Name: quantification of antibody-dependent enhancement of the zika virus in primary human cells
Uploaded: 2019-01-18T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Quantification of Antibody-dependent Enhancement of the Zika Virus in Primary Human Cells at JoVE.com

Bu eser cömertçe 1R21AI129881-01 (T.M.C. için) başlangıç fonlar Ulusal ortaya çıkan bulaşıcı hastalıklar laboratuvarları ve Boston Üniversitesi Tıp Fakültesi tarafından desteklenmiştir.

Bu çalışmada kullanılan serum numuneleri bir kohort Columbia insan katılımcılardan elde edilmiştir. Örnek koleksiyon Universidad de Pamplona (Columbia, Güney Amerika) ve Los Potios hastane8iç gözden geçirme Kurulu (IRB) tarafından kabul edildi. Örnekleri anonim olarak verilmiştir ve müfettişler hasta bilgi erişim vardı. Serum numuneleri için DENV serotip kontrol edildi. Örnekleri daha fazla DENV enfeksiyon nötralize etmek için teyit edildi tüp bebek. Kumanda pille...

<ol>
	<li>Hayes, E. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zika+virus+outside+Africa.">Zika virus outside Africa.</a> Emerging Infectious Diseases. 15, 1347-1350 (2009).</li><li>Grard, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zika+virus+in+Gabon+(Central+Africa)+-+2007:+a+new+threat+from+Aedes+albopictus.">Zika virus in Gabon (Central Africa) - 2007: a new threat from Aedes albopictus.</a> PLoS Neglected Tropical Diseases. 8 (2), 2681 (2014).</li><li>Fauci, A. S., Morens, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zika+Virus+in+the+Americas--Yet+Another+Arbovirus+Threat.">Zika Virus in the Americas--Yet Another Arbovirus Threat.</a> New England Journal of Medicine. 374 (7), 601-604 (2016).</li><li>Hawkes, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhancement+of+the+Infectivity+of+Arboviruses+by+Specific+Antisera+Produced+in+Domestic+Fowls.">Enhancement of the Infectivity of Arboviruses by Specific Antisera Produced in Domestic Fowls.</a> Australian Journal of Experimental Biology and Medical Science. 42, 465-482 (1964).</li><li>Musso, D., Gubler, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zika+Virus.">Zika Virus.</a> Clinical Microbiology Reviews. 29 (3), 487-524 (2016).</li><li>Vaughn, D. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dengue+viremia+titer,+antibody+response+pattern,+and+virus+serotype+correlate+with+disease+severity.">Dengue viremia titer, antibody response pattern, and virus serotype correlate with disease severity.</a> The Journal of Infectious Diseases. 181 (1), 2-9 (2000).</li><li>Khandia, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulation+of+Dengue/Zika+Virus+Pathogenicity+by+Antibody-Dependent+Enhancement+and+Strategies+to+Protect+Against+Enhancement+in+Zika+Virus+Infection.">Modulation of Dengue/Zika Virus Pathogenicity by Antibody-Dependent Enhancement and Strategies to Protect Against Enhancement in Zika Virus Infection.</a> Frontiers of Immunology. 9, 597 (2018).</li><li>Londono-Renteria, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+relevant+in+vitro+human+model+for+the+study+of+Zika+virus+antibody-dependent+enhancement.">A relevant in vitro human model for the study of Zika virus antibody-dependent enhancement.</a> Journal of General Virology. 98 (7), 1702-1712 (2017).</li><li>Ganger, M. T., Dietz, G. D., Ewing, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+common+base+method+for+analysis+of+qPCR+data+and+the+application+of+simple+blocking+in+qPCR+experiments.">A common base method for analysis of qPCR data and the application of simple blocking in qPCR experiments.</a> BMC Bioinformatics. 18 (1), 534 (2017).</li><li>Renn, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+quantitative+real-time+RT-PCR+assay+for+determining+expression+profiles+of+types+I+and+III+interferon+subtypes.">High-throughput quantitative real-time RT-PCR assay for determining expression profiles of types I and III interferon subtypes.