Name: quantifying leukocyte egress via lymphatic vessels from murine skin and tumors
Uploaded: 2019-01-07T14:00:00
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Los autores desean agradecer a Dr. Marcus Bosenberg por prever líneas de melanoma murino YUMM 1.7 y 1.1 YUMM y Dr. Deborah J. Fowell proporcionando B6. CG-Tg(CAG-tdKaede) ratones 15Utr acuerdo con RIKEN BRC a través de los Bio-recursos nacionales de MEXT, Japón.

Animales todos los protocolos han sido aprobados por el cuidado de Animal institucional y Comité de uso en la Oregon Health & Science University.
1. inducción de la inflamación y FITC pintura del pabellón de oreja de ratón
<ol><li>En campana de flujo laminar, anestesiar un ratón C57Bl/6 con isofluorane vaporizado (inducir en el isofluorane 3-5% y se mantiene a 1-3% isofluorane; tasa de flujo de oxígeno en 0.5-1.0 L/min). Asegurar adecuada anestesia mediante el control de la pérdida d...

Aunque la salida de leucocitos de los tejidos periféricos, no-linfoides es crítica para la iniciación y resolución de la respuesta inmune, los mecanismos moleculares que rigen la salida son poco conocidos. Esta brecha en el conocimiento es en gran parte debido a la disponibilidad lista de herramientas para la cuantificación in vivo. Aquí, describimos el uso de ratones photoconvertible (Kaede-Tg) para cuantificar la salida de leucocitos endógena de la piel y tumores y proporcionar una comparación directa ...

