Name: complementary use of microscopic techniques and fluorescence reading in studying cryptococcus-amoeba interactions
Uploaded: 2019-06-22T13:00:00
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이 작품은 남아프리카 공화국의 국립 연구 재단 (보조금 번호 : UID 87903)과 자유 국가의 대학에서 보조금에 의해 지원되었다. 우리는 또한 우리의 현미경 연구 기간 동안 피터 반 와이크와 핸리 그로블러가 제공하는 서비스와 지원에 감사드립니다.

크립토코커스 네오포르만 및 일부 아칸타모에바 카스텔라니 균주는 생체 안전성 수준-2(BSL-2) 병원체로 간주된다; 따라서, 연구원은 이 유기체로 일할 때 적당한 예방 조치를 취해야 합니다. 예를 들어, 실험실 직원은 실험실 코트, 장갑 및 눈 보호와 같은 특정 교육 및 개인 보호 장비 (PPE)가 있어야합니다. 생물학적 안전 캐비닛(레벨 2)은 감염을 일으킬 수 있는 절차에 사용되어야<sup ...

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논문에서, 아메바가 크립토 코카인 세포와 상호 작용할 때 발생할 수있는 가능한 결과를 밝히기 위해 다른 기술이 성공적으로 사용되었습니다. 또한, 우리는 Cryptococcus-amoeba 상호 작용의 결과에 3-하이드록시 지방산의 효과를 보여주기 위해 관심이 있었습니다.
사용된 첫번째 기술은 정지 심상을 렌더링하는 공초점 현미경 검사법이었습니다. 이 기술의 주요 단점은 특?...