</a> Journal of Visualized Experiments. (97), e52650 (2015).</li><li>McArthur, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dengue+vaccines:+recent+developments,+ongoing+challenges+and+current+candidates.">Dengue vaccines: recent developments, ongoing challenges and current candidates.</a> Expert Review of Vaccines. 12 (8), 933-953 (2013).</li><li>Priyamvada, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humoral+cross-reactivity+between+Zika+and+dengue+viruses:+implications+for+protection+and+pathology.">Humoral cross-reactivity between Zika and dengue viruses: implications for protection and pathology.</a> Emerging Microbes and Infections. 6 (5), 33 (2017).</li><li>Dai, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+basis+of+antibody-mediated+neutralization+and+protection+against+flavivirus.">Molecular basis of antibody-mediated neutralization and protection against flavivirus.</a> IUBMB Life. 68 (10), 783-791 (2016).</li><li>Dai, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structures+of+the+Zika+Virus+Envelope+Protein+and+Its+Complex+with+a+Flavivirus+Broadly+Protective+Antibody.">Structures of the Zika Virus Envelope Protein and Its Complex with a Flavivirus Broadly Protective Antibody.</a> Cell Host &amp; Microbe. 19 (5), 696-704 (2016).</li><li>Sirohi, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+3.8+A+resolution+cryo-EM+structure+of+Zika+virus.">The 3.8 A resolution cryo-EM structure of Zika virus.</a> Science. 352 (6284), 467-470 (2016).</li><li>George, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prior+Exposure+to+Zika+Virus+Significantly+Enhances+Peak+Dengue-2+Viremia+in+Rhesus+Macaques.">Prior Exposure to Zika Virus Significantly Enhances Peak Dengue-2 Viremia in Rhesus Macaques.</a> Scientific Reports. 7 (1), 10498 (2017).</li><li>Morens, D. M., Halstead, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+antibody-dependent+infection+enhancement+of+four+dengue+virus+serotypes+by+monoclonal+and+polyclonal+antibodies.">Measurement of antibody-dependent infection enhancement of four dengue virus serotypes by monoclonal and polyclonal antibodies.</a> Journal of General Virology. 71, 2909-2914 (1990).</li><li>Dejnirattisai, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cross-reacting+antibodies+enhance+dengue+virus+infection+in+humans.">Cross-reacting antibodies enhance dengue virus infection in humans.</a> Science. 328 (5979), 745-748 (2010).</li><li>Priyamvada, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+antibody+responses+after+dengue+virus+infection+are+highly+cross-reactive+to+Zika+virus.">Human antibody responses after dengue virus infection are highly cross-reactive to Zika virus.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 113 (28), 7852-7857 (2016).</li><li>Charles, A. S., Christofferson, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Utility+of+a+Dengue-Derived+Monoclonal+Antibody+to+Enhance+Zika+Infection+In+Vitro.">Utility of a Dengue-Derived Monoclonal Antibody to Enhance Zika Infection In Vitro.</a> PLoS Currents. 8, (2016).</li><li>Swanstrom, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dengue+Virus+Envelope+Dimer+Epitope+Monoclonal+Antibodies+Isolated+from+Dengue+Patients+Are+Protective+against+Zika+Virus.">Dengue Virus Envelope Dimer Epitope Monoclonal Antibodies Isolated from Dengue Patients Are Protective against Zika Virus.</a> MBio. 7 (4), (2016).</li></ol>

Olan diğer DENV serotipi ADE için önde gelen DENV antikorların bir etkili aşı11gelişimine engel. ZIKV Flaviviridae, aynı ailesine ait ve diğer flaviviruses, özellikle DENV12ile önemli bir Homoloji vardır. Hem ZIKV hem de DENV için antikorları nötralize ana hedef çok yüksek yapısal ve Kuvaterner sırası Homoloji arasında iki virüs13,14,15hisse zarf proteindir. Y...

