Name: quantifying leukocyte egress via lymphatic vessels from murine skin and tumors
Uploaded: 2019-01-07T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Quantifying Leukocyte Egress via Lymphatic Vessels from Murine Skin and Tumors at JoVE.com

Les auteurs tiennent à remercier le Dr Marcus Bosenberg qui YUMM 1.1 et lignes de mélanomes murins YUMM 1.7 et Dr. Deborah J. Fowell permettant B6. CG-Tg(CAG-tdKaede) 15Utr souris en accord avec RIKEN BRC grâce à la Bio-ressource nationale du MEXT, Japon.

Tous les protocoles d’animaux ont été approuvés par le Comité de l’urbanisme à l’Oregon Health & Science University et d’institutionnels animalier.
1. l’induction de l’Inflammation et de la peinture FITC de souris Pinna
<ol><li>Dans une hotte à flux laminaire, anesthésier une souris C57Bl/6 en utilisant isofluorane vaporisé (induire à isofluorane de 3 à 5 % et de maintenir à 1-3 % isofluorane ; débit d’oxygène à 0,5-1,0 L/min). Assurer le bonne anesthetization en...

Bien que l’évacuation de leucocytes de tissus non lymphoïdes périphériques est essentielle pour l’initiation et la résolution des réponses immunitaires, les mécanismes moléculaires qui régissent l’évacuation sont mal compris. Cette lacune dans les connaissances est en grande partie en raison de la disponibilité d’outils permettant la quantification in vivo. Nous décrivons ici l’utilisation de la souris et à quantifier l’évacuation de leucocyte endogène de la peau et des tumeurs et de f...

