Name: quantitative immunoblotting of cell lines as a standard to validate immunofluorescence for quantifying biomarker proteins in routine tissue samples
Uploaded: 2019-01-07T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Quantitative Immunoblotting of Cell Lines as a Standard to Validate Immunofluorescence for Quantifying Biomarker Proteins in Routine Tissue Samples at JoVE.co

Bu eser kısmen Fredrick Banting ve Charles en iyi Kanada Yüksek Lisans Bursu (A.M.) tarafından finanse edildi.

Birincil insan doku örnekleri kullanmak için onay Sağlık Bilimleri ve bağlı eğitim hastaneleri Araştırma Etik Kurulu (HSREB) Queen's University elde edildi.
1. hücre kültürünü doku Mikroarray (TMA) bina
<ol><li>Hasat ve hücreleri yıkayın. Not: Bu protokol üzerinde çeşitli kurulan ölümsüzleştirdi hücre satırları (Örneğin HeLa, Jurkat, RCH-ACV) test edilmiştir.<ol>
<li>Bir kez onlar uzanmak yaklaşık % 80'i confluency yapışık hücreleri için yakla...

<ol>
	<li>Khoury, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validation+of+Immunohistochemical+Assays+for+Integral+Biomarkers+in+the+NCI-MATCH+EAY131+Clinical+Trial.">Validation of Immunohistochemical Assays for Integral Biomarkers in the NCI-MATCH EAY131 Clinical Trial.</a> Clinical Cancer Research. 24 (3), 521-531 (2018).</li><li>Matos, L. L., Trufelli, D. C., de Matos, M. G. L., da Silva Pinhal, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunohistochemistry+as+an+important+tool+in+biomarkers+detection+and+clinical+practice.">Immunohistochemistry as an important tool in biomarkers detection and clinical practice.</a> Biomarker insights. 5, 9-20 (2010).</li><li>Seidal, T., Balaton, A. J., Battifora, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interpretation+and+quantification+of+immunostains.">Interpretation and quantification of immunostains.</a> The American journal of surgical pathology. 25 (9), 1204-1207 (2001).</li><li>Rimm, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What+brown+cannot+do+for+you.">What brown cannot do for you.</a> Nature Biotechnology. 24 (8), 914-916 (2006).</li><li>Bokhart, M. T., Rosen, E., Thompson, C., Sykes, C., Kashuba, A. D. M., Muddiman, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+mass+spectrometry+imaging+of+emtricitabine+in+cervical+tissue+model+using+infrared+matrix-assisted+laser+desorption+electrospray+ionization.">Quantitative mass spectrometry imaging of emtricitabine in cervical tissue model using infrared matrix-assisted laser desorption electrospray ionization.</a> Analytical and bioanalytical chemistry. 407 (8), 2073-2084 (2015).</li><li>Porta, T., Lesur, A., Varesio, E., Hopfgartner, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+in+MALDI-MS+imaging:+what+can+we+learn+from+MALDI-selected+reaction+monitoring+and+what+can+we+expect+for+imaging?.">Quantification in MALDI-MS imaging: what can we learn from MALDI-selected reaction monitoring and what can we expect for imaging?.</a> Analytical and Bioanalytical Chemistry. 407 (8), 2177-2187 (2015).</li><li>Rzagalinski, I., Volmer, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+low+molecular+weight+compounds+by+MALDI+imaging+mass+spectrometry+&#8211;+A+tutorial+review.">Quantification of low molecular weight compounds by MALDI imaging mass spectrometry &#8211; A tutorial review.</a> Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Proteins and Proteomics. 1865 (7), 726-739 (2017).</li><li>Gassmann, M., Grenacher, B., Rohde, B., Vogel, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantifying+Western+blots:+Pitfalls+of+densitometry.">Quantifying Western blots: Pitfalls of densitometry.</a> ELECTROPHORESIS. 30 (11), 1845-1855 (2009).</li><li>Tyanova, S., Temu, T., Cox, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+MaxQuant+computational+platform+for+mass+spectrometry-based+shotgun+proteomics.">The MaxQuant computational platform for mass spectrometry-based shotgun proteomics.</a> Nature Protocols. 11 (12), 2301-2319 (2016).</li><li>Burgess, M. W., Keshishian, H., Mani, D. R., Gillette, M. A., Carr, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simplified+and+efficient+quantification+of+low-abundance+proteins+at+very+high+multiplex+via+targeted+mass+spectrometry.">Simplified and efficient quantification of low-abundance proteins at very high multiplex via targeted mass spectrometry.</a> Molecular &amp; cellular proteomics: MCP. 13 (4), 1137-1149 (2014).</li><li>Carr, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+peptide+measurements+in+biology+and+medicine:+best+practices+for+mass+spectrometry-based+assay+development+using+a+fit-for-purpose+approach.">Targeted peptide measurements in biology and medicine: best practices for mass spectrometry-based assay development using a fit-for-purpose approach.</a> Molecular &amp; cellular proteomics: MCP. 13 (3), 907-917 (2014).</li><li>Denburg, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+Two+ELISA+Methods+and+Mass+Spectrometry+for+Measurement+of+Vitamin+D-Binding+Protein:+Implications+for+the+Assessment+of+Bioavailable+Vitamin+D+Concentrations+Across+Genotypes.">Comparison of Two ELISA Methods and Mass Spectrometry for Measurement of Vitamin D-Binding Protein: Implications for the Assessment of Bioavailable Vitamin D Concentrations Across Genotypes.</a> Journal of Bone and Mineral Research. 31 (6), 1128-1136 (2016).</li><li>Stack, E. C., Wang, C., Roman, K. A., Hoyt, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiplexed+immunohistochemistry,+imaging,+and+quantitation:+A+review,+with+an+assessment+of+Tyramide+signal+amplification,+multispectral+imaging+and+multiplex+analysis.">Multiplexed immunohistochemistry, imaging, and quantitation: A review, with an assessment of Tyramide signal amplification, multispectral imaging and multiplex analysis.</a> Methods. 70 (1), 46-58 (2014).</li><li>Peck, A. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validation+of+tumor+protein+marker+quantification+by+two+independent+automated+immunofluorescence+image+analysis+platforms.">Validation of tumor protein marker quantification by two independent automated immunofluorescence image analysis platforms.</a> Modern pathology: an official journal of the United States and Canadian Academy of Pathology, Inc. 29 (10), 1143-1154 (2016).</li><li>Toki, M. I., Cecchi, F., Hembrough, T., Syrigos, K. N., Rimm, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proof+of+the+quantitative+potential+of+immunofluorescence+by+mass+spectrometry.">Proof of the quantitative potential of immunofluorescence by mass spectrometry.