Sivrisinekler yoluyla bulaşan viral hastalıklar arasında Zika enfeksiyon en klinik olarak önemli1biridir. Enfeksiyon flavivirus kullandığı, çoğu durumda, Aedes aegypti onun birincil vektör1,2ZIKV neden olur. Ancak, Aedes albopictus bazı ZIKV salgınlar3birincil bir vektör olarak bildirdin çalışma vardır. Enfeksiyon birçok durumda asemptomatik olmakla birlikte, hastalığın en yaygın belirtileri ateş, baş ağrısı ve kas ağrı2vardır. Herhangi bir tedavi veya aşı ZIKV enfeksiyonu için kullanılabilir ve mevcut tedavi çoğunlukla destek oluyor. ZIKV Güney Amerika'da son salgınları şiddetli vakalarda hastalık ve yaklaşık 20-fold microcephaly2adlı fetusa nörogelişimsel bozuklukta artışa yol açtı. Güney Amerika DENV ve Batı Nil virüsü gibi birkaç arboviruses endemik bir alan olduğu için diğer flavivirus(es) için önceden dokunulmazlık, ZIKV enfeksiyonlar ve hastalık şiddetinde bir rol oynar olup olmadığını araştırmak çok önemlidir.
Çağlar boyunca, virüs infektivite konak hücre makine almak ve antiviral yanıt bastırmak için onların şansını artırmak için farklı stratejiler geliştirmişlerdir. Biri en büyüleyici tüm ana bilgisayar önceden bağışıklık antikorlar yanında onların çoğaltma fenomen ADE4ile geliştirmek için virüs kullanımıdır. ADE DENV tüm dört serotipleri arasında iyi okudu ve viral titreleri ve hastalık sonucu5,6,7artırmak için kanıtlanmış oldu. Bir önceki tüp bebek çalışmada, önceden var olan birincil insan bağışıklık hücreleri8DENV bağışıklık nedeniyle ZIKV çoğaltma önemli enhancement göstermiştir. Biz de ZIKV çoğaltma primer hücre içinde geliştirmek için DENV önceden varolan antikor kapasitesini ölçmek için ilgili bir tüp bebek yöntemi gösterdi.
TCID-50 DENV nötralize için test edilir insan serum numuneleri geliştirdiğimiz protokolünü kullanan veya plak azaltma nötralizasyon testi (PRNT), ZIKV biyolojik ilgili hücre veya hücreleri ZIKV bulaşabilir dokulardan türetilmiş birlikte deneyleri.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:773px;" width="773">
	<colgroup>
		<col />
		<col span="2" />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:259px;">Fetal Bovine Serum&#160;</td>
			<td style="width:119px;">GEMINI</td>
			<td style="width:119px;">100-106</td>
			<td style="width:277px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:259px;">iCycler&#160;</td>
			<td style="width:119px;">BioRad</td>
			<td style="width:119px;">785BR02188</td>
			<td>Model No. CFX96 Optics Module</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:259px;">Microfuge 18 Centrifuge</td>
			<td style="width:119px;">Beckman Coulter&#160;</td>
			<td style="width:119px;">367160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:259px;">Nanodrop-1000</td>
			<td style="width:119px;">Thermoscientific&#160;</td>
			<td style="width:119px;">1072</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:259px;">Quantifast SYBR-One step RT-PCR kit&#160;</td>
			<td style="width:119px;">Qiagen&#160;</td>
			<td style="width:119px;">204154</td>
			<td>Used for 1 step RT-qPCR</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:259px;">RNeasy RNA Isolation Kit&#160;</td>
			<td style="width:119px;">Qiagen&#160;</td>
			<td style="width:119px;">74106</td>
			<td>Used for RNA extraction</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:259px;">RPMI-medium&#160;</td>
			<td style="width:119px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">11875093</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

quantification of antibody-dependent enhancement of the zika virus in primary human cells

Flavivirus Zika ve Guillain-Barré sendromu ve bebeklerde, microcephaly gibi nörolojik komplikasyonlara son ortaya çıkması ciddi genel güvenlik endişeleri getirdi. Son yeniden doğuş Zika virüs (ZIKV) öncelikle alanlarda nerede nüfus maruz kalmış ve öncesi dokunulmazlık için diğer yakından ilgili bir durumda olduğu gibi risk faktörleri arasında en ciddi tehdit, antikor bağımlı geliştirme (ADE) teşkil etmektedir flaviviruses, özellikle dang virüs (DENV). Burada, DENV karşı insan serum antikor ZIKV enfeksiyon birincil insan hücreleri veya hücre hatları üzerinde etkisini miktarının bir protokol açıklayın.

