Monoclonal+Antibodies+Isolated+from+Dengue+Patients+Are+Protective+against+Zika+Virus.">Dengue Virus Envelope Dimer Epitope Monoclonal Antibodies Isolated from Dengue Patients Are Protective against Zika Virus.</a> MBio. 7 (4), (2016).</li></ol>

אשיג נוגדנים DENV שמוביל אייד של אחרים DENV אשר נגרמו מהזנים אליהם יש הפריע הפיתוח של חיסון יעיל11. ZIKV שייך למשפחת אותו, Flaviviridae, ויש הומולוגיה ניכר עם flaviviruses אחרים, במיוחד DENV12. המטרה העיקרית של נטרול נוגדנים הן ZIKV והן DENV הוא חלבון מעטפת, אשר חולקת הומולוגיה של רצף רבעוני...

בין בעקיצות יתושים מחלות ויראליות, Zika זיהום הוא אחד החשובים ביותר קלינית1. הזיהום נגרם על ידי flavivirus ZIKV אשר, ברוב המקרים, משתמש Aedes aegypti כמו וקטור העיקרי שלה,1,2. עם זאת, ישנם מחקרים דיווחו אדס כמו וקטור העיקרי כמה התפרצויות ZIKV3. למרות הזיהום אסימפטומטיים במקרים רבים, התסמינים השכיחים ביותר הם חום גבוה, כאב ראש, כאב שרירים2. יש שום תרופה או חיסון זמין עבור זיהום ZIKV, הטיפול זמין בעיקר הוא תומך. התפרצויות שאירעו של ZIKV בדרום אמריקה הובילה במקרים חמורים של המחלה ועלייה הפרעות התפתחותיות ההתעסקות בשם microcephaly2כ 20-fold. כמו בדרום אמריקה הוא אזור אנדמי ל arboviruses מספר כגון DENV וירוס הנילוס המערבי, זה הכרחי לחקור אם חסינות מוקדמת flavivirus(es) אחרים משחק תפקיד חומרת ZIKV זיהומים ומחלות.
לאורך כל הדורות, וירוסים התפתחו אסטרטגיות שונות כדי להגדיל את הסיכוי של infectivity על מנת להשתלט על המנגנון התא המארח, לדכא את התגובה אנטי-ויראלי. אחד המרתקים ביותר מכל הוא השימוש של המארח נוגדנים מראש המערכת החיסונית על ידי וירוסים כדי לשפר את שכפול שלהם עם התופעה אייד4. אייד על פני כל ארבעת אשר נגרמו מהזנים אליהם של DENV כבר למד היטב והפגינו להגדלת titers נגיפי המחלה התוצאה5,6,7. במחקר במבחנה הקודם, אנחנו הראו שיפור משמעותי של שכפול ZIKV עקב הקיימים מראש DENV חסינות ראשי תאים חיסוניים האנושי8. אנחנו גם הפגינו שיטה במבחנה הרלוונטיים כדי לכמת את היכולת של DENV קיימים נוגדנים כדי לשפר את שכפול ZIKV בתאים הראשי.
פרוטוקול זה פיתחנו משתמש בנסיוב אדם והמדגמים נבדקים על נטרול DENV TCID-50 או מבחני הבדיקה ניטרול הפחתת פלאק (PRNT), יחד עם ZIKV תאים רלוונטי מבחינה ביולוגית או תאים שמקורם ברקמות ZIKV שיכולים להדביק.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:773px;" width="773">
	<colgroup>
		<col />
		<col span="2" />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:259px;">Fetal Bovine Serum&#160;</td>
			<td style="width:119px;">GEMINI</td>
			<td style="width:119px;">100-106</td>
			<td style="width:277px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:259px;">iCycler&#160;</td>
			<td style="width:119px;">BioRad</td>
			<td style="width:119px;">785BR02188</td>
			<td>Model No. CFX96 Optics Module</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:259px;">Microfuge 18 Centrifuge</td>
			<td style="width:119px;">Beckman Coulter&#160;</td>
			<td style="width:119px;">367160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:259px;">Nanodrop-1000</td>
			<td style="width:119px;">Thermoscientific&#160;</td>
			<td style="width:119px;">1072</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:259px;">Quantifast SYBR-One step RT-PCR kit&#160;</td>
			<td style="width:119px;">Qiagen&#160;</td>
			<td style="width:119px;">204154</td>
			<td>Used for 1 step RT-qPCR</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:259px;">RNeasy RNA Isolation Kit&#160;</td>
			<td style="width:119px;">Qiagen&#160;</td>
			<td style="width:119px;">74106</td>
			<td>Used for RNA extraction</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:259px;">RPMI-medium&#160;</td>
			<td style="width:119px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">11875093</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

quantification of antibody-dependent enhancement of the zika virus in primary human cells