</a> Laboratory Investigation. 97 (3), 329-334 (2017).</li><li>AlJohani, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Abundant+expression+of+BMI1+in+follicular+lymphoma+is+associated+with+reduced+overall+survival.">Abundant expression of BMI1 in follicular lymphoma is associated with reduced overall survival.</a> Leukemia and Lymphoma. 59 (9), 2211-2219 (2018).</li><li>Wood, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Abundant+expression+of+interleukin-21+receptor+in+follicular+lymphoma+cells+is+associated+with+more+aggressive+disease.">Abundant expression of interleukin-21 receptor in follicular lymphoma cells is associated with more aggressive disease.</a> Leukemia and Lymphoma. 54 (6), 1212-1220 (2013).</li><li>Weberpals, J. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=First+application+of+the+Automated+QUantitative+Analysis+(AQUA)+technique+to+quantify+PTEN+protein+expression+in+ovarian+cancer:+A+correlative+study+of+NCIC+CTG+OV.16.">First application of the Automated QUantitative Analysis (AQUA) technique to quantify PTEN protein expression in ovarian cancer: A correlative study of NCIC CTG OV.16.</a> Gynecologic Oncology. 140 (3), 486-493 (2016).</li><li>Fischer, A. H., Jacobson, K. A., Rose, J., Zeller, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Paraffin+embedding+tissue+samples+for+sectioning.">Paraffin embedding tissue samples for sectioning.</a> CSH protocols. , (2008).</li><li>Fedor, H. L., Marzo, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=De+Practical+Methods+for+Tissue+Microarray+Construction.">De Practical Methods for Tissue Microarray Construction.</a> Methods in Molecular Medicine. , 89-101 (2005).</li><li>Kajimura, J., Ito, R., Manley, N. R., Hale, L. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+Single-+and+Dual-Color+Immunofluorescence+Protocols+for+Formalin-Fixed,+Paraffin-Embedded+Archival+Tissues.">Optimization of Single- and Dual-Color Immunofluorescence Protocols for Formalin-Fixed, Paraffin-Embedded Archival Tissues.</a> Journal of Histochemistry &amp; Cytochemistry. 64 (2), 112-124 (2016).</li><li>Mahmood, T., Yang, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Western+blot:+technique,+theory,+and+trouble+shooting.">Western blot: technique, theory, and trouble shooting.</a> North American journal of medical sciences. 4 (9), 429-434 (2012).</li><li>Wiedemann, M., Lee, S. J., da Silva, R. C., Visweswaraiah, J., Soppert, J., Sattlegger, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+semi-dry+electrophoretic+transfer+of+a+wide+range+of+differently+sized+proteins+for+immunoblotting.">Simultaneous semi-dry electrophoretic transfer of a wide range of differently sized proteins for immunoblotting.</a> Nature Protocol Exchange. , (2013).</li><li>Delbridge, A. R. D., Grabow, S., Strasser, A., Vaux, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thirty+years+of+BCL-2:+translating+cell+death+discoveries+into+novel+cancer+therapies.">Thirty years of BCL-2: translating cell death discoveries into novel cancer therapies.</a> Nature Reviews Cancer. 16 (2), 99-109 (2016).</li><li>Bosch, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+bioclinical+prognostic+model+using+MYC+and+BCL2+predicts+outcome+in+relapsed/refractory+diffuse+large+B-cell+lymphoma.">A bioclinical prognostic model using MYC and BCL2 predicts outcome in relapsed/refractory diffuse large B-cell lymphoma.</a> Haematologica. 103 (2), 288-296 (2018).</li><li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=BCL2+mRNA+or+protein+abundance+is+superior+to+gene+rearrangement+status+in+predicting+clinical+outcomes+in+patients+with+diffuse+large+B-cell+lymphoma.">BCL2 mRNA or protein abundance is superior to gene rearrangement status in predicting clinical outcomes in patients with diffuse large B-cell lymphoma.</a> Hematological Oncology. 35, 288-289 (2017).</li><li>Choi, Y. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+expression+of+Bcl-2+predicts+poor+outcome+in+diffuse+large+B-cell+lymphoma+patients+with+low+international+prognostic+index+receiving+R-CHOP+chemotherapy.">High expression of Bcl-2 predicts poor outcome in diffuse large B-cell lymphoma patients with low international prognostic index receiving R-CHOP chemotherapy.</a> International Journal of Hematology. 103 (2), 210-218 (2016).</li><li>. The Human Protein Atlas BCL2 Available from: <a target="_blank" href="https://www.proteinatlas.org/ENSG00000171791-BCL2/cell#rna">https://www.proteinatlas.org/ENSG00000171791-BCL2/cell#rna</a> (2018)</li><li>Parra, E. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validation+of+multiplex+immunofluorescence+panels+using+multispectral+microscopy+for+immune-profiling+of+formalin-fixed+and+paraffin-embedded+human+tumor+tissues.">Validation of multiplex immunofluorescence panels using multispectral microscopy for immune-profiling of formalin-fixed and paraffin-embedded human tumor tissues.</a> Scientific Reports. 7 (1), 13380 (2017).</li><li>Eaton, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Guide+to+Modern+Quantitative+Fluorescent+Western+Blotting+with+Troubleshooting+Strategies.">A Guide to Modern Quantitative Fluorescent Western Blotting with Troubleshooting Strategies.</a> Journal of Visualized Experiments. (93), e52099 (2014).</li><li>Zellner, M., Babeluk, R., Diestinger, M., Pirchegger, P., Skeledzic, S., Oehler, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescence-based+Western+blotting+for+quantitation+of+protein+biomarkers+in+clinical+samples.">Fluorescence-based Western blotting for quantitation of protein biomarkers in clinical samples.</a> ELECTROPHORESIS. 29 (17), 3621-3627 (2008).</li><li>Parra, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+Platforms+of+Multiplexed+Immunofluorescence+for+Study+of+Paraffin+Tumor+Tissues.">Novel Platforms of Multiplexed Immunofluorescence for Study of Paraffin Tumor Tissues.</a> Journal of Cancer Treatment &amp; Diagnostics. 2 (1), 43-53 (2018).</li><li>Robertson, D., Savage, K., Reis-Filho, J. S., Isacke, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+immunofluorescence+labelling+of+formalin-fixed+paraffin-embedded+(FFPE)+tissue.">Multiple immunofluorescence labelling of formalin-fixed paraffin-embedded (FFPE) tissue.</a> BMC Cell Biology. 9 (1), 13 (2008).</li></ol>