미생물은 토양과 물의 열린 물리적 경계와 같은 다른 생태 틈새 에서 점유하고 번창하기 위해 시간이 지남에 따라 진화, 다른 사람의 사이에서1. 이러한 틈새 시장에서, 미생물은 종종 제한된 자원에 대한 직접 경쟁에 종사; 중요한 것은, 그들은 증가 인구를 수용 할 필요가 자신의 성장이나 공간을 지원하기위해 사용하는 영양소에 대한 2,3. 어떤 경우에, 아메바와 같은 일부 홀로주체 유기체는 심지어 그들의 바이오 매스에서 영양분을 추출하는방법으로 크립토 코카인 세포에 선행 할 수있다 4,5. 차례로, 이것은 그 먹이의 인구 수를 제어하여 영토 지배를 확립 할 수 있습니다. 이러한 약탈적 압력 때문에, 일부 먹이는 압력의 부정적인 영향을 조정하기 위해크립토코칼 캡슐 6과 같은 미생물 인자를 생성하도록 선택될 수 있다. 그러나, 이 압력의 의도하지 않은 결과로, 몇몇 세균은 종 장벽을 교차하고 영양분이 풍부하고이상적인 인체의 밀폐된 공간 같이 7를 식민지화하는 새로운 틈새 시장을 찾아내는 것을 허용하는 요인을 얻습니다 조건. 후자는 크립토 코커스 (C.) 같은지상파 미생물을 설명 할 수있다. 네오포만은 병원성으로 변할 수 있습니다.
이를 위해, 크립토 코카인 세포가 아메바와 가질 수있는 초기 접촉을 연구하는 것이 중요하고이 병원성이 될 그들을 선택할 수있는 방법. 더 구체적으로, 이것은 감염 도중 대식세포에 의해 행동할 때 cryptococcal 세포가 어떻게 행동하는지에 단서를 줄 수 있습니다. 이러한 이유로 아메바는 상대적으로 저렴하고 실험실에서 아메바의 문화를 유지하기 쉽기 때문에 여기에 대식세포의 모델로 선택되었습니다8. 관심의 또한 크립토 코카인 이차 대사 산물 을 조사하는 것이었습니다. 3-하이드록시 지방산9,10 아메바 및 크립토 코카인 세포 사이의 상호 작용에 영향을 미치는.
아메바와 육안으로의 먹이 사이의 상호 작용을 인식하는 간단한 방법은 한천 접시의 표면에 먹이를 사용하여 잔디를 만들고 아메바를 발견하는 것입니다. 한천 판에 플라크 또는 클리어 영역의 시각화는 아메바가 먹이를 먹였을 수 있는 영역을 묘사합니다. 그러나이 매크로 수준에서는 프로세스의 결과만 지적되며 식세포증의 과정은 기계화 될 수 없습니다. 따라서, 세포 대 세포 에 기초하여 과정을 이해하기 위해,11,12를사용할 수 있는 몇 가지 현미경 방법이 있다. 예를 들어, 인큐베이션 챔버를 가진 거꾸로 된 현미경은 식세포와 그 표적13사이의 사건의 시간 경과를 비디오로 기록하는데 사용될 수 있다. 불행히도, 시간 경과 기능을 가진 현미경의 비용으로 인해 실험실이 특히 자원 불량 설정에서 이러한 현미경을 구입하는 것이 항상 가능한 것은 아닙니다.
위의 한계를 피하기 위해, 이 연구는 C. 네오포르만스 비즈 C. 네오포르만스 UOFS Y-1378 및 C. 네오포르만스 LMPE 046아칸타모에바 카스텔라니의 상호작용을 평가하는 순차적 탐구 설계를 제시한다. . 첫째, 정량적 방법 앞에 정성적 방법이 사용됩니다. 정지 심상은 반전된 형광 현미경, 뿐만 아니라 아메바-Cryptococcus 상호 작용을 묘사하는 전송 전자 현미경을 사용하여 캡처됩니다. 이어서 플레이트 리더를 사용하여 형광을 정량화하여 아메바의 효율을 추정하여 크립토코카인 세포를 내화시켰다. 데이터 해석 단계에서 이러한 방법의 결과를 조정할 때 식세포증 시간 경과 비디오를 정독하는 것만큼 중요한 정보를 똑같이 드러낼 수 있습니다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:783px;" width="782">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:312px;">1,4-Diazabicyclo-[2.2.2]-octane</td>
			<td style="width:176px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:123px;">D27802</td>
			<td style="width:172px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">1.5-mL plastic tube&#160;</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:123px;">69715</td>
			<td style="width:172px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">15-mL Centrifuge tube&#160;</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:123px;">7252018</td>
			<td style="width:172px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">50-mL Centrifuge tube&#160;</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:123px;">1132017</td>
			<td style="width:172px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:312px;">8-Well chamber slide</td>
			<td style="width:176px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:123px;">1109650</td>
			<td style="width:172px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:312px;">Acetone</td>
			<td style="width:176px;">Merck</td>
			<td style="width:123px;">SAAR1022040LC</td>
			<td style="width:172px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:312px;">Amoeba strain</td>
			<td style="width:176px;">ATCC&#210;</td>
			<td style="width:123px;">30234TM</td>
			<td style="width:172px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:312px;">ATCC medium 712</td>
			<td style="width:176px;">ATCC&#210;</td>
			<td style="width:123px;">712TM</td>
			<td style="width:172px;">Amoeba medium</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Black 96-well microtiter plate</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:123px;">152089</td>
			<td style="width:172px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:312px;">Centrifuge</td>
			<td style="width:176px;">Hermle</td>
			<td style="width:123px;">-</td>
			<td style="width:172px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:312px;">Chloroform</td>
			<td style="width:176px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:123px;">C2432</td>
			<td style="width:172px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:312px;">Confocal microscope</td>
			<td style="width:176px;">Nikon</td>
			<td>Nikon TE 2000</td>
			<td style="width:172px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td colspan="4" height="21" style="height:21px;width:783px;">Epoxy resin:</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:312px;">[1] NSA</td>
			<td style="width:176px;">[1] ALS</td>
			<td style="width:123px;">[1] R1054</td>
			<td style="width:172px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:312px;">[2] DER 736</td>
			<td style="width:176px;">[2] ALS</td>
			<td style="width:123px;">[2] R1073</td>
			<td style="width:172px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:312px;">[3] ERL Y221 resin</td>
			<td style="width:176px;">[3] ALS</td>
			<td style="width:123px;">[3] R1047R</td>
			<td style="width:172px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:312px;">[4] S1 (2-dimethylaminoethanol)</td>
			<td style="width:176px;">[4] ALS&#160;</td>
			<td style="width:123px;">[4] R1067</td>
