Name: an immunohistopathologic study to profile the folate receptor beta macrophage and vascular immune microenvironment in giant cell arteritis
Uploaded: 2019-02-08T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about An Immunohistopathologic Study to Profile the Folate Receptor Beta Macrophage and Vascular Immune Microenvironment in Giant Cell Arteritis at JoVE.com

وأمكن هذا العمل بالدعم من الدكتور دوغلاس السلالم، ماريان كلينغر، بينكو Ann، شعبة أمراض الروماتيزم/قسم الطب والجزيئية و "الأنسجة الأساسية المختبرية"، و "بنسلفانيا الدولة كلية الطب في جامعة"، هيرشي بنسلفانيا

وافق "مجلس استعراض مؤسسي الدولة بن" جميع الأساليب المذكورة.
1-نسيجية إعداد وتجهيز بعد الحصول على خزعة الشريان الزمانية
ملاحظة: تحت التخدير الموضعي وظروف معقمة يؤديها طبيب جراح مصدقة خزعة الشريان الزمنية (علامة التبويب). بعد الحصول على مقطع الشرايين 3 ?...

<ol>
	<li>Klippel, J. H., Stone, J. H., White, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Primer on the rheumatic diseases. , (2008).</li><li>Weyand, C. M., Goronzy, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+mechanisms+in+medium+and+large-vessel+vasculitis.">Immune mechanisms in medium and large-vessel vasculitis.</a> Nature Reviews Rheumatol. 9 (12), 731-740 (2013).</li><li>Weyand, C. M., Liao, Y. J., Goronzy, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+immunopathology+of+giant+cell+arteritis:+diagnostic+and+therapeutic+implications.">The immunopathology of giant cell arteritis: diagnostic and therapeutic implications.</a> Journal of Neuro-ophthalmology. 32 (3), 259-265 (2012).</li><li>Deng, J., Younge, B., Olshen, R., Goronzy, J., Weyand, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Th17+and+Th1+T-cell+responses+in+giant+cell+arteritis.">Th17 and Th1 T-cell responses in giant cell arteritis.</a> Circulation. 121, 906-915 (2010).</li><li>Mahr, A. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adjunctive+methotrexate+for+treatment+of+giant+cell+arteritis:+an+individual+patient+data+meta-analysis.">Adjunctive methotrexate for treatment of giant cell arteritis: an individual patient data meta-analysis.</a> Arthritis &amp; Rheumatology. 56 (8), 2789-2797 (2007).</li><li>Hoffman, G. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+multicenter,+randomized,+double-blind,+placebo-controlled+trial+of+adjuvant+methotrexate+treatment+for+giant+cell+arteritis.">A multicenter, randomized, double-blind, placebo-controlled trial of adjuvant methotrexate treatment for giant cell arteritis.</a> Arthritis &amp; Rheumatology. 46 (5), 1309-1318 (2002).</li><li>Stone, J. H., Klearman, M., Collinson, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trial+of+Tocilizumab+in+Giant-Cell+Arteritis.">Trial of Tocilizumab in Giant-Cell Arteritis.</a> New England Journal of Medicine. 377 (15), 1494-1495 (2017).</li><li>Milman, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tocilizumab+increased+sustained+glucocorticoid-free+remission+from+giant+cell+arteritis.">Tocilizumab increased sustained glucocorticoid-free remission from giant cell arteritis.</a> Annals of Internal Medicine. 167 (12), JC63 (2017).</li><li>Xia, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+functional+folate+receptor+is+induced+during+macrophage+activation+and+can+be+used+to+target+drugs+to+activated+macrophages.">A functional folate receptor is induced during macrophage activation and can be used to target drugs to activated macrophages.</a> Blood. 113 (2), 438-446 (2009).</li><li>Shen, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Folate+receptor-beta+constitutes+a+marker+for+human+proinflammatory+monocytes.">Folate receptor-beta constitutes a marker for human proinflammatory monocytes.</a> Journal of Leukocyte Biology. 96 (4), 563-570 (2014).</li><li>Salazar, M. D., Ratnam, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+folate+receptor:+what+does+it+promise+in+tissue-targeted+therapeutics.">The folate receptor: what does it promise in tissue-targeted therapeutics.</a> Cancer and Metastasis Reviews. 26 (1), 141-152 (2007).</li><li>Low, P. S., Henne, W. A., Doorneweerd, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Discovery+and+development+of+folic-acid-based+receptor+targeting+for+imaging+and+therapy+of+cancer+and+inflammatory+diseases.">Discovery and development of folic-acid-based receptor targeting for imaging and therapy of cancer and inflammatory diseases.</a> Accounts of Chemical Research. 41 (1), 120-129 (2008).