Name: quantifying leukocyte egress via lymphatic vessels from murine skin and tumors
Uploaded: 2019-01-07T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Quantifying Leukocyte Egress via Lymphatic Vessels from Murine Skin and Tumors at JoVE.com

الكتاب يود أن يشكر الدكتور ماركوس بوثينبيرج لتوفير YUMM 1.1 و YUMM 1.7 الميلانوما مورين خطوط والدكتورة ديبورا ج. فول لتوفير B6. Cg-Tg(CAG-tdKaede) 15Utr الفئران باﻻتفاق مع BRC بتبريد عن طريق بيو الموارد الوطنية من يأمرون، اليابان.

كافة البروتوكولات الحيوانية عليها برعاية الحيوان المؤسسية واستخدام اللجنة في ولاية أوريغون للصحة والعلوم بجامعة.
1-تنظيم دورات تعريفية لالتهاب وطلاء فيتك بينا الماوس
<ol><li>في غطاء الاندفاق الصفحي، تخدير ماوس C57Bl/6 استخدام إيسوفلوراني المتبخرة (حمل في 3-5% إيسوفلوراني والحفا...

على الرغم من أن خروج الكريات البيض من الأنسجة المحيطية، غير اللمفاوية أمر حاسم لبدء والقرار من الاستجابات المناعية، هي غير مفهومة الآليات الجزيئية التي تنظم متدفقة. هذه الفجوة في المعرفة إلى حد كبير بسبب توفر أدوات للقياس الكمي في فيفو. هنا، يمكننا وصف استخدام الفئران فوتوكونفيرتيب?...

