Name: protein kinase c-delta inhibitor peptide formulation using gold nanoparticles
Uploaded: 2019-03-09T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Protein Kinase C-delta Inhibitor Peptide Formulation using Gold Nanoparticles at JoVE.com

ويدعم هذا العمل المنح البحثية من المعاهد الكندية للبحوث الصحية (PJT-148847) ووزارة البحث والابتكار في أونتاريو (RE-08-029) وكندا البحث الأولى للتميز البرنامج، الطب حسب التصميم في جامعة تورنتو. الدكتور ليو مينجياو هو جيمس وماري دافي الرئاسة في إصابة الرئة، وإصلاح وتجديد.

1-إعداد حلول الببتيد
<ol><li>استرداد الببتيدات (P2: كااا، P4: كاووو، PKCδi: كسفنسييلجسل) من الثلاجة-20 درجة مئوية وذوبان الجليد في درجة حرارة الغرفة (RT). ملاحظة: الاحتفاظ زجاجة مغلقة لمنع الرطوبة من التكثيف على الببتيدات.</li>
	<li>وزن 0.01 غرام من كل الببتيد في microscale. وضع كل الببتيد في أنبوب مخروطي منفصل ...

<ol>
	<li>Yusen, R. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+registry+of+the+International+Society+for+Heart+and+Lung+Transplantation:+thirty-first+adult+lung+and+heart-lung+transplant+report--2014;+focus+theme:+retransplantation.">The registry of the International Society for Heart and Lung Transplantation: thirty-first adult lung and heart-lung transplant report--2014; focus theme: retransplantation.</a> The Journal of Heart and Lung Transplantation. 33 (10), 1009-1024 (2014).</li><li>Lee, J. C., Christie, J. D., Keshavjee, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primary+graft+dysfunction:+definition,+risk+factors,+short-+and+long-term+outcomes.">Primary graft dysfunction: definition, risk factors, short- and long-term outcomes.</a> Seminars in Respiratory and Critical. 31 (2), 161-171 (2010).</li><li>Chatterjee, S., Nieman, G. F., Christie, J. D., Fisher, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Shear+stress-related+mechanosignaling+with+lung+ischemia:+lessons+from+basic+research+can+inform+lung+transplantation.">Shear stress-related mechanosignaling with lung ischemia: lessons from basic research can inform lung transplantation.</a> American Journal of Physiology-Lung Cellular and Molecular Physiology. 307 (9), 668-680 (2014).</li><li>Inagaki, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+delta-protein+kinase+C+protects+against+reperfusion+injury+of+the+ischemic+heart+in+vivo.">Inhibition of delta-protein kinase C protects against reperfusion injury of the ischemic heart in vivo.</a> Circulation. 108 (19), 2304-2307 (2003).</li><li>Lincoff, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+delta-protein+kinase+C+by+delcasertib+as+an+adjunct+to+primary+percutaneous+coronary+intervention+for+acute+anterior+ST-segment+elevation+myocardial+infarction:+results+of+the+PROTECTION+AMI+Randomized+Controlled+Trial.">Inhibition of delta-protein kinase C by delcasertib as an adjunct to primary percutaneous coronary intervention for acute anterior ST-segment elevation myocardial infarction: results of the PROTECTION AMI Randomized Controlled Trial.</a> European Heart Journal. 35 (37), 2516-2523 (2014).</li><li>Kim, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=deltaV1-1+Reduces+Pulmonary+Ischemia+Reperfusion-Induced+Lung+Injury+by+Inhibiting+Necrosis+and+Mitochondrial+Localization+of+PKCdelta+and+p53.">deltaV1-1 Reduces Pulmonary Ischemia Reperfusion-Induced Lung Injury by Inhibiting Necrosis and Mitochondrial Localization of PKCdelta and p53.</a> American Journal of Transplantation. 16 (1), 83-98 (2016).</li><li>Lin, H. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Derangements+of+post-ischemic+cerebral+blood+flow+by+protein+kinase+C+delta.">Derangements of post-ischemic cerebral blood flow by protein kinase C delta.</a> Neuroscience. 171 (2), 566-576 (2010).</li><li>Lin, H. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+kinase+C+delta+modulates+endothelial+nitric+oxide+synthase+after+cardiac+arrest.">Protein kinase C delta modulates endothelial nitric oxide synthase after cardiac arrest.</a> Journal of Cerebral Blood Flow Metabolism. 34 (4), 613-620 (2014).</li><li>Albini, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HIV-tat+protein+is+a+heparin-binding+angiogenic+growth+factor.">HIV-tat protein is a heparin-binding angiogenic growth factor.</a> Oncogene. 12 (2), 289-297 (1996).</li><li>Kim, H., Moodley, S., Liu, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TAT+cell-penetrating+peptide+modulates+inflammatory+response+and+apoptosis+in+human+lung+epithelial+cells.">TAT cell-penetrating peptide modulates inflammatory response and apoptosis in human lung epithelial cells.</a> Drug Delivery and Translational Research. 5 (3), 275-278 (2015).</li><li>Lee, D., Pacheco, S., Liu, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biological+effects+of+Tat+cell-penetrating+peptide:+a+multifunctional+Trojan+horse.">Biological effects of Tat cell-penetrating peptide: a multifunctional Trojan horse.</a> Nanomedicine (Lond). 9 (1), 5-7 (2014).</li><li>Auffan, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Towards+a+definition+of+inorganic+nanoparticles+from+an+environmental,+health+and+safety+perspective.">Towards a definition of inorganic nanoparticles from an environmental, health and safety perspective.</a> Nature Nanotechnology. 4 (10), 634-641 (2009).