</li><li>Puig-Kroger, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Folate+receptor+beta+is+expressed+by+tumor-associated+macrophages+and+constitutes+a+marker+for+M2+anti-inflammatory/regulatory+macrophages.">Folate receptor beta is expressed by tumor-associated macrophages and constitutes a marker for M2 anti-inflammatory/regulatory macrophages.</a> Cancer Research. 69 (24), 9395-9403 (2009).</li><li>Nakashima-Matsushita, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+expression+of+folate+receptor+beta+and+its+possible+role+in+methotrexate+transport+in+synovial+macrophages+from+patients+with+rheumatoid+arthritis.">Selective expression of folate receptor beta and its possible role in methotrexate transport in synovial macrophages from patients with rheumatoid arthritis.</a> Arthritis &amp; Rheumatology. 42 (8), 1609-1616 (1999).</li><li>vander Heijden, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Folate+receptor+beta+as+a+potential+delivery+route+for+novel+folate+antagonists+to+macrophages+in+the+synovial+tissue+of+rheumatoid+arthritis+patients.">Folate receptor beta as a potential delivery route for novel folate antagonists to macrophages in the synovial tissue of rheumatoid arthritis patients.</a> Arthritis &amp; Rheumatology. 60 (1), 12-21 (2009).</li><li>Jansen, G., Peters, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+insights+in+folate+receptors+and+transporters:+implications+for+disease+and+treatment+of+immune+diseases+and+cancer.">Novel insights in folate receptors and transporters: implications for disease and treatment of immune diseases and cancer.</a> Pteridines. 26 (2), 41-53 (2015).</li><li>Albano-Aluquin, S., Malysz, J., Aluquin, V. R., Ratnam, M., Olsen, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+immunohistochemical+analysis+of+folate+receptor+beta+expression+and+distribution+in+giant+cell+arteritis+-+a+pilot+study.">An immunohistochemical analysis of folate receptor beta expression and distribution in giant cell arteritis - a pilot study.</a> American Journal of Clinical and Experimental Immunology. 6 (6), 107-114 (2017).</li><li>Ross, J. F., Chaudhuri, P. K., Ratnam, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+regulation+of+folate+receptor+isoforms+in+normal+and+malignant+tissues+in+vivo+and+in+established+cell+lines.+Physiologic+and+clinical+implications.">Differential regulation of folate receptor isoforms in normal and malignant tissues in vivo and in established cell lines. Physiologic and clinical implications.</a> Cancer. 73 (9), 2432-2443 (1994).</li><li>Reiner, N. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+in+molecular+biology.+Macrophages+and+dendritic+cells.+Methods+and+protocols.+Preface.">Methods in molecular biology. Macrophages and dendritic cells. Methods and protocols. Preface.</a> Methods in Molecular Biology. 531, (2009).</li><li>Robertson, D., Savage, K., Reis-Filho, J. S., Isacke, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+immunofluorescence+labelling+of+formalin-fixed+paraffin-embedded+(FFPE)+tissue.">Multiple immunofluorescence labelling of formalin-fixed paraffin-embedded (FFPE) tissue.</a> BMC Cell Biology. 9, 13 (2008).</li><li>Pawlina, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Histology: A text and atlas with correlated cell and molecular biology. , (2016).</li><li>Kumar, V., Abbas, A., Robbins Aster, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Robbins and Cotran pathologic basis of disease. , (2015).</li><li>Dabbs, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Diagnostic immunohistochemistry. , (2019).</li><li>Ross, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Folate+receptor+type+beta+is+a+neutrophilic+lineage+marker+and+is+differentially+expressed+in+myeloid+leukemia.">Folate receptor type beta is a neutrophilic lineage marker and is differentially expressed in myeloid leukemia.</a> Cancer. 85 (2), 348-357 (1999).</li><li>Holzapfel, G. A., Fratzl, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Collagen+in+arterial+walls:+biomechanical+aspects.">Collagen in arterial walls: biomechanical aspects.</a> Collagen. Structure and Mechanics. , 285-324 (2008).</li><li>Sultan, H., Smith, S. V., Lee, A. G., Chevez-Barrios, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathologic+Markers+Determining+Prognosis+in+Patients+with+Treated+or+Healing+Giant+Cell+Arteritis.">Pathologic Markers Determining Prognosis in Patients with Treated or Healing Giant Cell Arteritis.</a> American Journal of Ophthalmology. , (2018).</li></ol>