الاستجابات المناعية الأنسجة المحيطية تتشكل ليس فقط بتجنيد الكريات البيض إلى المواقع الالتهاب ولكن أيضا بالآليات التي تنظم الاحتفاظ بها بعد ذلك. وهكذا، تمليه الحصانة الواقية التراكمي الآليات الخلوية والجزيئية التي تحدد عما إذا كان يدخل الكريات البيض، يبقى داخل، أو بالأحرى يهاجر خارج الأنسجة الطرفية عبر الأوعية اللمفاوية. الأهم من ذلك، أن الميل للكريات البيضاء للخروج من الأنسجة عن طريق الأوعية اللمفاوية (يطلق عليها الخروج) مرتبط بوظائفها المتخصصة. الخلايا الجذعية (DC) اكتساب سلوك الهجرة استجابة لإشارات النضج مما يؤدي إلى نقل مستضد والعرض التقديمي في تجفيف الغدد الليمفاوية (دلن)، هي عملية ضرورية لمناعة التكيفية1. مسح الخلايا النقوي، مثل الضامة والعدلات، تعمل على إزالة الأنقاض apoptotic عن طريق البلعمه. خلال العدوى البكتيرية، العَدلات خروج الأنسجة والخضوع في نهاية المطاف للمبرمج في دلنس2 ونموذج لالتهاب القولون المستحثة بمفاجآت صيف دبي، والبيانات تدعم الفرضية القائلة بأن خروج بلعم ضروري لحل التهاب المحلية3. ومع ذلك، ما إذا كان يحدث خروج العَدلات وبلعم في جميع السياقات التحريضية، غير معروف. أدلة اللمفاويات T الخروج من حالة ثابتة4،5،،من67و المصابين8ملتهبة4،،من910، 11،12 الأنسجة الطرفية غير اللمفاوية، ويشير إلى أن أوافيكم بنشاط خلايا تي، على الرغم من الإشارات المستندة إلى الأنسجة التي تدفع هذا الخروج ما زالت غير مفهومة. وقد حددت عدة دراسات خروج الإشارات الضرورية للهجرة الاتجاه نحو تجفيف الشعيرات اللمفاوية واللاحقة بما في ذلك يجند chemokine (عزر ج ج) 21 (CCL21) ولها مستقبلات، CCR7،من411 13, يجند chemokine (عزر ج-س-ج) 12 (CXCL12) ومستقبلات CXCR42،14، وسفينجوسيني-1-فوسفات (S1P)10،،من1516. بيد أن هذه الآليات ليست نشطة في جميع السياقات، وعما إذا كانت هي تحديد الخروج من جميع أنواع الخلايا تبقى مسألة مفتوحة. الأهم من ذلك، يتطلب أعمق للآليات التي تحكم متدفقة وأهميتها الوظيفية في المرض زيادة الكمية في فيفو أساليب التحليل.
وقد استخدمت عدة طرق التحديد الكمي للخروج في عدة نماذج حيوانية في الجسم الحي بما في ذلك كانوليشن مباشرة من الأوعية اللمفاوية، التبني نقل السابقين فيفو المسمى الكريات البيضاء، التطبيق عبر الجلد لتتبع الفلورسنت، حقن الجسيمات المسمى، و في فيفو فوتوكونفيرسيون17،18. كانولاتيون المباشر للأوعية اللمفاوية الماوس الزبائ صعبة ومحدودة في الحيوانات الصغيرة بكميات السوائل التي يمكن جمعها. وبالتالي، إلى حد كبير أداء كانوليشن في الحيوانات الكبيرة (على سبيل المثال.، الأغنام) التي تكون فيها مثل هذه المعالجات الجراحية العملية. وتوفر هذه الدراسات أدلة مباشرة لوجود خلايا اللمفاوية سواء النقوي في الليمفاوية10،،من1920. وعلاوة على ذلك، تكشف نماذج الأغنام أن الالتهاب الحاد والمزمن زاد وجود اللمفاويات في الليمفاوية 100-fold حوالي10،21.
التبني نقل الخلايا الليمفاوية المسماة ومحوره وراثيا كشفت الأهم من ذلك أن CCR7 مطلوب للخروج من خلايا CD4 خلايا+ ر من حدة التهاب الجلد5،11، أثناء المعالجة الأولية للخلايا اللمفية مع جزيء صغير S1P مستقبلات مؤثر، يمنع FTY720، إلا بصورة جزئية عن خروج10. من المثير للاهتمام، الخروج من الخلايا الليمفاوية المحولة من التهاب مزمن في الجلد مستقلة CCR710، لكن قد تتطلب جزئيا CXCR49. تجارب نقل التبني، ومع ذلك، توصيل أرقام غير الفسيولوجية السابقين فيفو لمفاوية المنشط والمسمى إلى الأنسجة عن طريق الحقن، مما يغير البيئة النشاط الحيوي للأنسجة والضغوط السائل الخلالي مرتفعة أن فتح الشعيرات اللمفاوية الأولية، وتغيير خصائص النقل على22. كبديل، تطبيق عبر الجلد من fluorescein isothiocyanate (فيتك) في وجود أو عدم وجود المهيجات الجلدية (مثلاً.، والفثالات الفثالات، دبة) أو العدوى23،24 يسمح بالتتبع خلايا متجولة التي تتراكم الراسم وتهاجر إلى دلنس. وبالمثل، المسمى فلوريسسينتلي الأورام توفر وسيلة لتتبع الخلايا البلعمية التي تجتاح الورم المواد25. ووفرت هذه الأساليب الهامة من التبصر في الآليات التي تحكم العاصمة خروج13،14،17،،من2627 ولكن غير قادر على تتبع غير متجولة الخلايا الليمفاوية، وتفسير يمكن تعقدت اللمفاوي خالية من فيتك القابلة للذوبان وبالتالي وضع العلامات غير المهاجرة، LN المقيم وحدات تحكم المجال Dc.
وبدلاً من ذلك، الفحص المجهري إينترافيتال هو أداة قوية تسمح بتتبع في فيفو السكان الكريات البيض فسيولوجيا ذات الصلة في الوقت الحقيقي28،29. المستخدمة في تركيبة مع مراسل الفئران والقائم على جسم في فيفو إيمونوفلوريسسينت العلامات، إينترافيتال مجهرية كشف المجمع المكاني والزماني ديناميات المناعي الخلية الاتجار بالأشخاص، بما في ذلك الهجرة فراغي30 ، التهجير عبر البطانة اللمفاوية، ومرور داخل التجويف اللمفاوية، والهجرة على LN دخول28،31. محدود بالمصروفات، الخبرة الفنية اللازمة لإعداد، اعتماد واسع النطاق لتقنيات التصوير إينترافيتال ومحدودة الإنتاجية للتحديد الكمي لأنواع متعددة من الخلايا. لا يزال، اقتران الأساليب الكمية أن تحليل الديناميات السكانية الأنسجة مع تصوير إينترافيتال سوف توفر البصيرة ميكانيكية إضافية وهامة فيما يخص آليات حركية والهجرة نحو وداخل الشعيرات الدموية اللمفية 18 , 31 , 32.