Las respuestas inmunitarias de tejido periférico están conformadas no sólo por el reclutamiento de leucocitos a los sitios de inflamación, sino también por los mecanismos que regulan su retención posterior. Por lo tanto, inmunidad protectora es dictada por acumulativos mecanismos celulares y moleculares que determinan si entra a un leucocito, permanece dentro, o más bien emigra de tejido periférico vía los recipientes linfáticos. Lo importante es la propensión de leucocitos al tejido a través de vasos linfáticos (denominada salida) la salida está ligada a sus funciones especializadas. Las células dendríticas (DC) adquieran comportamiento migratorio en respuesta a señales de maduración conduce al transporte del antígeno y presentación en el drenaje de los ganglios linfáticos (dLN), un proceso que es necesario para la inmunidad adaptativa1. Barrido de las células mieloides, tales como los macrófagos y neutrófilos, sirven para limpiar escombros de apoptosis a través de la fagocitosis. Durante una infección bacteriana, neutrófilos salida del tejido y en última instancia sufren apoptosis en dLNs2 y en un modelo de colitis inducida por DSS, datos apoyan la hipótesis de que la salida de macrófagos es necesaria para resolver la inflamación local3. Si se produce la salida de neutrófilos y macrófagos en todos los contextos inflamatorios, sin embargo, se desconoce. Evidencia de la salida de linfocitos T de estado estacionario4,5,6,7, infectados8y inflamada4,9,10, 11,12 los tejidos no-linfoides, periférico indica que las células T se recirculan activamente, aunque mal entendidas las señales basadas en el tejido que esta salida. Varios estudios han identificado las señales necesarias para la migración direccional hacia los capilares linfáticos de drenaje y posterior salida incluyendo chemokine (C-C motif) ligando 21 (CCL21) y su receptor CCR74,11, 13, ligando de chemokine (adorno de C-X-C) 12 (CXCL12) y su receptor CXCR42,14y esfingosina-1-fosfato (S1P)10,15,16. Sin embargo, estos mecanismos no están activos en todos los contextos, y si determinan la salida de todos los tipos de la célula sigue siendo una incógnita. Lo importante, más penetración en los mecanismos que rigen la salida y su relevancia funcional en la enfermedad requiere cuantitativa en vivo métodos de análisis.
Varios métodos se han utilizado para cuantificar la salida en varios modelos animales en vivo , incluyendo la canulación directa de los vasos linfáticos, transferencia adoptiva de ex vivo etiquetados leucocitos, aplicación transdérmica de trazadores fluorescentes, inyección de partículas marcadas y en vivo photoconversion17,18. La canulación directa de los vasos linfáticos aferentes ratón es difícil y limitado en pequeños animales por los volúmenes de líquido que puede ser acumulado. Así, la canalización se ha realizado en gran parte en grandes animales (e.g., ovejas) donde tales manipulaciones quirúrgicas son prácticas. Estos estudios proporcionan evidencia directa de la presencia de células linfoides y mieloides en linfa10,19,20. Además, ovinos modelos revelan que la inflamación aguda y crónica incrementaron la presencia de linfocitos en los ganglios linfáticos casi 100-fold10,21.
Transferencia adoptiva de linfocitos genéticamente manipulados y etiquetados ha revelado lo importante que CCR7 se requiere para la salida de CD4+ T de las células de la piel agudo inflamada5,11, mientras que el tratamiento previo de los linfocitos con la pequeña molécula agonista de receptor de S1P, FTY720, inhibe parcialmente su salida10. Curiosamente, la salida de linfocitos transferidos de piel crónicamente inflamada es CCR7-independiente10, pero puede requerir parcialmente CXCR49. Experimentos de transferencia adoptiva, sin embargo, entregan a números no fisiológica de ex vivo los linfocitos activados y etiquetados en tejido a través de la inyección, que altera el ambiente biomecánico de los tejidos y elevadas presiones de fluido intersticiales abrir los capilares linfáticos iniciales y alterar sus propiedades de transporte22. Como alternativa, aplicación transdérmica de isotiocianato de fluoresceína (FITC) en la presencia o ausencia de irritantes cutáneos (por ej., ftalato de dibutilo, DBP) o infección23,24 permite el seguimiento de los células fagocíticas que acumulan tracer y migran a dLNs. Del mismo modo, fluorescencia etiquetados tumores proporcionan un medio para rastrear las células fagocíticas que han engullido tumor material25. Estos métodos han proporcionado importante información sobre los mecanismos que gobiernan DC salida13,14,17,26,27 pero son incapaces de seguir no fagocíticas los linfocitos y, la interpretación se pueden complicar por drenaje linfático libre de FITC soluble así etiquetado no migratorias, DCs residente LN.
Por otra parte, la microscopia intravital es una poderosa herramienta que permite el seguimiento en vivo de las poblaciones de leucocitos fisiológicamente relevante en tiempo real28,29. Se usa en combinación con los ratones de reportero y basados en anticuerpos en vivo inmunofluorescente etiquetado intravital microscopía ha puesto de manifiesto el complejo espacial y dinámica temporal de inmune celular trata de personas, incluyendo migración intersticial30 , transmigración a través del endotelio linfático, pasaje dentro de la luz linfática y la migración a LN entrada28,31. Amplia adopción de técnicas de imagen intravital está limitado por el costo, conocimientos necesarios para la instalación y limitado rendimiento para la cuantificación de múltiples tipos de células. Todavía, acoplamiento de métodos cuantitativos que analizan la dinámica de la población los tejidos con la proyección de imagen intravital proporcionará visión mecanicista adicional e importante con respecto a los mecanismos de la movilidad y la migración hacia y dentro de los capilares linfáticos 18 , 31 , 32.
