Name: quantifying leukocyte egress via lymphatic vessels from murine skin and tumors
Uploaded: 2019-01-07T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Quantifying Leukocyte Egress via Lymphatic Vessels from Murine Skin and Tumors at JoVE.com

Forfatterne vil gjerne takke Dr. Marcus Bosenberg for å gi YUMM 1.1 og YUMM 1.7 murine melanom linjer og Dr. Deborah J. Fowell for å gi B6. CG-Tg(CAG-tdKaede) 15Utr mus med RIKEN BRC gjennom nasjonale Bio-ressursen av MEXT, Japan.

Alle dyr protokoller har blitt godkjent av institusjonelle Animal Care og bruk komiteen på Oregon Health & Science University.
1. Innledning betennelse og FITC maleri av musen Pinna
<ol><li>I laminær strømning hette, bedøve C57Bl/6 mus med fordampede isofluorane (indusere på 3-5% isofluorane og opprettholde på 1-3% isofluorane; oksygen flow rate på 0,5-1.0 L/min). Sikre riktig anesthetization ved å overvåke tap av pedal refleks, ufrivillige bevegelser og redusert respirasjonsfrekven...

Selv om leukocytter egress fra eksterne, ikke-lymfoid vev er kritisk for initiering og oppløsning på immunreaksjoner, er molekylære mekanismer som styrer egress dårlig forstått. Dette gapet i kunnskap skyldes klare tilgjengelighet av verktøy for kvantifisering i vivo. Her beskriver vi bruk av photoconvertible mus (Kaede-Tg) å kvantifisere endogene leukocytter egress fra huden og svulster og gi en direkte head-to-head sammenligning FITC maling i provoserende og infeksjon modeller. Vi viser at mens begge mo...