</li><li>Ghosh, P., Han, G., De, M., Kim, C. K., Rotello, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gold+nanoparticles+in+delivery+applications.">Gold nanoparticles in delivery applications.</a> Advanced Drug Delivery Reviews. 60 (11), 1307-1315 (2008).</li><li>Yang, H., Fung, S. Y., Liu, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Programming+the+cellular+uptake+of+physiologically+stable+peptide-gold+nanoparticle+hybrids+with+single+amino+acids.">Programming the cellular uptake of physiologically stable peptide-gold nanoparticle hybrids with single amino acids.</a> Angewandte Chemie International Edition. 50 (41), 9643-9646 (2011).</li><li>Lee, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effective+delivery+of+a+rationally+designed+intracellular+peptide+drug+with+gold+nanoparticle-peptide+hybrids.">Effective delivery of a rationally designed intracellular peptide drug with gold nanoparticle-peptide hybrids.</a> Nanoscale. 7 (29), 12356-12360 (2015).</li><li>Cheng, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanotechnologies+for+biomolecular+detection+and+medical+diagnostics.">Nanotechnologies for biomolecular detection and medical diagnostics.</a> Current Opinion in Chemical Biology. 10 (1), 11-19 (2006).</li><li>Rosi, N. L., Mirkin, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanostructures+in+biodiagnostics.">Nanostructures in biodiagnostics.</a> Chemical Reviews. 105 (4), 1547-1562 (2005).</li><li>Saha, K., Agasti, S. S., Kim, C., Li, X., Rotello, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gold+nanoparticles+in+chemical+and+biological+sensing.">Gold nanoparticles in chemical and biological sensing.</a> Chemical Reviews. 112 (5), 2739-2779 (2012).</li><li>Boisselier, E., Astruc, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gold+nanoparticles+in+nanomedicine:+preparations,+imaging,+diagnostics,+therapies+and+toxicity.">Gold nanoparticles in nanomedicine: preparations, imaging, diagnostics, therapies and toxicity.</a> Chemical Society Reviews. 38 (6), 1759-1782 (2009).</li><li>Yang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amino+Acid-Dependent+Attenuation+of+Toll-like+Receptor+Signaling+by+Peptide-Gold+Nanoparticle+Hybrids.">Amino Acid-Dependent Attenuation of Toll-like Receptor Signaling by Peptide-Gold Nanoparticle Hybrids.</a> ACS Nano. 9 (7), 6774-6784 (2015).</li><li>Yang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endosomal+pH+modulation+by+peptide-gold+nanoparticle+hybrids+enables+potent+anti-inflammatory+activity+in+phagocytic+immune+cells.">Endosomal pH modulation by peptide-gold nanoparticle hybrids enables potent anti-inflammatory activity in phagocytic immune cells.</a> Biomaterials. 111, 90-102 (2016).</li><li>Yang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amino+Acid+Structure+Determines+the+Immune+Responses+Generated+by+Peptide-Gold+Nanoparticle+Hybrids.">Amino Acid Structure Determines the Immune Responses Generated by Peptide-Gold Nanoparticle Hybrids.</a> Particle &amp; Particle Systems Characterization. 30 (12), 1039-1043 (2013).</li><li>Pamies, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aggregation+behaviour+of+gold+nanoparticles+in+saline+aqueous+media.">Aggregation behaviour of gold nanoparticles in saline aqueous media.</a> Journal of Nanoparticle Research. 16 (4), (2014).</li><li>Perrault, S. D., Walkey, C., Jennings, T., Fischer, H. C., Chan, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mediating+tumor+targeting+efficiency+of+nanoparticles+through+design.">Mediating tumor targeting efficiency of nanoparticles through design.</a> Nano Letters. 9 (5), 1909-1915 (2009).</li><li>Connor, E. E., Mwamuka, J., Gole, A., Murphy, C. J., Wyatt, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gold+nanoparticles+are+taken+up+by+human+cells+but+do+not+cause+acute+cytotoxicity.">Gold nanoparticles are taken up by human cells but do not cause acute cytotoxicity.</a> Small. 1 (3), 325-327 (2005).</li><li>Kim, C. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Entrapment+of+Hydrophobic+Drugs+in+Nanoparticle+Monolayers+with+Efficient+Release+into+Cancer+Cells.">Entrapment of Hydrophobic Drugs in Nanoparticle Monolayers with Efficient Release into Cancer Cells.</a> Journal of the American Chemical Society. 131 (4), 1360 (2009).</li><li>Sonavane, G., Tomoda, K., Makino, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biodistribution+of+colloidal+gold+nanoparticles+after+intravenous+administration:+Effect+of+particle+size.">Biodistribution of colloidal gold nanoparticles after intravenous administration: Effect of particle size.</a> Colloids and Surfaces B-Biointerfaces. 66 (2), 274-280 (2008).</li><li>Balasubramanian, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biodistribution+of+gold+nanoparticles+and+gene+expression+changes+in+the+liver+and+spleen+after+intravenous+administration+in+rats.">Biodistribution of gold nanoparticles and gene expression changes in the liver and spleen after intravenous administration in rats.</a> Biomaterials. 31 (8), 2034-2042 (2010).</li><li>Lipka, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biodistribution+of+PEG-modified+gold+nanoparticles+following+intratracheal+instillation+and+intravenous+injection.">Biodistribution of PEG-modified gold nanoparticles following intratracheal instillation and intravenous injection.</a> Biomaterials. 31 (25), 6574-6581 (2010).</li></ol>