הופעתה האחרונה של flavivirus Zika וסיבוכים נוירולוגיות, כגון תסמונת גיליאן, microcephaly אצל תינוקות, הביא חששות בטיחות הציבור רציני. בין גורמי הסיכון, נוגדנים תלויי שיפור (איד) מהווה את האיום המשמעותי ביותר, כמו הופעתה האחרונה של הנגיף Zika (ZIKV) הוא בעיקר באזורים נחשף ואיפה נמצא במצב של טרום חסינות אחרים הקשורים קשר הדוק האוכלוסייה flaviviruses, וירוס דנגה במיוחד (DENV). כאן, אנו מתארים את פרוטוקול לכימות תנועת השפעת הנוגדנים בנסיוב אדם נגד DENV על זיהום ZIKV ראשי תאים אנושיים או שורות תאים.

איור 1, יש דוגמה diagrammatic שלב אחר שלב של כל השלבים המעורבים לבצע את פרוטוקול אייד. . זה תרשים סכימטי. מראה כל הליך איד של ZIKV עקב החסינות קיימת מראש DENV. איור 2 מציג בנסיוב אדם כמה דוגמאות היו מקוטלגים לשלוש קבוצות שונות: DENV אישר זיהום דגימות מכוני...

Watch this Scientific Journal Video about Quantification of Antibody-dependent Enhancement of the Zika Virus in Primary Human Cells at JoVE.com

Quantification of Antibody-dependent Enhancement of the Zika Virus in Primary Human Cells

אנו מתארים שיטה להעריך את ההשפעה של הקיימת מראש חסינות מפני וירוס דנגה על זיהום בנגיף Zika באמצעות בנסיוב אדם ראשי תאים אנושיים, כימות זיהום על ידי תגובת שרשרת של פולימראז בזמן אמת כמותית.

כימות של נוגדנים תלויי שיפור של הנגיף Zika בתאי אדם ראשי

The recent emergence of the flavivirus Zika and neurological complications, such as Guillain-Barr&#233; syndrome and microcephaly in infants, has brought ...