الائتلاف هو التهاب الأوعية الأكثر شيوعاً في البالغين، ولها سمة مرضية تجسد مجموعة قوية من لمفاوية مساعد تي وتنشيط الضامة التي ترد أيضا في سائر الأمراض الحبيبية أو فاسكولوباثيس مثل ساركويد و 2،بوليانجييتيس الحبيبي3. في الائتلاف، يوفر الشريان الزماني تمثيل ج...

خلية عملاقة الدموية (الائتلاف) مرض التهاب الشرايين المتوسطة إلى الكبيرة، استهداف الشريان الاورطي وفروعه والتي تؤثر على كبار السن. ويقدم خفيفة إلى المضاعفات الدماغية حادة مثل الصداع، ألم الفك، وفقدان الرؤية، والسكتة الدماغية والأنسجة والغرغرينا. ويؤكد التشخيص علامات التهابات عالية مثل كرات الدم الحمراء معدل الترسيب (ESR) ونمط الأنسجة متميزة على الشريان الزمانية خزعة (علامة التبويب)1. الائتلاف الأوعية الكبار الأكثر شيوعاً، وإمكانية الوصول إلى الشريان الزمانية التي تم الحصول عليها للتشخيص ويعرض ميزة على غيرها فاسكولوباثيس، مما مكن واحد دراسة الآلية المرضية سهولة أكبر. وتشمل النتائج النموذجية في علامة التبويب التغلغل الضامة/النسيجية والخلايا اللمفية تي وجدت في كافة طبقات الأوعية الدموية الغلالة البطانية، ووسائط الإعلام، والغلالة مع تدمير المتزامنة الصفيحة المرنة التي عادة ما يفصل بين هذه 2من المقصورات. وتثبت الأدلة الحالية أن الائتلاف ينطوي مستضد غير معروف أنه ينشط الخلايا الجذعية في الغلالة الوعائية، متبوعاً بتوظيف مساعد خلايا T (Th)، على وجه التحديد Th1 و Th17 الأنواع الفرعية التي تفرز انترلوكين-17 و انترفيرون-غاما (IFG) على التوالي. IFG ثم المجندين وينشط الضامة لإنتاج السيتوكينات والبروتياز. وتشمل هذه السيتوكينات الموالية التحريضية؛ بما في ذلك إيل-12، الذي شكل متبادل ينشط خلايا Th1 وبالتالي توفير حلقة التغذية مرتدة إيجابية؛ عامل نخر الورم وانترلوكين-6، الذي يسبب التهاب المفاصل والحمى وميتالوبروتيسيس التي تلف الصفيحة المرنة. الكورتيزون (GC)، التي تشكل العلاج المزمن القياسية، التحكم جزئيا مسارات سيتوكين بتخفيف Th17/إيل-17 ولكن لا ذراع Th1/IFG3،الاستجابة المناعية4. ولسوء الحظ، يؤدي وقف GC انتكاس المرض. كطريقة بديلة، قد تم أغراض أخرى الميثوتريكسات لعلاج الائتلاف، ولكن النهاية السريرية المرجوة لم تتحقق دائماً على الرغم من أن لم تستخدم المؤشرات الحيوية أكثر حساسية للعلاج الرصد5،6 . في عام 2017، ومانع انترلوكين 6، توسيليزوماب، أقر للمعالجة للائتلاف كما أنه أظهر فعالية مكافحة الأمراض والستيرويد تجنيب الآثار7،8.
وحتى الآن، هناك لا المؤشرات الحيوية جيدة للائتلاف. كنتيجة لذلك، من الصعب رصد نشاط المرض وتيتراتي جرعات من الأدوية المتاحة تجنب الآثار الضارة وتخفيف عبء التكلفة للمجتمع. وبالتالي، من الضروري البحث عن العلامات البيولوجية مرشح أن يرتبط بنشاط المرض، وتقديم رؤى جديدة عن المرضية والمساعدة في اتخاذ القرارات العلاجية.
التقلبات بلعم التنشيط عامل حاسم في الائتلاف المرضية. وهكذا، قد يكون وسيلة فعالة لعلاج الائتلاف الاستهداف الانتقائي لتفعيل الضامة. بيتا مستقبلات حمض الفوليك (FRB) هو بروتين سكري جليكوسيل-فوسفاتيديلينوسيتول أن يرتكز على غشاء الخلية المعرب عنها في الخلايا العادية حيدي، خلايا سرطان الدم النقوي وتنشيط الضامة. أن يجند، حمض الفوليك، وهو فيتامين أساسي في شكله مخفضة، التي تمكن الخلوية التوليف ومثلايشن وإصلاح الحمض النووي9. هو فعل التعبير FRB في أمراض المناعة الذاتية وخلال التسرطن. التعبير عن المقيد لسطح وحيدات أو برو-التهابات الضامة M1 في التهاب المفاصل أو الالتهابات M2 الضامة في الجهاز الصلبة والأورام الخبيثة النقوي10،،من1112 , 13-بالإضافة إلى دورها المحتمل كالعلامات البيولوجية لتنشيط الضامة، يمكن تمكين FRB نقل المخدرات انتقائية من خلال عملية متعددة الخطوات تبدأ بربط مستقبلات حمض الفوليك أو أنتيفولاتيس أو المخدرات مترافق الفولات في الخلية السطح، تليها التدخيل والإفراج عنها وتسليم المخدرات المرجوة في نهاية المطاف إلى الخلية الداخلية إليه12،14،،من1516. وعلى نقيض FRB المعرب عنها في الخلايا السرطانية، وتنشيط الضامة، FRB التي أعرب عنها في الخلايا المكونة للدم العادي غير قادر على ربط فلتس مما يضمن أن تسليم المخدرات FRB/حمض الفوليك-بوساطة يقتصر على FRB المصابات بالتهاب أو الخلايا السرطانية.