Şekil 1' de, ADE Protokolü taşımak için ilgili tüm adımları adım adım grafiksel gösterimi var. Bu DENV için ZIKV ADE tüm prosedürü önceden varolan dokunulmazlık nedeniyle gösteren bir Şematik diyagramı. Şekil 2 gösterir nasıl insan serum örnekleri üç farklı gruplar halinde kategorize: DENV enfeksiyon doğruladı örnekleri DENV enfekte grup olarak bilinir, DENV antikor-teyit örnekleri DENV maruz kalan ...

Watch this Scientific Journal Video about Quantification of Antibody-dependent Enhancement of the Zika Virus in Primary Human Cells at JoVE.com

Quantification of Antibody-dependent Enhancement of the Zika Virus in Primary Human Cells

Biz insan serumu, birincil insan hücreleri ve enfeksiyon miktar nicel gerçek zamanlı polimeraz zincir reaksiyonu tarafından kullanarak Zika virüs enfeksiyonu önceden varolan bağışıklık dang virüs karşı etkisini değerlendirmek için bir yöntem açıklanmaktadır.

Antikor-bağımlı donanýmýn birincil insan hücrelerinde Zika şunun miktar

The recent emergence of the flavivirus Zika and neurological complications, such as Guillain-Barr&#233; syndrome and microcephaly in infants, has brought ...