Eksterne tissue immunreaksjoner er formet ikke bare av leukocytter rekruttering til områder av betennelse, men også av mekanismer som regulerer deres påfølgende oppbevaring. Dermed er beskyttende immunitet diktert av kumulativ cellulære og molekylære mekanismer som bestemmer om en leukocytter inn, opphold, eller snarere overfører av eksterne tissue via lymfekar. Viktigst, er hang for leukocytter avslutte vev gjennom lymfekar (kalt egress) knyttet til sine spesialiserte funksjoner. Dendrittiske celler (DC) erverve vandrende atferd svar på modning signaler som fører til antigen transport og presentasjon i drenering lymfeknuter (dLN), en prosess som er nødvendig for adaptiv immunitet1. Scavenging myeloide celler, som makrofager og nøytrofile, tjene til å fjerne apoptotisk rester gjennom fagocytose. Under bakteriell infeksjon, nøytrofile egress vev og til slutt gjennomgår apoptose-programmert i dLNs2 og en modell av DSS-indusert kolitt, dataene støtter hypotesen at macrophage egress er nødvendig for å løse lokal betennelse3. Om nøytrofile og macrophage egress oppstår i alle inflammatorisk sammenhenger, men er ukjent. Bevis for T lymfocytt egress fra steady state4,5,6,7, infiserte8og betent4,9,10, 11,12 perifer, ikke-lymfoid vev angir at recirculate aktivt T celler, men vev-basert signaler som driver denne utkjørselen fortsatt dårlig forstått. Flere studier har identifisert signaler nødvendig for retningsbestemt overføring mot drenering lymfatisk kapillærene og påfølgende egress inkludert chemokine (C-C motiv) ligand 21 (CCL21) og dens reseptoren CCR74,11, 13, chemokine (C-X-C motiv) ligand 12 (CXCL12) og reseptor CXCR42,14, og sphingosine-1-fosfat (S1P)10,15,16. Disse mekanismene er ikke aktive i alle sammenhenger, men og om de bestemmer egress av alle celletyper fortsatt et åpent spørsmål. Viktigere, krever innsikt i mekanismer som styrer egress og relevansen fungerende sykdom kvantitative i vivo metoder for analyse.
Flere metoder har blitt brukt om å kvantifisere egress i flere dyremodeller i vivo inkludert direkte cannulation av lymfekar, adopsjon overføring av ex vivo merket leukocytter, transdermal applikasjon av fluorescerende tracers, injeksjon av merket partikler og i vivo photoconversion17,18. Direkte cannulation av afferente musen lymfekar er vanskelig og begrenset i små dyr av volumet av væske som kan samles. Dermed cannulation er hovedsakelig utført i store dyr (f.eks., sau) hvor slike kirurgisk manipulasjoner er praktisk. Disse studiene gir direkte bevis for tilstedeværelsen av både lymfoide og myeloide celler i lymfe10,19,20. Videre avslører ovine modeller at akutt og kronisk betennelse økt lymfocytt tilstedeværelse i lymfe med nesten 100-fold10,21.
Adopsjon overføring av merket og genetisk manipulerte lymfocytter har viktigere avslørt at CCR7 kreves for egress av CD4+ T celler fra akutt betent hud5,11, mens forbehandling av lymfocytter med de små molekylet S1P reseptor Agonistiske hemmer FTY720, bare delvis deres egress10. Interessant, egress av overførte lymfocytter fra kronisk betent hud er uavhengig av CCR710, men krever delvis CXCR49. Adopsjon overføring eksperimenter, men gir ikke-fysiologiske antall ex vivo aktivert og merket lymfocytter i vevet gjennom injeksjon, som endrer biomekaniske miljøet i vev og forhøyet interstitiell væsketrykk under driften det åpne første lymfatisk kapillærene og endre deres transport egenskaper22. Som et alternativ, transdermal applikasjon av fluorescein isothiocyanate (FITC) i tilstedeværelse eller fravær av dermal irritanter (f.eks., Dibutylftalat, DBP) eller infeksjon23,24 tillater sporing av phagocytic celler som akkumuleres tracer og overfører til dLNs. Tilsvarende gir fluorescently merket svulster betyr å spore phagocytic celler som har engulfed svulst materiale25. Disse metodene har gitt viktig innsikt i mekanismer som styrer DC egress13,14,17,26,27 , men ikke å spore ikke-phagocytic lymfocytter og tolkning kan kompliseres av gratis lymfedrenasje av løselig FITC dermed merking ikke-trekkfugler og LN bosatt DCs.
Eventuelt er intravital mikroskopi et kraftig verktøy som gir i vivo sporing av fysiologisk relevante leukocytter populasjoner i sanntid28,29. Brukt i kombinasjon med reporter mus og antistoff-basert i vivo immunofluorescent merking, intravital mikroskopi har avslørt komplekset romlige og timelige dynamikken i immun celle menneskehandel, inkludert interstitiell overføring30 , transmigration over den lymfatiske endotelet, passering i lymfatisk lumen og overføring på LN oppføring28,31. Omfattende bruk av intravital Bildeteknikker begrenses av utgifter, nødvendig ekspertise for satt opp, og begrenset gjennomstrømming for kvantifisering flere celletyper. Likevel vil kopling kvantitative metoder som analyserer populasjonsdynamikk vev med intravital bildebehandling gi ekstra og viktig mekanistisk innsikt med hensyn til mekanismer for motilitet og migrering mot og lymfatiske kapillærene 18 , 31 , 32.