שיטה זו יכולה לשמש כדי להעריך את ההשפעות של חסינות קיימת מראש נגד וירוס דנגי על זיהום וירוס זיקה, באמצעות סרום החולה האנושי בפועל ותאי החיסון האנושיים העיקריים. השימוש בדגימות סרום אנושיות בפועל ותאים ראשוניים אנושיים מספק תובנה עמוקה יותר לגבי השיפור תלוי הנוגדנים של נגיף זיקה על ידי סרה טרום חיסונית ונוגדנים. שיטה זו מספקת תובנה על היכולת של נוגדנים בתוך הדם של המטופל כדי לשפר את זיהום וירוס בתאים אנושיים אחרים.חשוב להבטיח כי רמות הזיהום הנגיפי גבוהות מספיק לגילוי אך נמוכות מספיק כדי לא להציף את התאים או להפריע לפרשנות הנתונים. התחל על ידי זריעת שלוש פעמים עשר לתאים הרביעיים ב 100 microliters של מדיום תאים ל הבאר בסטרילי, שטוח התחתון 96-well צלחת. כאשר כל התאים כבר מצופים, מניחים את הצלחת ב 37 מעלות צלזיוס ו 5% פחמן דו חמצני אינקובטור ולעשות 10 דילול סדרתי פי 10 של דגימות סרום אנושי מופשר במדיום ללא סרום.הקפד לשמור על דילול הסרום וגורם הדילול קבוע עבור כל הסרומים הטרום חיסוניים לפני הוספת הדילול לפתרונות הנגיף ולתאים. לאחר מכן, להפשיר זיקה וירוס זני פתרון מלאי באמבט מים 37 מעלות צלזיוס במשך 1-2 דקות לפני במהירות להעביר את המניה לקרח. הוסף 0.1 ריבוי של נפח זיהום שווה ערך של וירוס זיקה אל aliquots סרום ולמקם את הצלחת באינקובטור תרבות התא במשך שעה אחת כדי לאפשר נוגדנים וירוס דנגי ליצור קומפלקסים עם נגיף זיקה.בסוף הדגירה, לשטוף את התאים עם 100 microliters של PBS לגם ולהוסיף 50 microliters של קומפלקס המערכת החיסונית לכל באר. לאחר הדגירה של שעתיים, להסיר את המדיום ולשטוף את בארות פעמיים עם 100 microliters של PBS לגם כדי להסיר לחלוטין את העורקים החיסונית ואת כל virions מחובר. לאחר מכן להאכיל את התאים עם 100 microliters ל הבאר של תא תרבות בינוני בתוספת 10% נסיוב חזיר עוברי.ואז להחזיר את התאים לאנקובטור תרבות התא במשך 48 שעות. יומיים לאחר הזיהום, לשטוף את התאים פעמיים עם 100 microliters של PBS סטרילי ל הבאר לפני הוספת 250 microliters של מאגר תות תא עם 10%beta mercaptoethanol לכל באר. פיפטה למעלה ולמטה לפחות חמש פעמים עם גירוד כדי להאיץ את תהליך תיזה ולהעביר את lysates התא סטרילי שכותרתו 1.5 צינורות מיליליטר.הוסף נפח שווה של 70%אתנול לכל צינור ו pipette פתרון lysate למעלה ולמטה ארבע עד חמש פעמים. כאשר המתלים lysate ברורים, להעביר כל פתרון לטורים מבוססי סיליקה שכותרתו בשני צינורות איסוף מיליליטר עבור צנטריפוגה. השלך את הזרימה דרך שמירה על העמודים באותם צינורות איסוף ולהוסיף 700 microliters של שטיפת Buffer 1 לכל עמודה עבור צנטריפוגה שנייה.לאחר השלכת הזרימה דרך, לשטוף את העמודים פעמיים נוספות עם 500 microliters של שטיפת Buffer שתיים לכל לשטוף. לאחר הכביסה השנייה, מעבירים את העמודים לצינורות איסוף חדשים של שני מיליליטר לצנטריפוגה נוספת. הוסף 30 microliters של 42 מעלות צלזיוס RNase ללא מים למרכז של כל עמודה עבור צנטריפוגה לשחזר את RNA אלוט.לתגובת שרשרת פולימראז כמותית בזמן אמת או ניתוח QRTPCR להוסיף מיקרוליטר אחד של פריימרים גנים ספציפיים קדימה ואחורי מ 10 מניות micromolar יחד עם 0.25 microliters של תערובת תעתיק הפוך לכל תגובה. שים לב כי פריימרים המזהים חומר גנטי וירוס זיקה יזהו גנים ויראליים ולאפשר כימות זיהום. לאחר מכן, להוסיף 12.5 microliters של תערובת ירוקה SYBR ואחריו 25 microliters של מים לכל תגובה הוספת 15 microliters של מאסטר לערבב בכל באר של צלחת QPCR 96-well.בעת שימוש בתערובת מאסטר, להוסיף 100 ננוגרם של מדגם RNA לתערובת פיפטה לערבב מאסטר לתוך בארות בודדות של צלחת QRTPCR. שים לב שיש להפעיל דגימות ב- triplicate על אותו לוח QRTPCR. לאחר מכן הפעל את הדגימות במחשב PCR כמותי בהתאם לפרמטרים המתוארים בטבלה.לחיצה על לשונית עקומת ההמסה בתוכנת המערכת כדי לפקח על עקומת ההמסה. עקומת ההמסה תראה שיא אחד בכל הדגימות לגן מסוים כדי לאשר את נוכחותו של אמפיקון אחד בלבד. לקבלת תוצאות מיטביות, השתמש במרווחי טמפרטורה של 0.5 מעלות צלזיוס בין השלבים ותזמן החזקה מינימלי של 10 שניות בפרוטוקול עקומת ההמסה.לאחר מכן לחץ על הכרטיסיה נתוני כימות כדי לקבל מחזור כמותי עבור כל דוגמה ולייצא את הנתונים לגיליון אלקטרוני לניתוח כימות נוסף. ניתן לסווג את דגימות הסרום האנושי לשלוש קבוצות שונות: דגימות מאושרות של זיהום נגיף דנגי, דגימות מאושרות של נוגדנים לנגיף דנגי, וסרה בריאה ללא וירוס דנגי המנטרל נוגדנים או רנ"א. לאחר 48 שעות של זיהום, ניתוח QRTPCR מדגים כי רוב sera המכיל סרוטיפ וירוס דנגי אחד עד ארבעה נוגדנים מסוגלים לשפר את שכפול וירוס זיקה ברמות שונות.העלייה הגבוהה ביותר של ציטרים וירוס זיקה נמצא מקרופאגים שטופלו סרוטיפ וירוס דנגי המכיל סרה שניים וארבעה נוגדנים לעומת סרוטיפ אחד ושלוש אשר מראים אינדוקציה נמוכה יחסית של וירוס זיקה. חשוב לשמור על סביבה סטרילית, ללבוש את ציוד ההגנה האישי הנכון, ותמיד לשמור את דגימות סרום הנגיף המופשרות ואת רייגנטים QPCR על קרח. פרוטוקול זה יכול בקלות להיות שונה כדי לחקור שיפור תלוי נוגדנים של flavivirus אחרים כגון וירוס קדחת צהובה, וירוס דנגי, או וירוס הנילוס המערבי באמצעות פאנל של סרום החולה.טכניקה זו תהיה שימושית מאוד לביצוע מחקרי שיפור תלויי נוגדנים עתידיים בתחומי ארבווירוס או וירולוגיה. יש להשתמש בכל עת בציוד הגנה אישי ברמה ביו-בטיחותית נכונה, ויש לפענח את כל הפסולת הנגיפית ב-10% אקונומיקה למשך 30 דקות לפני ההשלכה.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

