Name: quantification of antibody-dependent enhancement of the zika virus in primary human cells
Uploaded: 2019-01-18T13:30:00
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이 작품 (T.M.C.)에 1R21AI129881-01, 국가 신흥 전염 성 질환 연구소, 그리고 보스턴 대학 학부에서 시작 자금 아낌없이 지원 했다.

이 연구에 사용 된 혈 청 샘플은 콜롬비아에서 코 호트의 인간 참가자에서 얻은 했다. 샘플 컬렉션 대학 데 팜 플로 나 (콜롬비아, 남 아메리카)와 로스 Potios 병원8내부 검토 위원회 (IRB)에 의해 승인 되었다. 샘플 제공 익명으로 하 고 조사 했다 환자 정보에 액세스할 수 없습니다. 혈 청 샘플 DENV serotype 확인 했다. 샘플 추가 DENV 감염을 중화 확인 되었다 생체 외에서. 컨트롤...

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	<li>Hayes, E. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zika+virus+outside+Africa.">Zika virus outside Africa.</a> Emerging Infectious Diseases. 15, 1347-1350 (2009).</li><li>Grard, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zika+virus+in+Gabon+(Central+Africa)+-+2007:+a+new+threat+from+Aedes+albopictus.">Zika virus in Gabon (Central Africa) - 2007: a new threat from Aedes albopictus.</a> PLoS Neglected Tropical Diseases. 8 (2), 2681 (2014).</li><li>Fauci, A. S., Morens, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zika+Virus+in+the+Americas--Yet+Another+Arbovirus+Threat.">Zika Virus in the Americas--Yet Another Arbovirus Threat.</a> New England Journal of Medicine. 374 (7), 601-604 (2016).</li><li>Hawkes, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhancement+of+the+Infectivity+of+Arboviruses+by+Specific+Antisera+Produced+in+Domestic+Fowls.">Enhancement of the Infectivity of Arboviruses by Specific Antisera Produced in Domestic Fowls.</a> Australian Journal of Experimental Biology and Medical Science. 42, 465-482 (1964).</li><li>Musso, D., Gubler, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zika+Virus.">Zika Virus.</a> Clinical Microbiology Reviews. 29 (3), 487-524 (2016).</li><li>Vaughn, D. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dengue+viremia+titer,+antibody+response+pattern,+and+virus+serotype+correlate+with+disease+severity.">Dengue viremia titer, antibody response pattern, and virus serotype correlate with disease severity.</a> The Journal of Infectious Diseases. 181 (1), 2-9 (2000).</li><li>Khandia, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulation+of+Dengue/Zika+Virus+Pathogenicity+by+Antibody-Dependent+Enhancement+and+Strategies+to+Protect+Against+Enhancement+in+Zika+Virus+Infection.">Modulation of Dengue/Zika Virus Pathogenicity by Antibody-Dependent Enhancement and Strategies to Protect Against Enhancement in Zika Virus Infection.</a> Frontiers of Immunology. 9, 597 (2018).</li><li>Londono-Renteria, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+relevant+in+vitro+human+model+for+the+study+of+Zika+virus+antibody-dependent+enhancement.">A relevant in vitro human model for the study of Zika virus antibody-dependent enhancement.</a> Journal of General Virology. 98 (7), 1702-1712 (2017).</li><li>Ganger, M. T., Dietz, G. D., Ewing, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+common+base+method+for+analysis+of+qPCR+data+and+the+application+of+simple+blocking+in+qPCR+experiments.">A common base method for analysis of qPCR data and the application of simple blocking in qPCR experiments.</a> BMC Bioinformatics. 18 (1), 534 (2017).</li><li>Renn, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+quantitative+real-time+RT-PCR+assay+for+determining+expression+profiles+of+types+I+and+III+interferon+subtypes.">High-throughput quantitative real-time RT-PCR assay for determining expression profiles of types I and III interferon subtypes.</a> Journal of Visualized Experiments. (97), e52650 (2015).