Derfor i vivo photoconversion har dukket opp som en metode som tillater i situ merking, uavhengig av phagocytic aktivitet, og for kvantifisering av fysiologiske leukocytter egress (kombinert med flowcytometri) i den fravær eller tilstedeværelse av utfordringen. Kaede-vs mus uttrykke constitutively et protein isolert fra steinete korallrev som viser grønne fluorescens (Kaede grønne) til utsatt for violet lys, hvoretter den irreversibelt konverterer til rød fluorescens (Kaede rød)33. Photoconverted celler kan spores som de egress fra eksterne tissue nettsteder og akkumuleres i dLNs. Dette og andre lignende photoconvertible musen modeller34,35 har åpenbart viktig biologi inkludert konstituerende egress av regulatoriske T celler fra huden36, CXCR4-avhengige B celle egress fra Peyers oppdateringer37 , mobilisering av bosatt minne T celler peptid re utfordre38og bred leukocytter egress fra svulst microenvironments39. Her, utfører vi en head-to-head sammenligning av photoconversion med transdermal FITC programmet i forbindelse med kutan inflammation og infeksjon å tillate direkte sammenligning av eksisterende data med metoden photoconvertible. Videre vi vise photoconversion i implantert svulster og beskrive konvertering effektivitet og selektiv egress fra svulst microenvironments. Slik vi hevde at ytterligere anvendelse av disse metodene er nødvendig å belyse kritiske biologi leukocytter egress fra svulster, som vil ha for å tolke intratumoral leukocytter kompleksitet, anti-tumor immunitet, og svar på terapi.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Collagenase D</td>
			<td>Roche</td>
			<td>11088866001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNase</td>
			<td>Roche</td>
			<td>4536282001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silver-LED-405B light source with optical fiber and collimtor</td>
			<td>Prizmatix Ltd</td>
			<td>V8144</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescein isothiocyanate isomer I</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F4274</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dibutyl phthalate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>524980</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>acetone</td>
			<td>Macron Fine Chemicals</td>
			<td>2440-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>29-guage syringes</td>
			<td>Exel International</td>
			<td>26029</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Evans Blue</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>E2129</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70 um cell strainers</td>
			<td>VWR</td>
			<td>732-2758</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P6148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBSS</td>
			<td>Caisson</td>
			<td>HBL06</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LIVE/DEAD Fixable Aqua Dead Cell Stain Kit</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>L34966</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Purified Anti-mouse CD16/CD32</td>
			<td>Tonbo Biosciences</td>
			<td>70-0161-M001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BV605 CD11c (clone N418)</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>117334</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PerCP-Cy5.5 MHCII (clone M5/114.15.2)</td>
			<td>BD Pharmingen</td>
			<td>562363</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BV421 CD3e (clone 145-2C11)</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>100341</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>APC CD8a (clone 53-6.7)</td>
			<td>TonBo Biosciences</td>
			<td>20-0081-u100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>APC-Cy7 CD45 (clone 30-F11)</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>103116</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BV650 CD19 (clone 6D5)</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>115541</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PercCP-Cy5.5 Ly6C (clone HK1.4)</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>128011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 647 F4/80 (clone BM8)</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>123121</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>APC-Cy7 Ly6G (clone 1A8)</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>127623</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BV711 CD11b (clone M1/70)</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>101241</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BV605 CD45 (clone 30-F11)</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>103155</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BV711 CD4 (clone RM4-5)</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>563726</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albumin (Fraction V)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP1600-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anit-Rat and Anti-Hamster Igk / Negative Control Compensation Particle Set</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>552845</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fortessa Flow Cytometer</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FlowJo v10 Software</td>
			<td>FlowJo</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