وفي دراستنا السابقة، أثبتنا للمرة الأولى أن يتم التعبير عن FRB في الائتلاف الضامة والتعبير يرتبط مع CD68 + و endothelin مستقبلات بيتا الضامة، التي تسهم في الائتلاف المرضية17. في هذا التقرير، يصف لنا نسيجية والمناعي الأساليب المستخدمة في تقييم بلعم FRB، وحلل اللمفاويات مجموع وبلعم التهم إلى التبصر في الموقف FRB على الساحة الأوعية الدموية الائتلاف.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Microtome</td>
			<td>Reichert-Jung</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>plain and frosted microscope slides and cover slips</td>
			<td>Fisher Scientific&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vertical rack</td>
			<td>Fisher Scientific&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Light microscope</td>
			<td>Olympus BX60&#160; microscope</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylene</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetone in distilled water</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>concentrations 100%, 90%, 70%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris-buffered saline solution (TBS)&#160;</td>
			<td>Dako Wash BufferS3006</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3% hydrogen peroxide in TBS</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Diaminobenzidine (DAB)</td>
			<td>Sigma Fast Tablet set</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chemical Permount&#160; Mounting Medium</td>
			<td>Fisher Scientific&#160;</td>
			<td>SP-15-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Harleco Gill&#39;s III Hematoxylin</td>
			<td>Fiisher Scientific 23-750-019</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Harleco Eosin Y 1% Alcoholic Stock Solution</td>
			<td>Fisher Scientific&#160;</td>
			<td>23-749-977</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 mM citric acid monohydrate (pH 6.0)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polyclonal rabbit anti-folate receptor beta&#160;</td>
			<td>Manohar Ratnam</td>
			<td></td>
			<td>optimized at 1:800</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monoclonal mouse anti-human CD68</td>
			<td>Dako&#160;</td>
			<td>M071801</td>
			<td>optimized at 1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polyclonal rabbit anti-CD3</td>
			<td>Agilent Dako</td>
			<td>A0452</td>
			<td>optimized at 1:100</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polymer goat anti- rabbit/mouse secondary antibody</td>
			<td>Dako</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Placental tissue</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>&#160;for FRB positive control</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an immunohistopathologic study to profile the folate receptor beta macrophage and vascular immune microenvironment in giant cell arteritis

