Name: quantification of antibody-dependent enhancement of the zika virus in primary human cells
Uploaded: 2019-01-18T13:30:00
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Questo lavoro è stato generosamente supportato da 1R21AI129881-01 (al t.m.c.), fondi di Start-up dal National Laboratories malattie infettive emergenti e la Boston University School of Medicine.

Campioni di siero utilizzati in questo studio sono stati ottenuti dai partecipanti umani di una coorte da Columbia. Raccolta dei campioni è stata approvata dal comitato di revisione interna (IRB) presso Universidad de Pamplona (Colombia, Sud America) e Los Potios ospedale8. I campioni sono stati forniti in forma anonima e gli investigatori non avevano accesso alle informazioni sui pazienti. I campioni di siero sono stati controllati per il sierotipo DENV. I campioni sono stati ulteriormente confe...

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	<li>Hayes, E. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zika+virus+outside+Africa.">Zika virus outside Africa.</a> Emerging Infectious Diseases. 15, 1347-1350 (2009).</li><li>Grard, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zika+virus+in+Gabon+(Central+Africa)+-+2007:+a+new+threat+from+Aedes+albopictus.">Zika virus in Gabon (Central Africa) - 2007: a new threat from Aedes albopictus.</a> PLoS Neglected Tropical Diseases. 8 (2), 2681 (2014).</li><li>Fauci, A. S., Morens, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zika+Virus+in+the+Americas--Yet+Another+Arbovirus+Threat.">Zika Virus in the Americas--Yet Another Arbovirus Threat.</a> New England Journal of Medicine. 374 (7), 601-604 (2016).</li><li>Hawkes, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhancement+of+the+Infectivity+of+Arboviruses+by+Specific+Antisera+Produced+in+Domestic+Fowls.">Enhancement of the Infectivity of Arboviruses by Specific Antisera Produced in Domestic Fowls.</a> Australian Journal of Experimental Biology and Medical Science. 42, 465-482 (1964).</li><li>Musso, D., Gubler, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zika+Virus.">Zika Virus.</a> Clinical Microbiology Reviews. 29 (3), 487-524 (2016).</li><li>Vaughn, D. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dengue+viremia+titer,+antibody+response+pattern,+and+virus+serotype+correlate+with+disease+severity.">Dengue viremia titer, antibody response pattern, and virus serotype correlate with disease severity.</a> The Journal of Infectious Diseases. 181 (1), 2-9 (2000).</li><li>Khandia, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulation+of+Dengue/Zika+Virus+Pathogenicity+by+Antibody-Dependent+Enhancement+and+Strategies+to+Protect+Against+Enhancement+in+Zika+Virus+Infection.">Modulation of Dengue/Zika Virus Pathogenicity by Antibody-Dependent Enhancement and Strategies to Protect Against Enhancement in Zika Virus Infection.</a> Frontiers of Immunology. 9, 597 (2018).</li><li>Londono-Renteria, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+relevant+in+vitro+human+model+for+the+study+of+Zika+virus+antibody-dependent+enhancement.">A relevant in vitro human model for the study of Zika virus antibody-dependent enhancement.</a> Journal of General Virology. 98 (7), 1702-1712 (2017).</li><li>Ganger, M. T., Dietz, G. D., Ewing, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+common+base+method+for+analysis+of+qPCR+data+and+the+application+of+simple+blocking+in+qPCR+experiments.">A common base method for analysis of qPCR data and the application of simple blocking in qPCR experiments.</a> BMC Bioinformatics. 18 (1), 534 (2017).