quantifying leukocyte egress via lymphatic vessels from murine skin and tumors

Leukocytter egress fra perifere vev til drenering lymfeknuter er ikke bare avgjørende for immun overvåking og innvielse, men bidrar også til oppløsningen av eksterne tissue svar. Mens en rekke metoder er brukt om å kvantifisere leukocytter egress fra ikke-lymfoide, perifere vev, fortsatt mobilnettet og molekylære mekanismer som styrer kontekst-avhengige egress dårlig forstått. Her beskriver vi bruk av i situ photoconversion for kvantitativ analyse av leukocytter egress fra murine hud og svulster. Photoconversion tillater direkte merkingen av leukocytter bosatt innen kutan vev. Om huden eksponering for voldsomhet lyset induserer lokale preget inflammatorisk svar av leukocytter infiltrerer og vaskulær leakiness, i en head-to-head sammenligning med transdermal applikasjon av fluorescerende tracers, photoconversion spesielt merket vandrende dendrittiske celle populasjoner og samtidig aktivert kvantifisering av lymfoide og myeloide egress fra kutan microenvironments og tumorer. Mekanismer av leukocytter egress fortsatt mangler en komponent i vår forståelse av intratumoral leukocytter kompleksitet, og dermed bruk av verktøyene som beskrives her gir innblikk i dynamikken i svulst immun microenvironments både på stødig statlige og svar på terapi.

