Name: quantifying leukocyte egress via lymphatic vessels from murine skin and tumors
Uploaded: 2019-01-07T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Quantifying Leukocyte Egress via Lymphatic Vessels from Murine Skin and Tumors at JoVE.com

המחברים רוצה להודות ד ר מרקוס Bosenberg למתן YUMM 1.1, YUMM 1.7 מלנומה מאתר קווים, ד ר דבורה ג'יי Fowell למתן B6. עכברים 15Utr cg-Tg(CAG-tdKaede) מסכים עם RIKEN BRC דרך ביו-משאב לאומי של MEXT, יפן.

כל הפרוטוקולים בעלי חיים אושרו על ידי טיפול בעלי חיים מוסדיים ועל שימוש הוועדה ב אורגון לבריאות & ומדע באוניברסיטת.
1. אינדוקציה של דלקת FITC ציור של העכבר פינה
<ol><li>ב תא למינארי, עזים ומתנגד עכבר C57Bl/6 באמצעות isofluorane מתאדה (זירוז ב 3-5% isofluorane ולשמור על 1-3% isofluorane; קצב הזרימה חמצן ב 0....

למרות היציאה ליקוציט רקמות היקפיים, שאינם הלימפה הוא קריטי עבור החניכה, ברזולוציה של תגובות חיסוניות, המנגנונים המולקולריים המפקחים על היציאה הם הבינו כהלכה. פער זה הידע נובע במידה רבה מוכן הזמינות של כלים כימות בתוך vivo. כאן, אנו מתארים את השימוש photoconvertible עכברים (קאךה-Tg) לכמת ליקוציט א...