Bir yöntem tarif var nicel immunoblotting (IB) ayirt (Eğer) yardımcı programı göstermek için bir hedef protein FFPE doku örneklerinde göreli bolluk ascertaining için yararlandığına. Geçerli protein miktar yöntemleri chromogenic IHC2,3gibi kategorik doğaları gereği veya örnekleri gibi örnek nüfus yapısı ve hücre içine soruşturma önlenmesi, homojenize gerektiğinden sınırlıdır IB ve kütle spektrometresi8,...

Proteinler formalin sabit, parafin gömülü (FFPE) doku biyopsisi örneklerinde ölçmek için gereken birçok klinik alanda bulunmaktadır. Örneğin, miktar rutin biyopsi örnekleri biyomarker proteinlerin prognoz aydınlatmak ve tedavi kanser hastaları1için bilgilendirmek için kullanılır. Ancak, geçerli yöntemleri genellikle öznel ve doğrulama eksikliği.
İmmünhistokimya (IHC) patoloji laboratuvarlarında rutin olarak kullanılan ve genellikle birincil bir antikor hedef protein yönetmen ve horseradish peroksidaz2gibi enzimatik bir etiketi ile Birleşik bir ikincil antikor bağlıdır. Geleneksel IHC duyarlıdır, yapabilirsiniz dakika kullanımı örnekleri ve dolayısıyla protein ifade ile ilgili histolojik bağlamı içinde değerlendirilmesi erişimine izin verme doku örnekleri morfolojik bütünlüğünü korur. Ancak, IHC tarafından oluşturulan chromogenic sinyal Eksiltici olduğundan, nispeten dar Dinamik Aralık uğrar ve2,3,4çoğullama için sınırlı potansiyel sunmaktadır. Matris yardımlı Lazer Desorpsiyon/iyonlaşma kütle spektrometresi (MALDI-MSI) görüntüleme morfolojik bütünlüğünü korur. Ancak, gelişmekte olan bu teknoloji mütevazı morfolojik çözünürlük ile ilişkilidir ve önemli kalibrasyon ve normalleştirme, onun fizibilite rutin klinik kullanım5,6,7için kararlar almanı gerektirir. İmmunoblotting8, kütle spektrometresi9,10,11ve enzim bağlı immunosorbent assay (ELISA)12, doku örnekleri protein ölçmek için alternatif teknikleri dahil her homojenize ile başladığı, örnek doku lysate. Birincil doku örnekleri türdeş olmayan çok sayıda hücre türleri içerdikleri vardır. Bu nedenle, homojenizasyon örnekleri gerektirecektir teknikleri bir protein miktar kanser hücreleri gibi ilgi belirli hücre nüfus izin vermez.
IHC, olsa gibi küçük ve ilgili FFPE örnekleri ve histolojik bütünlük13tutma izin verir. Ancak, floresan sinyallerini, katkı doğaya teşekkür Eğer birden çok birincil antikorlar ve floresan etiket uygulamaya müsait değil. Böylece, bir protein ilgi nispeten belirli hücreleri veya hücresel kompartmanlarda (örneğin, çekirdek karşı sitoplazma) diğer antikorları kullanılarak tanımlanmış içinde sayısal. Floresan sinyallerini de büyük bir Dinamik Aralık13,14avantajı var. Üstünlük, tekrarlanabilirlik ve çoğullama potansiyelini gösterdiği13,14,15FFPE örnekler için uygulanan olmuştur.
Burada nicel immunoblotting ilgi bir protein göreli bolluk belirlemede bilgisayar destekli görüntü analizi ile birleştiğinde nicel doğası tespit için altın standart olarak kurulan hücre hatları kullanarak nasıl kullanılacağını açıklar FFPE doku örnekleri histolojik bölümlerden. Bu yöntemde biyomarker proteinler klinik biyopsi örnekleri16,17,18ölçmek için çok katmanlı bir yaklaşım başarıyla uygulamış.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:675px;" width="673">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">697</td>
			<td style="width:116px;">DSMZ</td>
			<td style="width:123px;">ACC 42</td>
			<td style="width:213px;">Cell line</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">JeKo-1</td>
			<td style="width:116px;">ATCC</td>
			<td style="width:123px;">CRL-3006</td>
			<td>Cell line</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Jurkat</td>
			<td style="width:116px;">ATCC</td>
			<td style="width:123px;">TIB-152</td>
			<td>Cell line</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">RCH-ACV</td>
			<td style="width:116px;">DSMZ</td>
			<td style="width:123px;">ACC 548</td>
			<td>Cell line</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Granta-519</td>
			<td style="width:116px;">DSMZ</td>
			<td style="width:123px;">ACC 342</td>
			<td>Cell line</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">REH</td>
			<td style="width:116px;">DSMZ</td>
			<td style="width:123px;">ACC 22</td>
			<td>Cell line</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Raji</td>
			<td style="width:116px;">ATCC</td>
			<td style="width:123px;">CCL-86</td>
			<td>Cell line</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">HeLa</td>
			<td style="width:116px;">ATCC</td>
			<td style="width:123px;">CCL-2</td>
			<td>Cell line</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Trypsin/EDTA solution</td>
			<td style="width:116px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:123px;">R001100</td>
			<td>For detaching adhesive cells</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td style="width:116px;">Wisent Inc.</td>
			<td style="width:123px;">81150</td>
			<td>To neutralize trypsin</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Neutral Buffered Formalin</td>
			<td style="width:116px;">Protocol</td>
			<td style="width:123px;">245-684</td>
			<td>For fixing cell pellets</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:223px;">UltraPure low melting point agarose</td>
			<td style="width:116px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:123px;">15517-022</td>
			<td>For casting cell pellets</td>
		</tr>
		<tr height="62">
			<td height="62" style="height:62px;width:223px;">Mouse monoclonal anti-human Bcl-2 antibody, clone 124</td>
			<td style="width:116px;">Dako (Agilent)</td>
			<td style="width:123px;">cat#: M088729-2, RRID: 2064429</td>
			<td style="width:213px;">To detect Bcl-2 by immunoflourencence and immunoblot (lot#:&#160;00095786</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:223px;">Ventana Discovery XT</td>
			<td style="width:116px;">Roche</td>
			<td style="width:123px;">-</td>