</li><li>McArthur, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dengue+vaccines:+recent+developments,+ongoing+challenges+and+current+candidates.">Dengue vaccines: recent developments, ongoing challenges and current candidates.</a> Expert Review of Vaccines. 12 (8), 933-953 (2013).</li><li>Priyamvada, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humoral+cross-reactivity+between+Zika+and+dengue+viruses:+implications+for+protection+and+pathology.">Humoral cross-reactivity between Zika and dengue viruses: implications for protection and pathology.</a> Emerging Microbes and Infections. 6 (5), 33 (2017).</li><li>Dai, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+basis+of+antibody-mediated+neutralization+and+protection+against+flavivirus.">Molecular basis of antibody-mediated neutralization and protection against flavivirus.</a> IUBMB Life. 68 (10), 783-791 (2016).</li><li>Dai, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structures+of+the+Zika+Virus+Envelope+Protein+and+Its+Complex+with+a+Flavivirus+Broadly+Protective+Antibody.">Structures of the Zika Virus Envelope Protein and Its Complex with a Flavivirus Broadly Protective Antibody.</a> Cell Host &amp; Microbe. 19 (5), 696-704 (2016).</li><li>Sirohi, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+3.8+A+resolution+cryo-EM+structure+of+Zika+virus.">The 3.8 A resolution cryo-EM structure of Zika virus.</a> Science. 352 (6284), 467-470 (2016).</li><li>George, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prior+Exposure+to+Zika+Virus+Significantly+Enhances+Peak+Dengue-2+Viremia+in+Rhesus+Macaques.">Prior Exposure to Zika Virus Significantly Enhances Peak Dengue-2 Viremia in Rhesus Macaques.</a> Scientific Reports. 7 (1), 10498 (2017).</li><li>Morens, D. M., Halstead, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+antibody-dependent+infection+enhancement+of+four+dengue+virus+serotypes+by+monoclonal+and+polyclonal+antibodies.">Measurement of antibody-dependent infection enhancement of four dengue virus serotypes by monoclonal and polyclonal antibodies.</a> Journal of General Virology. 71, 2909-2914 (1990).</li><li>Dejnirattisai, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cross-reacting+antibodies+enhance+dengue+virus+infection+in+humans.">Cross-reacting antibodies enhance dengue virus infection in humans.</a> Science. 328 (5979), 745-748 (2010).</li><li>Priyamvada, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+antibody+responses+after+dengue+virus+infection+are+highly+cross-reactive+to+Zika+virus.">Human antibody responses after dengue virus infection are highly cross-reactive to Zika virus.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 113 (28), 7852-7857 (2016).</li><li>Charles, A. S., Christofferson, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Utility+of+a+Dengue-Derived+Monoclonal+Antibody+to+Enhance+Zika+Infection+In+Vitro.">Utility of a Dengue-Derived Monoclonal Antibody to Enhance Zika Infection In Vitro.</a> PLoS Currents. 8, (2016).</li><li>Swanstrom, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dengue+Virus+Envelope+Dimer+Epitope+Monoclonal+Antibodies+Isolated+from+Dengue+Patients+Are+Protective+against+Zika+Virus.">Dengue Virus Envelope Dimer Epitope Monoclonal Antibodies Isolated from Dengue Patients Are Protective against Zika Virus.</a> MBio. 7 (4), (2016).</li></ol>

다른 DENV serotypes 에이드로 이어지는 DENV 항 체의 분11효과적인 백신 개발을 방해 했다. ZIKV 같은 가족 Flaviviridae에 속해 있으며 다른 flaviviruses, 특히 DENV12와 상당한 상 동. ZIKV와 DENV에 대 한 항 체를 중화의 주요 목표 두 바이러스13,,1415사이 매우 높은 구조 및 제 사기 순서 상 동을 공유 하는 봉...