لضمان صياغة سليمة، من الأهمية بمكان أن يخضع الحل δPKCi خطوة سونيكيشن المبينة في 1.6. ΔPKCi الببتيد تسلسل يحتوي على مويتيس مسعور، حيث سونيكاتور ويساعد في إذابة بكسي في الحل الاسيتو الانيتريل 50%. وبالإضافة إلى ذلك، من المهم جداً لخلط المذيبات دقة، كما هو موضح في الخطوة 2.7.  الهجين الناتج القومي ال?...

زرع الرئة يحفظ المرضى ب أمراض الرئة نهاية مرحلة1. ومع ذلك، تبقى مضاعفات خطيرة بعد زرع الرئة عقبة. في المراحل الأولى بعد زرع الرئة، هو الخلل الأساسي الابتزاز المضاعفات الضارة الأكثر1، وأن السبب الرئيسي هو الاسكيمية-الاكسجينيه (الأشعة تحت الحمراء)-الناجم عن إصابة الرئة الحاد2.
قيد الحفظ بالتبريد، يقتصر التمثيل الغذائي في الرئة المانحين إلى مستوى منخفض جداً. ومع ذلك، يتم تنشيط الأنواع الأكسجين التفاعلية وتوليف أكسيد النيتريك نظراً لوقف تدفق الدم3. بعد زرع الأعضاء، يتم استعادة الدورة الدموية، والأنواع الأكسجين التفاعلية وأكسيد النيتريك التي تم إنشاؤها أثناء الاسكيمية الباردة تعزيز التهاب وخلية الموت، أسفر عن إصابة الأنسجة.
وقد استخدمت لمنع ضرر الأشعة تحت الحمراء، مثبط Cδ كيناز بروتين (PKCδi) في القلب والمخ والرئة4،5،،من67،8. وأظهرت هذه الدراسات أن تناقص PKCδi التهاب والمبرمج أثناء ضخه. كما منعت الإصابة الأشعة تحت الحمراء الرئوية في الفئران و نموذج عملية زرع الرئة6. هو عادة مترافق PKCδi مع اختراق الخلية ببتيد، تأت، للتسليم داخل الخلايا. بيد أنه قد ثبت أن الببتيد تأت وحدها قد آثار بيولوجية غير محددة، بما في ذلك الترويج للأوعية، والمبرمج، وتثبيط السيتوكينات متعددة9،،من1011. جسيمات نانوية، جزيئات صغيرة تتراوح بين 1 إلى 100 نانومتر في قطرها12، تم استكشاف كمرشحين في تسهيل إيصال المخدرات13. على وجه الخصوص، تعتبر جسيمات نانوية الذهب (قومي) موسع وغير سام. ولذلك، قمنا بتطوير قومي كالمخدرات تسليم ناقلات للمخدرات على أساس الببتيد،من1415.
يمكن التلاعب بها سطح قومي لتطبيقات محددة مثل التعرف الجزيئي16،17و الاستشعار الكيميائية18و التصوير19وإيصال الأدوية. تم تطوير نظام هجين الناتج القومي الإجمالي/ببتيد، الذي يحتوي على 20 نانومتر قومي واثنين من الببتيدات قصيرة (P2: كااا و P4: كووو) بنسبة نمط، لتعديل خصائص السطح من قومي. الببتيد P2، مع حمض الجلوتاميك مشحونة سلبا (ه) في النهاية، تستقر قومي في محلول مائي، ويساعد الببتيد P4، مع التربتوفان مسعور (W) في النهاية، قومي مدخل داخل الخلايا14. بقايا السيستين (ج) في المحطة ن من هذه الببتيدات تحتوي على مجموعة ثيول يمكن مترافق ل الأسطح الذهب14. كذلك استخدمت هذا الهجين الناتج القومي الإجمالي الببتيد لتسليم PKCδi (كسفنسييلجسل). نسبة المولى محسن P2:P4 أن PKCδi هو 47.5:2.5:50. قومي مترافق مع PKCδi (الناتج القومي الإجمالي/بكسي) هي مستقرة في الماء المقطر، 0.9% كلوريد الصوديوم، وبرنامج تلفزيوني يحتوي على الزلال البقري أو المصل البقري الجنين14. لقد ثبت الحقن الوريدي من الناتج القومي الإجمالي/بكسي لمنع الإصابة ضخه الاسكيمية الرئة15. هذه الوثيقة بالتفصيل أسلوب صياغة الناتج القومي الإجمالي/بكسي ويصف كيفية تقييم الخصائص الفيزيائية للناتج القومي الإجمالي/بكسي. لقد استخدمنا أساليب مماثلة لوضع المخدرات الأخرى الببتيد يضاف إلى الناتج القومي الإجمالي20،،من2122. نأمل أن هذه المادة سيتم توجيه مزيد من الاهتمام لصياغة هذه الرواية لإيصال المخدرات داخل الخلايا.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:603px;" width="603">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="126">
