Name: quantifying leukocyte egress via lymphatic vessels from murine skin and tumors
Uploaded: 2019-01-07T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Quantifying Leukocyte Egress via Lymphatic Vessels from Murine Skin and Tumors at JoVE.com

De auteurs bedank Dr. Marcus Bosenberg voor het verstrekken van YUMM 1.1 en YUMM 1.7 lymfkliertest melanoom lijnen en Dr. Deborah J. Fowell voor het verstrekken van B6. CG-Tg(CAG-tdKaede) 15Utr muizen in overleg met RIKEN BRC via de nationale Bio-bron van de MEXT, Japan.

Alle dierlijke protocollen zijn goedgekeurd door de institutionele Animal Care en gebruik Comité bij de Oregon Health & Science University.
1. de inductie van ontsteking en FITC schilderij van muis Pinna
<ol><li>In een laminaire flow-kap, anesthetize een C57Bl/6-muis met behulp van gevaporiseerde isofluorane (induceren bij 3-5% isofluorane en zorg ervoor dat u 1-3% isofluorane; zuurstof debiet op 0.5-1.0 L/min). Zorgen voor goede afstomping door controle op het verlies van pedaal reflex, on...

Hoewel de leukocyten egress uit perifere, niet-lymfoïde weefsels essentieel voor de inleiding en de resolutie van de immuunrespons is, worden de moleculaire mechanismen die egress regeren slecht begrepen. Deze lacunes in de kennis is grotendeels te wijten aan de beschikbaarheid van instrumenten voor de kwantificering in vivo. Hier beschrijven we het gebruik van photoconvertible muizen (Kaede-Tg) te kwantificeren van endogene leukocyte uitgang van de huid en de tumoren en bieden een directe vergelijking van de h...