			<td style="width:172px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:312px;">Fluorescein isothiocyanate</td>
			<td style="width:176px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:123px;">F4274</td>
			<td style="width:172px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:312px;">Formic Acid</td>
			<td style="width:176px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:123px;">489441</td>
			<td style="width:172px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fluoroskan Ascent FL</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:123px;">374-91038C</td>
			<td style="width:172px;">Microplate reader</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:312px;">Glucose</td>
			<td style="width:176px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:123px;">G8270</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:312px;">Glutaraldehyde</td>
			<td style="width:176px;">ALS</td>
			<td style="width:123px;">R1009</td>
			<td style="width:172px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:312px;">Hemocytometer</td>
			<td style="width:176px;">Boeco</td>
			<td style="width:123px;">-</td>
			<td style="width:172px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:312px;">Lead citrate</td>
			<td style="width:176px;">ALS</td>
			<td style="width:123px;">R1209</td>
			<td style="width:172px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Liquid Chromatography Mass Spectrometer</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td style="width:172px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:312px;">Methanol</td>
			<td style="width:176px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:123px;">R 34,860</td>
			<td style="width:172px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:312px;">Orbital shaker</td>
			<td style="width:176px;">Lasec&#160;</td>
			<td style="width:123px;">-</td>
			<td style="width:172px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:312px;">Osmium tetroxide</td>
			<td style="width:176px;">ALS</td>
			<td style="width:123px;">R1015</td>
			<td style="width:172px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:312px;">pHrodo Green Zymosan A BioParticles</td>
			<td style="width:176px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:123px;">P35365</td>
			<td style="width:172px;">This is the pH-sensitive dye</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:312px;">Physiological buffer solution</td>
			<td style="width:176px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:123px;">P4417-50TAB</td>
			<td style="width:172px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:312px;">Rotary shaker</td>
			<td style="width:176px;">Labcon</td>
			<td style="width:123px;">-</td>
			<td style="width:172px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td colspan="4" height="21" style="height:21px;width:783px;">Sodium phosphate buffer:</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:312px;">[1] di-sodium hydrogen orthophosphate dihydrate&#160;</td>
			<td style="width:176px;">[1] Merck</td>
			<td style="width:123px;">[1] 106580</td>
			<td style="width:172px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:312px;">[2] sodium di-hydrogen orthophosphate dihydrate</td>
			<td style="width:176px;">[2] Merck&#160;</td>
			<td style="width:123px;">[2] 106345</td>
			<td style="width:172px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:312px;">Transmission electron microscope</td>
			<td style="width:176px;">Philips</td>
			<td>Philips EM 100&#160;</td>
			<td style="width:172px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:312px;">Trypan blue&#160;</td>
			<td style="width:176px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:123px;">T8154</td>
			<td style="width:172px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:312px;">Ultramicrotome</td>
			<td style="width:176px;">Leica</td>
			<td style="width:123px;">EM UC7</td>
			<td style="width:172px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:312px;">Uranyl acetate</td>
			<td style="width:176px;">ALS</td>
			<td style="width:123px;">R1260A</td>
			<td style="width:172px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:312px;">Vacuum dessicator</td>
			<td style="width:176px;">Lasec&#160;</td>
			<td style="width:123px;">-</td>
			<td style="width:172px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:312px;">Vial</td>
			<td style="width:176px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:123px;">29651-U</td>
			<td style="width:172px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:312px;">YNB</td>
			<td style="width:176px;">Lasec&#160;</td>
			<td style="width:123px;">239210</td>
			<td style="width:172px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:312px;">YPD agar</td>
			<td style="width:176px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:123px;">Y-1500</td>
			<td>-</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