ونتيجة لذلك، في فيفو فوتوكونفيرسيون برز كوسيلة تسمح الموقع في وضع العلامات، مستقل لنشاط متجولة، والتحديد الكمي لخروج الكريات البيض الفسيولوجية (عندما يقترن بالتدفق الخلوي) في غياب أو وجود التحدي. مؤثرا عن الفئران كايد تيمبل بروتين المعزولة من المرجان ستوني أن يسلك الفلورية الخضراء (كايد الأخضر) حتى تتعرض للضوء فوق البنفسجي، بعدها أنه يحول لا رجعة فيه للأسفار أحمر (كايد أحمر)33. يمكن تعقب الخلايا فوتوكونفيرتيد كما أنها خروج من مواقع الأنسجة المحيطية، وتتراكم في دلنس. وكشفت هذه وأخرى مماثلة فوتوكونفيرتيبلي الماوس نماذج34،35 البيولوجيا الهامة بما في ذلك خروج المكونة من خلايا تي التنظيمية من الجلد36، تعتمد على CXCR4 خلية بالخروج من البقع في بييير37 , تعبئة خلايا الذاكرة المقيم T عند إعادة تحدي الببتيد38، وخروج الكريات البيض واسعة من ورم ميكرونفيرونمينتس39. هنا، نحن إجراء مقارنة وجها لوجه من فوتوكونفيرسيون مع التطبيق فيتك عبر الجلد في سياق الالتهابات الجلدية والعدوى تسمح بإجراء مقارنة مباشرة للبيانات الموجودة باستخدام أسلوب فوتوكونفيرتيبلي. وعلاوة على ذلك، نحن تثبت فوتوكونفيرسيون في أورام مزروع ووصف كفاءة التحويل وخروج انتقائية من ورم ميكرونفيرونمينتس. على هذا النحو، يمكننا القول بأن تطبيق هذه الأساليب المزيد من توضيح بيولوجيا حاسمة لخروج الكريات البيض من الأورام، والتي سيكون لها آثار كبيرة على تفسير intratumoral الكريات البيض التعقيد، الحصانة المضادة للورم، و واستجابة للعلاج.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Collagenase D</td>
			<td>Roche</td>
			<td>11088866001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNase</td>
			<td>Roche</td>
			<td>4536282001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silver-LED-405B light source with optical fiber and collimtor</td>
			<td>Prizmatix Ltd</td>
			<td>V8144</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescein isothiocyanate isomer I</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F4274</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dibutyl phthalate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>524980</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>acetone</td>
			<td>Macron Fine Chemicals</td>
			<td>2440-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>29-guage syringes</td>
			<td>Exel International</td>
			<td>26029</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Evans Blue</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>E2129</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70 um cell strainers</td>
			<td>VWR</td>
			<td>732-2758</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P6148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBSS</td>
			<td>Caisson</td>
			<td>HBL06</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LIVE/DEAD Fixable Aqua Dead Cell Stain Kit</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>L34966</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Purified Anti-mouse CD16/CD32</td>
			<td>Tonbo Biosciences</td>
			<td>70-0161-M001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BV605 CD11c (clone N418)</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>117334</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PerCP-Cy5.5 MHCII (clone M5/114.15.2)</td>
			<td>BD Pharmingen</td>
			<td>562363</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BV421 CD3e (clone 145-2C11)</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>100341</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>APC CD8a (clone 53-6.7)</td>
			<td>TonBo Biosciences</td>
			<td>20-0081-u100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>APC-Cy7 CD45 (clone 30-F11)</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>103116</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BV650 CD19 (clone 6D5)</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>115541</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PercCP-Cy5.5 Ly6C (clone HK1.4)</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>128011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 647 F4/80 (clone BM8)</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>123121</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>APC-Cy7 Ly6G (clone 1A8)</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>127623</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BV711 CD11b (clone M1/70)</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>101241</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BV605 CD45 (clone 30-F11)</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>103155</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BV711 CD4 (clone RM4-5)</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>563726</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albumin (Fraction V)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP1600-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anit-Rat and Anti-Hamster Igk / Negative Control Compensation Particle Set</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>552845</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fortessa Flow Cytometer</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FlowJo v10 Software</td>
			<td>FlowJo</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