En consecuencia, photoconversion en vivo se ha convertido en un método que permite en situ etiquetado, independiente de la actividad fagocítica y para la cuantificación de la salida de leucocitos fisiológica (cuando está juntado con citometría de flujo) en el ausencia o presencia de desafío. Ratones de Kaede-Tg constitutivamente expresan una proteína aislada de corales pétreos que exhibe fluorescencia verde (Kaede verde) hasta que se expone a la luz violeta, después de lo cual convierte irreversiblemente a fluorescencia roja (Kaede rojo)33. Las células Photoconverted pueden ser rastreadas como que salida de sitios de tejido periférico y se acumulan en dLNs. Esto y otros similares photoconvertible ratón modelos34,35 han revelado importante biología incluyendo salida constitutiva de las células T reguladoras de piel36, salida de la célula de B de CXCR4-dependiente de placas de Peyer37 , movilización de las células T de memoria residente péptido nuevo reto38y salida amplia del leucocito de tumor microambientes39. En este documento, realizamos una comparación directa de photoconversion con aplicación de FITC transdérmica en el contexto de la inflamación cutánea e infección para permitir la comparación directa de los datos existentes con el método photoconvertible. Además, demostrar photoconversion en tumores implantados y describir la eficiencia de conversión y salida selectiva de microambientes de tumor. Por lo tanto, sostenemos que más aplicación de estos métodos es necesario dilucidar la biología fundamental de salida de leucocitos de tumores, que tendrá implicaciones significativas para interpretar la complejidad del leucocito de intratumoral, inmunidad antitumoral y respuesta a la terapia.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Collagenase D</td>
			<td>Roche</td>
			<td>11088866001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNase</td>
			<td>Roche</td>
			<td>4536282001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silver-LED-405B light source with optical fiber and collimtor</td>
			<td>Prizmatix Ltd</td>
			<td>V8144</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescein isothiocyanate isomer I</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F4274</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dibutyl phthalate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>524980</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>acetone</td>
			<td>Macron Fine Chemicals</td>
			<td>2440-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>29-guage syringes</td>
			<td>Exel International</td>
			<td>26029</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Evans Blue</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>E2129</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70 um cell strainers</td>
			<td>VWR</td>
			<td>732-2758</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P6148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBSS</td>
			<td>Caisson</td>
			<td>HBL06</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LIVE/DEAD Fixable Aqua Dead Cell Stain Kit</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>L34966</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Purified Anti-mouse CD16/CD32</td>
			<td>Tonbo Biosciences</td>
			<td>70-0161-M001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BV605 CD11c (clone N418)</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>117334</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PerCP-Cy5.5 MHCII (clone M5/114.15.2)</td>
			<td>BD Pharmingen</td>
			<td>562363</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BV421 CD3e (clone 145-2C11)</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>100341</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>APC CD8a (clone 53-6.7)</td>
			<td>TonBo Biosciences</td>
			<td>20-0081-u100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>APC-Cy7 CD45 (clone 30-F11)</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>103116</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BV650 CD19 (clone 6D5)</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>115541</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PercCP-Cy5.5 Ly6C (clone HK1.4)</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>128011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 647 F4/80 (clone BM8)</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>123121</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>APC-Cy7 Ly6G (clone 1A8)</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>127623</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BV711 CD11b (clone M1/70)</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>101241</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BV605 CD45 (clone 30-F11)</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>103155</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BV711 CD4 (clone RM4-5)</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>563726</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albumin (Fraction V)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP1600-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anit-Rat and Anti-Hamster Igk / Negative Control Compensation Particle Set</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>552845</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fortessa Flow Cytometer</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FlowJo v10 Software</td>
			<td>FlowJo</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