Réponses immunitaires tissus périphériques sont formés non seulement par le recrutement des leucocytes aux sites d’inflammation, mais aussi par des mécanismes qui régulent leur maintien ultérieur. Ainsi, l’immunité protectrice est dictée par cumulatives mécanismes cellulaires et moléculaires qui déterminent si un leucocyte saisit, séjours au sein, ou plutôt migre dans les tissus périphériques via les vaisseaux lymphatiques. Ce qui est important, la propension des leucocytes à la sortie des tissus par les vaisseaux lymphatiques (appelés egress) est liée à leurs fonctions spécialisées. Les cellules dendritiques (DC) acquièrent un comportement migrateur en réponse aux signaux de maturation conduisant au transport de l’antigène et présentation à drainer des ganglions lymphatiques (RAD), un processus qui est nécessaire à l’immunité adaptative1. Nettoyage des cellules myéloïdes, telles que les macrophages et les neutrophiles, servent à dégager des débris d’apoptose par phagocytose. Au cours de l’infection bactérienne, neutrophiles évacuer les tissus et finalement apoptose dans dLNs2 et dans un modèle de colite induite par le DSS, données soutiennent l’hypothèse que l’évacuation des macrophages est nécessaire à la résolution de l’inflammation locale3. Évacuation des neutrophiles et les macrophages se soit produite dans tous les contextes inflammatoires, cependant, est inconnue. Éléments de preuve pour l’évacuation des lymphocytes T du regime4,5,6,7, infectés8et enflammée4,9,10, 11,12 des tissus périphériques, non lymphoïdes indique que les cellules T recirculer activement, même si les signaux sur tissus qui animent cette sortie restent mal compris. Plusieurs études ont identifié les signaux nécessaires à la migration directionnelle vers capillaires lymphatiques de drainage et ultérieures évacuation y compris ligand chemokine (C-C motif) 21 (CCL21) et son récepteur CCR74,11, 13, ligand chemokine (C-X-C motif) 12 (CXCL12) et son récepteur CXCR42,14et sphingosine-1-phosphate (S1P)10,15,16. Toutefois, ces mécanismes ne sont pas actifs dans tous les contextes, et qu’ils déterminent l’évacuation de tous les types de cellules reste une question ouverte. Ce qui est important, plus les mécanismes qui régissent l’évacuation et sa pertinence fonctionnelle dans la maladie exige que quantitative in vivo des méthodes d’analyse.
Plusieurs méthodes ont été utilisées pour quantifier l’évacuation dans plusieurs modèles animaux in vivo , y compris une canulation directe des vaisseaux lymphatiques, transfert adoptif ex vivo étiqueté leucocytes, application transdermique des traceurs fluorescents, injection de particules marquées et in vivo photoconversion17,,18. Canulation directe des vaisseaux lymphatiques afférents de la souris est difficile et limitée chez de petits animaux par les volumes de liquide pouvant être collectées. Ainsi, canulation a largement été effectuée chez les grands animaux (p. ex.., moutons) où de telles manipulations chirurgicales sont pratiques. Ces études fournissent des preuves directes de la présence de cellules lymphoïdes et myéloïdes dans la lymphe10,19,20. En outre, modèles ovins révèlent que l’inflammation aiguë et chronique ont augmenté de présence de lymphocytes dans les ganglions de presque 100 fois10,21.
Transfert adoptif des lymphocytes étiquetées et génétiquement manipulés a surtout révélé que CCR7 est nécessaire pour l’évacuation des CD4+ T les cellules de5,peau enflammée aiguë11, tandis que le prétraitement des lymphocytes avec la petite molécule agoniste des récepteurs S1P, FTY720, inhibe partiellement leur sortie10. Fait intéressant, l’évacuation des lymphocytes transférés de peau chroniquement enflammée est indépendant du CCR710, mais peut exiger partiellement CXCR49. Expériences de transfert adoptif, cependant, livrer des numéros non physiologiques de ex vivo lymphocytes activés et étiquetées dans les tissus par injection, ce qui altère l’environnement biomécanique des tissus et des pressions élevées de fluide interstitielles qui ouvre les capillaires lymphatiques initiaux et modifier leurs propriétés de transport22. Comme alternative, application transdermique d’isothiocyanate de fluorescéine (FITC) en présence ou en absence d’irritants par voie cutanée (e.g., phtalate de dibutyle, DBP) ou infection23,24 permet le suivi des cellules phagocytaires qui s’accumulent à traceurs et de migrent vers dLNs. De même, tumeurs fluorescent étiquetés fournissent un moyen pour assurer le suivi des cellules phagocytaires qui ont englouti la tumeur matière25. Ces méthodes ont donné un important aperçu les mécanismes qui régissent DC sortie13,14,17,26,27 , mais sont incapables de suivre non phagocytaires lymphocytes et, l’interprétation peuvent être compliquées par drainage lymphatique libre du FITC soluble donc étiquetage non migratrice, LN DCs résidents.
Par ailleurs, la microscopie intravitale est un outil puissant qui permet en vivo suivi des populations de leucocytes physiologiquement pertinentes en temps réel28,29. Utilisé en combinaison avec la souris journaliste et axée sur les anticorps in vivo par immunofluorescence labeling, intravitale microscopie a révélé le complexe spatial et la dynamique temporelle d’immunitaire cellulaire traite, y comprises les migrations interstitielle30 , transmigration à travers l’endothélium lymphatique, le passage dans le lumen lymphatique et la migration sur LN entrée28,31. L’adoption généralisée de techniques d’imagerie intravitale est limitée par la dépense, l’expertise nécessaire pour mettre en place et limité le débit pour quantifier plusieurs types de cellules. Encore, les méthodes quantitatives qui analysent la dynamique des populations de couplage tissus avec imagerie intravitale fournira insight mécanistique supplémentaire et important en ce qui concerne les mécanismes de la motilité et la migration vers et au sein de capillaires lymphatiques 18 , 31 , 32.