Perifere weefsel immuunresponsen zijn gevormd, niet alleen door leukocyten aanwerving aan de sites van ontsteking, maar ook door mechanismen die hun latere retentie regelen. Dus, beschermende immuniteit is ingegeven door cumulatieve cellulaire en moleculaire mechanismen die bepalen of een leukocyte invoert, blijft binnen, of liever gezegd migreert is uit perifere weefsel via de lymfevaten. Nog belangrijker is, is de neiging voor leukocyten om af te sluiten van weefsel via de lymfevaten (zogenaamde egress) gekoppeld aan hun gespecialiseerde functies. Dendritische cellen (DC) verwerven trekgedrag in reactie op signalen van de rijping leidt tot antigeen vervoer en presentatie in het aftappen lymfklieren (dLN), een proces dat nodig is voor adaptieve immuniteit1. Opruiming myeloïde cellen, zoals macrofagen en neutrofielen, dienen apoptotic puin door fagocytose te wissen. Tijdens de bacteriële infectie, neutrofielen egress weefsel en uiteindelijk ondergaan apoptosis in dLNs2 en een model van DSS-geïnduceerde colitis, gegevens ondersteunt de hypothese dat de macrofaag egress is noodzakelijk om te lossen lokale ontsteking3. Of neutrofiele en macrofaag egress plaatsvindt in alle inflammatoire contexten, is echter onbekend. Bewijs voor T lymfocyten uitgang uit de steady-state4,,5,,6,7, besmette8en ontstoken4,9,10, 11,12 perifere, niet-lymfoïde weefsels geeft aan dat T-cellen actief recirculate, hoewel de weefsel gebaseerde signalen die deze afslag rijden blijven slecht begrepen. Verschillende studies hebben geïdentificeerd signalen nodig voor de directionele overgang naar het aftappen van lymfatische haarvaten en latere egress inclusief chemokine (C-C motief) ligand 21 (CCL21) en de receptor CCR74,11, 13, chemokine (C-X-C motief) ligand 12 (CXCL12) en de receptor CXCR42,14, en sphingosine-1-fosfaat (S1P)10,15,16. Deze mechanismen zijn niet actief in alle contexten, echter, en of ze bepalen uitgang van alle celtypes blijft een open vraag. Nog belangrijker is, verder vereist inzicht in de mechanismen die egress en haar functionele relevantie in ziekte regeren kwantitatieve in-vivo analysemethoden.
Verschillende methoden zijn gebruikt om het kwantificeren van de uitgang in meerdere diermodellen in vivo met inbegrip van directe cannulation van lymfevaten, adoptief overdracht van ex vivo label leukocyten, transdermale toepassing van fluorescente verklikstoffen, injectie van gelabelde deeltjes, en in vivo photoconversion17,18. Directe cannulation van de lymfevaten afferent muis is moeilijk en kleine dieren beperkt door de hoeveelheid vloeistof die kunnen worden verzameld. Dus cannulation is grotendeels uitgevoerd in grote dieren (bv., schapen) waar dergelijke chirurgische manipulaties zijn praktische. Deze studies leveren direct bewijs voor de aanwezigheid van zowel lymfoïde en myeloïde cellen in lymfe10,19,20. Bovendien, schapen modellen onthullen dat acute en chronische ontsteking lymfocyt aanwezigheid in lymfe steeg met bijna 100-fold10,-21.
Adoptief overdracht van gelabelde en genetisch gemanipuleerde lymfocyten belangrijker is gebleken dat CCR7 vereist voor de uitgang van CD4 is+ T cellen van acuut ontstoken huid5,11, terwijl de voorbehandeling van lymfocyten met het kleine molecuul S1P receptor agonist remt FTY720, slechts gedeeltelijk hun egress-10. Interessant is dat de uitgang van overgedragen lymfocyten van chronisch ontstoken huid is CCR7-onafhankelijke10, maar kan gedeeltelijk CXCR49vereisen. Adoptief overdracht experimenten, leveren niet-fysiologische aantal ex vivo echter geactiveerd en gelabelde lymfocyten in weefsel via injectie, dat de biomechanische omgeving van weefsels en een verhoogde interstitiële vloeistof druk verandert dat opent eerste lymfatische haarvaten en veranderen hun vervoer eigenschappen22. Als een alternatieve, transdermale toepassing van fluoresceïne-isothiocyanaat (FITC) in de aanwezigheid of afwezigheid van dermale irriterende stoffen (bv., dibutylftalaat, DBP) of infectie23,24 voorziet in het bijhouden van fagocytische cellen die accumuleren tracer en migreren naar dLNs. Evenzo fluorescently geëtiketteerde tumoren een manier bieden waarmee bijhouden fagocytische cellen die tumor materiële25hebben opgeslokt. Deze methoden hebben verstrekt belangrijk inzicht verschaffen in de mechanismen die regeren DC uitgang13,14,17,26,27 , maar zijn niet in staat om bij te houden van niet-fagocytische lymfocyten en interpretatie kunnen worden bemoeilijkt door gratis lymfedrainage van oplosbare FITC dus labeling niet-trekvogels, LN resident DCs.
U kunt ook is intravital microscopie een krachtig hulpmiddel waarmee voor in vivo bijhouden van fysiologisch relevante leukocyte populaties in real-time28,29. Gebruikt in combinatie met de verslaggever muizen en antilichaam gebaseerde in vivo immunefluorescentie labeling, intravital microscopie is gebleken dat de complexe ruimtelijke en temporele dynamiek van immuun cel mensenhandel, waaronder interstitiële migratie30 , zielsverhuizing over de lymfatische endotheel, passage binnen de lymfatische lumen en migratie op LN vermelding28,31. Brede goedkeuring van intravital beeldvormingstechnieken wordt beperkt door de kosten, de nodige expertise voor instellen, en doorvoer voor het kwantificeren van meerdere celtypen beperkt. Nog steeds, koppeling van de kwantitatieve methodes die het analyseren van de populatiedynamiek weefsels met intravital imaging geven extra en belangrijk mechanistische inzicht met betrekking tot de mechanismen van de motiliteit en migratie naar en binnen lymfatische haarvaten 18 , 31 , 32.
Bijgevolg, in vivo photoconversion heeft ontpopt als een methode voor het in situ labelen, waarmee onafhankelijk van fagocytische activiteit, en voor de kwantificering van fysiologische leukocyte egress (wanneer in combinatie met stroom cytometry) in de afwezigheid of aanwezigheid van uitdaging. Constitutively express Kaede-Tg muizen een proteïne van stony koraal dat groene fluorescentie (Kaede groene) vertoont totdat blootgesteld aan violet licht, waarna het onomkeerbaar wordt omgezet in rode fluorescentie (Kaede rode)33geïsoleerd. Photoconverted cellen kunnen worden getraceerd als zij egress van perifere weefsel sites en zich ophopen in de dLNs. Dit en andere soortgelijke photoconvertible muis modellen34,35 is gebleken dat belangrijke biologie met inbegrip van constituerende egress van regulatoire T-cellen van huid36, CXCR4-afhankelijke B-cel egress van Peyer van patches37 , mobilisatie van resident T geheugencellen op peptide opnieuw uitdaging38, en brede leukocyte egress tumor microenvironments €39. Hierin, voeren wij een head-to-head vergelijking van photoconversion met transdermaal FITC toepassing in het kader van cutane ontsteking en infectie te voorzien in rechtstreekse vergelijking van bestaande gegevens met de photoconvertible-methode. Bovendien, we tonen photoconversion geïmplanteerde tumoren en beschrijven van de omzettingsefficiëntie en selectieve egress van tumor microenvironments. Zo, we stellen dat verdere toepassing van deze methoden is nodig om te verhelderen van de kritische biologie van leukocyten egress van tumoren, die aanzienlijke gevolgen voor de interpretatie van intratumoral leukocyten complexiteit, anti-tumor immuniteit, zal hebben en respons op therapie.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Collagenase D</td>
			<td>Roche</td>
			<td>11088866001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNase</td>
			<td>Roche</td>
			<td>4536282001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silver-LED-405B light source with optical fiber and collimtor</td>
			<td>Prizmatix Ltd</td>
			<td>V8144</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescein isothiocyanate isomer I</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F4274</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dibutyl phthalate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>524980</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>acetone</td>
			<td>Macron Fine Chemicals</td>
			<td>2440-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>29-guage syringes</td>
			<td>Exel International</td>
			<td>26029</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Evans Blue</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>E2129</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70 um cell strainers</td>
			<td>VWR</td>
			<td>732-2758</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P6148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBSS</td>
			<td>Caisson</td>
			<td>HBL06</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LIVE/DEAD Fixable Aqua Dead Cell Stain Kit</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>L34966</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Purified Anti-mouse CD16/CD32</td>
			<td>Tonbo Biosciences</td>
			<td>70-0161-M001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BV605 CD11c (clone N418)</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>117334</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PerCP-Cy5.5 MHCII (clone M5/114.15.2)</td>
			<td>BD Pharmingen</td>
			<td>562363</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BV421 CD3e (clone 145-2C11)</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>100341</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>APC CD8a (clone 53-6.7)</td>
			<td>TonBo Biosciences</td>
			<td>20-0081-u100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>APC-Cy7 CD45 (clone 30-F11)</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>103116</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BV650 CD19 (clone 6D5)</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>115541</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PercCP-Cy5.5 Ly6C (clone HK1.4)</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>128011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 647 F4/80 (clone BM8)</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>123121</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>APC-Cy7 Ly6G (clone 1A8)</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>127623</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BV711 CD11b (clone M1/70)</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>101241</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BV605 CD45 (clone 30-F11)</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>103155</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BV711 CD4 (clone RM4-5)</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>563726</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albumin (Fraction V)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP1600-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anit-Rat and Anti-Hamster Igk / Negative Control Compensation Particle Set</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>552845</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fortessa Flow Cytometer</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FlowJo v10 Software</td>
			<td>FlowJo</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