</li><li>Renn, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+quantitative+real-time+RT-PCR+assay+for+determining+expression+profiles+of+types+I+and+III+interferon+subtypes.">High-throughput quantitative real-time RT-PCR assay for determining expression profiles of types I and III interferon subtypes.</a> Journal of Visualized Experiments. (97), e52650 (2015).</li><li>McArthur, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dengue+vaccines:+recent+developments,+ongoing+challenges+and+current+candidates.">Dengue vaccines: recent developments, ongoing challenges and current candidates.</a> Expert Review of Vaccines. 12 (8), 933-953 (2013).</li><li>Priyamvada, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humoral+cross-reactivity+between+Zika+and+dengue+viruses:+implications+for+protection+and+pathology.">Humoral cross-reactivity between Zika and dengue viruses: implications for protection and pathology.</a> Emerging Microbes and Infections. 6 (5), 33 (2017).</li><li>Dai, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+basis+of+antibody-mediated+neutralization+and+protection+against+flavivirus.">Molecular basis of antibody-mediated neutralization and protection against flavivirus.</a> IUBMB Life. 68 (10), 783-791 (2016).</li><li>Dai, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structures+of+the+Zika+Virus+Envelope+Protein+and+Its+Complex+with+a+Flavivirus+Broadly+Protective+Antibody.">Structures of the Zika Virus Envelope Protein and Its Complex with a Flavivirus Broadly Protective Antibody.</a> Cell Host &amp; Microbe. 19 (5), 696-704 (2016).</li><li>Sirohi, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+3.8+A+resolution+cryo-EM+structure+of+Zika+virus.">The 3.8 A resolution cryo-EM structure of Zika virus.</a> Science. 352 (6284), 467-470 (2016).</li><li>George, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prior+Exposure+to+Zika+Virus+Significantly+Enhances+Peak+Dengue-2+Viremia+in+Rhesus+Macaques.">Prior Exposure to Zika Virus Significantly Enhances Peak Dengue-2 Viremia in Rhesus Macaques.</a> Scientific Reports. 7 (1), 10498 (2017).</li><li>Morens, D. M., Halstead, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+antibody-dependent+infection+enhancement+of+four+dengue+virus+serotypes+by+monoclonal+and+polyclonal+antibodies.">Measurement of antibody-dependent infection enhancement of four dengue virus serotypes by monoclonal and polyclonal antibodies.</a> Journal of General Virology. 71, 2909-2914 (1990).</li><li>Dejnirattisai, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cross-reacting+antibodies+enhance+dengue+virus+infection+in+humans.">Cross-reacting antibodies enhance dengue virus infection in humans.</a> Science. 328 (5979), 745-748 (2010).</li><li>Priyamvada, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+antibody+responses+after+dengue+virus+infection+are+highly+cross-reactive+to+Zika+virus.">Human antibody responses after dengue virus infection are highly cross-reactive to Zika virus.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 113 (28), 7852-7857 (2016).</li><li>Charles, A. S., Christofferson, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Utility+of+a+Dengue-Derived+Monoclonal+Antibody+to+Enhance+Zika+Infection+In+Vitro.">Utility of a Dengue-Derived Monoclonal Antibody to Enhance Zika Infection In Vitro.</a> PLoS Currents. 8, (2016).</li><li>Swanstrom, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dengue+Virus+Envelope+Dimer+Epitope+Monoclonal+Antibodies+Isolated+from+Dengue+Patients+Are+Protective+against+Zika+Virus.">Dengue Virus Envelope Dimer Epitope Monoclonal Antibodies Isolated from Dengue Patients Are Protective against Zika Virus.</a> MBio. 7 (4), (2016).</li></ol>