Par conséquent, en vivo photoconversion a émergé comme une méthode qui permet d’in situ étiquetage, indépendante de l’activité phagocytaire et la quantification d’évacuation leucocytaire physiologique (lorsqu’il est couplé avec la cytométrie en flux) dans le absence ou présence de défi. Les souris Kaede-Tg expriment constitutivement une protéine isolée de stony corail qui présente une fluorescence verte (Kaede vert) jusqu'à ce que l’exposé à la lumière violette, après quoi il convertit irréversiblement à fluorescence rouge (rouge de Kaede)33. Photoconverted cellules peuvent être suivis comme ils sortir de sites tissulaires périphériques et s’accumulent dans dLNs. Ceci et autres34,des modèles de souris similaires et35 ont révélé importante biologie, y compris la sortie constitutive des lymphocytes T régulateurs de peau36, évacuation des lymphocytes B CXCR4 dépendant de plaques de Peyer37 , la mobilisation des cellules de mémoire résidente T sur le peptide re-défier38et de sortir de leucocyte large du tumeur microenvironnements39. Dans les présentes, nous effectuons une comparaison entre photoconversion avec application FITC transdermique dans le contexte d’inflammation cutanée et d’infection afin de permettre une comparaison directe des données existantes avec la méthode et. En outre, nous montrent photoconversion dans les tumeurs implantés et décrire l’efficacité de conversion et évacuation sélective des micro-environnements tumeur. Par conséquent, nous croyons que davantage l’application de ces méthodes est nécessaires pour élucider la biologie critique d’évacuation de leucocytes de tumeurs, ce qui aura des implications importantes pour l’interprétation de complexité de leucocyte intratumorale, immunité anti-tumorale, et réponse au traitement.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Collagenase D</td>
			<td>Roche</td>
			<td>11088866001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNase</td>
			<td>Roche</td>
			<td>4536282001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silver-LED-405B light source with optical fiber and collimtor</td>
			<td>Prizmatix Ltd</td>
			<td>V8144</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescein isothiocyanate isomer I</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F4274</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dibutyl phthalate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>524980</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>acetone</td>
			<td>Macron Fine Chemicals</td>
			<td>2440-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>29-guage syringes</td>
			<td>Exel International</td>
			<td>26029</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Evans Blue</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>E2129</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70 um cell strainers</td>
			<td>VWR</td>
			<td>732-2758</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P6148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBSS</td>
			<td>Caisson</td>
			<td>HBL06</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LIVE/DEAD Fixable Aqua Dead Cell Stain Kit</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>L34966</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Purified Anti-mouse CD16/CD32</td>
			<td>Tonbo Biosciences</td>
			<td>70-0161-M001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BV605 CD11c (clone N418)</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>117334</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PerCP-Cy5.5 MHCII (clone M5/114.15.2)</td>
			<td>BD Pharmingen</td>
			<td>562363</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BV421 CD3e (clone 145-2C11)</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>100341</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>APC CD8a (clone 53-6.7)</td>
			<td>TonBo Biosciences</td>
			<td>20-0081-u100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>APC-Cy7 CD45 (clone 30-F11)</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>103116</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BV650 CD19 (clone 6D5)</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>115541</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PercCP-Cy5.5 Ly6C (clone HK1.4)</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>128011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 647 F4/80 (clone BM8)</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>123121</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>APC-Cy7 Ly6G (clone 1A8)</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>127623</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BV711 CD11b (clone M1/70)</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>101241</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BV605 CD45 (clone 30-F11)</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>103155</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BV711 CD4 (clone RM4-5)</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>563726</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albumin (Fraction V)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP1600-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anit-Rat and Anti-Hamster Igk / Negative Control Compensation Particle Set</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>552845</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fortessa Flow Cytometer</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FlowJo v10 Software</td>
			<td>FlowJo</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