תגובות חיסוניות רקמות היקפיים הם בצורת לא רק על ידי גיוס ליקוציט לאתרים של דלקת, אלא גם על ידי מנגנונים המסדירים השמירה הבאים שלהם. לפיכך, חיסון הגנתי מוכתב על ידי מנגנונים תאית ומולקולרית מצטברים הקובעים אם ליקוציט מזין, נשאר בתוך, או ליתר דיוק נודד מחוץ רקמות היקפיים דרך כלי הלימפה. חשוב, נטיה של לויקוציטים ליציאה רקמות דרך כלי הלימפה (הנקרא היציאה) מקושרת לפונקציות מיוחדות שלהן. תאים דנדריטים (DC) רוכשים התנהגות נודדות בתגובה אותות ההבשלה המוביל אנטיגן תחבורה המצגת ניקוז הלימפה (dLN), תהליך זה הוא הכרחי עבור חסינות מסתגלת1. ניקוי התאים מיאלואידית, כגון מקרופאגים, נויטרופילים, משמשים כדי לנקות פסולת אפופטוטיים להיפגע דרך phagocytosis. במהלך זיהום חיידקי, נויטרופילים רקמה זו אש מרגמות מדויקת בסופו של דבר עוברים אפופטוזיס dLNs2 , במודל של DSS-induced קוליטיס, נתונים תומך את ההשערה כי היציאה מקרופאג הכרחי לפתרון דלקת מקומית3. אם היציאה נויטרופילים, מקרופאג מתרחשת בכל ההקשרים דלקתיות, לעומת זאת, אינו ידוע. ראיות של לימפוציטים-T יציאה מן מצב יציב4,5,6,7, נגוע8ו מודלק4,9,10, 11,12 הפריפריה, שאינם הלימפה ברקמות מציין כי בתאי T recirculate באופן פעיל, על פי האותות רקמות מבוסס כונן היציאה הזאת להישאר ממעטים להבין. מספר מחקרים זיהו אותות הדרושים להעברת כיוונית לעבר ניקוז לימפטי נימים ובעקבות זו אש מרגמות מדויקת כולל ליגנד כימוקין (מוטיב C-C) 21 (CCL21) והקולטן שלו CCR74,11, 13, ליגנד כימוקין (מוטיב C-X-C) 12 (CXCL12) שלו קולטן CXCR42,14, ו sphingosine-1-פוספט (S1P)10,15,16. מנגנונים אלה אינם פעילים בכל ההקשרים, אולם, בין אם הם לקבוע את היציאה של כל סוגי תאים נותרת שאלה פתוחה. חשוב, עוד תובנה המנגנונים המפקחים על היציאה והקשר שלה פונקציונלי במחלה דורש שיטות כמותיות ויוו של ניתוח.
מספר שיטות השתמשו כדי לכמת את היציאה מספר מודלים ויוו כולל תעלות ישיר של כלי הלימפה, העברת המאמצת של ex-vivo שכותרתו לויקוציטים, יישום transdermal של קליעים נותבים פלורסנט, זריקה של חלקיקים שכותרתו, ויוו photoconversion17,18. תעלות ישיר של כלי הלימפה מביא העכבר הוא מוגבל בחיות קטנות על-ידי אמצעי האחסון של נוזלים הניתנים לאיסוף וקשה. לפיכך, תעלות במידה רבה בוצעו חיות גדולות (למשל., כבשים) איפה מעשי כזה מניפולציות כירורגי. מחקרים אלה מספקים עדות ישירה נוכחות של תאי הלימפה והן מיאלואידית הלימפה10,19,20. יתר על כן, מודלים ovine חושפים כי דלקת אקוטי וכרוני מוגבר לימפוציט נוכחות לימפה בגיל10,כמעט 100-fold21.
העברת המאמצת של לימפוציטים שכותרתו, גנטי חשוב חשף כי CCR7 נדרש עבור היציאה של CD4+ T תאים מן העור מודלק בחריפות5,11, ואילו רעלני של לימפוציטים עם מולקולת קטן S1P קולטן אגוניסט, FTY720, מעכב באופן חלקי בלבד שלהם היציאה10. מעניין, היציאה של לימפוציטים שהועברו מן העור דלקתי כרוני הוא תלוי-CCR710, אך עשויים לדרוש חלקית CXCR49. העברת המאמצת ניסויים, עם זאת, לספק מספרים שאינם-פיזיולוגיים של לשעבר vivo מופעל ומתויגים לימפוציטים לתוך רקמות באמצעות הזרקה, אשר כמושפע ביו-מכני של רקמות, לחצים מוגברות של נוזל בין-תאי זה פתח נימי הלימפה הראשונית, לשנות את המאפיינים שלהם תחבורה22. כיישום transdermal חלופית, של fluorescein isothiocyanate (FITC), נוכחות או היעדרות מגירויים עורי (למשל., dibutyl פתלאט, DBP) או זיהום23,24 מאפשר המעקב אחר התאים phagocytic מעקב ולצבור להגר dLNs. באופן דומה, גידולים fluorescently שכותרתו לספק אמצעי כדי לעקוב אחר תאים phagocytic שכילו הגידול גשמי25. שיטות אלה סיפקו חשוב תובנה המנגנונים למשול DC היציאה13,14,17,26,27 , אך אינם מסוגלים לעקוב אחר שאינו-phagocytic יכול להיות מסובך לימפוציטים ופרשנות, ניקוז לימפטי חינם של FITC מסיסים ובכך תיוג עופות נודדים, DCs תושב LN.
לחלופין, מיקרוסקופ intravital הוא כלי רב עוצמה המאפשר מעקב ויוו לאוכלוסיות ליקוציט רלוונטי מבחינה פיזיולוגית בזמן אמת28,29. משתמשים בה בשילוב עם הכתב עכברים, נוגדן מבוססי ויוו immunofluorescent תיוג, intravital מיקרוסקופ חשפה את המתחם המרחבי וסלולרי הדינמיקה הטמפורלי של החיסון ההעברה אינטרסטיציאליות, סחר בבני אדם, לרבות30 , גלגול על פני אנדותל הלימפה, המעבר בתוך לומן הלימפה, ואת ההעברה על בעוד ערך28,31. אימוץ רחב של טכניקות הדמיה intravital מוגבל על ידי הוצאות, המומחיות הנדרשת עבור ערכת, מוגבל תפוקה לכימות תנועת סוגי תאים מרובים. עדיין, צימוד שיטות כמותיות לנתח המלאכותיות רקמות עם הדמיה intravital יספקו תובנה מכניסטית נוספים וחשובים לגבי המנגנונים של תנועתיות והעברה לקראת ובתוך נימי הלימפה 18 , 31 , 32.