			<td height="126" style="height:126px;width:216px;">negatively charged glutamic acid peptide (P2)</td>
			<td style="width:189px;">CanPeptide</td>
			<td></td>
			<td style="width:197px;">Sequence: CAAAAE-NH2 
			Length: 6aa 
			Modification: C-terminal amidation 
			Quantity: 50mg 
			Purity: &#62;95%</td>
		</tr>
		<tr height="126">
			<td height="126" style="height:126px;width:216px;">hydrophobic tryptophan peptide (P4)</td>
			<td>CanPeptide</td>
			<td></td>
			<td style="width:197px;">Sequence: CAAAAW-NH2 
			Length: 6aa 
			Modification: C-terminal amidation 
			Quantity: 50mg 
			Purity: &#62;95%</td>
		</tr>
		<tr height="147">
			<td height="147" style="height:147px;width:216px;">&#948;PKCi peptide</td>
			<td>CanPeptide</td>
			<td></td>
			<td style="width:197px;">Seqeuence: CSFNSYELGSL-NH2 
			Length: 11aa 
			Modification: C-terminal amidation 
			Quantity: 50mg 
			Purity: &#62;95%</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Conical tube(50ml)</td>
			<td>Corning Life Sciences</td>
			<td align="right" style="width:119px;">3582070</td>
			<td style="width:197px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Conical tube(15ml)</td>
			<td>Corning Life Sciences</td>
			<td align="right" style="width:119px;">3582096</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Acetonitrile</td>
			<td style="width:71px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">271004-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Sonicator</td>
			<td style="width:71px;">Branson Ultrasonics Corp.</td>
			<td style="width:119px;">Branson 2510MTH</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Microtube</td>
			<td>Diamed.ca</td>
			<td style="width:119px;">AD 150-N</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Gold nanoparticle solution</td>
			<td>Ted Pella</td>
			<td style="width:119px;">15705-5</td>
			<td>A particle size is 20nm</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Rocking Platform shaker</td>
			<td style="width:71px;">VWR international</td>
			<td style="width:119px;">40000-304&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Microcentrifuge</td>
			<td style="width:71px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:119px;">5417R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Acryl cuvette</td>
			<td style="width:71px;">SARSREDT</td>
			<td align="right" style="width:119px;">67.758</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">UV-Vis spectrophotometer</td>
			<td style="width:71px;">Agilent</td>
			<td style="width:119px;">Caty 60 UV-Vis</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