خلية عملاقة الدموية (الائتلاف) مرض مزمن المناعي بوساطة الشرايين متوسطة إلى كبيرة الحجم التي تؤثر على كبار السن. بيانات الائتلاف مع أعراض الانسداد من الصداع، التهاب المفاصل والسكتة الدماغية أو فقدان الرؤية. الضامة، والخلايا الليمفاوية T-مساعد اختراق جدار الأوعية الدموية وإنتاج استجابة برو تحريضية التي تؤدي إلى الضرر اللاحق بالسفينة والاسكيميه. وحتى الآن، هناك لا الائتلاف العلامات البيولوجية التي يمكن أن ترصد المرض النشاط ودليل الاستجابة العلاجية.
حمض الفوليك مستقبلات بيتا (FRB) هو بروتين جليكوسيلفوسفاتيديلينوسيتول التي ترتكز على أغشية الخلايا وعادة التعبير عنها في النسب حيدي وفي معظم خلايا سرطان الدم النقوي كذلك كما هو الحال في الأورام والمفاصل الضامة الزلالي، حيث يرتبط التعبير مع شدة المرض. قدرة FRB لربط مركبات حمض الفوليك، وحمض الفوليك-يصرف والمخدرات أنتيفولاتي جعلت هدفا دروجابل في مرض السرطان ومرض التهاب البحوث. ويصف هذا التقرير الأنسجة والمناعي الأساليب المستخدمة في تقييم التعبير وتوزيع FRB بالنسبة جكايمونوباثولوجي.
كانت ملطخة الشريان الزمانية الثابتة الفورمالين وجزءاً لا يتجزأ من البارافين خزعات من الائتلاف والضوابط العادية توضع وويوزين باستعراض علم الأنسجة: الأنسجة وتحديد ملامح أصم. إيمونوهيستوتشيميستري استخدمت للكشف عن التعبير FRB و CD68 و CD3. وأجرى تحليل المجهري لتحديد عدد الخلايا الملون إيجابيا على 10 أبواب عالية الطاقة-الحقل المحدد ومواقعها في الجدار الشرياني.
التهاب ليمفوهيستيوسيتيك (LH) مصحوبا بتضخم إينتيمال وتعطلت الصفيحة المرنة كان ينظر في الائتلاف مع أي الموجودة في عناصر التحكم. ارتشاح LH يتكون من 60% من الضامة اللمفاويات و 40 في المائة. التعبير FRB مقصور على الضامة، تتألف من 31 في المائة من مجموع بلعم السكان CD68 + والمترجمة لوسائط الإعلام، والغلالة. واعتبر لا FRB في عناصر التحكم.
هذا البروتوكول أظهرت نمطاً العددية والمكانية متميزة من بلعم FRB بالنسبة إلى المكروية مأمن الأوعية الدموية في الائتلاف.