Cross-reattività degli anticorpi DENV verso l'ADE di altri sierotipi DENV ha ostacolato lo sviluppo di un vaccino efficace11. ZIKV appartiene alla stessa famiglia, Flaviviridae e ha una notevole omologia con altri flavivirus, soprattutto DENV12. Il bersaglio principale degli anticorpi neutralizzanti per ZIKV e DENV è la proteina dell'involucro, che condivide un'omologia di sequenza strutturale e Quaternario molto elevato tra i due virus13,</su...

Tra le malattie virali trasmesse da zanzare, Zika infezione è uno del più clinicamente importante1. L'infezione è causata da flavivirus ZIKV che, nella maggior parte dei casi, utilizza Aedes aegypti come suo principale vettore1,2. Tuttavia, ci sono studi che hanno segnalato Aedes albopictus come un vettore primario in alcuni focolai ZIKV3. Anche se l'infezione è asintomatica in molti casi, i sintomi più comuni sono febbre, mal di testa e muscolo dolore2. Non c'è nessuna cura o vaccino disponibile per infezione ZIKV e il trattamento disponibile per la maggior parte è favorevole. Recente insorgenza di ZIKV in Sud America ha portato a gravi casi di malattia e un aumento di circa 20 volte nel disordine dello sviluppo neurologico nei feti che si chiamano microcefalia2. Come il Sud America è una zona endemica per diversi arbovirus come DENV e West Nile virus, è fondamentale indagare se preventiva immunità alle altre flavivirus(es) gioca un ruolo nella severità delle infezioni ZIKV e malattia.
Nel corso dei secoli, i virus hanno evoluto strategie differenti per aumentare le proprie chance di infettività al fine di prendere in consegna la macchina di cellula ospite e sopprimere la risposta antivirale. Uno dei più affascinanti di tutti è l'uso degli host anticorpi pre-immune dai virus per migliorare la loro replica con il fenomeno ADE4. ADE in tutti i quattro sierotipi di DENV è stata ben studiata e ha dimostrato di aumentare i titoli virali e malattia risultato5,6,7. In un precedente studio in vitro, abbiamo dimostrato un miglioramento significativo della replica di ZIKV a causa di preesistenti immunità DENV in cellule immuni umane primarie8. Inoltre, abbiamo dimostrato un metodo in vitro pertinente per quantificare la capacità degli anticorpi preesistenti DENV per migliorare la replica di ZIKV in cellule primarie.
Il protocollo che abbiamo sviluppato utilizza campioni di siero umano che vengono testati per la neutralizzazione di DENV in TCID 50 o prova di neutralizzazione di riduzione della placca (PRNT) assays, insieme con ZIKV in cellule biologicamente rilevanti o cellule derivate dai tessuti che possono infettare ZIKV.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:773px;" width="773">
	<colgroup>
		<col />
		<col span="2" />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:259px;">Fetal Bovine Serum&#160;</td>
			<td style="width:119px;">GEMINI</td>
			<td style="width:119px;">100-106</td>
			<td style="width:277px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:259px;">iCycler&#160;</td>
			<td style="width:119px;">BioRad</td>
			<td style="width:119px;">785BR02188</td>
			<td>Model No. CFX96 Optics Module</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:259px;">Microfuge 18 Centrifuge</td>
			<td style="width:119px;">Beckman Coulter&#160;</td>
			<td style="width:119px;">367160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:259px;">Nanodrop-1000</td>
			<td style="width:119px;">Thermoscientific&#160;</td>
			<td style="width:119px;">1072</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:259px;">Quantifast SYBR-One step RT-PCR kit&#160;</td>
			<td style="width:119px;">Qiagen&#160;</td>
			<td style="width:119px;">204154</td>
			<td>Used for 1 step RT-qPCR</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:259px;">RNeasy RNA Isolation Kit&#160;</td>
			<td style="width:119px;">Qiagen&#160;</td>
			<td style="width:119px;">74106</td>
			<td>Used for RNA extraction</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:259px;">RPMI-medium&#160;</td>
			<td style="width:119px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">11875093</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

quantification of antibody-dependent enhancement of the zika virus in primary human cells

Il recente emergere del flavivirus Zika e complicazioni neurologiche, quali sindrome di Guillain-Barré e microcefalia in infanti, ha portato sicurezza pubblica gravi preoccupazioni. Tra i fattori di rischio, esaltazione anticorpo-dipendente (ADE) rappresenta la minaccia più significativa, come la recente ricomparsa del virus Zika (ZIKV) è principalmente nelle zone dove la popolazione è stata esposta ed è in uno stato di pre-immunità agli altri strettamente connessi flavivirus, specialmente virus dengue (DENV). Qui, descriviamo un protocollo per quantificare l'effetto degli anticorpi del siero umano DENV sull'infezione di ZIKV in cellule umane primarie o linee cellulari.