			<td style="width:213px;">For automation of immunofluorescence staining</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:223px;">EnVision+ System- HRP labelled polymer (anti-mouse)</td>
			<td style="width:116px;">Dako (Agilent)</td>
			<td style="width:123px;">K4000</td>
			<td style="width:213px;">For immunofluorescence signal amplification</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:223px;">EnVision+ System- HRP labelled polymer (anti-rabbit)</td>
			<td style="width:116px;">Dako (Agilent)</td>
			<td style="width:123px;">K4002</td>
			<td style="width:213px;">For immunofluorescence signal amplification</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:223px;">Cyanine 5 tyramide reagent</td>
			<td style="width:116px;">Perkin Elmer</td>
			<td style="width:123px;">NEL745001KT</td>
			<td style="width:213px;">For immunofluorescence signal amplification</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:223px;">Aperio ImageScope</td>
			<td style="width:116px;">Leica Biosystems</td>
			<td style="width:123px;">-</td>
			<td style="width:213px;">To view scanned slides</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:223px;">HALO image analysis software</td>
			<td style="width:116px;">Indica Labs</td>
			<td style="width:123px;">-</td>
			<td style="width:213px;">For quantification of immunofluorescence</td>
		</tr>
		<tr height="62">
			<td height="62" style="height:62px;width:223px;">Protease inhibitors (Halt protease inhibitor cocktail, 100X)</td>
			<td style="width:116px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:123px;">1862209</td>
			<td>To add to RIPA buffer</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:223px;">Ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA)</td>
			<td style="width:116px;">BioShop</td>
			<td style="width:123px;">EDT001</td>
			<td>For RIPA buffer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">NP-40</td>
			<td style="width:116px;">BDH Limited</td>
			<td style="width:123px;">56009</td>
			<td>For RIPA buffer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Sodium deoxycholate</td>
			<td style="width:116px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:123px;">D6750</td>
			<td>For RIPA buffer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Glycerol</td>
			<td style="width:116px;">FisherBiotech</td>
			<td style="width:123px;">BP229</td>
			<td>For Laemlli buffer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Bromophenol blue</td>
			<td style="width:116px;">BioShop</td>
			<td style="width:123px;">BRO777</td>
			<td>For Laemlli buffer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Dithiothreitol (DTT)</td>
			<td style="width:116px;">Bio-Rad</td>
			<td style="width:123px;">161-0611</td>
			<td>For Laemlli buffer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Bovine serum albumin (BSA)</td>
			<td style="width:116px;">BioShop</td>
			<td style="width:123px;">ALB001</td>
			<td>For immunoblot washes</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:223px;">Protein ladder (Precision Plus Protein Dual Color Standards)</td>
			<td style="width:116px;">Bio-Rad</td>
			<td style="width:123px;">161-0374</td>
			<td>For running protein gel</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:223px;">Filter paper (Extra thick blot paper)</td>
			<td style="width:116px;">Bio-Rad</td>
			<td style="width:123px;">1703969</td>
			<td>For blotting transfer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Nitrocellulose membrane</td>
			<td style="width:116px;">Bio-Rad</td>
			<td style="width:123px;">162-0115</td>
			<td>For blotting transfer</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:223px;">Trans-blot SD semi-dry transfer cell</td>
			<td style="width:116px;">Bio-Rad</td>
			<td>1703940</td>
			<td>For semi-dry transfer</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:223px;">Skim milk powder (Nonfat dry milk)</td>
			<td style="width:116px;">Cell Signaling Technology</td>
			<td style="width:123px;">9999S</td>
			<td>For blocking buffer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Tween 20</td>
			<td style="width:116px;">BioShop</td>
			<td style="width:123px;">TWN510</td>
			<td>For wash buffer</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:223px;">GAPDH rabbit monoclonal antibody</td>
			<td style="width:116px;">Epitomics</td>
			<td style="width:123px;">2251-1</td>
			<td style="width:213px;">Primary antibody of control protein (lot#: YE101901C)</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:223px;">Goat anti-mouse IgG (HRP conjugated) antibody</td>
			<td style="width:116px;">abcam</td>
			<td style="width:123px;">cat#: ab6789, RRID: AB_955439</td>
			<td style="width:213px;">Secondary antibody for immunoblot</td>
		</tr>
		<tr height="62">
			<td height="62" style="height:62px;width:223px;">Goat anti-rabbit IgG (HRP conjugated) antibody</td>
			<td style="width:116px;">abcam</td>
			<td style="width:123px;">cat#: ab6721, RRID: AB_955447</td>
			<td style="width:213px;">Secondary antibody for immunoblot (lot#: GR3192725-5)</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:223px;">Clarity Western ECL substrates</td>
			<td style="width:116px;">Bio-Rad</td>
			<td style="width:123px;">1705060</td>
			<td style="width:213px;">For immunoblot signal detection</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:223px;">Amersham Imager 600</td>
			<td style="width:116px;">GE Healthcare Life Sciences</td>
			<td style="width:123px;">29083461</td>
			<td>For immunoblot signal detection</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">ImageJ software</td>
			<td style="width:116px;">Freeware, NIH</td>
			<td style="width:123px;">-</td>
			<td>For densitometry analysis</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