نتائج الأنسجة
ح & ه بقع في العينات الطبيعية أظهر التشريح الشرياني الطبيعي مع خلايا البطانية في الغلالة البطانية، خلايا العضلات الملساء في وسائط الإعلام، والغلالة ومصفوفة الكولاجين ايربان التي تشمل سفن التغذية والليفية تسمى vasa ...

Watch this Scientific Journal Video about An Immunohistopathologic Study to Profile the Folate Receptor Beta Macrophage and Vascular Immune Microenvironment in Giant Cell Arteritis at JoVE.com

An Immunohistopathologic Study to Profile the Folate Receptor Beta Macrophage and Vascular Immune Microenvironment in Giant Cell Arteritis

ويوضح البروتوكول استخدام فحص الأنسجة وإيمونوهيستوتشيميستري للشخصية بلعم بيتا مستقبلات حمض الفوليك وعلاقته بالخلايا المناعية مجموع التسلل في خزعات الشريان الزمانية في الخلية العملاقة الدموية.

دراسة إيمونوهيستوباثولوجيك الشخصية بلعم بيتا مستقبلات حمض الفوليك والأوعية الدموية المكروية محصنة في الخلية العملاقة الدموية

Giant cell arteritis (GCA) is a chronic immune-mediated disease of medium-to-large sized arteries that affects older adults. GCA manifests with arthritis ...