quantifying leukocyte egress via lymphatic vessels from murine skin and tumors

Salida de leucocitos de tejidos periféricos a los ganglios linfáticos drenantes no sólo es fundamental para la vigilancia inmune e iniciación sino también contribuye a la resolución de las respuestas del tejido periférico. Mientras que una variedad de métodos se utilizan para cuantificar la salida de leucocitos de tejidos no-linfoides, periféricos, los mecanismos celulares y moleculares que rigen la salida dependiente del contexto siguen siendo mal entendidos. Aquí, describimos el uso de photoconversion en situ para el análisis cuantitativo de la salida de leucocitos de piel murina y tumores. Photoconversion permite la directa etiquetado de leucocitos residente dentro del tejido cutáneo. Aunque la exposición a luz ultravioleta induce local las respuestas inflamatorias caracterizan por infiltrados de leucocitos y filtración vascular, en una comparación directa con aplicación transdérmica de trazadores fluorescentes, photoconversion específicamente etiquetado las poblaciones migratorias dendrítico de la célula y al mismo tiempo permitió la cuantificación de salida mieloide y linfoide de microambientes cutáneas y tumores. Los mecanismos de salida de leucocitos siguen siendo un componente faltante en nuestra comprensión de la complejidad de leucocito intratumoral, y así la aplicación de las herramientas descritas en este documento proporcionará una visión única en la dinámica de tumor inmunes microambientes ambos en constante estado y en respuesta a la terapia.

