Name: quantification of antibody-dependent enhancement of the zika virus in primary human cells
Uploaded: 2019-01-18T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Quantification of Antibody-dependent Enhancement of the Zika Virus in Primary Human Cells at JoVE.com

Detta arbete var generöst stöds av 1R21AI129881-01 (till T.M.C.), start-up medel från de nationella framväxande smittsamma sjukdomar laboratorier, och Boston University School of Medicine.

Serumprov som används i denna studie erhölls från mänskliga deltagare av en kohort från Columbia. Provsamling godkändes av intern omprövning board (IRB) vid Universidad de Pamplona (Columbia, Sydamerika) och Los Potios sjukhus8. Proverna lämnades anonymt och utredarna hade ingen åtkomst till patientinformation. Serumprover kontrollerades för DENV serotypen. Proverna var bekräftat för att neutralisera DENV infektion in vitro-. För kontroll användes serumprover från friska in...

<ol>
	<li>Hayes, E. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zika+virus+outside+Africa.">Zika virus outside Africa.</a> Emerging Infectious Diseases. 15, 1347-1350 (2009).</li><li>Grard, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zika+virus+in+Gabon+(Central+Africa)+-+2007:+a+new+threat+from+Aedes+albopictus.">Zika virus in Gabon (Central Africa) - 2007: a new threat from Aedes albopictus.</a> PLoS Neglected Tropical Diseases. 8 (2), 2681 (2014).</li><li>Fauci, A. S., Morens, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zika+Virus+in+the+Americas--Yet+Another+Arbovirus+Threat.">Zika Virus in the Americas--Yet Another Arbovirus Threat.</a> New England Journal of Medicine. 374 (7), 601-604 (2016).</li><li>Hawkes, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhancement+of+the+Infectivity+of+Arboviruses+by+Specific+Antisera+Produced+in+Domestic+Fowls.">Enhancement of the Infectivity of Arboviruses by Specific Antisera Produced in Domestic Fowls.</a> Australian Journal of Experimental Biology and Medical Science. 42, 465-482 (1964).</li><li>Musso, D., Gubler, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zika+Virus.">Zika Virus.</a> Clinical Microbiology Reviews. 29 (3), 487-524 (2016).</li><li>Vaughn, D. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dengue+viremia+titer,+antibody+response+pattern,+and+virus+serotype+correlate+with+disease+severity.">Dengue viremia titer, antibody response pattern, and virus serotype correlate with disease severity.</a> The Journal of Infectious Diseases. 181 (1), 2-9 (2000).</li><li>Khandia, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulation+of+Dengue/Zika+Virus+Pathogenicity+by+Antibody-Dependent+Enhancement+and+Strategies+to+Protect+Against+Enhancement+in+Zika+Virus+Infection.">Modulation of Dengue/Zika Virus Pathogenicity by Antibody-Dependent Enhancement and Strategies to Protect Against Enhancement in Zika Virus Infection.</a> Frontiers of Immunology. 9, 597 (2018).</li><li>Londono-Renteria, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+relevant+in+vitro+human+model+for+the+study+of+Zika+virus+antibody-dependent+enhancement.">A relevant in vitro human model for the study of Zika virus antibody-dependent enhancement.</a> Journal of General Virology. 98 (7), 1702-1712 (2017).</li><li>Ganger, M. T., Dietz, G. D., Ewing, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+common+base+method+for+analysis+of+qPCR+data+and+the+application+of+simple+blocking+in+qPCR+experiments.">A common base method for analysis of qPCR data and the application of simple blocking in qPCR experiments.</a> BMC Bioinformatics. 18 (1), 534 (2017).