Nella Figura 1, c'è un'illustrazione schematica passo passo tutti i passaggi eseguire il protocollo di ADE. È un diagramma schematico mostrando tutta la procedura di ADE di ZIKV dovuto immunità pre-esistente a DENV. La figura 2 Mostra come siero campioni sono stati classificati in tre gruppi differenti: campioni di infezione confermata DENV sono indicati come il gruppo DENV-infettati, DENV anticorpo-confermato campioni sono de...

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Quantification of Antibody-dependent Enhancement of the Zika Virus in Primary Human Cells

Descriviamo un metodo per valutare l'effetto di pre-esistenti immunità contro il virus della dengue sull'infezione del virus di Zika utilizzando siero umano, cellule umane primarie e quantificazione di infezione da reazione a catena della polimerasi quantitativa in tempo reale.

Quantificazione di esaltazione anticorpo-dipendente del Virus in cellule umane primarie Zika

The recent emergence of the flavivirus Zika and neurological complications, such as Guillain-Barr&#233; syndrome and microcephaly in infants, has brought ...

Questo metodo può essere utilizzato per valutare gli effetti dell'immunità preesistenti contro il virus dengue sull'infezione da virus Zika, utilizzando il siero del paziente umano reale e le cellule immunitarie umane primarie. L'uso di campioni reali di siero del paziente umano e cellule primarie umane fornisce una visione più approfondita del potenziamento dipendente dagli anticorpi del virus Zika da parte di sieri e anticorpi pre-immuni. Questo metodo fornisce informazioni sulla capacità degli anticorpi all'interno del sangue di un paziente di migliorare un'infezione da virus in altre cellule umane.È importante assicurarsi che i livelli di infezione virale siano abbastanza alti per il rilevamento ma abbastanza bassi da non sopraffare le cellule o interferire con l'interpretazione dei dati. Inizia seminando tre volte dieci fino alle quattro cellule in 100 microlitri di terreno di coltura cellulare per pozzo in una piastra sterile a fondo piatto da 96 porri. Una volta che tutte le cellule sono state placcate, posizionare la piastra in un incubatore di anidride carbonica di 37 gradi Celsius e 5% e effettuare diluizioni seriali di 10 volte di campioni di siero umano scongelati in mezzo privo di siero.Assicurarsi di mantenere costanti le diluizioni del siero e il fattore di diluizione per tutti i sieri pre-immuni prima di aggiungere le diluizioni alle soluzioni virali e alle cellule. Successivamente, scongelare la soluzione stock di ceppi del virus Zika in un bagno d'acqua di 37 gradi Celsius per uno o due minuti prima di trasferire rapidamente lo stock sul ghiaccio. Aggiungere una molteplicità 0.1 di volume equivalente di infezione del virus Zika alle aliquote siere e posizionare la piastra nell'incubatore di coltura cellulare per un'ora per consentire agli anticorpi del virus dengue di formare complessi con i virioni Zika.Alla fine dell'incubazione, lavare le cellule con 100 microlitri di PBS per pozzo e aggiungere 50 microlitri di complesso immunitario ad ogni pozzo. Dopo l'incubazione di due ore, rimuovere il mezzo e lavare i pozzi due volte con 100 microlitri di PBS per pozzo per rimuovere completamente i complessi immunitari e eventuali virioni non attaccati. Quindi nutrire le cellule con 100 microlitri per pozzo di mezzo di coltura cellulare integrato con siero bovino fetale al 10%.Quindi riportare le cellule nell'incubatore di coltura cellulare per 48 ore. Due giorni dopo l'infezione, lavare le cellule due volte con 100 microlitri di PBS sterile per pozzo prima di aggiungere 250 microlitri di tampone di lysis cellulare con mercaptoetanolo 10%beta ad ogni pozzo. Pipetta su e giù almeno cinque volte con graffi per accelerare il processo di lisi e trasferire i litolati cellulari in tubi sterili etichettati da 1,5 millilitri.Aggiungere un volume uguale di 70%etanolo a ciascun tubo e pipettare la