quantitative immunoblotting of cell lines as a standard to validate immunofluorescence for quantifying biomarker proteins in routine tissue samples

Miktar formalin sabit, parafin gömülü (FFPE) doku örnekleri ilgi proteinlerin klinik olarak önemli olduğunu ve araştırma uygulamaları. Miktar bir en iyi yöntem doğrudur, geniş bir doğrusal dinamik alanı vardır ve tek tek hücre tiplerinin tanımlanması için izin vermek için örnek yapısal bütünlüğünü korur. Geçerli yöntemleri immünhistokimya (IHC), kütle spektrometresi ve immunoblotting gibi her kategorik kendi doğası nedeniyle bu hükümleri yerine veya örnek homojenize gerekiyor. Alternatif bir yöntem ayirt (Eğer) ve faiz FFPE dokulara protein göreli bereket belirlemek için görüntü analizi öneriyorum. Burada biz bu yöntemi kolayca optimize edilmiştir, geniş dinamik alan verimleri ve nicel immunoblotting altın standart göre doğrusal olarak ölçülebilir göstermektedir. Ayrıca, bu yöntem örnek yapısal bütünlüğünü bakım izni ve tanılama uygulamalarda çok önemli olabilir çeşitli hücre tiplerinin düzeye çıkarılmasını sağlar. Genel olarak, bu FFPE örneklerinde proteinlerin göreli miktar için sağlam bir yöntemdir ve klinik uygun veya ihtiyaçları araştırma için kolayca adapte edilebilir.