protein kinase c-delta inhibitor peptide formulation using gold nanoparticles

مثبطات البروتين كيناز ج-دلتا (PKCδi) دواء واعداً لمنع الضرر الناجم عن ضخه الاسكيمية الجهاز. هو عادة مترافق لاختراق الخلية ببتيد، تأت، للتسليم داخل الخلايا. ومع ذلك، أظهرت تأت الأنشطة البيولوجية غير محددة. يمكن استخدام الجسيمات النانوية الذهبية (قومي) كشركات تسليم المخدرات دون سمية المعترف بها. ولذلك، فقد استخدمنا هجين الناتج القومي الإجمالي/ببتيد لتسليم PKCδi. اثنين قصيرة الببتيدات (P2: كااا و P4: كووو)، بنسبة نمط، واستخدمت لتعديل خصائص السطح من الناتج القومي الإجمالي. قومي مترافق مع PKCδi (الناتج القومي الإجمالي/بكسي) مستقرة في الماء المقطر، 0.9% كلوريد الصوديوم، وفوسفات مخزنة المالحة (PBS) تحتوي على ألبومين المصل البقري أو المصل البقري الجنين. وأبدى سابقا الحقن الوريدي من الناتج القومي الإجمالي-بكسي لمنع الإصابة الاسكيمية-ضخه في الرئة. توضح هذه المقالة بروتوكول لصياغة الناتج القومي الإجمالي/بكسي وتقييم الخصائص الفيزيائية للناتج القومي الإجمالي/بكسي. لقد استخدمنا أساليب مماثلة لوضع المخدرات الأخرى المستندة إلى ببتيد مع الناتج القومي الإجمالي. سوف يوجه هذا المقال نأمل المزيد من الاهتمام لهذه التكنولوجيا تقديم رواية المخدرات داخل الخلايا وتطبيقاتها المجراة.