כתוצאה מכך, אין ויוו photoconversion התפתחה שיטה המאפשרת בחיי עיר תיוג, עצמאית של הפעילות phagocytic, וגם עבור כימות של היציאה ליקוציט פיזיולוגיים (בשילוב עם cytometry זרימה) ב- היעדרות או נוכחות של אתגר. קאךה-Tg עכברים מביעים צורונים חלבון מבודד אלמוג זה מוצגים ירוק קרינה פלואורסצנטית (קאךה ירוק) עד נחשפים באור סגול, לאחר מכן הוא בלתי הפיך ממיר פלואורסצנטי אדום (קאךה אדום)33. ניתן לעקוב Photoconverted תאים כמו זו הם אש מרגמות מדויקת מאתרי רקמות היקפיים להצטבר dLNs. זה ו אחרים דומים photoconvertible העכבר מודלים34,35 חשפו חשוב ביולוגיה כולל יציאה המכונן של תאי T רגולטוריים מן העור36, תלויי-CXCR4 תא B יציאה מן כתמים של פייה37 , גיוס בתאי T הזיכרון תושב פפטיד לאתגר מחדש38, ועל יציאה רחבה ליקוציט מן הגידול microenvironments39. במסמך זה, אנו מבצעים השוואה ראש בראש של photoconversion עם יישום FITC transdermal בהקשר של עורית דלקת ולדלקת כדי לאפשר השוואה ישירה של נתונים קיימים עם השיטה photoconvertible. יתר על כן, אנו מדגימים photoconversion גידולים מושתל, לתאר את יעילות ההמרה ויציאה סלקטיבי של גידול microenvironments. ככזה, אנו טוענים עוד יישום של שיטות אלה המצריך התירי הביולוגיה קריטי של ליקוציט יציאה מן גידולים, אשר יהיו השלכות משמעותיות על פענוח intratumoral ליקוציט המורכבות, אנטי הגידול חסינות, ו תגובה לטיפול.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Collagenase D</td>
			<td>Roche</td>
			<td>11088866001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNase</td>
			<td>Roche</td>
			<td>4536282001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silver-LED-405B light source with optical fiber and collimtor</td>
			<td>Prizmatix Ltd</td>
			<td>V8144</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescein isothiocyanate isomer I</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F4274</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dibutyl phthalate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>524980</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>acetone</td>
			<td>Macron Fine Chemicals</td>
			<td>2440-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>29-guage syringes</td>
			<td>Exel International</td>
			<td>26029</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Evans Blue</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>E2129</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70 um cell strainers</td>
			<td>VWR</td>
			<td>732-2758</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P6148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBSS</td>
			<td>Caisson</td>
			<td>HBL06</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LIVE/DEAD Fixable Aqua Dead Cell Stain Kit</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>L34966</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Purified Anti-mouse CD16/CD32</td>
			<td>Tonbo Biosciences</td>
			<td>70-0161-M001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BV605 CD11c (clone N418)</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>117334</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PerCP-Cy5.5 MHCII (clone M5/114.15.2)</td>
			<td>BD Pharmingen</td>
			<td>562363</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BV421 CD3e (clone 145-2C11)</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>100341</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>APC CD8a (clone 53-6.7)</td>
			<td>TonBo Biosciences</td>
			<td>20-0081-u100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>APC-Cy7 CD45 (clone 30-F11)</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>103116</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BV650 CD19 (clone 6D5)</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>115541</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PercCP-Cy5.5 Ly6C (clone HK1.4)</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>128011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 647 F4/80 (clone BM8)</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>123121</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>APC-Cy7 Ly6G (clone 1A8)</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>127623</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BV711 CD11b (clone M1/70)</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>101241</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BV605 CD45 (clone 30-F11)</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>103155</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BV711 CD4 (clone RM4-5)</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>563726</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albumin (Fraction V)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP1600-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anit-Rat and Anti-Hamster Igk / Negative Control Compensation Particle Set</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>552845</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fortessa Flow Cytometer</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FlowJo v10 Software</td>
			<td>FlowJo</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