piggyBac Transposon System Modification of Primary Human T Cells

piggyBac Transposon System Modification of Primary Human T Cells

שינוי מערכת Transposon piggyBac של תאי T אנושיים ראשוניים

The piggyBac transposon system is naturally active, originally derived from the cabbage looper moth1,2. This non-viral system is plasmid based, most ...

Neutrophil Isolation and Analysis to Determine their Role in Lymphoma Cell Sensitivity to Therapeutic Agents

בידוד נויטרופילים וניתוח כדי לקבוע את תפקידם רגישות תאים לימפומה לסוכנים טיפוליים

Neutrophils are the most abundant (40% to 75%) type of white blood cells and among the first inflammatory cells to migrate towards the site of ...

Zika Virus Infectious Cell Culture System and the In Vitro Prophylactic Effect of Interferons

Zika Virus Infectious Cell Culture System and the In Vitro Prophylactic Effect of Interferons

מערכת תרבית תאי זיהומיות וירוס זיקה ואת<em&gt; במבחנה</em&gt; אפקט מניעתי של אינטרפרונים

Zika Virus (ZIKV) is an emerging pathogen that is linked to fetal developmental abnormalities such as microcephaly, eye defects, and impaired growth. ZIKV ...

Dextran Enhances the Lentiviral Transduction Efficiency of Murine and Human Primary NK Cells

לתוספי משפר את היעילות התמרה חושית Lentiviral של תאי NK העיקרי מאתר ואנושי

The efficient transduction of specific genes into natural killer (NK) cells has been a major challenge. Successful transductions are critical to defining ...

Rescue and Characterization of Recombinant Virus from a New World Zika Virus Infectious Clone

הצלה אפיון של וירוס רקומביננטי מעולם חדש Zika וירוס זיהום מזוהם

Infectious cDNA clones allow for genetic manipulation of a virus, thus facilitating work on vaccines, pathogenesis, replication, transmission and viral ...

Zika Virus Specific Diagnostic Epitope Discovery

גילוי ספציפי וירוס Zika Epitope אבחון

High-density peptide microarrays allow screening of more than six thousand peptides on a single standard microscopy slide. This method can be applied for ...

A Simple Flow Cytometry Based Assay to Determine In Vitro Antibody Dependent Enhancement of Dengue Virus Using Zika Virus Convalescent Serum

A Simple Flow Cytometry Based Assay to Determine In Vitro Antibody Dependent Enhancement of Dengue Virus Using Zika Virus Convalescent Serum

Cytometry זרימה פשוטים מבוסס Assay כדי לקבוע במבחנה נוגדן התלויים שיפור של וירוס דנגה באמצעות נסיוב הבראה Zika וירוס

Antibody dependent enhancement of infection has been shown to play a major role in Dengue viral pathogenesis. Traditional assays that measure the capacity ...

Evaluation of Zika Virus-specific T-cell Responses in Immunoprivileged Organs of Infected Ifnar1-/- Mice

Evaluation of Zika Virus-specific T-cell Responses in Immunoprivileged Organs of Infected Ifnar1-/- Mice

הערכה של תגובות T-cell Zika וירוס ספציפיים באיברים Immunoprivileged של עכברים נגועים Ifnar1- / -

The Zika virus (ZIKV) can induce inflammation in immunoprivileged organs (e.g., the brain and testis), leading to the Guillain-Barr&#233; syndrome and ...

Quantification of Efferocytosis by Single-cell Fluorescence Microscopy

כימות של Efferocytosis על-ידי קרינה פלואורסצנטית תא בודד מיקרוסקופ

Studying the regulation of efferocytosis requires methods that are able to accurately quantify the uptake of apoptotic cells and to probe the signaling ...

Isolation and Quantification of Zika Virus from Multiple Organs in a Mouse

בידוד וקוונפיקציה של וירוס Zika ממספר איברים בעכבר

The methods being presented demonstrate laboratory procedures for the isolation of organs from Zika virus infected animals and the quantification of viral ...