</li><li>Renn, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+quantitative+real-time+RT-PCR+assay+for+determining+expression+profiles+of+types+I+and+III+interferon+subtypes.">High-throughput quantitative real-time RT-PCR assay for determining expression profiles of types I and III interferon subtypes.</a> Journal of Visualized Experiments. (97), e52650 (2015).</li><li>McArthur, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dengue+vaccines:+recent+developments,+ongoing+challenges+and+current+candidates.">Dengue vaccines: recent developments, ongoing challenges and current candidates.</a> Expert Review of Vaccines. 12 (8), 933-953 (2013).</li><li>Priyamvada, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humoral+cross-reactivity+between+Zika+and+dengue+viruses:+implications+for+protection+and+pathology.">Humoral cross-reactivity between Zika and dengue viruses: implications for protection and pathology.</a> Emerging Microbes and Infections. 6 (5), 33 (2017).</li><li>Dai, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+basis+of+antibody-mediated+neutralization+and+protection+against+flavivirus.">Molecular basis of antibody-mediated neutralization and protection against flavivirus.</a> IUBMB Life. 68 (10), 783-791 (2016).</li><li>Dai, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structures+of+the+Zika+Virus+Envelope+Protein+and+Its+Complex+with+a+Flavivirus+Broadly+Protective+Antibody.">Structures of the Zika Virus Envelope Protein and Its Complex with a Flavivirus Broadly Protective Antibody.</a> Cell Host &amp; Microbe. 19 (5), 696-704 (2016).</li><li>Sirohi, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+3.8+A+resolution+cryo-EM+structure+of+Zika+virus.">The 3.8 A resolution cryo-EM structure of Zika virus.</a> Science. 352 (6284), 467-470 (2016).</li><li>George, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prior+Exposure+to+Zika+Virus+Significantly+Enhances+Peak+Dengue-2+Viremia+in+Rhesus+Macaques.">Prior Exposure to Zika Virus Significantly Enhances Peak Dengue-2 Viremia in Rhesus Macaques.</a> Scientific Reports. 7 (1), 10498 (2017).</li><li>Morens, D. M., Halstead, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+antibody-dependent+infection+enhancement+of+four+dengue+virus+serotypes+by+monoclonal+and+polyclonal+antibodies.">Measurement of antibody-dependent infection enhancement of four dengue virus serotypes by monoclonal and polyclonal antibodies.</a> Journal of General Virology. 71, 2909-2914 (1990).</li><li>Dejnirattisai, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cross-reacting+antibodies+enhance+dengue+virus+infection+in+humans.">Cross-reacting antibodies enhance dengue virus infection in humans.</a> Science. 328 (5979), 745-748 (2010).</li><li>Priyamvada, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+antibody+responses+after+dengue+virus+infection+are+highly+cross-reactive+to+Zika+virus.">Human antibody responses after dengue virus infection are highly cross-reactive to Zika virus.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 113 (28), 7852-7857 (2016).</li><li>Charles, A. S., Christofferson, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Utility+of+a+Dengue-Derived+Monoclonal+Antibody+to+Enhance+Zika+Infection+In+Vitro.">Utility of a Dengue-Derived Monoclonal Antibody to Enhance Zika Infection In Vitro.</a> PLoS Currents. 8, (2016).</li><li>Swanstrom, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dengue+Virus+Envelope+Dimer+Epitope+Monoclonal+Antibodies+Isolated+from+Dengue+Patients+Are+Protective+against+Zika+Virus.">Dengue Virus Envelope Dimer Epitope Monoclonal Antibodies Isolated from Dengue Patients Are Protective against Zika Virus.</a> MBio. 7 (4), (2016).</li></ol>