complementary use of microscopic techniques and fluorescence reading in studying cryptococcus-amoeba interactions

Cryptococcus 감염을 시뮬레이션하기 위해 환경에서 크립토 코카인 세포의 자연 포식자인 아메바를 대식세포의 모델로 사용할 수 있습니다. 대식세포와 유사한 이 육식 유기체는 식세포증을 사용하여 내면화된 세포를 죽입니다. 공초점 레이저 스캐닝 현미경의 도움으로 크립토 코카인 세포와 아메바 사이의 대화형 순간을 묘사하는 이미지가 캡처됩니다. 전자 현미경의 분해력은 또한 아메바 식품 액포내부에 갇혀있을 때 크립토 코카인 세포의 초구조적 세부 사항을 밝히는 데 도움이됩니다. 식세포증은 지속적인 과정이기 때문에 정량적 데이터가 분석에 통합되어 이미지가 캡처될 때 시점에서 어떤 일이 발생하는지 설명합니다. 구체적으로, 상대 형광 단위는 크립토 코카인 세포를 내화에 아메바의 효율을 정량화하기 위해 판독된다. 이를 위해 크립토코카인 세포는 염료로 염색되어 식품 액포의 산성 환경 내에 한 번 형광이 가해집니다. 함께 사용 하는 경우, 이러한 기술을 통해 수집 된 정보는 아메바에 의해 내면화 될 때 세포의 행동과 운명에 결론을 도출 하는 데 도움이 중요 한 정보를 제공할 수 있습니다., 아마도, 다른 식세포 세포에 의해.