quantifying leukocyte egress via lymphatic vessels from murine skin and tumors

Sortie de leucocytes des tissus périphériques aux ganglions lymphatiques de drainage n’est pas seulement essentiel pour la surveillance du système immunitaire et initiation mais contribue aussi à la résolution des réactions des tissus périphériques. Bien qu’une variété de méthodes sont utilisées pour quantifier l’évacuation de leucocytes de tissus non lymphoïdes, périphériques, les mécanismes cellulaires et moléculaires qui gouvernent contextuel évacuation restent mal compris. Nous décrivons ici l’utilisation de photoconversion de in situ pour l’analyse quantitative d’évacuation de leucocytes de peau murine et tumeurs. Photoconversion permet l’étiquetage direct des leucocytes résidant dans les tissus cutanés. Bien que l’exposition de la peau aux ultraviolets provoque local réponses inflammatoires caractérisent par des infiltrats de leucocytes et de la perméabilité vasculaire, dans une comparaison entre application transdermique des traceurs fluorescents, photoconversion spécifiquement marqué les populations de migrateurs cellules dendritiques et activé simultanément la quantification d’évacuation myéloïde et lymphoïde de micro-environnements cutanées et tumeurs. Les mécanismes d’évacuation des leucocytes restent un élément manquant dans notre compréhension de la complexité des leucocytes intratumorale, et donc l’application des outils décrits dans les présentes fournira un aperçu unique de la dynamique de la tumeur des micro-environnements immunitaires à steady state et en réponse à la thérapie.