quantifying leukocyte egress via lymphatic vessels from murine skin and tumors

ליקוציט יציאה מן רקמות היקפיים ניקוז הלימפה אינה קריטית עבור מעקב המערכת החיסונית, חניכה, אך תורם גם הרזולוציה של רקמות היקפיים תגובות. בעוד מגוון שיטות משמשים לכמת ליקוציט יציאה מן הרקמות שאינם הלימפה, ציוד היקפי, המנגנונים תאית ומולקולרית המפקחים על היציאה תלויי-ההקשר נשארים ממעטים להבין. כאן, אנו מתארים את השימוש בבאתרו photoconversion לניתוח כמותי של ליקוציט יציאה מן העור מאתר וגידולים. Photoconversion מאפשר ישיר תיוג וחריגה של תושב תוך עורית. למרות חשיפה העור אור סגול גורם מקומי תגובות דלקתיות מאופיין ליקוציט ולחום, leakiness בכלי הדם, תוך השוואה ראש בראש עם יישום transdermal של קליעים נותבים פלורסנט, photoconversion במיוחד מתויג אוכלוסיות נודדות תא דנדריטי וזמין בו-זמנית כימות של יציאה מיאלואידית ו הלימפה מן microenvironments עורית וגידולים. המנגנון של היציאה ליקוציט רכיב חסר בהבנה שלנו של intratumoral ליקוציט מורכבות וובכך היישום של הכלים המתוארים במסמך זה יספקו תובנה ייחודית הדינמיקה של הגידול מערכת החיסון microenvironments שני בבית יציב המדינה, בתגובה לטיפול.

אנחנו קודם ביקשו לשכפל את התוצאות photoconversion שפורסמו בספרות כדי להעריך את היעילות ולקבוע המשויכים דלקת בעור העכבר. פינה האוזן נחשף לאור mW סגול 100 (405 ננומטר) במשך 3 דקות כאמור תיאר33. יחיד המתלים התא שנוצר בעור האוזן או צוואר הרחם dLNs מיד בעקבות החשיפה גילה של יעילו...

Watch this Scientific Journal Video about Quantifying Leukocyte Egress via Lymphatic Vessels from Murine Skin and Tumors at JoVE.com

Quantifying Leukocyte Egress via Lymphatic Vessels from Murine Skin and Tumors

. הנה, נדגים את שיטות ויוו כימות של ליקוציט יציאה מן תמימה, מודלק, והעור מאתר ממאיר. אנו לבצע השוואת עפות בשני דגמים: transdermal FITC יישום, בחיי עיר photoconversion. יתר על כן, נדגים את התועלת של photoconversion עבור מעקב אחר ליקוציט היציאה של גידולים עורית.

לכימות ליקוציט היציאה דרך כלי הלימפה מ מאתר עור וגידולים

Leukocyte egress from peripheral tissues to draining lymph nodes is not only critical for immune surveillance and initiation but also contributes to the ...