Primero intentamos replicar los resultados photoconversion publicados en la literatura para evaluar la eficacia y determinar la inflamación asociada en la piel de ratón. El pabellón de la oreja fue expuesto a la luz 100 de mW violeta (405 nm) para 3 minutos como se ha descrito33. Solo suspensiones celulares generados a partir de la piel del oído o dLNs cervical inmediatamente después de la exposición revelaron una eficiencia de conversión del 78% de CD45 tod...

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Quantifying Leukocyte Egress via Lymphatic Vessels from Murine Skin and Tumors

Aquí, demostramos los métodos de cuantificación en vivo de la salida de leucocitos de ingenuo, inflamado y mala piel murina. Realizamos una comparación directa de dos modelos: photoconversion de aplicación y en situ FITC transdérmica. Además, demostramos la utilidad de photoconversion para el seguimiento de salida de leucocitos de tumores cutáneos.

Cuantificación de leucocitos salida vía los recipientes linfáticos de la piel murina y tumores

Leukocyte egress from peripheral tissues to draining lymph nodes is not only critical for immune surveillance and initiation but also contributes to the ...

La fotoconversión proporciona un método in vivo rastreable para el análisis cuantitativo de la salida de leucocitos para una visión mecanicista de la residencia de leucocitos y la dinámica de salida de múltiples sitios de tejido en estados enfermos. Bueno, aquí demostramos la utilidad del seguimiento de leucocitos de tumores cutáneos. La aplicación de este ensayo a otros tejidos y enfermedades está limitada sólo por la capacidad de administrar la luz.La principal ventaja de esta técnica es que permite la cuantificación de poblaciones endógenas, en lugar de células inmunitarias transferidas como una salida de tejidos inflamados in vivo. Para inducir la inflamación, después de confirmar la falta de respuesta al pellizco del dedo del otro, utilice una micropipeta para administrar 20 microlitros de ftalato de dibutilo o DBP, en el lado ventral del pinna del oído de un ratón transgénico Kaede anestesiado. Después de permitir que el DBP se seque, tire de la oreja a través de una hendidura en un pedazo de papel de aluminio y utilice cinta adhesiva de doble cara para fijar la oreja planamente a la lámina con el lado dorsal hacia arriba.A continuación, coloque que está directamente debajo de una fuente de luz de 405 nanómetros y fotoconvierta durante tres minutos a 100 milivatios de potencia. Para la infección por vacunas, utilice una micropipeta para administrar 5 veces 10 a la 6a placa que forma unidades del virus de la vacuna en 10 microlitros de PBS en el pinna del oído de un ratón transgénico Kaede anestesiado y pinche el pinna 25 veces. 24 horas más tarde, photoconvertir el pinna como se acaba de demostrar.En el punto de tiempo experimental apropiado, cosecha las pinnas y los ganglios linfáticos cervicales e inguinales y usa dos pares de pinzas para despegar el lado ventral y dorsal de cada pinna. A continuación, coloque los ganglios linfáticos y las piezas de pinna, con el interior de la oreja hacia abajo, en pozos individuales de una placa de 24 pozos que contiene 1 miligramo por mililitro de colágeno D y 80 unidades por mililitro de dnasa diluida en HBSS que contiene calcio y magnesio. Utilice dos agujas de calibre 29 para abrir cada cápsula del ganglio linfático y coloque la placa a 37 grados centígrados durante 30 minutos.Al final de la incubación, presione los tejidos de pinna y ganglios linfáticos digeridos a través de coladores separados de células de nylon de 70 micras para obtener suspensiones de una sola célula de cada tejido. Cuando los tumores hayan crecido al tamaño experimental adecuado, afeite cualquier piel recién regenerada alrededor del sitio del tumor y tire del tumor a través de un agujero circular cortado en un pedazo de papel de aluminio. Coloque el tumor directamente debajo de la fuente de luz de 405 nanómetros y fotoconvertir durante 5 minutos a 200 milivatios de potencia.24 horas después de la fotoconversión, cosecha los tumores y ganglios linfáticos braquiales e inguinales de cada animal y usa tijeras para picar los tumores dentro de pozos individuales de una placa de 24 pozos que contiene Colágenoasa D y DNase en HBSS. Coloque los ganglios linfáticos en pozos separados y haga una burla para abrir las cápsulas como se acaba de demostrar. Después de incubar los tumores durante una hora y los ganglios linfáticos durante media hora a 37 grados Celsius, presione los tejidos digeridos a través de coladores separados de 70 micras para obtener suspensiones de una sola célula de cada tejido.Para analizar las suspensiones de una sola célula por citometría de flujo, primero recoja el bazo o la sangre de un ratón transgénico Kaede y lyse los glóbulos rojos con tampón de potasio de cloruro de amonio. Divida las células en un Kaede FITC no convertido y una población de Kaede PE convertida y resuspendir las células Kaede PE de un solo color en un mililitro de PBS en un pozo de una placa de 24 pozos, luego fotoconvertir las células durante 5 minutos bajo una fuente de luz de 405 nanómetros a 100 milivatios de potencia. A continuación, utilice las celdas Kaede PE fotoconvertidas y las células Kaede FITC no convertidas para establecer los voltajes fotomultiplicadores en 70 a 80% del rango total de cada canal fluorescente.Una vez que se hayan establecido los voltajes para las proteínas Kaede, compense todas las demás manchas de anticuerpos primarios utilizando cuentas de compensación etiquetadas con un solo fluoróforo, de acuerdo con las instrucciones del fabricante. A continuación, ejecute las muestras en el citómetro de flujo de acuerdo con los protocolos de análisis citométrico de flujo estándar. Las suspensiones de una sola célula generadas a partir de la piel del oído o de los ganglios linfáticos drenantes cervicales inmediatamente después de la exposición a la fotoconversión revelan una eficiencia de conversión del 78% de todos los leucocitos positivos CD45 en la piel, sin que se observen células convertidas en los ganglios linfáticos drenantes.La cuantificación del número de leucocitos positivos CD45 infiltrados en oídos fotoconvertidos cero y 24 horas después de la conversión, revela que la exposición a la luz violeta provoca un aumento estadísticamente significativo en la infiltración de leucocitos. Este aumento en la infiltración positiva de leucocitos CD45 sin embargo, es pequeño en relación con la infiltración inducida por un potente estímulo inflamatorio como el virus de la vacuna. La fotoconversión también aumenta la permeabilidad vascular en las pinnas del oído medida por el ensayo Miles, lo que en conjunto indica que se deben tener en cuenta los efectos de la luz violeta en la inflamación del tejido al optimizar la dosis, el tiempo de exposición y la interpretación de los datos.El análisis citométrico de flujo de células tumorales disociadas de animales fotoconvertidos revela una conversión significativa de células positivas CD45 intratumorales de Kaede FITC positivas a Kaede PE positivas, mientras que las células de los ganglios linfáticos drenan permanecen sin convertir. La eficiencia de la fotoconversión de los leucocitos positivos CD45 varió significativamente entre los tipos y tamaños de tumores, con leucocitos positivos CD45 dentro de pequeños tumores de melanoma que demuestran la fotoconversión más eficiente. A medida que aumentan los volúmenes tumorales, la eficiencia de conversión disminuye a alrededor del 50%Notablemente, la melanina tiene un impacto sorprendente en la eficiencia de la fotoconversión con una máxima fotoconversión de células positivas CD45 observadas dentro de tumores productores de melanina de sólo alrededor del 30% en tumores más pequeños, que cae al 10% a medida que los volúmenes tumorales se acercan a 400 milímetros cúbicos.El examen de los ganglios linfáticos drenantes tumorales 24 horas después de la fotoconversión revela la presencia de células inmunitarias positivas rojas Kaede de varios fenotipos, lo que demuestra la emigración de leucocitos del tumor fotoconvertido. Después de su desarrollo, esta técnica allanó el camino para que los investigadores en el campo de la Inmunología descubrieran la cinética del estado estacionario y la rotación de leucocitos inflamada en el tejido periférico. Al intentar este procedimiento, es importante asegurarse de que sólo el tejido de interés es fotoconvertido, ya que la fotoconversión involuntaria del tejido circundante comprometerá sus resultados.Los individuos nuevos en este método deben optimizar el tiempo de exposición para la conversión de su tejido, así como la duración de los tiempos antes de que se produzca la recolección de tejido en función de la dinámica del leucocitos de interés.