Eğer yetenek hücre hatlarında FFPE doku bloklar halinde yapılan anti-apoptotik protein Bcl-2 göreli miktarını belirlemek için onaylamak için kullanılan bu protokol. Sayısal Bcl-2 seçmeli olarak'kanser hücrelerinin oncogenic mekanizmaları aydınlatmak ve patolojik tanı ve klinik yönetim kararları24bilgilendirilmesi yararlı olabilir. Daha ayrıntılı olarak, Bcl-2 uygun B-lymphocyte gelişiminde bir rol oynar ve ifadesini sık lenfoma<sup class="xr...

Watch this Scientific Journal Video about Quantitative Immunoblotting of Cell Lines as a Standard to Validate Immunofluorescence for Quantifying Biomarker Proteins in Routine Tissue Samples at JoVE.co

Quantitative Immunoblotting of Cell Lines as a Standard to Validate Immunofluorescence for Quantifying Biomarker Proteins in Routine Tissue Samples

Hücre hatları nicel Immunoblotting ayirt rutin doku örneklerinde biyomarker protein miktarının için doğrulamak için standart olarak

Nicel immunoblotting ayirt Histoloji formalin sabit, parafin gömülü (FFPE) doku örnekleri ilgi bir protein miktarının aracı olarak görüntü analizi ile birleştiğinde doğrulamak için nasıl kullanılacağını açıklar. Bizim sonuçlar biyomarker proteinler rutin biyopsi örneklerinde göreli miktarı ascertaining için ayirt Histoloji yarar gösterilmektedir.

Quantification of proteins of interest in formalin-fixed, paraffin-embedded (FFPE) tissue samples is important in clinical and research applications. An ...