모기 품 어진 바이러스 성 질병 가운데 Zika 감염1가장 임상적으로 중요 한 중 하나입니다. 감염은 flavivirus ZIKV는, 대부분의 경우에는 기본 벡터1,2 Aedes aegypti 사용에 의해 발생 합니다. 그러나, 일부 ZIKV 발생3주 벡터로 Aedes albopictus 보고 연구 있다. 많은 경우에서 무 증상 감염 이지만, 가장 일반적인 증상은 발열, 두통, 근육 통증2. 아무 치료 또는 백신 ZIKV 감염에 사용할 수 있는 이며 사용 가능한 치료는 주로 지원. 남아메리카에 있는 ZIKV의 최근 발발 microcephaly2라는 태아에 neurodevelopmental 장애에 약 20-fold 증가 질병의 심한 경우에 지도 했다. 남미 지역 여러 arboviruses DENV 및 웨스트 나 일 바이러스에 발병으로 조사 여부 다른 flavivirus(es)에 이전 면역 역할 ZIKV 감염 및 질병의 심각도에 결정적 이다.
연령대에 걸쳐 바이러스는 호스트 셀 기계를 정복 하 고 항 바이러스 반응 억제 infectivity의 그들의 기회를 증가 하는 다른 전략을 진화 했다. 모두의 가장 매혹적인 중 현상 에이드4그들의 복제를 향상 시키기 위해 바이러스에 의해 호스트 미리 면역 항 체의 사용 이다. DENV의 모든 4 개의 serotypes에 걸쳐 ADE 잘 공부 하 고 바이러스 titers 및 질병 결과5,,67증가 입증 되었습니다. 이전 체 외 연구에서 우리는 기존의 기본 인간의 면역 세포8DENV 면제 때문에 ZIKV 복제의 향상을 나타났습니다. 우리는 또한 관련 생체 외에서 메서드 기본 셀에 ZIKV 복제 향상 DENV 기존의 항 체의 기능을 정량화를 시연 했다.
우리가 개발한 프로토콜 DENV 중화 TCID 50에 대 한 테스트는 인간의 혈 청 샘플 사용 또는 플 라크 감소 중립화 시험 (PRNT) 분석 실험, 생물학으로 관련 된 셀 또는 셀 ZIKV 감염 시킬 수 있는 조직에서 파생 된 ZIKV 함께.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:773px;" width="773">
	<colgroup>
		<col />
		<col span="2" />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:259px;">Fetal Bovine Serum&#160;</td>
			<td style="width:119px;">GEMINI</td>
			<td style="width:119px;">100-106</td>
			<td style="width:277px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:259px;">iCycler&#160;</td>
			<td style="width:119px;">BioRad</td>
			<td style="width:119px;">785BR02188</td>
			<td>Model No. CFX96 Optics Module</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:259px;">Microfuge 18 Centrifuge</td>
			<td style="width:119px;">Beckman Coulter&#160;</td>
			<td style="width:119px;">367160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:259px;">Nanodrop-1000</td>
			<td style="width:119px;">Thermoscientific&#160;</td>
			<td style="width:119px;">1072</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:259px;">Quantifast SYBR-One step RT-PCR kit&#160;</td>
			<td style="width:119px;">Qiagen&#160;</td>
			<td style="width:119px;">204154</td>
			<td>Used for 1 step RT-qPCR</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:259px;">RNeasy RNA Isolation Kit&#160;</td>
			<td style="width:119px;">Qiagen&#160;</td>
			<td style="width:119px;">74106</td>
			<td>Used for RNA extraction</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:259px;">RPMI-medium&#160;</td>
			<td style="width:119px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">11875093</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

quantification of antibody-dependent enhancement of the zika virus in primary human cells

Flavivirus Zika Guillain-바레 증후군 등 유아, microcephaly 신경 합병증의 최근 출현은 심각한 공공 안전 문제를 가져왔다. 위험 요인 중 항 체 의존 향상 (ADE) 포즈 가장 중요 한 위협을 Zika 바이러스 (ZIKV)의 최근 재 출현은 주로 지역 인구는 다른 밀접 하 게 관련을 사전 면제의 상태 flaviviruses, 특히 뎅기열 바이러스 (DENV) 여기, 우리 ZIKV 감염 기본 인간 세포 또는 세포에 DENV에 대 한 인간의 혈 청 항 체의 효과 측정에 대 한 프로토콜을 설명 합니다.