quantifying leukocyte egress via lymphatic vessels from murine skin and tumors

Leukocyten egress uit perifere weefsels naar zuig lymfeklieren is niet alleen cruciaal voor immuun toezicht en inleiding maar draagt ook bij aan de resolutie van de perifere weefsel reacties. Hoewel een verscheidenheid van methoden worden gebruikt om te kwantificeren leukocyte egress uit niet-lymfoïde, perifere weefsels, blijven de cellulaire en moleculaire mechanismen die context-afhankelijke egress regeren slecht begrepen. Hier beschrijven we het gebruik van in situ photoconversion voor kwantitatieve analyse van leukocyten egress van lymfkliertest huid en tumoren. Photoconversion zorgt voor de directe etikettering van leukocyten woonachtig binnen cutane weefsel. Hoewel de blootstelling van de huid aan violet licht lokale induceert inflammatoire reacties gekenmerkt door leukocyten infiltreert en vasculaire leakiness, in een head-to-head vergelijking met transdermale toepassing van fluorescente verklikstoffen, photoconversion specifiek Label trekkende dendritische cel populaties en gelijktijdig ingeschakeld de kwantificering van myeloïde en lymfoïde egress van cutane microenvironments en tumoren. De mechanismen van leukocyten egress blijven een ontbrekende onderdeel in ons begrip van intratumoral leukocyten complexiteit zal, en aldus de toepassing van de instrumenten die hierin worden beschreven uniek inzicht in de dynamiek van tumor immuun microenvironments beide bij steady state en in reactie op de therapie.