وينبغي الحرص على تقييم الخصائص الفيزيائية الهجين الناتج القومي الإجمالي/بكسي، الناتج القومي الإجمالي يميل إلى الكلية في المذيبات. عندما يتم تجميع الناتج القومي الإجمالي، يتغير لون الحل من الوردي إلى الأرجواني (الشكل 1a). جهاز المطياف الضوئي تجاه الأشعة ف...

Watch this Scientific Journal Video about Protein Kinase C-delta Inhibitor Peptide Formulation using Gold Nanoparticles at JoVE.com

Protein Kinase C-delta Inhibitor Peptide Formulation using Gold Nanoparticles

وقد استخدمنا سابقا هجين ببتيد نانوحبيبات الذهب لتسليم عن طريق الوريد الببتيد الاصطناعية، مثبط البروتين كيناز ج-دلتا، مما خفض إصابة الرئة الحاد الناجم عن ضخه الاسكيمية. هنا نعرض البروتوكول مفصلاً لوضع المخدرات. يمكن أن تصاغ الببتيدات داخل الخلايا الأخرى وعلى نحو مماثل.

البروتين كيناز ج-دلتا "الببتيد المانع صياغة" استخدام "الذهب جسيمات نانوية"

Protein kinase C-delta inhibitor (PKC&#948;i) is a promising drug to prevent ischemia-reperfusion-induced organ injury. It is usually conjugated to a ...