그림 1, 에이드 프로토콜 수행에 관련 된 모든 단계의 단계별 도표 그림이 이다. 그것은 DENV에 기존의 면역 인 에이드의 ZIKV의 전체 절차를 보여주는 회로도입니다. 그림 2 는 어떻게 인간의 혈 청 샘플 세 가지 그룹으로 분류 되었다: DENV 감염 확인 샘플 이라고 DENV에 감염 된 그룹, DENV 항 체 확인 샘플은 DENV 노출 그룹으로 하 고 ?...

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Quantification of Antibody-dependent Enhancement of the Zika Virus in Primary Human Cells

우리는, 사용 하 여 인간의 혈 청 기본 인간 세포 감염 부 량 정량 실시간 중 합 효소 연쇄 반응에 의해 Zika 바이러스 감염에 뎅기열 바이러스에 대 한 기존의 면역의 효과 평가 하는 방법을 설명 합니다.

기본 인간 세포에서 Zika 바이러스의 항 체 의존 향상의 정량화

The recent emergence of the flavivirus Zika and neurological complications, such as Guillain-Barr&#233; syndrome and microcephaly in infants, has brought ...

이 방법은 실제 인간 환자 혈청 및 1 차적인 인간 면역 세포를 사용하여 Zika 바이러스 감염에 뎅기열 바이러스에 대하여 기존 면제의 효력을 평가하기 위하여 이용될 수 있습니다. 실제 인간 환자 혈청 샘플과 인간 1 차 세포의 사용은 사전 면역 세라 및 항체에 의한 Zika 바이러스의 항체 의존성 향상에 대한 심층적인 통찰력을 제공합니다. 이 방법은 다른 인간 세포에 있는 바이러스 감염을 강화하기 위하여 환자의 혈액 내의 항체의 기능에 통찰력을 제공합니다.바이러스 감염 수준이 검출을 위해 충분히 높지 만 세포를 압도하거나 데이터 해석을 방해하지 않을 만큼 충분히 낮다는 것을 확인하는 것이 중요합니다. 멸균, 평평한 바닥 96-웰 플레이트에서 잘 세포 배양 배지의 100 마이크로리터에서 제4 세포에 세 번 10번 을 파종하여 시작한다. 모든 세포가 도금되었을 때, 플레이트를 섭씨 37도 및 이산화탄소 인큐베이터 5%에 놓고 해동된 인간 혈청 시료를 혈청 프리 배지에 10배 연속 희석합니다.바이러스 솔루션 및 세포에 희석제를 추가하기 전에 모든 면역 세럼에 대한 혈청 희석 및 희석 계수를 일정하게 유지해야 합니다. 다음으로, Zika 바이러스는 신속하게 얼음에 주식을 전송하기 전에 1 ~ 2 분 동안 섭씨 37도 수조에 재고 솔루션을 균주. 혈청 알리쿼트에 Zika 바이러스의 감염 동등한 부피의 0.1 복합성을 추가하고 뎅기열 바이러스 항체가 Zika virions와 복합체를 형성할 수 있도록 1 시간 동안 세포 배양 인큐베이터에 플레이트를 배치합니다.인큐베이션이 끝나면 우물당 100마이크로리터의 PBS로 세포를 세척하고 각 웰에 50마이크로리터의 면역 복합체를 추가합니다. 2 시간 인큐베이션 후, 배지를 제거하고 우물당 100 마이크로리터의 PBS로 우물을 두 번 씻아 면역 복합체및 부착되지 않은 비리온을 완전히 제거합니다. 그런 다음 10%의 태아 소 혈청으로 보충된 세포 배양 배지의 웰당 100 마이크로리터로 세포를 공급한다.그런 다음 세포를 세포 배양 인큐베이터로 48시간 동안 되돌려 보입니다. 감염 이틀 후, 각 웰에 10%의 베타 머카토에탄올이 있는 세포 리시스 버퍼 250 마이크로리터를 첨가하기 전에 잘 100마이크로리터의 멸균 PBS로 세포를 두 번 세척한다. 