Tout d’abord, nous avons cherché à reproduire photoconversion résultats publiés dans la littérature pour évaluer l’efficacité et de déterminer l’inflammation associée à la peau de souris. Le pavillon de l’oreille a été exposé à la lumière de mW violet 100 (405 nm) pour 3 min comme décrit plus haut33. Single des suspensions de cellules produites de la peau de l’oreille ou les cervicales dLNs immédiatement après l’exposition révèle une...

Watch this Scientific Journal Video about Quantifying Leukocyte Egress via Lymphatic Vessels from Murine Skin and Tumors at JoVE.com

Quantifying Leukocyte Egress via Lymphatic Vessels from Murine Skin and Tumors

Ici, nous montrons les méthodes in vivo la quantification d’évacuation de leucocytes de naïve, enflammée et peau murine maligne. Nous effectuons une comparaison entre deux modèles : transdermique FITC application et in situ photoconversion. En outre, nous démontrent l’utilité de photoconversion pour le suivi des sorties de leucocytes de tumeurs cutanées.

Quantification des leucocytes évacuation via les vaisseaux lymphatiques de peau Murine et tumeurs

Leukocyte egress from peripheral tissues to draining lymph nodes is not only critical for immune surveillance and initiation but also contributes to the ...

Photoconversion fournit une méthode in vivo trackable pour l’analyse quantitative de l’évacuation des leucocytes pour un aperçu mécaniste de la résidence des leucocytes et de la dynamique de sortie de plusieurs sites tissulaires dans les états maladie. Eh bien, ici nous démontrons l’utilité du suivi des leucocytes à partir de tumeurs cutanées. L’application de cet essai à d’autres tissus et maladies est limitée seulement par la capacité d’administrer la lumière.Le principal avantage de cette technique est que pour permet la quantification des populations endogènes, plutôt que transférées cellules immunitaires comme une issue des tissus enflammés in vivo. Pour induire une inflammation, après avoir confirmé un manque de réponse au pincement des orteils, utilisez une micropipette pour administrer 20 microlitres de phtalate de dibutyle ou DBP, du côté ventral de la pinna de l’oreille d’une souris transgénique Kaede anesthésiée. Après avoir laissé sécher le DBP, tirez l’oreille à travers une fente dans un morceau de papier d’aluminium et utilisez du ruban adhésif à double face pour fixer l’oreille à plat sur le papier d’aluminium avec le côté dorsale orienté vers le haut.Ensuite, position que vous êtes directement sous une source de lumière de 405 nanomètres et photoconvertir pendant trois minutes à 100 milliwatts de puissance. Pour l’infection par la vaccinia, utilisez une micropipette pour administrer 5 fois 10 à la 6ème plaque formant des unités de vaccinia dans 10 microlitres de PBS sur la pinna d’oreille d’une souris transgénique kaede anesthésiée et piquer la pinna 25 fois. 24 heures plus tard, photoconvertir la pinna comme vient de le démontrer.Au moment expérimental approprié, récolter les pignons et les ganglions lymphatiques cervicaux et inguinaux et utiliser deux paires de pinces à épiler le côté ventral et dorsale de chaque pinna. Placez ensuite les ganglions lymphatiques et les morceaux de pinna, avec l’intérieur de l’oreille face vers le bas, dans les puits individuels d’une plaque de 24 puits contenant 1 milligramme par millilitre de Collagène D et 80 unités par millilitre d’ADN dilué dans HBSS contenant du calcium et du magnésium. Utilisez deux aiguilles de calibre 29 pour taquiner chaque capsule de ganglion lymphatique et placer la plaque à 37 degrés Celsius pendant 30 minutes.À la fin de l’incubation, presser les tissus digérés de pinna et de ganglion lymphatique à travers des passoires cellulaires en nylon séparées de 70 Microns pour obtenir des suspensions cellulaires simples de chaque tissu. Quand les tumeurs se sont développées à la taille expérimentale appropriée, rasez n’importe quelle fourrure nouvellement repousse autour du site de tumeur et tirez la tumeur par un trou circulaire coupé dans un morceau de papier d’aluminium. Placez la tumeur directement au-dessous de la source lumineuse de 405 nanomètres et photoconvertiez pendant 5 minutes à 200 milliwatts de puissance.24 heures après la photoconversion, récolter les tumeurs et les ganglions lymphatiques brachiaux et inguinaux de chaque animal et utiliser des ciseaux pour émincer les tumeurs dans les puits individuels d’une plaque de 24 puits contenant collagène D et DNase dans HBSS. Placez les ganglions lymphatiques dans des puits séparés et taquinez les capsules comme nous venons de le démontrer. Après avoir incubé les tumeurs pendant une heure et les ganglions lymphatiques pendant une demi-heure à 37 degrés Celsius, pressez les tissus digérés à travers des passoires distinctes de 70 Microns pour obtenir des suspensions cellulaires simples de chaque tissu.Pour analyser les suspensions à cellule unique par cytométrie d’écoulement, recueillir d’abord la rate ou le sang d’une souris transgénique Kaede et lyse les globules rouges avec tampon de potassium chlorure d’ammonium. Divisez les cellules en une seule Kaede FITC non convertie et une population kaede PE convertie et resuspendez les cellules Kaede PE d’une seule couleur en un millilitre de PBS dans un puits d’une plaque de 24 puits, puis photoconvertiez les cellules pendant 5 minutes sous une source lumineuse de 405 nanomètres à 100 milliwatts de puissance. Ensuite, utilisez les cellules Kaede PE photoconverties et les cellules Kaede FITC non converties pour régler les tensions photomultiplier à 70 à 80% de la portée totale de chaque canal fluorescent.Une fois que les tensions pour les protéines Kaede ont été réglées, compenser toutes les autres taches primaires d’anticorps à l’aide de perles de compensation étiquetées fluorophore unique, selon les instructions du fabricant. Ensuite, exécutez les échantillons sur le cytomètre d’écoulement selon les protocoles standard d’analyse cytométrique de flux. Les suspensions à cellules simples générées par la peau de l’oreille ou les ganglions lymphatiques drainants cervicaux immédiatement après l’exposition à la photoconversion révèlent une efficacité de conversion de 78 % de tous les leucocytes positifs CD45 dans la peau, sans cellules converties observées dans les ganglions lymphatiques drainants.La quantification du nombre de leucocytes positifs CD45 infiltrants dans les oreilles photo converties zéro et 24 heures après la conversion, révèle que l’exposition à la lumière violette provoque une augmentation statistiquement significative de l’infiltration des leucocytes. Cette augmentation de l’infiltration positive de leucocyte CD45 cependant, est petite par rapport à l’infiltration induite par un stimulus inflammatoire puissant tel que le virus de vaccinia. La photoconversion augmente également la perméabilité vasculaire dans les pinnae d’oreille telles que mesurées par l’analyse de Miles, tout en indiquant que les effets de la lumière violette sur l’inflammation des tissus devraient être pris en compte lors de l’optimisation de la dose, du temps d’exposition et de l’interprétation des données.L’analyse cytométrique de flux des cellules tumorales dissociées des animaux photoconvertis révèle une conversion significative des cellules positives intratumorales de CD45 de Kaede FITC positives à Kaede PE positives, tandis que les cellules drainantes de ganglion lymphatique restent non converties. L’efficacité de photoconversion des leucocytes positifs de CD45 a varié de manière significative entre les types et les tailles de tumeur, avec des leucocytes positifs de CD45 dans de petites tumeurs de mélanome démontrant la photoconversion la plus efficace. Comme les volumes tumoraux augmentent, l’efficacité de conversion diminue à environ 50%Notamment, la mélanine a un impact frappant sur l’efficacité de la photoconversion avec une photoconversion maximale des cellules positives CD45 observées dans les tumeurs productrices de mélanine de seulement environ 30% dans les tumeurs plus petites, qui tombe à 10% que les volumes tumoraux approchent de 400 millimètres cubes.L’examen des ganglions lymphatiques drainants de tumeur 24 heures après photoconversion indique la présence des cellules immunitaires positives rouges de Kaede de divers phénotypes, démontrant ainsi l’émigration de leucocyte de la tumeur photoconverted. Après son développement, cette technique a ouvert la voie aux chercheurs dans le domaine de l’immunologie pour découvrir la cinétique de l’état stable et le chiffre d’affaires enflammé de leucocyte dans le tissu périphérique. Tout en essayant cette procédure, il est important de s’assurer que seul le tissu d’intérêt est photoconverti, car la photoconversion accidentelle du tissu environnant compromettra vos résultats.Les personnes nouvelles à cette méthode devraient optimiser le temps d’exposition pour la conversion de leurs tissus, ainsi que la durée des temps avant la collecte des tissus se produit en fonction de la dynamique du leucocyte d’intérêt.