quantifying leukocyte egress via lymphatic vessels from murine skin and tumors

خروج الكريات البيض من الأنسجة المحيطة بالغدد الليمفاوية تجفيف ليس فقط الحرجة لمراقبة محصنة وبدء بل تسهم أيضا في القرار ردود الأنسجة المحيطية. بينما يتم استخدام مجموعة متنوعة من أساليب لقياس خروج الكريات البيض من الأنسجة غير اللمفاوية، والأجهزة الطرفية، والآليات الخلوية والجزيئية التي تنظم خروج تعتمد على السياق تظل غير مفهومة. هنا، نحن تصف الاستخدام في الموقع فوتوكونفيرسيون للتحليل الكمي لخروج الكريات البيض من الجلد مورين والأورام. فوتوكونفيرسيون يسمح بمباشرة العلامات من الكريات البيضاء المقيمين داخل الأنسجة الجلدية. على الرغم من تعرض الجلد للضوء فوق البنفسجي يستحث المحلية التحريضية الردود تتسم تتسرب الكريات البيض ويجتازها الأوعية الدموية، في مقارنة وجها لوجه مع التطبيق عبر الجلد لتتبع الفلورسنت، فوتوكونفيرسيون على وجه التحديد تسمية الخلية الجذعية هجرة السكان، وفي نفس الوقت تمكين التحديد الكمي لخروج النقوي واللمفاوية من ميكرونفيرونمينتس الجلدية والأورام. آليات خروج الكريات البيض تظل عنصرا مفقوداً في فهمنا لتعقيد الكريات البيض إينتراتومورال، وهكذا تطبيق الأدوات المبينة في هذا التقرير سوف توفر فريدة من التبصر في ديناميات الورم ميكرونفيرونمينتس محصنة على حد سواء في استقرار الدولة واستجابة للعلاج.

أولاً سعينا إلى تكرار النتائج فوتوكونفيرسيون نشرت في الأدب لتقييم الكفاءة وتحديد التهاب المرتبطة بها في الجلد الماوس. تعرضت بينا الإذن إلى 100 ميغاواط البنفسجي الخفيف (405 نانومتر) لدقيقة 3 كما تم وصفه سابقا33. واحد تعليق خلية المتولدة من الجلد الإذن أو دلنس عنق ...

Watch this Scientific Journal Video about Quantifying Leukocyte Egress via Lymphatic Vessels from Murine Skin and Tumors at JoVE.com

Quantifying Leukocyte Egress via Lymphatic Vessels from Murine Skin and Tumors

هنا، علينا أن نظهر الأساليب في فيفو التقييم الكمي لخروج الكريات البيض من السذاجة، ملتهبة، والجلد مورين الخبيثة. نقوم بمقارنة وجها لوجه بين نموذجين: فوتوكونفيرسيون التطبيق و في الموقع فيتك عبر الجلد. وعلاوة على ذلك، علينا أن نظهر الأداة المساعدة فوتوكونفيرسيون لتعقب خروج الكريات البيض من الأورام الجلدية.

التحديد الكمي لخروج الكريات البيض عن طريق الأوعية اللمفاوية من الجلد مورين والأورام

Leukocyte egress from peripheral tissues to draining lymph nodes is not only critical for immune surveillance and initiation but also contributes to the ...