soluzione di lysate su e giù da quattro a cinque volte. Quando le sospensioni del lisato sono chiare, trasferire ogni soluzione in colonne etichettate a base di silice in due tubi di raccolta millilitro per la centrifugazione. Scartare il flusso mantenendo le colonne negli stessi tubi di raccolta e aggiungere 700 microlitri di Wash Buffer 1 a ciascuna colonna per una seconda centrifugazione.Dopo aver scartato il flusso, sciacquare le colonne altre due volte con 500 microlitri di Wash Buffer due per lavaggio. Dopo il secondo lavaggio, trasferire le colonne in nuovi tubi di raccolta a due millilitri per un'altra centrifugazione. Aggiungere 30 microlitri di acqua priva di RNasi di 42 gradi Celsius al centro di ogni colonna per la centrifugazione e recuperare l'RNA eluito.Per la reazione quantitativa a catena della polimerasi in tempo reale o l'analisi QRTPCR aggiungere un microlitro di primer gene specifici avanti e indietro da 10 scorte micromolari insieme a 0,25 microlitri di mix di trascrittasi inversa per reazione. Si noti che i primer che riconoscono il materiale genetico del virus Zika rileveranno i geni virali e consentiranno la quantificazione delle infezioni. Successivamente, aggiungere 12,5 microlitri di SYBR Green Mix seguiti da 25 microlitri di acqua ad ogni reazione aggiungendo 15 microlitri di Master Mix in ogni pozzo di piastra QPCR da 96 po '.Quando si utilizza un Master Mix, aggiungere 100 nanogrammi del campione di RNA alla miscela e pipettare il Master Mix in singoli pozzi della piastra QRTPCR. Si noti che i campioni devono essere eseguiti in triplice copia sulla stessa piastra QRTPCR. Quindi eseguire i campioni su una macchina PCR quantitativa in base ai parametri delineati nella tabella.Facendo clic sulla linguetta della curva di fusione nel software di sistema per monitorare la curva di fusione. La curva di fusione mostrerà un singolo picco in tutti i campioni per un particolare gene per confermare la presenza di un solo amplicon. Per ottenere risultati ottimali, utilizzare incrementi di temperatura di 0,5 gradi Celsius tra i passaggi e un tempo di attesa minimo di 10 secondi nel protocollo della curva di fusione.Quindi fare clic sulla scheda dati di quantificazione per ottenere un ciclo quantitativo per ogni campione ed esportare i dati in un foglio di calcolo per ulteriori analisi di quantificazione. I campioni di siero umano possono essere classificati in tre diversi gruppi: campioni confermati di infezione da virus dengue, campioni confermati di anticorpi del virus dengue e sieri sani senza anticorpi neutralizzanti del virus dengue o RNA. Dopo 48 ore di infezione, l'analisi QRTPCR dimostra che la maggior parte dei sieri contenenti sierotipo del virus dengue da uno a quattro anticorpi sono in grado di migliorare la replicazione del virus Zika a diversi livelli.L'aumento più elevato dei titoli del virus Zika si riscontra nei macrofagi trattati con sierotipo due e quattro anticorpi del virus dengue contenente sieri rispetto al sierotipo uno e tre che mostrano un'induzione relativamente inferiore del virus Zika. È importante mantenere un ambiente sterile, indossare le corrette apparecchiature di protezione individuale e mantenere sempre i campioni di siero del virus scongelati e i reagenti QPCR sul ghiaccio. Questo protocollo può essere facilmente modificato per studiare il miglioramento dipendente dagli anticorpi di altri flavivirus come virus della febbre gialla, virus dengue o virus del Nilo occidentale utilizzando un pannello di siero del paziente.Questa tecnica sarà molto utile per eseguire futuri studi di potenziamento dipendenti dagli anticorpi nei campi dell'arbovirus o della virologia. Un adeguato livello di biosicurezza due dispositivi di protezione individuale dovrebbero essere utilizzati in ogni momento e tutti i rifiuti virali devono essere decontaminati in candeggina al 10% per 30 minuti prima dello smaltimento.

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