פוטוקונום מספקת שיטת vivo הניתנת למעקב לניתוח כמותי של יציאה לויקוציטים לתובנה מכנית על מגורי לויקוציטים ודינמיקת יציאה מאתרי רקמות מרובים במצבים חיים. ובכן, כאן אנו מדגימים את התועלת של מעקב לויוציט מגידולים עוריים. היישום של יישום זה לרקמות ומחלות אחרות מוגבל רק על ידי היכולת לנהל אור.היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא המאפשר כימות של אנדוגני, ולא מועבר אוכלוסיות תאים חיסוניים כמו יציאה מרקמות מודלק vivo. כדי לגרום לדלקת, לאחר אישור חוסר תגובה קמצוץ בוהן, להשתמש micropipette לנהל 20 microliters של דיבוטיל פתלט או DBP, לצד הגחוני של פינה האוזן של עכבר מהומר Kaede הרדמה. לאחר מתן אפשרות ל- DBP להתייבש, משוך את האוזן דרך חריץ בחתיכת רדיד אלומיניום ולהשתמש בקלטת דו-צדדית כדי לאבטח את האוזן שטוחה עד רדיד אלומיניום כאשר הצד הגבי פונה כלפי מעלה.לאחר מכן, למקם כי אתה ישירות תחת מקור אור 405 ננומטר ו photoconvert במשך שלוש דקות ב 100 מילי וואט של כוח. עבור זיהום vaccinia, להשתמש micropipette לנהל 5 פעמים 10 כדי 6 לוח להרכיב יחידות של וירוס vaccinia ב 10 microliters של PBS על הפינה האוזן של עכבר מהומר Kaede הרדמה לתקוע את פינה 25 פעמים. 24 שעות לאחר מכן, צלם את הפינה כפי שהוכח.בנקודת הזמן הניסיונית המתאימה, לקצור את הפיני ואת בלוטות הלימפה הצוואריות והבלתי משתנות ולהשתמש בשני זוגות פינצטה כדי לקלף לגזרים את הצד הגחוני והדורסי של כל פינה. לאחר מכן מניחים את בלוטות הלימפה ואת חתיכות פינה, עם החלק הפנימי של האוזן פונה כלפי מטה, לתוך בארות בודדות של צלחת 24 באר המכיל 1 מיליגרם למיליליטר של קולגנס D ו 80 יחידות למיליליטר של Dnase מדולל HBSS המכיל סידן ומגנזיום. השתמש בשני 29 מחטי מד כדי להקניט לפתוח כל כמוסה בלוטות הלימפה ולה מניחים את הצלחת ב 37 מעלות צלזיוס במשך 30 דקות.בסוף הדגירה, לחץ על רקמות הפינה והבלוטות הלימפה המתעכלות באמצעות מסנני תאי ניילון 70 מיקרון נפרדים כדי להשיג השעיות תא יחיד של כל רקמה. כאשר הגידולים גדלו לגודל הניסיוני המתאים, לגלח כל פרווה שזה עתה גדלה מחדש סביב אתר הגידול ולמשוך את הגידול דרך חור עגול לחתוך חתיכת רדיד אלומיניום. מקם את הגידול ישירות מתחת למקור אור 405 ננומטר ו photoconvert במשך 5 דקות ב 200 מילי וואט של כוח.24 שעות לאחר ההתנשאות, לקצור את הגידולים ואת בלוטות הלימפה brachial ו inguinal מכל בעל חיים ולהשתמש מספריים כדי לטחון את הגידולים בתוך בארות בודדות של צלחת 24 היטב המכיל קולגנס D ו DNase ב HBSS. מניחים את בלוטות הלימפה לתוך בארות נפרדות להקניט לפתוח את הכמוסות כפי שהוכח רק. לאחר הדגירה של הגידולים במשך שעה אחת ואת בלוטות הלימפה במשך חצי שעה ב 37 מעלות צלזיוס, לחץ על הרקמות מתעכל באמצעות מסנני 70 מיקרון נפרדים כדי להשיג מתלים תא יחיד של כל רקמה.