يوفر تحويل الصور طريقة قابلة للتتبع في الجسم الحي للتحليل الكمي لخارج الكريات البيض للحصول على رؤية ميكانيكية في الإقامة في الكريات البيض وديناميات الخروج من مواقع الأنسجة المتعددة في الدول المريضة. حسناً، هنا نُظهر فائدة تتبع الكريات البيض من الأورام الجلدية. تطبيق هذا الفحص على الأنسجة والأمراض الأخرى محدودة فقط من خلال القدرة على إعطاء الضوء.الميزة الرئيسية لهذه التقنية هو أن يسمح القياس الكمي من السكان الذاتية، بدلا من نقل الخلايا المناعية كما الخروج من الأنسجة الملتهبة في الجسم الحي. للحث على التهاب، بعد التأكد من عدم وجود استجابة لقرصة إصبع القارص، استخدم ميكروبيجيت لإدارة 20 ميكرولترات من الفثالات ثنائي بوتيل أو DBP، إلى الجانب البطني من بين الأذن من فأر Kaede المعدلة وراثيا تخدير. بعد السماح للDBP لتجف، سحب الأذن من خلال شق في قطعة من رقائق الألومنيوم واستخدام الشريط على الوجهين لتأمين الأذن بشكل قاطع إلى احباط مع الجانب الظهري التي تواجه التصاعدي.ثم، ضع أنك تحت مصدر ضوء نانومتر 405 وفوتكونفوتور لمدة ثلاث دقائق عند 100 مللي واط من الطاقة. للعدوى vaccinia، استخدم micropipette لإدارة 5 مرات 10 إلى وحدات تشكيل البلاك 6 من فيروس vaccinia في 10 ميكرولترات من برنامج تلفزيوني على بينا الأذن من فأر Kaede المعدلة تخدير وكزة pinna 25 مرات. بعد 24 ساعة، photoconvert بينا كما أظهرت للتو.عند نقطة الوقت التجريبي المناسبة، حصاد ال بينهاي والعقد الليمفاوية العنقية والأربية واستخدام اثنين من أزواج من ملاقط لتقشر بعيدا الجانب البطني والدوسل من كل بينا. ثم ضع العقد الليمفاوية وقطع الزنى ، مع مواجهة داخل الأذن لأسفل ، في آبار فردية من لوحة 24 بئرًا تحتوي على 1 ملليغرام لكل ملليلتر من Collagenase D و 80 وحدة لكل ملليلتر من Dnase مخففة في HBSS تحتوي على الكالسيوم والمغنيسيوم. استخدام اثنين من الإبر قياس 29 ندف فتح كل كبسولة العقدة الليمفاوية ووضع لوحة في 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة.في نهاية الحضانة ، اضغط على الأنسجة المنهضوية والعقدة الليمفاوية من خلال 70 ميكرون مصافي خلايا النايلون منفصلة للحصول على تعليق خلية واحدة من كل الأنسجة. عندما نمت الأورام إلى الحجم التجريبي المناسب ، حلق أي فرو جديد حول موقع الورم وسحب الورم من خلال ثقب دائري قطع في قطعة من رقائق الألومنيوم. ضع الورم مباشرة تحت مصدر ضوء 405 نانومتر وفوتكونفوتور لمدة 5 دقائق عند 200 مللي واط من الطاقة.بعد 24 ساعة من التحول الضوئي، حصاد الأورام والغدد العضدي والغدد الليمفاوية الإربية من كل واستخدام مقص ل mince الأورام داخل الآبار الفردية من لوحة 24-well التي تحتوي على كولاجيناز D وDNase في HBSS. ضع العقد الليمفاوية في آبار منفصلة وندف فتح كبسولات كما أظهرت للتو. بعد احتضان الأورام لمدة ساعة واحدة والغدد الليمفاوية لمدة نصف ساعة في 37 درجة مئوية ، اضغط على الأنسجة المهضومة من خلال مصافي منفصلة 70 ميكرون للحصول على تعليق خلية واحدة من كل نسيج.