파이펫은 리스시 공정속도를 높이고 세포 리스를 1.5 밀리리터 튜브로 살균하기 위해 긁힘으로 적어도 5번 위아래로 감았다.각 튜브에 70%에탄올의 동일한 볼륨을 추가하고 용액을 4~5회 위아래로 피펫합니다. lysate 서스펜션이 명확하면 각 솔루션을 원심 분리를 위해 2밀리리터 수집 튜브에 레이블이 부착된 실리카 기반 컬럼으로 전송합니다. 동일한 수집 튜브에 컬럼을 유지하는 흐름을 버리고 두 번째 원심 분리를 위해 각 열에 700 마이크로리터의 Wash 버퍼 1을 추가합니다.흐름을 폐기한 후, 세척당 500 마이크로리터의 세차 버퍼 2개로 컬럼을 두 번 더 헹구십시오. 두 번째 세척 후 컬럼을 새로운 2밀리리터 수집 튜브로 옮겨 다른 원심분리를 합니다. 원심분리를 위해 각 컬럼의 중앙에 42도 의 30 마이크로리터를 추가하고 용출된 RNA를 복구합니다.정량적 실시간 폴리머라제 연쇄 반응 또는 QRTPCR 분석을 위해 반응당 역전사 믹스의 0.25 마이크로리터와 함께 10개의 마이크로몰라 주식으로부터 유전자 특이적 전방 및 역프라이머1개의 마이크로리터를 첨가한다. Zika 바이러스 유전 물질을 인식하는 프라이머는 바이러스 유전자를 검출하고 감염 정량화를 허용할 것입니다. 다음으로, SYBR 그린 믹스의 12.5 마이크로리터를 추가하고 각 반응에 25 마이크로리터의 물을 추가하여 96웰 QPCR 플레이트의 각 웰에 마스터 믹스 15 마이크로리터를 추가합니다.마스터 믹스를 사용하는 경우, 혼합에 RNA 샘플의 100 나노그램을 추가하고 마스터 믹스를 QRTPCR 플레이트의 개별 우물에 파이펫한다. 샘플은 동일한 QRTPCR 플레이트에서 트리플리케이트로 실행되어야 합니다. 그런 다음 테이블에 설명된 매개 변수에 따라 정량적 PCR 컴퓨터에서 샘플을 실행합니다.시스템 소프트웨어의 용융 곡선 탭을 클릭하여 용융 곡선을 모니터링합니다. 용융 곡선은 하나의 앰플리콘의 존재를 확인하기 위해 특정 유전자에 대한 모든 샘플에서 단일 피크를 보여줍니다. 최적의 결과를 얻으려면 용융 곡선 프로토콜에서 단계 와 최소 보유 시간 사이에 섭씨 0.5도의 온도 증분을 사용합니다.그런 다음 정량화 데이터 탭을 클릭하여 각 샘플에 대한 정량적 주기를 얻고 데이터를 스프레드시트로 내보내 추가 정량화 분석을 합니다. 인간 혈청 샘플은 세 가지 다른 그룹으로 분류될 수 있다: 뎅기열 바이러스 감염 확인 샘플, 뎅기열 바이러스 항체 확인 샘플, 그리고 뎅기열 바이러스가 항체 또는 RNA를 중화하지 않는 건강한 세라. 감염 48 시간 후, QRTPCR 분석은 뎅기열 바이러스 혈청형을 포함하는 대부분의 혈청이 다른 수준에서 Zika 바이러스 복제를 향상시킬 수 있음을 보여줍니다.Zika 바이러스 titres에서 가장 높은 증가는 체증을 함유하는 뎅기열 바이러스 혈청형으로 처리된 대식세포에서 발견되며, 이는 체형 1및 3에 비해 Zika 바이러스의 상대적으로 낮은 유도를 보여준다. 멸균 환경을 유지하고, 적절한 개인 보호 장비를 착용하고, 항상 해동된 바이러스 혈청 샘플과 QPCR 시약을 얼음에 보관하는 것이 중요합니다. 이 프로토콜은 쉽게 환자 혈청의 패널을 사용하여 황열병 바이러스, 뎅기열 바이러스 또는 웨스트 나일 바이러스와 같은 다른 flavivirus의 항체 의존적 향상을 연구하기 위해 수정될 수 있다.이 기술은 arbovirus 또는 바이러스학 필드에 있는 미래 항체 의존적인 향상 연구 결과를 수행하는 데 매우 유용할 것입니다. 적절한 생체 안전 수준 2 개의 개인 보호 장비는 항상 사용되어야하며 모든 바이러스 성 폐기물은 폐기 하기 전에 30 분 동안 10 %의 표백제에서 오염제거해야합니다.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