Bu yöntem, dang virüsüne karşı önceden var olan bağışıklığın Zika virüs enfeksiyonu üzerindeki etkilerini değerlendirmek için, gerçek insan hasta serumu ve birincil insan bağışıklık hücreleri kullanılarak kullanılabilir. Gerçek insan hasta serum örnekleri ve insan birincil hücrelerinin kullanımı ön-bağışıklık sera ve antikorlar tarafından Zika virüsü antikor bağımlı geliştirme içine daha derin bir fikir sağlar. Bu yöntem, diğer insan hücrelerinde bir virüs enfeksiyonu geliştirmek için bir hastanın kanında antikorların yeteneği içine fikir sağlar.Viral enfeksiyon düzeylerinin tespit için yeterince yüksek ama hücreleri bunaltacak kadar düşük olduğundan veya veri yorumlanmasına müdahale edilemeyeceğini sağlamak önemlidir. Steril, düz alt 96-iyi plaka iyi başına hücre kültürü orta 100 mikrolitre dördüncü hücrelere üç kez on tohumlama ile başlayın. Tüm hücreler kaplandığında, tabağı 37 derece santigrat ve %5 karbondioksit inkübatöre yerleştirin ve çözülmüş insan serumu örneklerinin 10 kat seri seyreltilmesini serumsuz ortamda yapın.Virüs çözümleri ve hücrelere seyreltme eklemeden önce tüm pre-immün serumlar için serum seyreltme ve seyreltme faktörü sabit tutmak için emin olun. Daha sonra, çözülme Zika virüsü, stokları hızla buza aktarmadan önce 37 derece lik bir su banyosunda 1-2 dakika santigrat derecede santigrat siler. Serum aliquots için Zika virüsü enfeksiyon eşdeğer hacmi 0.1 çokluk ekleyin ve dang virüsü antikorları Zika virions ile kompleksleri oluşturmak için izin vermek için bir saat boyunca hücre kültürü kuluçka plaka yerleştirin.Kuluçka sonunda, iyi başına PBS 100 mikrolitre ile hücreleri yıkayın ve her kuyuya bağışıklık kompleksi 50 mikrolitre ekleyin. İki saatlik kuluçkadan sonra, orta yıkın ve tamamen bağışıklık kompleksleri ve herhangi bir bekar virions kaldırmak için iyi başına PBS 100 mikrolitre ile iki kez kuyuları yıkayın. Daha sonra hücre kültürü orta kuyu başına 100 mikrolitre ile hücreleri beslemek% 10 fetal sığır serum uymaktadır.Sonra hücreleri 48 saat boyunca hücre kültürü kuluçka makinesine geri döndürün. Enfeksiyondan iki gün sonra, her kuyuya %10 beta mercaptoetanol ile 250 mikrolitre hücre lisis tamponu eklemeden önce hücreleri her biri 100 mikrolitre steril PBS ile iki kez yıkayın. Pipet, lysis işlemini hızlandırmak ve hücre lisatlarını steril etiketli 1,5 mililitrelik tüplere aktarmak için çizilme ile en az beş kez yukarı ve aşağı.Her tüpe %70 etanol eşit hacim ekleyin ve lysat çözeltisini 4-5 kez yukarı ve aşağı inceleyip. Lysat süspansiyonları net olduğunda, santrifüj için iki mililitrelik toplama tüplerinde her çözeltiyi etiketli silika bazlı kolonlar halinde aktarın. Aynı toplama tüpleri sütunları tutarak akış atın ve ikinci bir santrifüj için her sütuna Wash Tampon 1 700 mikrolitre ekleyin.Akış tan sonra, yıkama başına iki yıkama Tamponu 500 mikrolitre ile iki kez daha kolonları durulayın. İkinci yıkamadan sonra, başka bir santrifüj için yeni iki mililitrelik toplama tüpleri sütunaktarın. Santrifüj için her sütunun ortasına 42 derece RNase-Free su 30 mikrolitre ekleyin ve eluted RNA kurtarmak.Kantitatif gerçek zamanlı polimeraz zincir reaksiyonu veya QRTPCR analizi için 10 mikromolar stoktan bir mikrolitre gen spesifik ileri ve ters astarlar ve reaksiyon başına 0,25 mikrolitre ters transkriptaz karışımı ekleyin. Zika virüsü genetik materyalini tanıyan astarların viral genleri tespit edeceğini ve enfeksiyon nicelemesine olanak sağlayacağını unutmayın. Daha sonra, 96-well QPCR plaka her kuyuda Master Mix 15 mikrolitre ekleyerek her reaksiyona 25 mikrolitre su ardından SYBR Green Mix 12,5 mikrolitre ekleyin.Master Mix kullanırken, Karışıma 100 nanogram RNA numunesi ekleyin ve Master Mix'i QRTPCR plakasının tek tek kuyularına pipetlendirin. Örneklerin aynı QRTPCR plakasında üç kat olarak çalıştırılması gerektiğini unutmayın. Daha sonra örnekleri tabloda belirtilen parametrelere göre nicel bir PCR makinesinde çalıştırın.Erime eğrisini izlemek için sistem yazılımındaki erime eğrisi sekmesini tıklatma. Erime eğrisi, belirli bir genin sadece bir amplicon varlığını doğrulamak için tüm örneklerde tek tepe gösterecektir. Optimum sonuçlar için, erime eğrisi protokolünde adımlar arasında 0,5 derece sıcaklık artışları ve en az 10 saniye tutma süresi kullanın.Ardından, her örnek için nicel bir döngü elde etmek ve daha fazla niceleme çözümlemesi için verileri bir elektronik tabloya aktarmak için niceleme veri sekmesini tıklatın. İnsan serum örnekleri üç farklı gruba kategorize edilebilir: dang virüsü enfeksiyonu doğrulanmış örnekler, dang virüsü antikor onaylı örnekler, ve hiçbir dang virüsü nötralize antikorlar veya RNA ile sağlıklı sera. 48 saatlik enfeksiyondan sonra QRTPCR analizi, dang virüsü içeren seraların çoğunun 1-4 antikor içeren seranın Zika virüsü replikasyonunu farklı seviyelerde geliştirebildiğini göstermektedir.Zika virüs titres en yüksek artış zika virüsü nispeten daha düşük indüksiyon gösteren serotip bir ve üç göre sera içeren dang virüsü serotip iki ve dört antikorile tedavi makrofajlarda bulunur. Steril bir ortam sağlamak, uygun kişisel koruma ekipmanLarını takmak ve çözülmüş virüs serum örneklerini ve QPCR reaktiflerini her zaman buz üzerinde tutmak önemlidir. Bu protokol kolayca hasta serum bir panel kullanarak sarı humma virüsü, dang virüsü veya Batı Nil virüsü gibi diğer flavivirus antikor bağımlı geliştirme çalışma için değiştirilebilir.Bu teknik, arbovirüs veya viroloji alanlarında gelecekteki antikora bağımlı geliştirme çalışmaları yürütmek için son derece yararlı olacaktır. Uygun biyogüvenlik seviyesi her zaman iki kişisel koruma ekipmanı kullanılmalı ve tüm viral atıklar imha edilmeden önce 30 dakika boyunca %10 çamaşır suyu yla dezenfekte edilmelidir.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

piggyBac Transposon System Modification of Primary Human T Cells

piggyBac Transposon System Modification of Primary Human T Cells

Primer insan T hücrelerinin piggyBac Transposon Sistem Modifikasyon

The piggyBac transposon system is naturally active, originally derived from the cabbage looper moth1,2. This non-viral system is plasmid based, most ...