لتحليل تعليق الخلايا المفردة عن طريق قياس الخلايا المتدفقة ، قم أولاً بجمع الطحال أو الدم من فأر معدل وراثيا Kaede وتحلل خلايا الدم الحمراء مع عازلة البوتاسيوم كلوريد الأمونيوم. تقسيم الخلايا إلى واحد Kaede FITC غير المحولة واحد Kaede PE السكان و resuspend لون واحد Kaede PE الخلايا في ملليلتر واحد من برنامج تلفزيوني في بئر واحدة من لوحة 24 جيدا، ثم photoconvert الخلايا لمدة 5 دقائق تحت 405 نانومتر ضوء مصدر في 100 مللي واط من الطاقة. بعد ذلك استخدام الخلايا KAede PE المحولة ضوئيًا وخلايا Kaede FITC غير المحولة لضبط الفولتية المُتعدد الضوئي إلى 70 إلى 80٪ من النطاق الإجمالي لكل قناة فلورية.مرة واحدة تم تعيين الفولتية لبروتينات كايدي، تعويض عن جميع البقع الأجسام المضادة الأولية الأخرى باستخدام حبات تعويض الفلوروور واحد المسمى، وفقا لتعليمات الشركة المصنعة. ثم، تشغيل العينات على مقياس التدفق الكيسي وفقا لبروتوكولات التحليل السيتوميتري تدفق القياسية. تكشف عمليات التعليق الأحادية الخلية التي يتم إنشاؤها من جلد الأذن أو عنق الرحم الذي يستنزف العقد الليمفاوية مباشرة بعد التعرض للفوتونلوكونر عن كفاءة تحويل 78٪ لجميع الكريات البيض الإيجابية CD45 في الجلد ، مع عدم وجود خلايا محولة لوحظت في الغدد الليمفاوية المستنزفة.ويكشف القياس الكمي لأعداد الكريات البيض الإيجابية CD45 المتسللة في الأذنين المقلوبتين صفرًا و24 ساعة بعد التحويل، أن التعرض للضوء البنفسجي يسبب زيادة ملحوظة إحصائيًا في تسلل الكريات البيض. هذه الزيادة في CD45 تسرب الكريات البيض إيجابية ومع ذلك، صغيرة بالنسبة للتسلل الناجم عن حافز التهابي قوي مثل فيروس التشنج. كما يزيد تحويل الصور من نفاذية الأوعية الدموية في الأذن المقيسة بمقاسات الأميال، مما يشير معًا إلى أنه يجب النظر في آثار الضوء البنفسجي على التهاب الأنسجة عند تحسين الجرعة ووقت التعرض وتفسير البيانات.تحليل تدفق الخلايا الحرارية للخلايا السرطانية المفككة من الحيوانات المقلوبة ضوئيا يكشف عن تحويل كبير من الخلايا الإيجابية داخل الجسم CD45 من كايدي FITC إيجابية إلى كايدي PE إيجابية, في حين استنزاف الخلايا الليمفاوية العقدة لا تزال غير المحولة. اختلفت كفاءة تحويل الصور من الكريات البيض إيجابية CD45 بشكل كبير بين أنواع الأورام والأحجام، مع CD45 الكريات البيض الإيجابية داخل أورام سرطان الجلد الصغيرة مما يدل على التحول الضوئي الأكثر كفاءة. كما يزيد حجم الورم, انخفاض كفاءة التحويل إلى حوالي 50٪ لا سيما, الميلانين له تأثير لافت على كفاءة التحول الضوئي مع أقصى تحويل ضوئي للخلايا إيجابية CD45 لوحظ داخل الأورام المنتجة للميلانين من حوالي 30٪ فقط في الأورام الصغيرة, أن ينخفض إلى 10٪ كما أحجام الورم الاقتراب 400 ملليمتر مكعب.فحص الورم استنزاف الغدد الليمفاوية 24 ساعة بعد photoconversion يكشف عن وجود خلايا المناعة الإيجابية الحمراء Kaede من مختلف الأنماط الظاهرية، مما يدل على الهجرة الكريات البيض من الورم photoconverted. بعد تطورها ، مهدت هذه التقنية الطريق للباحثين في مجال علم المناعة للكشف عن حركية الحالة الثابتة ودوران الكريات البيض الملتهبة في الأنسجة الطرفية. أثناء محاولة هذا الإجراء، من المهم التأكد من أن الأنسجة ذات الاهتمام فقط هو تحويل فوتونون، كما أن تحويل ضوئي غير مقصود من الأنسجة المحيطة بها سوف يعرض النتائج للخطر.وينبغي أن الأفراد الجدد لهذه الطريقة تحسين وقت التعرض لتحويل الأنسجة الخاصة بهم، فضلا عن مدة من الأوقات قبل جمع الأنسجة يحدث على أساس ديناميات الكريات البيض من الفائدة.