piggyBac Transposon System Modification of Primary Human T Cells

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기본 인간 T 세포 piggyBac Transposon 시스템 변경

The piggyBac transposon system is naturally active, originally derived from the cabbage looper moth1,2. This non-viral system is plasmid based, most ...

연구

면역학 및 감염병학

Neutrophil Isolation and Analysis to Determine their Role in Lymphoma Cell Sensitivity to Therapeutic Agents

호중구의 분리 및 분석 치료제에 림프종 세포 감도에서 자신의 역할을 확인하는 방법

Neutrophils are the most abundant (40% to 75%) type of white blood cells and among the first inflammatory cells to migrate towards the site of ...

Zika Virus Infectious Cell Culture System and the In Vitro Prophylactic Effect of Interferons

Zika Virus Infectious Cell Culture System and the In Vitro Prophylactic Effect of Interferons

Zika 바이러스 감염 세포 배양 시스템과<em&gt; 체외</em인터페론의&gt; 예방 효과

Zika Virus (ZIKV) is an emerging pathogen that is linked to fetal developmental abnormalities such as microcephaly, eye defects, and impaired growth. ZIKV ...

Dextran Enhances the Lentiviral Transduction Efficiency of Murine and Human Primary NK Cells

Dextran Murine 및 인간의 기본 NK 세포의 Lentiviral 변환 효율 향상

The efficient transduction of specific genes into natural killer (NK) cells has been a major challenge. Successful transductions are critical to defining ...

Rescue and Characterization of Recombinant Virus from a New World Zika Virus Infectious Clone

새로운 세계 Zika 바이러스 전염성 클론으로부터 재조합 바이러스의 구조 및 특성 규명

Infectious cDNA clones allow for genetic manipulation of a virus, thus facilitating work on vaccines, pathogenesis, replication, transmission and viral ...

Zika Virus Specific Diagnostic Epitope Discovery

Zika 바이러스 특정 진단 Epitope 발견

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A Simple Flow Cytometry Based Assay to Determine In Vitro Antibody Dependent Enhancement of Dengue Virus Using Zika Virus Convalescent Serum

A Simple Flow Cytometry Based Assay to Determine In Vitro Antibody Dependent Enhancement of Dengue Virus Using Zika Virus Convalescent Serum

간단한 Cytometry 결정 체 외에서 항 체 의존의 향상 뎅기열 바이러스 Zika 바이러스 미리 혈 청을 사용 하 여 분석 결과 기반으로

Antibody dependent enhancement of infection has been shown to play a major role in Dengue viral pathogenesis. Traditional assays that measure the capacity ...

Evaluation of Zika Virus-specific T-cell Responses in Immunoprivileged Organs of Infected Ifnar1-/- Mice

Evaluation of Zika Virus-specific T-cell Responses in Immunoprivileged Organs of Infected Ifnar1-/- Mice

감염 된 Ifnar1/- 생쥐의 Immunoprivileged 장기에서 Zika 바이러스 관련 T 세포 응답의 평가

The Zika virus (ZIKV) can induce inflammation in immunoprivileged organs (e.g., the brain and testis), leading to the Guillain-Barr&#233; syndrome and ...

Quantification of Efferocytosis by Single-cell Fluorescence Microscopy

단일 세포 형광 현미경 검사 법에 의해 Efferocytosis의 정량화

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Isolation and Quantification of Zika Virus from Multiple Organs in a Mouse

마우스의 여러 장기에서 Zika 바이러스의 격리 및 정량화

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