يمكن استخدام هذا البروتوكول المناعي الكيميائي والهيستوباثي لفحص مستقبلات الفولات بيتا ، وهو بروتين مرشح مع قيمة تنبؤية وعلاجية محتملة للبيئة الدقيقة الوعائية في التهاب الشرايين الخلية العملاقة. هذا البروتوكول هو اختبار الزمن وتستخدم على نطاق واسع، ويمكن استخدامها لاستكشاف سمات بيتا مستقبلات الفولات في أنسجة الشرايين الصدغية، حتى بعد التخزين على المدى الطويل. للحصول على أقسام الأنسجة، استخدم ميكروتوم لشريحة أربعة إلى خمسة أجزاء سميكة ميكرومتر من الشرايين الصدغية المضمروسة البارافين، تطفو كل قسم في حمام مائي 40 درجة مئوية كما يتم الحصول عليها، لإزالة التجاعيد.استخدم شرائح المجهر الزجاجي لالتقاط ثلاثة أقسام لكل شريحة، ودفئ الشرائح على لوحة دافئة، في فرن درجة مئوية 60 لمدة 60 دقيقة. عندما تكون الأقسام قد التزمت بالشرائح، ضع الشرائح في رف عمودي للتجفيف عند درجة حرارة 37 درجة مئوية لمدة 24 ساعة. في اليوم التالي، قم بنقل الشرائح إلى حاوية شرائح للتخزين عند أربع درجات مئوية لمدة 12 ساعة على الأقل.بعد ذلك، قم بتحميل الشرائح في رف الشريحة وترطيب الأنسجة مع اثنين من خمس دقائق، 100٪ الإكسيلين الغمر والهادر، خمس دقائق لكل تركيز سلسلة الغمر الإيثانول، مع 10 ثانية من الانفعالات كل 30 ثانية. بعد غمر الإيثانول بنسبة 70٪، شطف الشرائح مرتين في الماء المقطر مزدوجة لمدة خمس دقائق، مع 10 ثانية من الانفعالات كل 30 ثانية. لاسترجاع المستضد، قم بنقل الحامل إلى حاوية زجاجية مع 200 ميكرولترات من 95 درجة مئوية، 10 ملليمولار لكل لتر من عازلة سترات لمدة 30 دقيقة.في نهاية الحضانة، والسماح للشرائح لتبرد إلى درجة حرارة الغرفة لمدة 20 دقيقة قبل الشطف مع المياه الجارية لمدة خمس دقائق. لإزالة نشاط البيروكسيد العضوي ، استخدم أولاً علامة رهاب الماء لرسم دائرة حول كل عينة من الأنسجة ، قبل احتضان العينات في 200 ميكرولترات من بيروكسيد الهيدروجين بنسبة 3٪ لمدة 10 دقائق ، تليها 3 يغسل في 200 micoliters من محلول ملحي ثلاثيات المخزن ، أو TBSS ، لكل غسل. بعد الغسيل الأخير، داب كل شريحة بلطف لإزالة أي العازلة الزائدة وإضافة 200 ميكرولترات من مزيج الأجسام المضادة الأولية من الفائدة وزلة غطاء إلى كل شريحة لاحتضان لمدة ساعة واحدة في غرفة رطبة في درجة حرارة الغرفة.في نهاية الحضانة، تخلص من زلات الغطاء وشطف الشرائح مع ثلاث يغسل لمدة دقيقتين في TBSS الطازجة. بعد إزالة العازلة الزائدة، إضافة 200 ميكرولترات من حل الأجسام المضادة الثانوية الحيوية المناسبة وزلة غطاء إلى كل شريحة لاحتضان لمدة 45 دقيقة في غرفة رطبة في درجة حرارة الغرفة. بعد تجاهل زلات الغطاء، شطف الشرائح مع TBSS كما هو موضح.إزالة أي المخزن المؤقت الزائد. وتسمية المقاطع مع 200 ميكرولترات من العازلة الركيزة DAB لمدة 10 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. في نهاية الحضانة، وغسل الشرائح مع TBSS والمياه الصنبور الجارية لمدة 10 دقائق، قبل أن تُلَمَّى مع الهماتروسيلين لمدة ثلاث دقائق.ثم، إضافة 70 microliters من وسيلة مناسبة تصاعد لكل شريحة وببطء طرف شريط غطاء زجاجي على المتوسطة المتصاعدة لتجنب خلق فقاعات كما يتم خفض زلة الغطاء في مكانها. للتحليل الهستواثي، ضع الشريحة على خشبة المجهر الخفيف وقيّم هندسة الأوعية الدموية لقسم الأنسجة الأول. ثم، كمي عدد الضامة نسبة إلى عدد الخلايا الليمفاوية لكل قسم.للتحليل المناعي الكيميائي، ودراسة مستقبلات حمض الفوليك نمط تلطيخ بيتا على كل قسم الأنسجة وتحديد عدد مستقبلات الفولات بيتا إيجابية، CD68 إيجابية، وD3 الخلايا الإيجابية في 10 حقول الطاقة العالية مختارة عشوائيا لكل قسم. Hematoxylin وeosin تلطيخ في العينات العادية يكشف عن تشريح الشرايين الطبيعية، مع الخلايا البطانية في التميمة تونيكا، والخلايا العضلية الملساء في وسائل الإعلام tunica، ومصفوفة الكولاجين غير متجانسة، التي تشمل الخلايا الليفية والأوعية المغذية تسمى vasorum vasa في tunica adventitia. الشرايين الدهنية الضبيّة الضّيّاقية الضّيّاقية الضّيّاقة الضّيِقّة الضّيِمّة تُظهر التهابًا متوسطًا إلى حادًا، مع المجاميع والضمّة، أو الهُسَقَيّة، الخلايا اللمفية، خلايا البلازما العرضية، وخلايا عملاقة متعدّد النوى.ويلاحظ أيضا تضييق Luminal، ويرافقه سماكة إيمينال وتعطيل 90٪ من lamina مرنة الداخلية. CD3 اللمفاويات الإيجابية وD68 الضامة الإيجابية موجودة أيضا في جميع العينات التهاب الشرايين الخلية العملاقة إيجابية، مع أنماط تلطيخ مماثلة لوحظت في جميع الخزعات. يقتصر تلطيخ مستقبلات الفولات بيتا على الضامة والخلايا العملاقة متعددة النواة التي تُحل بشكل تفضيلي إلى المُلَوَة ووسائل الإعلام.الجدير بالذكر، شملت مستقبلات الفولات بيتا ما يقرب من 30٪ من الضامة الإجمالية. تتطلب معالجة خزعة الشريان الزمني، والقطع، والديواكسين البراعة الدقيقة من أجل تنفيذ الخطوات اللاحقة. يتطلب تفسير الشريحة خبرة أخصائي أمراض القلب والأوعية الدموية من ذوي الخبرة.ذكّر المشاهدين باستخدام التلامس والاحتياطات التنفسية، مثل القفازات والأغطية المهوّنة، عند التعامل مع العينات والكواشف.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Seven Steps to Stellate Cells

سبع خطوات لخلايا النجمية

Hepatic stellate cells are liver-resident  cells of star-like morphology and are located in the space of Disse between  liver sinusoidal endothelial cells ...