Wij willen eerst repliceren photoconversion resultaten gepubliceerd in de literatuur tot evaluatie van de doeltreffendheid en de bijbehorende ontsteking in de huid van de muis te bepalen. De pinna oor was blootgesteld aan 100 mW violet licht (405 nm) voor 3 min33zoals hiervoor is beschreven. Eén cel schorsingen gegenereerd op basis van het oor huid of cervicale dLNs onmiddellijk na de blootstelling bleek een omzettingsefficiëntie van 78% van alle CD45+...

Watch this Scientific Journal Video about Quantifying Leukocyte Egress via Lymphatic Vessels from Murine Skin and Tumors at JoVE.com

Quantifying Leukocyte Egress via Lymphatic Vessels from Murine Skin and Tumors

Hier tonen we de methoden voor in vivo kwantificering van leukocyten egress van naïef, ontstoken, en kwaadaardige lymfkliertest huid. Wij voeren een head-to-head vergelijking van twee modellen: transdermaal FITC toepassing en in situ photoconversion. Bovendien tonen wij het nut van photoconversion voor het bijhouden van leukocyten egress van cutane tumoren.

Kwantificeren van de leukocyten Egress via de lymfevaten van lymfkliertest huid en tumoren

Leukocyte egress from peripheral tissues to draining lymph nodes is not only critical for immune surveillance and initiation but also contributes to the ...