Vi først forsøkte å gjenskape photoconversion resultater publisert i litteraturen å vurdere effektiviteten og bestemme tilknyttet betennelse i huden musen. Det øre høydepunkt var utsatt for 100 mW violet lys (405 nm) for 3 min som tidligere beskrevet33. Enkelt celle suspensjoner generert fra øre hud eller cervical dLNs umiddelbart etter eksponering avslørte en 78% konvertering effektivitet av alle CD45+ leukocytter i huden med ingen konverterte c...

Watch this Scientific Journal Video about Quantifying Leukocyte Egress via Lymphatic Vessels from Murine Skin and Tumors at JoVE.com

Quantifying Leukocyte Egress via Lymphatic Vessels from Murine Skin and Tumors

Her viser vi metodene for i vivo kvantifisering av leukocytter egress fra naiv, betent, og ondartet murine hud. Vi utfører en head-to-head sammenligning av to modeller: transdermal FITC programmet og i situ photoconversion. Videre viser vi nytten av photoconversion for å spore leukocytter egress fra kutan svulster.

Kvantifisere leukocytter Egress via lymfekar fra Murine huden og svulster

Leukocyte egress from peripheral tissues to draining lymph nodes is not only critical for immune surveillance and initiation but also contributes to the ...

Photoconversion gir en sporbar in vivo metode for kvantitativ analyse av leukocytt utgående for en mekanistisk innsikt i leukocytt bolig og utgang dynamikk fra flere vev nettsteder i syke tilstander. Vel, her demonstrerer vi nytten av leukocyttsporing fra kutane svulster. Anvendelsen av denne analysen til andre vev og sykdommer er bare begrenset av evnen til å administrere lys.Den største fordelen med denne teknikken er at å muliggjøre kvantifisering av endogene, i stedet for overførte immuncellepopulasjoner som en utgående fra betent vev in vivo. For å indusere betennelse, etter å ha bekreftet mangel på respons på tåklemmen, bruk en mikropipette til å administrere 20 mikroliter dibutylgalat eller DBP, til ventral side av ørepinnen til en bedøvet Kaede transgen mus. Etter at DBP har tørket, trekker du øret gjennom en spalte i et stykke aluminiumsfolie og bruker dobbeltsidig tape for å feste øret flatt til folien med den dorsale siden vendt oppover.Deretter plasserer du at du er rett under en 405 nanometer lyskilde og fotokonverterer i tre minutter ved 100 milliwatt strøm. For vaccinia infeksjon, bruk en mikropipette til å administrere 5 ganger 10 til 6th plakk forming enheter av vaccinia virus i 10 mikroliter pbs på øret pinna av en bedøvet Kaede transgen mus og poke pinna 25 ganger. 24 timer senere, photoconvert pinna som nettopp demonstrert.På riktig eksperimentelt tidspunkt høster du pinnae og livmorhals- og inngangslymfeknuter og bruker to par pinsett for å skrelle fra hverandre ventral og ryggsiden av hver pinna. Plasser deretter lymfeknuter og pinna stykker, med innsiden av øret vendt ned, i individuelle brønner av en 24-brønns plate som inneholder 1 mg per milliliter collagenase D og 80 enheter per milliliter dnase fortynnet i HBSS som inneholder kalsium og magnesium. Bruk to 29 gauge nåler for å erte åpne hver lymfeknute kapsel og plassere platen på 37 grader Celsius i 30 minutter.På slutten av inkubasjonen trykker du på det fordøyde pinna- og lymfeknutevevet gjennom separate 70 Mikron nyloncellesiler for å oppnå enkeltcellesuspensjoner av hvert vev. Når svulstene har vokst til riktig eksperimentell størrelse, barber noen nylig gjenbygd pels rundt tumorstedet og trekk svulsten gjennom et sirkulært hull kuttet i et stykke aluminiumsfolie. Plasser svulsten rett under 405 nanometer lyskilde og photoconvert i 5 minutter ved 200 milliwatts strøm.24 timer etter fotokonversjon, høst svulstene og brachial og inguinal lymfeknuter fra hvert dyr og bruk saks for å hakke svulstene i individuelle brønner av en 24-brønnsplate som inneholder Collagenase D og DNase i HBSS. Plasser lymfeknutene i separate brønner og erte åpne kapslene som nettopp demonstrert. Etter inkubering av svulstene i en time og lymfeknutene i en halv time ved 37 grader Celsius, trykk på det fordøyde vevet gjennom separate 70 Micron-siler for å oppnå enkeltcellesuspensjoner av hvert vev.For å analysere enkeltcellesuspensjoner ved strømningscytometri, må du først samle milten eller blodet fra en Kaede transgen mus og lyse de røde blodcellene med ammoniumkloridkaliumbuffer. Del cellene i en ukonvertert Kaede FITC og en konvertert Kaede PE populasjon og resuspend enkeltfarge Kaede PE celler i en milliliter PBS i en brønn av en 24-brønns plate, deretter photoconvert cellene i 5 minutter under en 405 nanometer lyskilde ved 100 milliwatt strøm. Deretter bruker du de fotokonverterte Kaede PE-cellene og de ukonverterte Kaede FITC-cellene til å sette fotomultiplierspenningene til 70 til 80% av det totale spekteret for hver fluorescerende kanal.Når spenningene for Kaede-proteinene er satt, kompenserer du for alle de andre primære antistoffflekkene ved hjelp av enkelt fluoroformerkede kompensasjonsperler, i henhold til produsentens instruksjoner. Deretter kjører du prøvene på strømningscytometeret i henhold til standard strømningscytokometriske analyseprotokoller. Encellede suspensjoner generert fra ørehuden eller cervical drenering lymfeknuter umiddelbart etter fotokonversjon eksponering avslører en 78% konvertering effektivitet av alle CD45 positive leukocytter i huden, uten konverterte celler observert i drenering lymfeknuter.Kvantifisering av antall infiltrerende CD45 positive leukocytter i fotokonverterte ører null og 24 timer etter konvertering, avslører at fiolett lyseksponering forårsaker en statistisk signifikant økning i leukocyttinfiltrasjon. Denne økningen i CD45 positiv leukocyttinfiltrasjon er imidlertid liten i forhold til infiltrasjonen indusert av en potent inflammatorisk stimulans som vacciniavirus. Fotokonversjon øker også vaskulær permeabilitet i ørepinnaen målt ved Miles-analysen, sammen som indikerer at effekten av fiolett lys på vevsbetennelse bør vurderes ved optimalisering av dose, eksponeringstid og datatolkning.Flow cytometrisk analyse av dissosierte tumorceller fra fotokonverterte dyr avslører en betydelig konvertering av intratumorale CD45 positive celler fra Kaede FITC positivt til Kaede PE positiv, mens drenering lymfeknuteceller forblir ukonverterte. Fotokonversjonseffektiviteten til CD45 positive leukocytter varierte betydelig mellom tumortyper og størrelser, med CD45 positive leukocytter i små melanomsvulster som viser den mest effektive fotokonversjon. Etter hvert som tumorvolumene øker, reduseres konverteringseffektiviteten til rundt 50%Spesielt melanin har en slående innvirkning på fotokonversjonseffektivitet med en maksimal fotokonversjon av CD45 positive celler observert i melaninproduserende svulster på bare ca 30% i mindre svulster, som faller til 10%når tumorvolumene nærmer seg 400 kubikkmillimeter.Undersøkelsen av tumordrenering lymfeknuter 24 timer etter fotokonversjon avslører tilstedeværelsen av Kaede røde positive immunceller av ulike fenotyper, og viser dermed leukocyttutvandring fra den fotokonverterte svulsten. Etter utviklingen banet denne teknikken vei for forskere innen immunologi for å avdekke kinetikken til steady state og betent leukocyttomsetning i perifert vev. Mens du prøver denne prosedyren, er det viktig å sikre at bare vevet av interesse er fotokonvertert, da utilsiktet fotokonversjon av det omkringliggende vevet vil kompromittere resultatene dine.Personer som er nye på denne metoden, bør optimalisere eksponeringstiden for konvertering av vevet, samt varigheten av tidene før vevsamlingen oppstår basert på dynamikken i leukocytt av interesse.