미생물은 육안으로 인식할 수 없는 현미경 유기체입니다. 그러나, 그들의 충격은 피부 감염과 같은 관찰 가능한 임상으로 명백한 질병 귀착될 수 있습니다. 미생물의 특정 측면을 공부 할 때, 자신의 형태에 이르기까지, 부산물, 상호 작용, 회화 및 비디오 증거를 제공 할 수있는 것은 가장 중요하다.
우리는 먼저 크립토 코카인...

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Complementary Use of Microscopic Techniques and Fluorescence Reading in Studying Cryptococcus-Amoeba Interactions

크립토코커스-아메바 상호 작용 을 연구할 때 현미경 기술과 형광 읽기의 상호 보완적 사용

이 논문에서는 스틸, 형광 이미지 및 고해상도 투과 전자 현미경 이미지를 사용하여 연구되는 크립토코카인 세포 및 아메바의 공동 배양을 준비하기 위한 프로토콜을 자세히 설명합니다. 여기에 예시된 것은 정량적 데이터가 이러한 정성적 정보를 보완하는 방법입니다.

To simulate Cryptococcus infection, amoeba, which is the natural predator of cryptococcal cells in the environment, can be used as a model for ...

이 절차의 전반적인 목적은 환경 포식자 아메바에 의해 병원성 곰팡이 종 Cryptococcus neoformans의 phagocytosis를 연구하는 도구로 현미경 을 사용하는 것입니다. 이 비디오는 공초점 레이저 스캐닝 현미경 및 전송 전자 현미경 검사를 사용하여 연구할 크립토 코칼 세포 및 아메배의 공동 배양을 준비하기위한 프로토콜을 자세히 설명합니다. 이러한 기술을 사용하여 얻은 정보는 감염 중에 내면화 될 때 암호 세포의 행동에 대한 통찰력을 얻을 수 있습니다.YPD 천 접시에 테스트 곰팡이 균주를 줄입니다. 섭씨 30도에서 48시간 동안 접시를 배양합니다. 48 시간 된 접시에서 세포의 루프를 긁어 4 %의 포도당으로 보충되는 YNB 국물의 100 밀리리터를 포함하는 250 밀리리터 원추형 플라스크로 접종하십시오.플라스크를 섭씨 30도에서 24시간 동안 로터리 셰이커로 배양합니다. 24시간 잠복기 후, 혈류계를 사용하여 곰팡이 세포를 계산하고 생리적 완충액을 사용하여 밀리리터당 100만 개의 세포로 세포 수를 조절한다. 펩톤 효모 추출물 포도당 국물에 아메바 세포를 재배하여 섭씨 30도에서 일주일 동안 재배합니다.혈전계를 사용하여 아메바 세포를 계산하고 신선한 멸균 ATCC 배지 712로 밀리리터당 세포 수를 1,000만 세포로 조절한다. 이에 따라 트라이판 블루 얼룩을 사용하여 생존 가능성 분석기를 수행합니다. 적어도 80%의 생존력을 보이는 세포와 함께 일하는 것이 좋습니다.표준화된 아메바 세포의 200마이크로리터 서스펜션을 부착 슬라이드의 챔버로 분배합니다. 세포가 섭씨 30도에서 표면에 부착되도록 2시간 동안 지나갑니다. 아메바 세포가 정착하는 동안, 형광균 이소티오야네이트와 표준화 된 크립토 코칼 세포를 얼룩.실온과 어둠 속에서 2 시간 동안 곰팡이 세포를 부드럽게 교반하십시오. 이미 아메바 세포를 포함하는 적절한 챔버에 세척 한 후 스테인드 크립토 코칼 세포의 200 마이크로 리터 현탁액을 분배합니다. 준비된 공동 문화를 섭씨 30도에서 추가로 2시간 동안 배양합니다.코인큐베이션 기간이 끝나면 PBS로 챔버를 두 번 세척하여 비내화 된 크립토 코칼 세포를 포함한 모든 무바운드 아메바 세포를 제거하십시오. 세포를 고치는 데 사용된 글루타랄데히드를 흡인하고 PBS로 챔버를 두 번 세척합니다. 챔버 슬라이드를 분해합니다.공초점 레이저 스캐닝 현미경을 사용하여 공동 배양 된 세포를 볼 수 있습니다. 상기 분석서를 보완하기 위해, 식품 바쿠올 내부에 갇힌 세포의 판독을 선택적으로 허용하는 pHrodo 염료로 크립토코칼 세포를 얼룩지게 한다. 이미 종자 아메바 세포를 포함하는 검은 부착 마이크로티터 플레이트의 우물에 이 스테인드 세포를 분배합니다.로그산스믹 신호를 상대형광 단위로 변환할 수 있는 마이크로 플레이트 판독기에서 형광을 측정합니다. 표준화된 아메바 세포의 5밀리리터를 이미 포함하는 동일한 원심분리기 튜브에 표준화된 크립토코칼 세포의 5밀리리터를 추가합니다. 튜브가 섭씨 30도에서 2시간 동안 방치되도록 허용하십시오.원심 분리 후 상퍼를 흡인. pH 7에서 3시간 동안 3%글루타랄데히드에서 3%글루타랄데히드화나트륨의 1개의 어금니로 공동 배양된 세포를 나타내는 펠릿을 수정한다. 인산나트륨 완충제로 공동 배양 된 세포를 한 번 씻으라.마찬가지로 버퍼링 된 1 % 오스뮴 테트란화물에 1 1 1/2 시간 동안 다시 수정한 다음 세척합니다. 30%50%70%95%와 100%의 등급아톤 계열에서 공동 배양된 세포라고도 하는 TEM 물질을 각각 15분 동안 탈수한다. 여기서 두 가지 변경 사항에서 최종 탈수 단계를 반복합니다.정상 일관성의 에폭시를 계량하여 에폭시 수지를 준비합니다. 에폭시 수지에 물질을 포함. TEM 물질을 섭씨 70도에서 8시간 동안 중합합니다.울트라톤에 유리 나이프가 장착된 16나노미터 섹션을 잘라냅니다. 어둠 속에서 10 분 동안 우라젤 아세테이트로 섹션을 얼룩지게하고 어둠 속에서도 10 분 동안 구연산염을 납으로 얼룩지게합니다. 전송 전자 현미경으로 섹션을 봅니다.예시적인 목적을 위해, 비디오에서, 2개의 격리가 검토되고, 하나는 3-하이드록시 지방산을 생성하고 그렇지 않은 다른 하나. 3-하이드록시 지방산은 크립토코칼 세포의 성장에 역할을 하지 않는 이차 대사산물이다. 다음은 크립토코커스와 아메배 사이의 대화형 순간을 보여주는 스냅샷입니다.점에, 내면화 전후의 크립토 코칼 셀을 관찰할 수 있다. 식세포증을 연구할 때, 라이브 이미징을 사용하는 것이 이상적입니다. 그러나, 연구원이 지속적으로 phagocytosis의 과정을 따르기 위하여 그 같은 현미경에 접근하는 것이 항상 가능하지는 않습니다.이러한 한계를 보완하기 위한 가능한 해결책은 상대형광 단위의 판독을 통해 정량적 데이터로 이미지를 보완하는 것일 수 있다. 막대 그래프는 이미지를 보완하는 데 사용한 데이터의 예입니다. 중요한 것은 이미지 형태의 정성적 데이터와 정량적 데이터는 시간이 지남에 따라 서로 다른 시점에서 취할 수 있다는 것입니다.모든 정보를 피킹함으로써, 하나는 phagocytosis의 과정에서 무슨 일이 일어나는지의 더 큰 이미지를 구성하기 시작할 수 있습니다. 정량적 데이터에서, 3-하이드록시 지방산을 가진 세포가 3-하이드록시 지방산을 생성하지 않는 세포에 비해 아메바 작용에 덜 민감하다는 것을 보는 것은 분명하다. TEM은 고해상도 전력으로 인해 음식 바쿠올의 루멘에 조류의 눈을 볼 수 있기 때문에 특히 강력한 도구이며, 이것은 라이브 이미징뿐만 아니라 스틸 이미지를 검사 할 때 종종 놓친 세부 사항의 종류입니다.이 특정 TEM 현미경 에서, 크립토 코칼 세포의 표면에 protuberances 명확하게 볼 수 있습니다. 이전에는 이러한 세포 표면 구조가 3-하이드록시 지방산이 주변 환경으로 방출되는 채널이라는 이론이 있었습니다. 요점에, 이러한 채널은 내부 조건을 변경하기 위해 아메배의 식품 바쿠올의 루멘에 3 하이드록시 지방산을 전달하는 데 도움이 될 수 있으며, 따라서 세포 생존의 촉진.pHrodo 또는 FITC 같이 음식 vacuole 안쪽같이 낮은 pH에서 단지 형광으로 사용하기 위하여 훨씬 더 나은 얼룩일 지도 모릅니다. 구체적으로 볼 때, pHrodo는 연구원이 내화된 세포에 관한 데이터를 얻을 수 있도록 허용합니다. 이를 위해, 세포는 염색하기 전에 인산염 완충액에서 중단되고 아메바 매체가 중성 pH인 것이 중요합니다.전송 전자 현미경 연산자는 종종 결과가 왜곡되고 전자 폭격에 의해 손상된 현미경 그래프가 있는 지점이기 때문에 제대로 단면에 훈련되어야 합니다. 그것은 연구원이 제시된 프로토콜에서 충분한 정보를 취하고 그들의 자신의 연구 결과에서 그(것)들을 최적화할 수 있을 것이라는 점을 상상됩니다. 더욱이, 연구원은 또한 표적으로 한 대사산물에 대하여 항체를 개발하고 TEM 시험 도중 면역금표지를 포함하여 그들의 면역 형광 현미경 연구 결과 도중 그(것)들을 적용할 수 있습니다.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Complementary Use of Microscopic Techniques and Fluorescence Reading in Studying Cryptococcus-Amoeba Interactions