Bu yöntem, rutin olarak işlenmiş biyopsi materyalinden biyomarker proteinleri ölçerek kanser patolojisi alanındaki temel soruların yanıtlandırılmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin konvansiyonel immünohistokimyaile ilgili başlıca avantajları, objektif olması, geniş bir dinamik menzile sahip olması ve belirli hücre tiplerinde proteinlerin sayısallaştırılmasına izin vermeleridir. Bazı sözde biyomarker proteinlerin varlığı veya yokluğu, ya da daha spesifik olarak, kanser biyopsisi örneklerinde bu proteinlerin göreceli bolluğu kanserlerin belirli türde belirli bir patolojik tanı yapımında çok yararlı olabilir.Ama aynı zamanda kanser tedavileri yanıt tahmin yararlı olabilir, bu yüzden bu teknik kanser hastalarının tanı ve tedavisi hem de ilgilidir. Bu protokol esas olarak, immünoffloresan dayalı testin nicel doğasını doğrulamak için ölümsüzleştirilmiş hücre hatlarında protein niceleminin nasıl kullanılacağı ile ilgilidir. Ancak immünororesksanın çok katlı bir yaklaşıma kolayca dahil edilebildiği ve primer biyopsi örneklerine uygulanabildiği unutulmamalıdır.Bu prosedüre yardımcı olmak ve göstermek için teknisyen Lee Boudreau ve operasyon direktörü Shakeel Virk olacaktır. İkisi de Queen's Moleküler Patoloji Laboratuvarı'ndan. Başlamak için, beş dakika için 225 Gs 50 mililitrekonik tüp içinde daha önce hasat hücreleri santrifüj.Süpernatant'ı dekantlet ve hücre peletini 10 mililitre PBS'de yeniden askıya alın. Daha sonra, 225 Gs'de yeniden askıya alınan hücreleri beş dakika santrifüj edin. 10 mililitre %10 NBF ile hücre peletini askıya alın.Sonra bir gecede 24 RİB'de bir rocker oda sıcaklığında hücreleri kuluçkaya yatırın. Hücreleri onardıktan sonra, hücreleri 225 Gs'de beş dakika santrifüj edin. Sonra supernatant çıkarın ve PBS 500 mikrolitre hücreleri resuspend.Hücreleri 1,5 mililitrelik mikrosantrifüj tüpüne aktarın ve santrifüj yoluyla hücreleri pelet. Sonra, supernatant aspire. Hücreleri içeren her tüpe yaklaşık 500 mikrolitre %1 agarose çözeltisi ekleyin.Sonra, pipet karışımı yukarı ve aşağı karıştırmak için. Agarose hücre çözeltisi sertleştikten sonra tüplere bir mililitre %10 NBF ekleyin. Daha sonra, nbf'yi örneklerden çıkarın.Hücre fişini çıkarmak için bir jilet kullanın ve fişi plastik bir doku kasetine yerleştirin. Örnekleri bir gecede otomatik doku işlemcisi ile işleyin. Daha sonra, standart histoloji yöntemleri kullanarak, parafin balmumu örnekleri gömmek.Bir doku arrayer alet kullanarak, parafin bloğundan 6 milimetrelik çekirdekleri hasat edin ve boş bir parafin bloğuna yerleştirin. Bundan sonra, yeni oluşturulan hücre hattı, TMA iki histolojik bölümleri hazırlamak için bir mikrotom kullanın. Daha sonra bölümleri bir histoloji slaytına monte edin ve onları ayırın.İlk olarak, hücre hattı TMA'nın iki slaytını otomatik bir boyama sistemine yükleyin. En iyi primer antikor seyreltme ile bir tarafı leke, negatif bir kontrol slayt olarak diğer bırakarak. Her iki slayt için, bir nükleer karşı leke uygulamak, ve ikincil antikor.Boyama işleminden sonra, tiramid sinyal amplifikasyon reaktifleri ekleyin. Bundan sonra, kullanılan floroforlar için uygun uyarma ve algılama dalga boylarını kullanarak immünolekeli slaytları tarar. İster çekirdek ister sitoplazma olsun, hücresel ilgi bölmesini belirlemek ve her satır için ortalama floresan yoğunluğunu veya MFI'yi ölçmek için görüntü analizi yazılımını kullanın.Hangi hücre hattının hedef proteinin en büyük bolluğuna sahip olduğunu belirlemek için, aliquot değerli hazırlanmış hücre lysate mikrosantrifüj tüpler içine. Daha sonra 6x laemly tampon 2,5 mikrolitre ekleyin ve yeterli RIPA lysis tampon 15 mikrolitre toplam hacmi getirmek için. Ardından, bir Protein merdiveni ve önceden hazırlanmış örnekleri içeren bir SDS sayfa jeli yükleyin.Bundan sonra, boş kuyulara laemly tampon yükleyin. Mavi boya tabağın altına ulaşana kadar jel çalıştırın. Yarı kuru protein transferini yaptıktan sonra, kontrol proteininden ilgi proteinini ayırmak için membranı yatay olarak kesmek için jilet kullanın.Üreticilerin talimatlarına göre engelleme ve antikor kuluçkaları gerçekleştirin. Sonra membran şeritler imal bir plastik torbaya yerleştirin. ECL karışımı ile membranları kapsayacak şekilde p1000 pipet kullanın.Sonra çanta mühür ve 1-2 dakika karanlıkta oda sıcaklığında membranlar kuluçka. Ardından, membranları içeren plastik torbayı dijital görüntüleme platformuna yerleştirin. Membranın çeşitli pozlamalarını yakalamak için kemilüminesans ve kolorimetrik marker algılamasını kullanın.Görüntü analizi yazılımı veya görsel gözlem kullanarak, hangi hücre hattının en hedef proteinifade belirler. Bu hücre hattının seri seyreltme immunoblotting sonra, görüntü analiz yazılımı kullanarak pozlama görüntüleri açın. Jelin ilk şeridini seçmek için dikdörtgen seçim aracını kullanın.Sonra analiz etmek için gidin, jeller, ve ilk şerit seçin. Dikdörtgen seçim aracını bir sonraki şeride taşıyarak bu işlemi tekrarlayın ve analiz e, jelleri ve sonraki şeridi seçin. Sonra, analiz etmek için gidin, jeller, ve şerit çizmek.Arka plan gürültüsünü gidermek için her tepenin tabanlarına çizgiler çizmek için düz çizgi aracını kullanın. Ardından her tepe noktasını seçmek için değnek aracını kullanın ve sonuçlar penceresinden her tepenin bant yoğunluğunu elde edin. Densitometri çıktısını kullanarak her birincil antikor için yüklenen toplam protein miktarına karşılık bant yoğunluğunun bir dağılım grafiği oluşturun.Daha sonra, her antikor lineer dinamik aralığının konumunu belirlemek için en iyi uyum ve görsel gözlem bir çizgi kullanın. Doğrusal aralıkta bir bant yoğunluğu veren bir protein konsantrasyonu seçin ve daha önce gösterildiği gibi, bu protein konsantrasyonu ile tüm hücre hattı lysates bir immünoblot gerçekleştirin. Ardından, her antikor için önceden tanımlanmış doğrusal aralıklarda sinyal veren pozlamaları seçerek dijital taramalarda densitometri gerçekleştirin.Bundan sonra, her hücre hattı için kontrol bandı yoğunluğu yükleme hedef protein bant yoğunluğu oranını hesaplamak. Son olarak, IF boyama görüntü analizinden elde edilen değerler ile immünoblotlamadan elde edilen değerler arasında Pearson korelasyon testi yapmak için istatistiksel yazılım kullanın. Bu protokol, IF'nin anti-apoptotik protein Bcl-2'nin göreli miktarını belirleme yeteneğini doğrulamak için kullanılmıştır.Primer antikorların farklı seyreltmeleri immünohistoloji lekesi ile insan bademcik dokusu üzerinde test edildi. Bu deney için, bir ila 50 seyreltme az arka plan gürültüsü ile güçlü bir sinyal verdi optimal seyreltme olarak belirlenmiştir. Bu seyreltme immünororesans ile tma hücre hattı leke için kullanılan ve görüntü analizi Bcl-2 atfedilen sitoplazmik Cy5 sinyali ölçmek için kullanılmıştır.Tüm test edilen hücre hatları için immünoblot dayanarak, Granta-519 Bcl-2 en büyük bolluk vardı. Daha sonra Bcl-2'nin lineer dinamik aralığını bulmak ve GAPDH proteinini kontrol etmek için Granta-519 lysate seri seyreltme immünoblotu kullanıldı. Bu teşpteki Bcl-2'nin dinamik aralığı yaklaşık 0 bant yoğunluğundan 7500 üniteye kadar değişmekteydi.GAPDH'nin dinamik aralığı 3000 ile 6500 arasında değişmektedir. İmmünoblot bu doğrusal aralıkta maruz kalma ile tekrarlandı. Ve Her hücre hattı için Bcl-2'nin GAPDH'ye oranı hesaplandı.Pearson korelasyon testi, immünolotlamanın yoğunluk oranlarının kantitatif IF'den gelen yoğunluk okumaları ile güçlü ve pozitif korelasyon olduğunu göstermiştir. Bu yordamı çalışırken, tüm bantların kendi doğrusal aralıkları içinde olduğu en uygun pozlamayı bulmak için, son membranı birden çok zaman puanı için ortaya çıkarmak için hatırlaman önemlidir. IF protokolünün nicel yapısı doğruladıktan sonra, hedef proteinin ifade edildiği yer gibi klinik soruları yanıtlamak için rutin olarak işlenmiş doku örneklerinde multipleks IF için değiştirilebilir.