Neutrophil Isolation and Analysis to Determine their Role in Lymphoma Cell Sensitivity to Therapeutic Agents

Nötrofil İzolasyon ve Analiz Terapötik Ajanların için Lenfoma Hücre Duyarlılık kendi Rolü belirleme

Neutrophils are the most abundant (40% to 75%) type of white blood cells and among the first inflammatory cells to migrate towards the site of ...

Zika Virus Infectious Cell Culture System and the In Vitro Prophylactic Effect of Interferons

Zika Virus Infectious Cell Culture System and the In Vitro Prophylactic Effect of Interferons

Zika Virüs Bulaşıcı hücre kültürü sistemine ve<em&gt; İn Vitro</emİnterferonların&gt; profilaktik etkisi

Zika Virus (ZIKV) is an emerging pathogen that is linked to fetal developmental abnormalities such as microcephaly, eye defects, and impaired growth. ZIKV ...

Dextran Enhances the Lentiviral Transduction Efficiency of Murine and Human Primary NK Cells

Dextran fare ve insan birincil NK hücreleri Lentiviral iletim verimliliğini artırır

The efficient transduction of specific genes into natural killer (NK) cells has been a major challenge. Successful transductions are critical to defining ...

Rescue and Characterization of Recombinant Virus from a New World Zika Virus Infectious Clone

Yeni Bir Dünyadan Rekombinant Virüsün Kurtarılması ve Karakterizasyonu Zika Virüsü Bulaşıcı Klon

Infectious cDNA clones allow for genetic manipulation of a virus, thus facilitating work on vaccines, pathogenesis, replication, transmission and viral ...

Zika Virus Specific Diagnostic Epitope Discovery

Zika virüs belirli tanılama Epitope bulma

High-density peptide microarrays allow screening of more than six thousand peptides on a single standard microscopy slide. This method can be applied for ...

A Simple Flow Cytometry Based Assay to Determine In Vitro Antibody Dependent Enhancement of Dengue Virus Using Zika Virus Convalescent Serum

A Simple Flow Cytometry Based Assay to Determine In Vitro Antibody Dependent Enhancement of Dengue Virus Using Zika Virus Convalescent Serum

Basit Akış Sitometresi Vitro antikor bağımlı Enhancement-in dang virüs Zika virüs nekahat Serum kullanarak belirlemek için tahlil dayalı

Antibody dependent enhancement of infection has been shown to play a major role in Dengue viral pathogenesis. Traditional assays that measure the capacity ...

Evaluation of Zika Virus-specific T-cell Responses in Immunoprivileged Organs of Infected Ifnar1-/- Mice

Evaluation of Zika Virus-specific T-cell Responses in Immunoprivileged Organs of Infected Ifnar1-/- Mice

Virüslü Ifnar1- / - farelerin Immunoprivileged organlarında Zika virüs özgü T hücreli yanıt-e doğru değerlendirilmesi

The Zika virus (ZIKV) can induce inflammation in immunoprivileged organs (e.g., the brain and testis), leading to the Guillain-Barr&#233; syndrome and ...

Quantification of Efferocytosis by Single-cell Fluorescence Microscopy

Efferocytosis tek hücreli floresans mikroskobu tarafından miktar

Studying the regulation of efferocytosis requires methods that are able to accurately quantify the uptake of apoptotic cells and to probe the signaling ...

Isolation and Quantification of Zika Virus from Multiple Organs in a Mouse

Farede Birden Fazla Organdan Zika Virüsünün İzolasyon ve Nicelikselleştirilmesi

The methods being presented demonstrate laboratory procedures for the isolation of organs from Zika virus infected animals and the quantification of viral ...