يمكن لنظامنا الفريد لتوصيل الأدوية ، الذي يستخدم 20 جسيمات ذهبية نانومترية في ببتيدات قصيرة محددة ، تثبيت جزيئات النانو الذهبية في الحل الفسيولوجي وتعزيز امتصاصه الخلوي ، وبالتالي ، تسليم الأدوية المستندة إلى الببتيد أو غيرها بشكل فعال في الخلايا. لدينا الناتج القومي الإجمالي الببتيد الهجين من السهل توليف ومستقرة. باستخدام الذهب ببتيد نانو جسيمات هجينة كحاملين للمخدرات، يمكننا نقل أدوية الببتيد إلى الخلايا بشكل فعال وفي وفرة.تعاملنا مع إصابة الإقفاريات في الرئتين مع الناتج القومي الإجمالي / PKCi الهجين. الناتج القومي الإجمالي يجلب الببتيدات مثبطات PKC في السيتوبلازم. وكان هذا الأسلوب التسليم قادرة على الحد من إصابات الرئة أكثر شدة باستخدام جرعة أقل من PKCi من طرق التسليم الأخرى.لبدء هذا الإجراء، استرداد الببتيدات من الثلاجة في ناقص 20 درجة مئوية، وذوبانها في درجة حرارة الغرفة. استخدم مقياسًا صغيرًا لوزن 0.01 جرام من كل ببتيد مذاب، ونقل كل ببتيد إلى أنبوب مخروطي منفصل 50 ملليلتر. إضافة 18.74 ملليلتر من المياه ديوند إلى أنبوب P2، و 16.93 ملليلتر من المياه ديوند إلى أنبوب P4.إضافة 8.21 ملليلتر من 50٪ الأسيتونتريل المخفف في المياه الأيونية إلى أنبوب مثبطات دلتا PKC. دوامة حلول الببتيد لفترة وجيزة. ثم ضع الأنابيب في صوتنة في 40 ميغاهيرتز لمدة خمس دقائق.بعد ذلك، قم بنقل الحلول إلى مجلس وزراء السلامة البيولوجية. من الأهمية بمكان وضع أنبوب مخروطي 50 مل في صوتاتور لمدة خمس دقائق. إذا تم تخطي هذه الخطوة، فإن الناتج القومي الإجمالي/PKCi سيشكل التجميعات.نقل ملليلتر واحد من كل حل الببتيد إلى أنبوب مخروطي جديد 50 ملليلتر. إضافة 19 ملليلتر من المياه الأيونية إلى الأنابيب التي تحتوي على P2 و P4. وإضافة 19 ملليلتر من 50٪ الأسيتونتريل إلى أنبوب يحتوي على مثبط دلتا PKC. إضافة 475 ملليلتر من حل P2، 25 ميكرولترات من حل P4، 500 ميكرولترات من محلول مثبطات دلتا PKC إلى أنبوب 15 ملليلتر.ثم إضافة تسعة ملليلتر من 20 نانومتر الناتج القومي الإجمالي الحل لنفس الأنبوب. إزالة حل مجتمعة من مجلس الوزراء السلامة البيولوجية والتفاف الأنبوب في رقائق الألومنيوم. ضع الأنبوب على شاكر بين عشية وضحاها.في اليوم التالي، إعادة العينات إلى مجلس الوزراء السلامة البيولوجية. نقل 1 ملليلتر aliquots من الناتج القومي الإجمالي / PKCi الحل في أنابيب 1.5 ملليلتر الصغيرة. أجهزة الطرد المركزي الأنابيب الدقيقة في جهاز طرد مركزي صغير في 15294 مرات ز وعلى أربع درجات مئوية لمدة 30 دقيقة.نقل أنابيب صغيرة مرة أخرى إلى مجلس الوزراء السلامة الحيوية، وإزالة supernatent من كل أنبوب، مع ضمان بيليه الناتج القومي الإجمالي لا disturbed. resuspend كل بيليه في المذيبات المطلوبة وفقا للتركيز المطلوب. لتقييم الناتج القومي الإجمالي/ PKCi الذوبان الهجين، صب 0.5 ملليلتر من الناتج القومي الإجمالي / PKCi الحل في cuvette الاستحقاق.ضع الـ cuvette على مقياس طيف الأشعة فوق البنفسجية-فيس واختبر ذروة الامتصاص. في هذه الدراسة, البروتين كيناز C دلتا مثبطات مترافق مع الجسيمات النانوية الذهب لتشكيل الناتج القومي الإجمالي / PKCi الهجين. يجب توخي الحذر مع تقييم الخصائص الفيزيائية الحيوية للهجين ، حيث تميل الجسيمات النانوية الذهبية إلى التجميع في المذيبات.عندما تجمع الجسيمات النانوية، فإن لون الحل يتغير من الوردي إلى الأرجواني. يتم تحليل العينات باستخدام مقياس طيفي للأشعة فوق البنفسجية Vis قادر على الكشف عنه بدرجة عالية من الحساسية. إذا لم يتم تجميع الهجين، يجب أن تكون ذروة امتصاص في 525 نانومتر.وإذا تم تجميع الناتج القومي الإجمالي، فإن ذروة الاستيعاب ستتحول إلى اليمين. وكما يمكن أن نرى، عندما تكون المجاميع قد تشكلت، تنخفض الكثافة البصرية في الدلتا. عند صياغة الهجينة الببتيد الناتج القومي الإجمالي, من المهم أن نتذكر نسبة الببتيدات إلى الناتج القومي الإجمالي الحل ينبغي أن يكون واحد إلى تسعة.يمكن استخدام هذه الصيغة الناتج القومي الإجمالي / PKCi لإصابة نقص التروية في نظم الجهاز غير الرئة. أي الببتيدات يمكن أن نعلق على الناتج القومي الإجمالي إذا كانت تلك الببتيدات لديها بقايا السيستين في N-terminus. وهذا يعني أن الناتج القومي الإجمالي الببتيد الهجين يمكن استخدامها لنقل أدوية الببتيد الأخرى إلى الخلية.الببتيدات المصممة بعقلانية هي تقنية جديدة يمكن أن تجلب تفاعل بروتين بروتيني محدد داخل تلك الخلايا. هذه التقنية، التي تم تطويرها هنا، يمكن استخدامها في توصيل أدوية ببتيد جديدة أو لإصدارات معدلة من الأدوية الموجودة.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Formulation of Diblock Polymeric Nanoparticles through Nanoprecipitation Technique