Fotoconversie biedt een traceerbare in vivo methode voor de kwantitatieve analyse van leukocyte uitgang voor een mechanistisch inzicht in leukocytenverblijf en exitdynamiek van meerdere weefsellocaties in zieke toestanden. Nou, hier tonen we het nut van leukocyten tracking van cutane tumoren. De toepassing van deze test op andere weefsels en ziekten wordt alleen beperkt door de mogelijkheid om licht toe te dienen.Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat het mogelijk maakt de kwantificering van endogene, in plaats van overgedragen immuuncel populaties als een uitgang van ontstoken weefsels in vivo. Om ontstekingen te veroorzaken, gebruik na bevestiging van een gebrek aan respons op teensnuifje een micropipet om 20 microliter dibutylftalaat of DBP toe te dienen aan de ventrale kant van de oorpinna van een verdoofde Kaede transgene muis. Nadat u de DBP hebt laten drogen, trekt u het oor door een spleet in een stuk aluminiumfolie en gebruikt u dubbelzijdige tape om het oor plat aan de folie te vastzetten met de rugzijde naar boven gericht.Dan, positie dat je direct onder een 405 nanometer lichtbron en photoconvert gedurende drie minuten op 100 milliwatt vermogen. Voor vaccinia-infectie gebruikt u een micropipet om 5 keer 10 toediening toe te dienen aan de 6e plaquevormende eenheden van het vacciniavirus in 10 microliter PBS op de oorpinna van een verdoofde Kaede-transgene muis en prik de pinna 25 keer. 24 uur later, photoconvert de pinna zoals net aangetoond.Oogst op het juiste experimentele tijdstip de pinnae en de cervicale en inguinale lymfeklieren en gebruik twee paar pincet om de ventrale en rugzijde van elke pinna uit elkaar te pellen. Plaats vervolgens de lymfeklieren en de pinna-stukken, met de binnenkant van het oor naar beneden gericht, in individuele putten van een 24-bronplaat met 1 milligram per milliliter Collagenase D en 80 eenheden per milliliter Dnase verdund in HBSS met calcium en magnesium. Gebruik twee naalden van 29 meter om elke lymfekliercapsule open te plagen en plaats de plaat gedurende 30 minuten op 37 graden Celsius.Druk aan het einde van de incubatie op de verteerde pinna- en lymfeklierweefsels via afzonderlijke 70 Micron nylon cel strainers om eencellige suspensies van elk weefsel te verkrijgen. Wanneer de tumoren zijn uitgegroeid tot de juiste experimentele grootte, scheren een nieuw gekweekte vacht rond de tumor site en trek de tumor door een cirkelvormig gat gesneden in een stuk aluminiumfolie. Plaats de tumor direct onder de 405 nanometer lichtbron en fotoconvert gedurende 5 minuten op 200 milliwatt aan stroom.24 uur na de fotoconversie, oogst de tumoren en brachiale en inguinale lymfeklieren van elk dier en gebruik schaar om de tumoren in individuele putten van een 24-put plaat met Collagenase D en DNase in HBSS gehakt. Plaats de lymfeklieren in aparte putten en plaag open de capsules zoals net aangetoond. Na het uitbroeden van de tumoren gedurende een uur en de lymfeklieren gedurende een half uur bij 37 graden Celsius, druk op de verteerde weefsels door middel van aparte 70 Micron strainers om eencellige suspensies van elk weefsel te verkrijgen.Om de eencellige suspensies door stromingscytometrie te analyseren, verzamelt u eerst de milt of bloed van een Kaede-transgene muis en lyse de rode bloedcellen met ammoniumchloride kaliumbuffer. Splits de cellen in een onbekeerde Kaede FITC en een omgezet Kaede PE populatie en resuspend de enkele kleur Kaede PE cellen in een milliliter van PBS in een put van een 24-well plaat, dan fotoconvert de cellen voor 5 minuten onder een 405 nanometer lichtbron op 100 milliwatt van de macht. Gebruik vervolgens de fotogeconverteerde Kaede PE-cellen en de onbekeerde Kaede FITC-cellen om de fotomultiplierspanningen in te stellen op 70 tot 80% van het totale bereik van elk fluorescerend kanaal.Zodra de spanningen voor de Kaede eiwitten zijn ingesteld, compenseren voor alle andere primaire antilichaam vlekken met behulp van enkele fluorofofore gelabeld compensatie kralen, volgens de instructies van de fabrikant. Voer vervolgens de monsters uit op de stroomcytometer volgens de standaardtritometrische analyseprotocollen. Eencellige suspensies gegenereerd uit de oorhuid of cervicale drainerende lymfeklieren onmiddellijk na blootstelling aan fotoconversie onthullen een 78% conversie-efficiëntie van alle CD45 positieve leukocyten in de huid, zonder geconverteerde cellen waargenomen in de drainerende lymfeklieren.Kwantificering van de aantallen infiltrerende CD45 positieve leukocyten in fotogeconverteerde oren nul en 24 uur na de omzetting, toont aan dat blootstelling aan violet licht een statistisch significante toename van leukocyten infiltratie veroorzaakt. Deze toename van CD45 positieve leukocyten infiltratie is echter klein ten opzichte van de infiltratie veroorzaakt door een krachtige ontstekingsprikkel zoals vacciniavirus. Fotoconversie verhoogt ook vasculaire doorlaatbaarheid in de oor pinnae zoals gemeten door Miles test, samen aangeeft dat effecten van violet licht op weefselontsteking moet worden overwogen bij het optimaliseren van de dosis, blootstelling tijd en interpretatie van gegevens.Flow cytometrische analyse van gescheiden tumorcellen van fotoconverteerde dieren onthult een aanzienlijke conversie van intratumorale CD45 positieve cellen van Kaede FITC positief naar Kaede PE positief, terwijl het aftappen van lymfekliercellen onbekeerd blijven. De fotoconversie-efficiëntie van CD45 positieve leukocyten varieerde aanzienlijk tussen tumortypes en maten, met CD45 positieve leukocyten binnen kleine melanoomtumoren die de meest efficiënte fotoconversie aantonen. Als de tumor volumes toenemen, de conversie-efficiëntie daalt tot ongeveer 50%Met name melanine heeft een opvallende invloed op de efficiëntie van de fotoconversie met een maximale fotoconversie van CD45 positieve cellen waargenomen binnen melanine-producerende tumoren van slechts ongeveer 30%in kleinere tumoren, dat daalt tot 10%als de tumor volumes aanpak 400 kubieke millimeter.Het onderzoek van tumorafvoerende lymfeklieren 24 uur na de fotoconversie onthult de aanwezigheid van Kaede rode positieve immuuncellen van verschillende fenotypen, wat aantoont dat leukocyte-emigratie uit de fotoconverteerde tumor. Na de ontwikkeling maakte deze techniek de weg vrij voor onderzoekers op het gebied van immunologie om de kinetiek van steady state en ontstoken leukocytenomzet in perifeer weefsel bloot te leggen. Tijdens een poging tot deze procedure, is het belangrijk om ervoor te zorgen dat alleen het weefsel van belang wordt fotoconverted, als onbedoelde fotoconversie van het omliggende weefsel zal uw resultaten in gevaar brengen.Personen die nieuw zijn bij deze methode moeten de blootstellingstijd voor de omzetting van hun weefsel optimaliseren, evenals de duur van de tijden voordat de weefselverzameling plaatsvindt op basis van de dynamiek van leukocyten van belang.