Use of an Optical Trap for Study of Host-Pathogen Interactions for Dynamic Live Cell Imaging

동적 라이브 셀 이미징에 대한 호스트 병원체 상호 작용 연구를위한 광학 트랩의 사용

Dynamic live cell imaging allows direct visualization of real-time interactions between cells of the immune system1, 2; however, the lack of spatial and ...

연구

면역학 및 감염병학

Use of the EpiAirway Model for Characterizing Long-term Host-pathogen Interactions

장기 호스트 병원체 상호 작용을 특성화에 대한 EpiAirway 모델의 사용

Nontypeable Haemophilus influenzae  (NTHi) are human-adapted Gram-negative bacteria that can cause recurrent and chronic infections of the respiratory ...

Assessing Hepatic Metabolic Changes During Progressive Colonization of Germ-free Mouse by 1H NMR Spectroscopy

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하여 세균없는 마우스 프로 그레시브 콜로니 동안 간장 신진 대사 변경 사항 평가 1 H NMR 분광학

It is well known that gut bacteria contribute significantly to the host homeostasis, providing a range of benefits such as immune protection and vitamin ...

Studying Interactions of Staphylococcus aureus with Neutrophils by Flow Cytometry and Time Lapse Microscopy

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의 상호 작용을 연구<em&gt; 황색 포도상 구균</em&gt; 유동 세포 계측법 및 시간 경과 현미경에 의한 호중구와

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Use of Shigella flexneri to Study Autophagy-Cytoskeleton Interactions

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사용<em&gt; 시겔 flexneri</em&gt; 자식 작용 - 세포 뼈대의 상호 작용을 연구하는

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소설<em&gt; 시험관</em&gt; 인간의 전체 혈액과 내피 세포 사이의 상호 작용 유학을위한 모델

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유전자 또는 약물 치료에 사용하기 위해 HIV-1 생산을 표적 RNA를의 효능 및 독성 평가

Small RNA therapies targeting post-integration steps in the HIV-1 replication cycle are among the top candidates for gene therapy and have the potential ...

Visual and Microscopic Evaluation of Streptomyces Developmental Mutants

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Streptomyces 발달 돌연변이의 영상 및 현미경 평가

Streptomycetes are filamentous soil bacteria belonging to the phylum Actinobacteria that are found throughout the world and produce a wide array of ...

Co-immunoprecipitation Assay for Studying Functional Interactions Between Receptors and Enzymes

수용 체와 효소 간의 기능 상호 작용을 공부에 대 한 분석 결과 Co-immunoprecipitation

Receptor-associated enzymes are the major mediators of cellular activation. These enzymes are regulated, at least in part, by physical interactions with ...

Analysis of SAMHD1 Restriction by Flow Cytometry in Human Myeloid U937 Cells

인간 골수성 U937 세포에서 유세포 분석에 의한 SAMHD1 제한 분석

Sterile &#945;-motif/histidine-aspartate domain-containing protein 1 (SAMHD1) inhibits replication of HIV-1 in quiescent myeloid cells. U937 cells are ...