Korsreaktivitet DENV antikroppar leder till ADE av andra DENV serotyperna har hindrat utvecklingen av ett effektivt vaccin11. ZIKV tillhör samma familj, flavivirus, och har en avsevärd homologi med andra flavivirus, särskilt DENV12. Det främsta målet för neutraliserande antikroppar för både ZIKV och DENV är kuvertet protein, som delar en mycket hög strukturella och Kvartära sekvenshomologi mellan två virus13,1...

Bland de myggor-burna virussjukdomar är Zika infektion en av den mest kliniskt viktigt1. Infektionen orsakas av flavivirus ZIKV som, i de flesta fall använder Aedes aegypti som dess primära vector1,2. Det finns dock studier som rapporterat Aedes albopictus som en primär vektor i vissa ZIKV utbrott3. Även om infektionen är asymtomatiska i många fall, är de vanligaste symtomen feber, huvudvärk och muskel smärta2. Det finns inget botemedel eller vaccin för ZIKV infektion och behandling är mestadels stödjande. Senaste utbrott av ZIKV i södra Amerika ledde till svåra fall av sjukdomen och en cirka 20-fold ökning neurologiska sjukdomen hos foster heter mikrocefali2. Sydamerika är ett område som är endemisk till flera arboviruses såsom DENV och West Nile virus, är det viktigt att undersöka om tidigare immunitet mot andra flavivirus(es) spelar en roll i svårighetsgraden av ZIKV infektioner och sjukdomar.
Genom tiderna har har virus utvecklats olika strategier för att öka deras chans att smittsamhet för att ta över den mottagande cellen maskinen och undertrycka antivirala responsen. En av de mest fascinerande av alla är användningen av värd pre immunförsvaret antikroppar av virus för att förbättra deras replikering med fenomenet ADE4. ADE över alla fyra serotyper av DENV har varit väl studerade och visat att öka viral titrar och sjukdom resultatet5,6,7. I en tidigare in vitro-studie, har vi visat betydande förbättring av ZIKV replikering på grund av befintlig DENV immunitet i primära mänskliga immunceller8. Vi visade också en relevant in vitro-metod för att kvantifiera DENV befintliga antikroppar förmåga att förbättra ZIKV replikering i primära celler.
Det protokoll som vi har utvecklat använder humant serumprover som är testade för DENV neutralisering TCID-50 eller plack minskning neutraliseringstest (PRNT) analyser, tillsammans med ZIKV i biologiskt relevanta celler eller celler som härrör från vävnader som ZIKV kan infektera.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:773px;" width="773">
	<colgroup>
		<col />
		<col span="2" />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:259px;">Fetal Bovine Serum&#160;</td>
			<td style="width:119px;">GEMINI</td>
			<td style="width:119px;">100-106</td>
			<td style="width:277px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:259px;">iCycler&#160;</td>
			<td style="width:119px;">BioRad</td>
			<td style="width:119px;">785BR02188</td>
			<td>Model No. CFX96 Optics Module</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:259px;">Microfuge 18 Centrifuge</td>
			<td style="width:119px;">Beckman Coulter&#160;</td>
			<td style="width:119px;">367160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:259px;">Nanodrop-1000</td>
			<td style="width:119px;">Thermoscientific&#160;</td>
			<td style="width:119px;">1072</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:259px;">Quantifast SYBR-One step RT-PCR kit&#160;</td>
			<td style="width:119px;">Qiagen&#160;</td>
			<td style="width:119px;">204154</td>
			<td>Used for 1 step RT-qPCR</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:259px;">RNeasy RNA Isolation Kit&#160;</td>
			<td style="width:119px;">Qiagen&#160;</td>
			<td style="width:119px;">74106</td>
			<td>Used for RNA extraction</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:259px;">RPMI-medium&#160;</td>
			<td style="width:119px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">11875093</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

quantification of antibody-dependent enhancement of the zika virus in primary human cells

Senaste uppkomsten av flavivirus Zika och neurologiska komplikationer, såsom Guillain-Barrés syndrom och mikrocefali hos spädbarn, har medfört allvarliga offentliga säkerhetsproblem. Bland riskfaktorerna utgör antikroppsberoende enhancement (ADE) den mest betydande hot, som nyligen re-framväxten av zikaviruset (ZIKV) är främst i områden där befolkningen har varit utsatt och är i ett tillstånd av före immunitet mot andra närbesläktade flavivirus, särskilt denguefeber virus (DENV). Här beskriver vi ett protokoll för att kvantifiera effekten av humant serumantikroppar mot DENV på ZIKV infektion i primära mänskliga celler eller cellinjer.

I figur 1finns det en stegvisa Schematisk illustration av alla stegen att genomföra protokollet ADE. Det är en schematisk bild som visar hela förfarandet i ADE av ZIKV på grund av redan existerande immunitet till DENV. Figur 2 visar hur humant serum prover var kategoriseras i tre olika grupper: DENV infektion-bekräftade prover kallas gruppen DENV-infekterade, DENV antikropp-bekräftade prover är avses som gruppen DENV-expon...

Watch this Scientific Journal Video about Quantification of Antibody-dependent Enhancement of the Zika Virus in Primary Human Cells at JoVE.com

Quantification of Antibody-dependent Enhancement of the Zika Virus in Primary Human Cells

Vi beskriver en metod för att utvärdera effekten av redan existerande immunitet mot denguefeber virus på Zika virusinfektion med humant serum, primära mänskliga celler och infektion kvantifiering genom kvantitativ realtids polymeras-kedjereaktion.

Kvantifiering av antikroppsberoende förbättring av zikaviruset i primära mänskliga celler

The recent emergence of the flavivirus Zika and neurological complications, such as Guillain-Barr&#233; syndrome and microcephaly in infants, has brought ...