Research

JoVE Journal

Biology

Murine Skin Transplantation

Transplantation de peau murine

As one of the most stringent and least technically challenging models, skin transplantation is a standard method to assay host T cell responses to ...

Recherche

Biologie

Analysis of Physiologic E-Selectin-Mediated Leukocyte Rolling on Microvascular Endothelium

Analyse des leucocytes roulant physiologique E-sélectine-Mediated sur l&#39;endothélium microvasculaire

E-selectin is a type-1 membrane protein on microvascular endothelial cells that helps initiate recruitment of circulating leukocytes to cutaneous, bone ...

Isolation and Culture of Adult Epithelial Stem Cells from Human Skin

Isolement et culture des cellules souches épithéliales adultes de la peau humaine

The homeostasis of all self-renewing tissues is dependent on adult stem cells. As undifferentiated stem cells undergo asymmetric divisions, they generate ...

Isolation of Immune Cells from Primary Tumors

Isolement des cellules immunitaires des tumeurs primitives

Tumors create a unique immunosuppressive microenvironment (tumor microenvironment, TME) whereby leukocytes are recruited into the tumor by various ...

gDNA Enrichment by a Transposase-based Technology for NGS Analysis of the Whole Sequence of BRCA1, BRCA2, and 9 Genes Involved in DNA Damage Repair

gDNA Enrichment by a Transposase-based Technology for NGS Analysis of the Whole Sequence of BRCA1, BRCA2, and 9 Genes Involved in DNA Damage Repair

ADNg enrichissement par une technologie basée Transposase-NGS Analyse de la séquence plénier de<em&gt; BRCA1</em&gt;,<em&gt; BRCA2</em&gt;, et 9 gènes impliqués dans la réparation des dommages de l&#39;ADN

The widespread use of Next Generation Sequencing has opened up new avenues for cancer research and diagnosis. NGS will bring huge amounts of new data on ...

Isolation and Culture of Primary Mouse Keratinocytes from Neonatal and Adult Mouse Skin

Isolation et culture des kératinocytes de la souris primaire de la peau de souris néonatale et adulte

The keratinocyte (KC) is the predominant cell type in the epidermis, the outermost layer of the skin. Epidermal KCs play a critical role in providing skin ...

Expression of Fluorescent Fusion Proteins in Murine Bone Marrow-derived Dendritic Cells and Macrophages

Expression des protéines de Fusion Fluorescent en Murine dérivés de la moelle osseuse des cellules dendritiques et Macrophages

Dendritic cells and macrophages are crucial cells that form the first line of defense against pathogens. They also play important roles in the initiation ...

Y-27632 Enriches the Yield of Human Melanocytes from Adult Skin Tissues

Y-27632 enrichit le rendement des mélanocytes humains à partir de tissus cutanés adultes

The isolation and culture of primary melanocytes from skin tissues is very important for biological research and has been widely used for clinical ...

A Murine Model of a Burn Wound Reconstructed with an Allogeneic Skin Graft

Un modèle murine d’une blessure de brûlure reconstruite avec une greffe de peau allogénique

Trivial superficial wounds heal without complications by primary intention. Deep wounds, such as full thickness burns, heal by secondary intention and ...

Inhibition of Wound Epidermis Formation via Full Skin Flap Surgery During Axolotl Limb Regeneration

Inhibition de la formation de l’épiderme de la plaie par chirurgie complète du lambeau de peau pendant la régénération des membres axolotl

Classical experiments in salamander regenerative biology over the last century have long established that the wound epidermis is a crucial signaling ...