כדי לנתח את המתלים תא יחיד על ידי ציטומטריה זרימה, הראשון לאסוף את הטחול או הדם מעכבר מהופנט Kaede וללהות את תאי הדם האדומים עם מאגר אשלגן אמוניום כלורי. לפצל את התאים לתוך אחד Kaede FITC ללא המרה אחד אחד המרה Kaede PE האוכלוסייה resuspend את צבע יחיד Kaede PE תאים במיליליטר אחד של PBS באר אחת של צלחת 24 גם, ואז פוטו להמיר את התאים במשך 5 דקות תחת מקור אור 405 ננומטר ב 100 מילי וואט של כוח. לאחר מכן השתמש בתאי Kaede PE עם ההמרה עם התמונה ותאי Kaede FITC הבלתי מעורערים כדי להגדיר את המתחים photomultiplier ל 70 עד 80% מהטווח הכולל של כל ערוץ פלואורסצנטי.לאחר שנקבעו המתחים לחלבוני Kaede, לפצות על כל כתמי הנוגדנים העיקריים האחרים באמצעות חטיפי פיצוי יחידים עם תווית פלואורופור, בהתאם להוראות היצרן. לאחר מכן, הפעל את הדגימות על ציטומטר הזרימה על פי פרוטוקולי ניתוח ציטומטרי זרימה סטנדרטיים. מתלים של תא יחיד הנוצרים מעור האוזן או מבלוטות לימפה מרוקנות צוואר הרחם מיד לאחר החשיפה לצילום חושפים יעילות המרה של 78%של כל ה- CD45 לויוציטים חיוביים בעור, ללא תאים מומרים שנצפו בבלוטות הלימפה המתנקזות.כימות המספרים של CD45 לויקוציטים חיוביים חודרים באוזניים פוטו-מומרות אפס ו-24 שעות לאחר ההמרה, מגלה כי חשיפה לאור סגול גורמת לעלייה משמעותית סטטיסטית בהסתננות לויקוציטים. עלייה זו CD45 חדירה חיובית לויוציט עם זאת, הוא קטן יחסית חדירה הנגרמת על ידי גירוי דלקתי חזק כגון וירוס vaccinia. Photoconversion גם מגביר את החדירה בכלי הדם בפיני האוזן כפי שנמדד על ידי מיילס assay, יחד המציין כי ההשפעות של אור סגול על דלקת רקמות יש לקחת בחשבון בעת אופטימיזציה של מינון, זמן חשיפה ופרשנות נתונים.ניתוח ציטומטרי זרימה של תאים סרטניים דיסוציאציה מבעלי חיים פוטו-מנוטרלים מגלה המרה משמעותית של תאים חיוביים CD45 תוך-לא מוסרי מ Kaede FITC חיובי Kaede PE חיובי, בעוד ניקוז תאי בלוטות הלימפה להישאר ללא שינוי. יעילות פוטופרונצ'ר של CD45 לויוציטים חיוביים השתנתה באופן משמעותי בין סוגי הגידולים וגדלים, עם CD45 לויוציטים חיוביים בתוך גידולים מלנומה קטנים המדגימים את פוטוקונום היעיל ביותר. ככל שנפחי הגידול גדלים, יעילות ההמרה פוחתת לכ-50% יש לציין שלמלנין יש השפעה מרשימה על יעילות פוטוקונום עם היפוך מרבי של CD45 תאים חיוביים שנצפו בתוך גידולים המייצרים מלנין של כ-30% בלבד בגידולים קטנים יותר, שיורדים ל-10% ככל שנפחי הגידול מתקרבים ל-400 מילימטרים מעוקבים.הבדיקה של גידול ניקוז בלוטות הלימפה 24 שעות לאחר photoconversion מגלה את נוכחותם של תאי חיסון חיוביים אדומים Kaede של פנוטיפים שונים, ובכך להדגים הגירה לויוציטים מהגידול photoconverted. לאחר התפתחותה, טכניקה זו סללה את הדרך לחוקרים בתחום האימונולוגיה לחשוף את הקינטיקה של מצב יציב ותחלופת לויציט מודלקת ברקמה היקפית. בעת ניסיון הליך זה, חשוב להבטיח כי רק רקמת העניין הוא photoconverted, כמו פוטוקונום בשוגג של הרקמה שמסביב יסכן את התוצאות שלך.אנשים חדשים בשיטה זו צריכים לייעל את זמן החשיפה להמרה של הרקמה שלהם, כמו גם משך הזמן לפני איסוף הרקמות מתרחשת בהתבסס על הדינמיקה של לויוצייט של עניין.