Denna metod kan användas för att utvärdera effekterna av redan existerande immunitet mot denguevirus på Zika virusinfektion, med hjälp av faktiska mänskliga patienten serum och primära mänskliga immunceller. Användningen av faktiska mänskliga patienten serumprover och mänskliga primära celler ger djupare insikt i antikropp beroende förbättring av Zika virus av pre-immun sera och antikroppar. Denna metod ger insikt i antikropparnas förmåga i en patients blod att förstärka en virusinfektion i andra mänskliga celler.Det är viktigt att se till att virusinfektionsnivåerna är tillräckligt höga för detektion men tillräckligt låg för att inte överväldiga cellerna eller störa datatolkningen. Börja med att så tre gånger tio till de fjärde cellerna i 100 mikroliter av cellodlingsmedium per brunn i en steril, platt botten 96-brunnsplatta. När alla cellerna har pläterats, placera plattan i en 37 grader Celsius och 5%koldioxid inkubator och göra 10 faldig serieutspädningar av tinade humana serumprover i serumfritt medium.Var noga med att hålla serumutspädningarna och spädningsfaktorn konstant för alla pre-immunserumen innan spädningarna tillsätts till viruslösningarna och cellerna. Nästa, tina Zika virus stammar stamlösning i en 37 graders Celsius vattenbad i en till två minuter innan snabbt överföra beståndet till is. Lägg till en 0,1 multiplikitet av infektion motsvarande volym Zika virus till serum alikvoter och placera plattan i cellkulturen inkubatorn i en timme så att denguevirus antikroppar att bilda komplex med Zika virions.I slutet av inkubationen, tvätta cellerna med 100 mikroliter PBS per brunn och tillsätt 50 mikroliter immunkomplex till varje brunn. Efter två timmars inkubation, ta bort mediet och tvätta brunnarna två gånger med 100 mikroliter PBS per brunn för att helt ta bort immunkomplexen och eventuella obundna virioner. Mata sedan cellerna med 100 mikroliter per brunn av cellodlingsmedium kompletterat med 10%fetalt bovinserum.Sedan tillbaka cellerna till cellodlingen inkubatorn i 48 timmar. Två dagar efter infektionen, tvätta cellerna två gånger med 100 mikroliter steril PBS per brunn innan du lägger till 250 mikroliter cell lysbuffert med 10%beta merkaptoetanol till varje brunn. Pipett upp och ner minst fem gånger med repor för att påskynda lysprocessen och överföra cellen lysas till sterila märkta 1,5 milliliter rör.Tillsätt en lika stor volym på 70%etanol till varje rör och pipettera lysatelösningen upp och ner fyra till fem gånger. När lysateupphängningar är tydliga, överför varje lösning till märkta kiseldioxidbaserade kolumner i två milliliter uppsamlingsrör för centrifuger. Kassera genomflödet hålla kolumnerna i samma samlingsrör och tillsätt 700 mikroliter av Wash Buffer 1 till varje kolumn för en andra centrifugeringen.Efter att du har kastat igenom flödet sköljer du kolumnerna ytterligare två gånger med 500 mikroliter Wash Buffer två per tvätt. Efter den andra tvätten överför du kolonnerna till nya två milliliter uppsamlingsrör för en annan centrifuger. Tillsätt 30 mikroliter med 42 grader Celsius RNase-Fritt vatten till mitten av varje kolumn för centrifugering och återhämta det eluerade RNA.För kvantitativ realtids polymeras kedjereaktion eller QRTPCR analys lägga till en mikroliter av genspecifika framåt och omvänd primers från 10 mikromolar lager tillsammans med 0,25 mikroliter av omvänd transkriptas mix per reaktion. Observera att primers som känner igen Zika virus genetiskt material kommer att upptäcka virusgener och möjliggöra infektion kvantifiering. Därefter lägger 12,5 mikroliter av SYBR Green Mix följt av 25 mikroliter vatten till varje reaktion lägga 15 mikroliter av Master Mix i varje brunn av 96-väl QPCR plattan.När du använder en Master Mix, tillsätt 100 nanogram av RNA-provet till mixen och pipettera Master Mix i enskilda brunnar av QRTPCR-plattan. Observera att prover ska köras i tre exemplar på samma QRTPCR-platta. Kör sedan proverna på en kvantitativ PCR-maskin enligt de parametrar som beskrivs i tabellen.Klicka på fliken smältkurva i systemets programvara för att övervaka smältkurvan. Smältkurvan kommer att visa enstaka topp i alla prover för en viss gen för att bekräfta förekomsten av endast en amplikon. För optimala resultat, använd 0,5 grader Celsius temperatursteg mellan steg och en minsta hålltid på 10 sekunder i smältkurvan protokollet.Klicka sedan på fliken kvantifieringsdata för att få en kvantitativ cykel för varje prov och exportera data till ett kalkylblad för ytterligare kvantifieringsanalys. De mänskliga serumproven kan kategoriseras i tre olika grupper:denguevirus infektion bekräftade prover, denguevirus antikropp bekräftade prover, och friska sera med ingen denguevirus neutraliserande antikroppar eller RNA. Efter 48 timmars infektion visar QRTPCR-analys att de flesta sera som innehåller denguevirusserotyp en till fyra antikroppar kan förbättra Zika-virusreplikation på olika nivåer.Den högsta ökningen av Zika virus titrar finns i makrofager behandlas med sera-innehållande denguevirus serotyp två och fyra antikroppar jämfört med serotyp ett och tre som visar en relativt lägre induktion av Zika virus. Det är viktigt att upprätthålla en steril miljö, att bära rätt personlig skyddsutrustning, och att alltid hålla de tinade virusserumproverna och QPCR-reagenserna på is. Detta protokoll kan enkelt modifieras för att studera antikroppsberoende förbättring av andra flavivirus såsom gula febern virus, denguevirus, eller West Nile virus med hjälp av en panel av patientens serum.Denna teknik kommer att vara mycket användbar för att utföra framtida antikroppsberoende förbättringsstudier inom arbovirus- eller virologiområdena. Korrekt utrustning för biosäkerhetsnivå två ska användas hela tiden och allt virusavfall ska saneras i 10%blekmedel under 30 minuter före bortskaffande.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