Research

JoVE Journal

Biology

Murine Skin Transplantation

As one of the most stringent and least technically challenging models, skin transplantation is a standard method to assay host T cell responses to ...

Analysis of Physiologic E-Selectin-Mediated Leukocyte Rolling on Microvascular Endothelium

E-selectin is a type-1 membrane protein on microvascular endothelial cells that helps initiate recruitment of circulating leukocytes to cutaneous, bone ...

Isolation and Culture of Adult Epithelial Stem Cells from Human Skin

The homeostasis of all self-renewing tissues is dependent on adult stem cells. As undifferentiated stem cells undergo asymmetric divisions, they generate ...

Isolation of Immune Cells from Primary Tumors

Tumors create a unique immunosuppressive microenvironment (tumor microenvironment, TME) whereby leukocytes are recruited into the tumor by various ...

gDNA Enrichment by a Transposase-based Technology for NGS Analysis of the Whole Sequence of BRCA1, BRCA2, and 9 Genes Involved in DNA Damage Repair

gDNA Enrichment by a Transposase-based Technology for NGS Analysis of the Whole Sequence of BRCA1, BRCA2, and 9 Genes Involved in DNA Damage Repair

gDNA berikelse av en Transposase-basert teknologi for NGS Analyse av hele sekvensen av<em&gt; BRCA1</em&gt;,<em&gt; BRCA2</em&gt;, og ni gener involvert i DNA Damage Repair

The widespread use of Next Generation Sequencing has opened up new avenues for cancer research and diagnosis. NGS will bring huge amounts of new data on ...

Isolation and Culture of Primary Mouse Keratinocytes from Neonatal and Adult Mouse Skin

Isolering og kultur av primære muskeratinocytter fra neonatal og voksen mus hud

The keratinocyte (KC) is the predominant cell type in the epidermis, the outermost layer of the skin. Epidermal KCs play a critical role in providing skin ...

Expression of Fluorescent Fusion Proteins in Murine Bone Marrow-derived Dendritic Cells and Macrophages

Uttrykk for fluorescerende Fusion proteiner i Murine Ben margtransplantasjon-avledet dendrittiske celler og makrofager

Dendritic cells and macrophages are crucial cells that form the first line of defense against pathogens. They also play important roles in the initiation ...

Y-27632 Enriches the Yield of Human Melanocytes from Adult Skin Tissues

Y-27632 Beriker utbyttet av menneskelige melanocytter fra voksen hudvev

The isolation and culture of primary melanocytes from skin tissues is very important for biological research and has been widely used for clinical ...

A Murine Model of a Burn Wound Reconstructed with an Allogeneic Skin Graft

En murin modell av en burn sår rekonstruert med en allogen hud graft

Trivial superficial wounds heal without complications by primary intention. Deep wounds, such as full thickness burns, heal by secondary intention and ...

Inhibition of Wound Epidermis Formation via Full Skin Flap Surgery During Axolotl Limb Regeneration

Hemming av sår epidermis formasjon via full hudklaff kirurgi under axolotl lem regenerering

Classical experiments in salamander regenerative biology over the last century have long established that the wound epidermis is a crucial signaling ...