An Introduction to Parasitic Wasps of Drosophila and the Antiparasite Immune Response

An Introduction to Parasitic Wasps of Drosophila and the Antiparasite Immune Response

مقدمة لالدبابير الطفيلية من<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; والاستجابة المناعية Antiparasite

Most known parasitoid wasp species attack the larval or pupal stages of Drosophila. While Trichopria drosophilae infect the pupal stages of the host (Fig. ...

An In vitro Model to Study Heterogeneity of Human Macrophage Differentiation and Polarization

An In vitro Model to Study Heterogeneity of Human Macrophage Differentiation and Polarization

على<em&gt; في المختبر</em&gt; نموذج لدراسة عدم تجانس التمايز بلعم الإنسان والاستقطاب

Monocyte-derived macrophages represent an important cell type of the innate immune system. Mouse models studying macrophage biology suffer from the ...

Generation of Lymph Node-fat Pad Chimeras for the Study of Lymph Node Stromal Cell Origin

جيل من العقدة الليمفاوية الدسم سادة الوهم لدراسة العقدة الليمفاوية اللحمية خلية المنشأ

The stroma is a key component of the lymph node structure and function. However, little is known about its origin, exact cellular composition and the ...

In Vitro and In Vivo Model to Study Bacterial Adhesion to the Vessel Wall Under Flow Conditions

In Vitro and In Vivo Model to Study Bacterial Adhesion to the Vessel Wall Under Flow Conditions

في المختبر والمجراة نموذج لدراسة التصاق البكتيريا إلى سفينة ستريت تحت ظروف التدفق

In order to cause endovascular infections and infective endocarditis, bacteria need to be able to adhere to the vessel wall while being exposed to the ...

Neutrophil Isolation and Analysis to Determine their Role in Lymphoma Cell Sensitivity to Therapeutic Agents

عزل وتحليل العدلة لتحديد ما دورها في الغدد اللمفاوية حساسية الخلية وكلاء العلاجية

Neutrophils are the most abundant (40% to 75%) type of white blood cells and among the first inflammatory cells to migrate towards the site of ...

Development and Identification of a Novel Subpopulation of Human Neutrophil-derived Giant Phagocytes In Vitro

Development and Identification of a Novel Subpopulation of Human Neutrophil-derived Giant Phagocytes In Vitro

التنمية وتحديد جزء من السكان رواية من المستمدة العدلات-الإنسان البالعات العملاق<em&gt; في المختبر</em

Neutrophils (PMN) are best known for their phagocytic functions against invading pathogens and microorganisms. They have the shortest half-life amongst ...

Fabricating Optical-quality Glass Surfaces to Study Macrophage Fusion

اختﻻق الواجهات الزجاجية الجودة البصرية لدراسة الانصهار بلعم

Visualizing the formation of multinucleated giant cells (MGCs) from living specimens has been challenging due to the fact that most live imaging ...

Assessing the Cellular Immune Response of the Fruit Fly, Drosophila melanogaster, Using an In Vivo Phagocytosis Assay

Assessing the Cellular Immune Response of the Fruit Fly, Drosophila melanogaster, Using an In Vivo Phagocytosis Assay

تقييم الاستجابة المناعية الخلوية ذبابة الفاكهة، melanogaster المورفولوجية، استخدام "في فيفو البلعمه بالانزيم"

In all animals, innate immunity provides an immediate and robust defense against a broad spectrum of pathogens. Humoral and cellular immune responses are ...