صياغة النانوية Diblock البوليمر من خلال تقنيات Nanoprecipitation

Nanotechnology is a relatively new branch of science that involves harnessing the unique properties of particles that are nanometers in scale ...

Synthesis, Assembly, and Characterization of Monolayer Protected Gold Nanoparticle Films for Protein Monolayer Electrochemistry

التوليف ، والجمعية ، وتوصيف أحادي الطبقة المحمية الجسيمات النانوية الذهبية للأفلام كهربية البروتين أحادي الطبقة

Colloidal gold nanoparticles protected with alkanethiolate ligands called monolayer protected gold clusters (MPCs) are synthesized and subsequently ...

Analysis of Targeted Viral Protein Nanoparticles Delivered to HER2+ Tumors

تحليل المستهدفة البروتين الفيروسي النانوية يسلم إلى HER2 + أورام

The HER2+ tumor-targeted nanoparticle, HerDox, exhibits tumor-preferential accumulation and tumor-growth ablation in an animal model of HER2+ cancer. ...

Microfabrication of Nanoporous Gold Patterns for Cell-material Interaction Studies

التصنيع الدقيق لأنماط ذهب نانوية مسامية للدراسات التفاعل الخلوي المواد

Nanostructured materials with feature sizes in tens of nanometers have enhanced the performance of several technologies, including fuel cells, biosensors, ...

Programming Stem Cells for Therapeutic Angiogenesis Using Biodegradable Polymeric Nanoparticles

الخلايا الجذعية العلاجية البرمجة لتكوين الأوعية الدموية عن طريق تحلل البوليمر النانوية

Controlled vascular growth is critical for successful tissue regeneration and wound healing, as well as for treating ischemic diseases such as stroke, ...

Harmonic Nanoparticles for Regenerative Research

التوافقي النانوية للبحوث التجديدي

In this visualized experiment, protocol details are provided for in vitro labeling of human embryonic stem cells (hESC) with second harmonic generation ...

Correlative Light- and Electron Microscopy Using Quantum Dot Nanoparticles

المتلازم الخفيفة والمجهر الإلكتروني عن طريق الكم دوت النانوية

A method is described whereby quantum dot (QD) nanoparticles can be used for correlative immunocytochemical studies of human pathology tissue using ...

Surface Functionalization of Hepatitis E Virus Nanoparticles Using Chemical Conjugation Methods

الروغان السطحية من جسيمات نانوية فيروس التهاب الكبد الوبائي ه استخدام أساليب تصريف المواد الكيميائية

Virus-like particles (VLPs) have been used as nanocarriers to display foreign epitopes and/or deliver small molecules in the detection and treatment of ...

In Vesiculo Synthesis of Peptide Membrane Precursors for Autonomous Vesicle Growth

في فيسيكولو التوليف من السلائف غشاء الببتيد لنمو الحويصلة المستقلة

Compartmentalization of biochemical reactions is a central aspect of synthetic cells. For this purpose, peptide-based reaction compartments serve as an ...

Production of E. coli-expressed Self-Assembling Protein Nanoparticles for Vaccines Requiring Trimeric Epitope Presentation

Production of E. coli-expressed Self-Assembling Protein Nanoparticles for Vaccines Requiring Trimeric Epitope Presentation

إنتاج E.القولونية - أعرب الذاتي تجميع البروتين الجسيمات النانوية لللقاحات التي تتطلب عرض الإبإبيلة الانتهازية

Self-assembling protein nanoparticles (SAPNs) function as repetitive antigen displays and can be used to develop a wide range of vaccines for different ...