piggyBac Transposon System Modification of Primary Human T Cells

piggyBac Transposon System Modification of Primary Human T Cells

piggyBac transposon System Ändring av primära humana T-celler

The piggyBac transposon system is naturally active, originally derived from the cabbage looper moth1,2. This non-viral system is plasmid based, most ...

Neutrophil Isolation and Analysis to Determine their Role in Lymphoma Cell Sensitivity to Therapeutic Agents

Neutrofil Isolering och analys för att fastställa deras roll i lymfom Cell Känslighet för terapeutiska medel

Neutrophils are the most abundant (40% to 75%) type of white blood cells and among the first inflammatory cells to migrate towards the site of ...

Zika Virus Infectious Cell Culture System and the In Vitro Prophylactic Effect of Interferons

Zika Virus Infectious Cell Culture System and the In Vitro Prophylactic Effect of Interferons

Zika Virus Infectious cellodlingssystem och<em&gt; In Vitro</em&gt; Profylaktiska effekten av interferoner

Zika Virus (ZIKV) is an emerging pathogen that is linked to fetal developmental abnormalities such as microcephaly, eye defects, and impaired growth. ZIKV ...

Dextran Enhances the Lentiviral Transduction Efficiency of Murine and Human Primary NK Cells

Dextran effektiviserar Lentiviral transduktion murina och mänskliga primära NK-celler

The efficient transduction of specific genes into natural killer (NK) cells has been a major challenge. Successful transductions are critical to defining ...

Rescue and Characterization of Recombinant Virus from a New World Zika Virus Infectious Clone

Räddning och karaktärisering av rekombinant virus från en ny världsinfektiös klon från Zika Virus

Infectious cDNA clones allow for genetic manipulation of a virus, thus facilitating work on vaccines, pathogenesis, replication, transmission and viral ...

Zika Virus Specific Diagnostic Epitope Discovery

Zikaviruset specifika diagnostiska epitop Discovery

High-density peptide microarrays allow screening of more than six thousand peptides on a single standard microscopy slide. This method can be applied for ...

A Simple Flow Cytometry Based Assay to Determine In Vitro Antibody Dependent Enhancement of Dengue Virus Using Zika Virus Convalescent Serum

A Simple Flow Cytometry Based Assay to Determine In Vitro Antibody Dependent Enhancement of Dengue Virus Using Zika Virus Convalescent Serum

En enkel flödescytometri baserat test för att bestämma In Vitro antikropp beroende förbättring av denguefeber Virus använder Zika Virus konvalescent Serum

Antibody dependent enhancement of infection has been shown to play a major role in Dengue viral pathogenesis. Traditional assays that measure the capacity ...

Evaluation of Zika Virus-specific T-cell Responses in Immunoprivileged Organs of Infected Ifnar1-/- Mice

Evaluation of Zika Virus-specific T-cell Responses in Immunoprivileged Organs of Infected Ifnar1-/- Mice

Utvärdering av Zika Virus-specifika T-cell svar i Immunoprivileged organ av infekterade Ifnar1- / - möss

The Zika virus (ZIKV) can induce inflammation in immunoprivileged organs (e.g., the brain and testis), leading to the Guillain-Barr&#233; syndrome and ...

Quantification of Efferocytosis by Single-cell Fluorescence Microscopy

Kvantifiering av Efferocytosis av Single-cell fluorescensmikroskopi

Studying the regulation of efferocytosis requires methods that are able to accurately quantify the uptake of apoptotic cells and to probe the signaling ...

Isolation and Quantification of Zika Virus from Multiple Organs in a Mouse

Isolering och kvantifiering av zikavirus från flera organ i en mus

The methods being presented demonstrate laboratory procedures for the isolation of organs from Zika virus infected animals and the quantification of viral ...