Research

JoVE Journal

Biology

Murine Skin Transplantation

Trasplante de piel murina

As one of the most stringent and least technically challenging models, skin transplantation is a standard method to assay host T cell responses to ...

Investigación

Biología

Analysis of Physiologic E-Selectin-Mediated Leukocyte Rolling on Microvascular Endothelium

Análisis de los Rolling fisiológicos de E-selectina leucocitaria mediada por el endotelio microvascular

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Isolation and Culture of Adult Epithelial Stem Cells from Human Skin

Aislamiento y cultivo de células madre adultas epiteliales de la piel humana

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Isolation of Immune Cells from Primary Tumors

El aislamiento de las células inmunes de tumores primarios

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gDNA Enriquecimiento por una tecnología basada en la transposasa de Análisis NGS de la secuencia entera de<em&gt; BRCA1</em&gt;,<em&gt; BRCA2</em&gt;, y 9 genes involucrados en la reparación del ADN daños

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Isolation and Culture of Primary Mouse Keratinocytes from Neonatal and Adult Mouse Skin

Aislamiento y cultivo de queratinocitos de ratón primario de piel de ratón neonatal y adulto

The keratinocyte (KC) is the predominant cell type in the epidermis, the outermost layer of the skin. Epidermal KCs play a critical role in providing skin ...

Expression of Fluorescent Fusion Proteins in Murine Bone Marrow-derived Dendritic Cells and Macrophages

Expresión de proteínas fluorescentes de fusión en murinas médula ósea células dendríticas y macrófagos

Dendritic cells and macrophages are crucial cells that form the first line of defense against pathogens. They also play important roles in the initiation ...

Y-27632 Enriches the Yield of Human Melanocytes from Adult Skin Tissues

Y-27632 enriquece el rendimiento de los melanocitos humanos de los tejidos adultos de la piel

The isolation and culture of primary melanocytes from skin tissues is very important for biological research and has been widely used for clinical ...

A Murine Model of a Burn Wound Reconstructed with an Allogeneic Skin Graft

Un modelo murino de una herida de quemadura reconstruida con un injerto de piel alogénico

Trivial superficial wounds heal without complications by primary intention. Deep wounds, such as full thickness burns, heal by secondary intention and ...

Inhibition of Wound Epidermis Formation via Full Skin Flap Surgery During Axolotl Limb Regeneration

Inhibición de la formación de la epidermis de la herida a través de la cirugía de colgajo cutáneo completo durante la regeneración de las extremidades del ajolote

Classical experiments in salamander regenerative biology over the last century have long established that the wound epidermis is a crucial signaling ...