Research

JoVE Journal

Biology

Murine Skin Transplantation

Murine huidtransplantatie

As one of the most stringent and least technically challenging models, skin transplantation is a standard method to assay host T cell responses to ...

Analysis of Physiologic E-Selectin-Mediated Leukocyte Rolling on Microvascular Endothelium

Analyse van de Fysiologische E-selectine-Mediated Leukocyte Rolling op microvasculaire endotheel

E-selectin is a type-1 membrane protein on microvascular endothelial cells that helps initiate recruitment of circulating leukocytes to cutaneous, bone ...

Isolation and Culture of Adult Epithelial Stem Cells from Human Skin

Isolatie en Cultuur van Volwassen epitheliale stamcellen uit menselijke huid

The homeostasis of all self-renewing tissues is dependent on adult stem cells. As undifferentiated stem cells undergo asymmetric divisions, they generate ...

Isolation of Immune Cells from Primary Tumors

Isolatie van immuuncellen van primaire tumoren

Tumors create a unique immunosuppressive microenvironment (tumor microenvironment, TME) whereby leukocytes are recruited into the tumor by various ...

gDNA Enrichment by a Transposase-based Technology for NGS Analysis of the Whole Sequence of BRCA1, BRCA2, and 9 Genes Involved in DNA Damage Repair

gDNA Enrichment by a Transposase-based Technology for NGS Analysis of the Whole Sequence of BRCA1, BRCA2, and 9 Genes Involved in DNA Damage Repair

gDNA Verrijking door een-Transposase gebaseerde technologie voor NGS analyse van de hele reeks van<em&gt; BRCA1</em&gt;,<em&gt; BRCA2</em&gt;, En 9 genen betrokken bij DNA-schade te herstellen

The widespread use of Next Generation Sequencing has opened up new avenues for cancer research and diagnosis. NGS will bring huge amounts of new data on ...

Isolation and Culture of Primary Mouse Keratinocytes from Neonatal and Adult Mouse Skin

Isolatie en Cultuur van Primaire Muis Keratinocyten Uit Neonatale en Volwassen Muis Huid

The keratinocyte (KC) is the predominant cell type in the epidermis, the outermost layer of the skin. Epidermal KCs play a critical role in providing skin ...

Expression of Fluorescent Fusion Proteins in Murine Bone Marrow-derived Dendritic Cells and Macrophages

Expressie van fluorescerende Fusion eiwitten in lymfkliertest beenmerg-afgeleide dendritische cellen en macrofagen

Dendritic cells and macrophages are crucial cells that form the first line of defense against pathogens. They also play important roles in the initiation ...

Y-27632 Enriches the Yield of Human Melanocytes from Adult Skin Tissues

Y-27632 verrijkt de opbrengst van menselijke melanocyten uit volwassen huidweefsels

The isolation and culture of primary melanocytes from skin tissues is very important for biological research and has been widely used for clinical ...

A Murine Model of a Burn Wound Reconstructed with an Allogeneic Skin Graft

Een Murine Model van een burn wound gereconstrueerd met een allogene huidtransplantatie

Trivial superficial wounds heal without complications by primary intention. Deep wounds, such as full thickness burns, heal by secondary intention and ...

Inhibition of Wound Epidermis Formation via Full Skin Flap Surgery During Axolotl Limb Regeneration

Remming van wond epidermisvorming via volledige huidflapchirurgie tijdens Axolotl Limb Regeneration

Classical experiments in salamander regenerative biology over the last century have long established that the wound epidermis is a crucial signaling ...