Research

JoVE Journal

Biology

Murine Skin Transplantation

زرع الجلد الفئران

As one of the most stringent and least technically challenging models, skin transplantation is a standard method to assay host T cell responses to ...

Analysis of Physiologic E-Selectin-Mediated Leukocyte Rolling on Microvascular Endothelium

تحليل فسلجي المتداول كريات بيضاء E - Selectin بوساطة بطانة الاوعية الدموية الدقيقة في

E-selectin is a type-1 membrane protein on microvascular endothelial cells that helps initiate recruitment of circulating leukocytes to cutaneous, bone ...

Isolation and Culture of Adult Epithelial Stem Cells from Human Skin

العزلة وثقافة الكبار الخلايا الجذعية الظهارية من الجلد البشري

The homeostasis of all self-renewing tissues is dependent on adult stem cells. As undifferentiated stem cells undergo asymmetric divisions, they generate ...

Isolation of Immune Cells from Primary Tumors

عزل الخلايا المناعية من الأورام الأولية

Tumors create a unique immunosuppressive microenvironment (tumor microenvironment, TME) whereby leukocytes are recruited into the tumor by various ...

gDNA Enrichment by a Transposase-based Technology for NGS Analysis of the Whole Sequence of BRCA1, BRCA2, and 9 Genes Involved in DNA Damage Repair

gDNA Enrichment by a Transposase-based Technology for NGS Analysis of the Whole Sequence of BRCA1, BRCA2, and 9 Genes Involved in DNA Damage Repair

gDNA التخصيب من قبل القائم على تقنية Transposase لتحليل NGS من تسلسل كامل ل<em&gt; BRCA1</em&gt;،<em&gt; BRCA2</em&gt;، و 9 الجينات المسؤولة عن إصلاح الحمض النووي الأضرار

The widespread use of Next Generation Sequencing has opened up new avenues for cancer research and diagnosis. NGS will bring huge amounts of new data on ...

Isolation and Culture of Primary Mouse Keratinocytes from Neonatal and Adult Mouse Skin

عزل وثقافة الكرياتينية الماوس الرئيسية من حديثي الولادة والفأر الكبار الجلد

The keratinocyte (KC) is the predominant cell type in the epidermis, the outermost layer of the skin. Epidermal KCs play a critical role in providing skin ...

Expression of Fluorescent Fusion Proteins in Murine Bone Marrow-derived Dendritic Cells and Macrophages

تعبير البروتينات الفلورية الانصهار في مورين الخلايا الجذعية المشتقة من نخاع العظم والضامة

Dendritic cells and macrophages are crucial cells that form the first line of defense against pathogens. They also play important roles in the initiation ...

Y-27632 Enriches the Yield of Human Melanocytes from Adult Skin Tissues

Y-27632 يثري العائد من الخلايا الصباغية البشرية من أنسجة الجلد الكبار

The isolation and culture of primary melanocytes from skin tissues is very important for biological research and has been widely used for clinical ...

A Murine Model of a Burn Wound Reconstructed with an Allogeneic Skin Graft

نموذج مورين من جرح حرق أعيد بناؤها مع الكسب غير المشروع الجلد الجيني

Trivial superficial wounds heal without complications by primary intention. Deep wounds, such as full thickness burns, heal by secondary intention and ...

Inhibition of Wound Epidermis Formation via Full Skin Flap Surgery During Axolotl Limb Regeneration

تثبيط تكوين بشرة الجرح عن طريق جراحة سديلة الجلد الكاملة أثناء تجديد الأطراف Axolotl

Classical experiments in salamander regenerative biology over the last century have long established that the wound epidermis is a crucial signaling ...