Research

JoVE Journal

Biology

Murine Skin Transplantation

השתלת עור Murine

As one of the most stringent and least technically challenging models, skin transplantation is a standard method to assay host T cell responses to ...

Analysis of Physiologic E-Selectin-Mediated Leukocyte Rolling on Microvascular Endothelium

ניתוח של הרולינג E-selectin בתיווך פיזיולוגי ליקוציט על כלי הדם האנדותל

E-selectin is a type-1 membrane protein on microvascular endothelial cells that helps initiate recruitment of circulating leukocytes to cutaneous, bone ...

Isolation and Culture of Adult Epithelial Stem Cells from Human Skin

בידוד תרבות למבוגרים גזע תאים אפיתל של העור האנושי

The homeostasis of all self-renewing tissues is dependent on adult stem cells. As undifferentiated stem cells undergo asymmetric divisions, they generate ...

Isolation of Immune Cells from Primary Tumors

בידוד של תאים חיסוניים של גידולים ראשוניים

Tumors create a unique immunosuppressive microenvironment (tumor microenvironment, TME) whereby leukocytes are recruited into the tumor by various ...

gDNA Enrichment by a Transposase-based Technology for NGS Analysis of the Whole Sequence of BRCA1, BRCA2, and 9 Genes Involved in DNA Damage Repair

gDNA Enrichment by a Transposase-based Technology for NGS Analysis of the Whole Sequence of BRCA1, BRCA2, and 9 Genes Involved in DNA Damage Repair

gDNA העשרה על ידי טכנולוגיה מבוססת Transposase לניתוח NGS של הרצף השלם של<em&gt; BRCA1</em&gt;,<em&gt; BRCA2</em&gt;, ו -9 גנים המעורבים בתיקון נזק לדנ&quot;א

The widespread use of Next Generation Sequencing has opened up new avenues for cancer research and diagnosis. NGS will bring huge amounts of new data on ...

Isolation and Culture of Primary Mouse Keratinocytes from Neonatal and Adult Mouse Skin

בידוד ותרבות של עכברים ראשיים Keratinocytes מ neonatal ומבוגרים עור עכבר

The keratinocyte (KC) is the predominant cell type in the epidermis, the outermost layer of the skin. Epidermal KCs play a critical role in providing skin ...

Expression of Fluorescent Fusion Proteins in Murine Bone Marrow-derived Dendritic Cells and Macrophages

ביטוי של חלבונים פיוז'ן פלואורסצנט תאים דנדריטים הנגזרות מח עצם מאתר ו מקרופאגים

Dendritic cells and macrophages are crucial cells that form the first line of defense against pathogens. They also play important roles in the initiation ...

Y-27632 Enriches the Yield of Human Melanocytes from Adult Skin Tissues

Y-27632 מעשיר את התשואה של מלנוציטים אנושיים מרקמות עור למבוגרים

The isolation and culture of primary melanocytes from skin tissues is very important for biological research and has been widely used for clinical ...

A Murine Model of a Burn Wound Reconstructed with an Allogeneic Skin Graft

מודל מורנה של פצע צריבה שוחזר עם שתל העור Allogeneic

Trivial superficial wounds heal without complications by primary intention. Deep wounds, such as full thickness burns, heal by secondary intention and ...

Inhibition of Wound Epidermis Formation via Full Skin Flap Surgery During Axolotl Limb Regeneration

עיכוב של היווצרות אפידרמיס הפצע באמצעות ניתוח דש עור מלא במהלך התחדשות הגפיים Axolotl

Classical experiments in salamander regenerative biology over the last century have long established that the wound epidermis is a crucial signaling ...