Research

JoVE Journal

Biology

Actin Co-Sedimentation Assay; for the Analysis of Protein Binding to F-Actin

Aktin Co-Sedimantasyon Testi; F-Aktin Bağlayıcı Protein Analizi

The actin cytoskeleton within the cell is a network of actin filaments that allows the movement of cells and cellular processes, and that generates ...

Quantitative Comparison of cis-Regulatory Element (CRE) Activities in Transgenic Drosophila melanogaster

Quantitative Comparison of cis-Regulatory Element CRE Activities in Transgenic Drosophila melanogaster

Uygulamalarda Kantitatif Karşılaştırılması Cis</emTransgenik>-Regulatory Element (CRE) Etkinlikler Drosophila melanogaster</em

Gene expression patterns are specified by cis-regulatory element (CRE) sequences, which are also called enhancers or cis-regulatory modules. A typical CRE ...

A Quantitative Fitness Analysis Workflow

Kantitatif Spor Analizi İş Akışı

Quantitative Fitness Analysis (QFA) is an experimental and computational workflow for comparing fitnesses of microbial cultures grown in parallel1,2,3,4. ...

Using SecM Arrest Sequence as a Tool to Isolate Ribosome Bound Polypeptides

Ribozom Ciltli Polipeptitler izole bir aracı olarak SECM Tutuklanma sırası kullanılarak

Extensive research has provided ample evidences suggesting that protein folding in the cell is a co-translational process1-5. However, the exact pathway ...

Profiling Individual Human Embryonic Stem Cells by Quantitative RT-PCR

Kantitatif RT-PCR ile Bireysel İnsan Embriyonik Kök Hücreleri profilleme

Heterogeneity of stem cell population hampers detailed understanding of stem cell biology, such as their differentiation propensity toward different ...

Quantitative Immunofluorescence Assay to Measure the Variation in Protein Levels at Centrosomes

Kantitatif İmmünofloresan Deneyi sentrozomlar Protein Düzeyleri Varyasyon Tedbir

Centrosomes are small but important organelles that serve as the poles of mitotic spindle to maintain genomic integrity or assemble primary cilia to ...

Method for Measuring the Activity of Deubiquitinating Enzymes in Cell Lines and Tissue Samples

Hücre Kuşakları ve Doku Örneklerinde Deubiquitinating Enzim aktivitesinin ölçülmesi için bir yöntem

The ubiquitin-proteasome system has recently been implicated in various pathologies including neurodegenerative diseases and cancer. In light of this, ...

Employing Digital Droplet PCR to Detect BRAF V600E Mutations in Formalin-fixed Paraffin-embedded Reference Standard Cell Lines

Dijital Damlacık PCR Formalin sabit Parafin gömülü Referans Standart Hücre Hatlarında BRAF V600E mutasyonları tespit etmek istihdam

ddPCR is a highly sensitive PCR method that utilizes a water-oil emulsion system. Using a droplet generator, an extracted nucleic acid sample is ...

Immunofluorescence Analysis of Endogenous and Exogenous Centromere-kinetochore Proteins

Endojen ve İmmünofloresan Analizi ve Eksojen Sentromer-kinetochore Proteinler

"Centromeres" and "kinetochores" refer to the site where chromosomes associate with the spindle during cell division. Direct visualization of ...

Gap Junctional Intercellular Communication: A Functional Biomarker to Assess Adverse Effects of Toxicants and Toxins, and Health Benefits of Natural Products

Gap Junctional Hücreler arası iletişim: Doğal Ürünler Toksikantların ve Toksinler Yan Etkileri değerlendirmek için Fonksiyonel Biyomarker ve Sağlık Faydaları

This protocol describes a scalpel loading-fluorescent dye transfer (SL-DT) technique that measures intercellular communication through gap junction ...