Name: protein kinase c-delta inhibitor peptide formulation using gold nanoparticles
Uploaded: 2019-03-09T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Protein Kinase C-delta Inhibitor Peptide Formulation using Gold Nanoparticles at JoVE.com

עבודה זו נתמכת על ידי מענקי מחקר קנדי מוסדות הבריאות מחקר (PJT-148847), משרד של מחקר, חדשנות של אונטריו (RE-08-029), קנדה הראשון של מצוינות תכנית המחקר, רפואה על ידי עיצוב באוניברסיטת טורונטו. ד ר Mingyao ליו הוא ג'יימס וכיסא דייוי מרי ב פגיעת ריאות, תיקון והתחדשות.

1. הכנת פפטיד פתרונות
<ol><li>אחזר את פפטידים (P2: CAAAAE, P4: CAAAAW, PKCδi: CSFNSYELGSL) מן המקפיא-20 ° C ו להפשיר בטמפרטורת החדר (RT). הערה: לשמור את הבקבוק סגור כדי למנוע עיבוי על פפטידים לחות.</li>
	<li>שוקלים 0.01 גר' כל פפטיד על microscale. לשים כל פפטיד לתוך צינור חרוטי נפרד 50 מ.</li>
	<li>להוסיף 18.74 מ ל מים (DI) יונים הצינור P2.</li...

<ol>
	<li>Yusen, R. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+registry+of+the+International+Society+for+Heart+and+Lung+Transplantation:+thirty-first+adult+lung+and+heart-lung+transplant+report--2014;+focus+theme:+retransplantation.">The registry of the International Society for Heart and Lung Transplantation: thirty-first adult lung and heart-lung transplant report--2014; focus theme: retransplantation.</a> The Journal of Heart and Lung Transplantation. 33 (10), 1009-1024 (2014).</li><li>Lee, J. C., Christie, J. D., Keshavjee, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primary+graft+dysfunction:+definition,+risk+factors,+short-+and+long-term+outcomes.">Primary graft dysfunction: definition, risk factors, short- and long-term outcomes.</a> Seminars in Respiratory and Critical. 31 (2), 161-171 (2010).</li><li>Chatterjee, S., Nieman, G. F., Christie, J. D., Fisher, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Shear+stress-related+mechanosignaling+with+lung+ischemia:+lessons+from+basic+research+can+inform+lung+transplantation.">Shear stress-related mechanosignaling with lung ischemia: lessons from basic research can inform lung transplantation.</a> American Journal of Physiology-Lung Cellular and Molecular Physiology. 307 (9), 668-680 (2014).</li><li>Inagaki, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+delta-protein+kinase+C+protects+against+reperfusion+injury+of+the+ischemic+heart+in+vivo.">Inhibition of delta-protein kinase C protects against reperfusion injury of the ischemic heart in vivo.</a> Circulation. 108 (19), 2304-2307 (2003).</li><li>Lincoff, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+delta-protein+kinase+C+by+delcasertib+as+an+adjunct+to+primary+percutaneous+coronary+intervention+for+acute+anterior+ST-segment+elevation+myocardial+infarction:+results+of+the+PROTECTION+AMI+Randomized+Controlled+Trial.">Inhibition of delta-protein kinase C by delcasertib as an adjunct to primary percutaneous coronary intervention for acute anterior ST-segment elevation myocardial infarction: results of the PROTECTION AMI Randomized Controlled Trial.</a> European Heart Journal. 35 (37), 2516-2523 (2014).</li><li>Kim, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=deltaV1-1+Reduces+Pulmonary+Ischemia+Reperfusion-Induced+Lung+Injury+by+Inhibiting+Necrosis+and+Mitochondrial+Localization+of+PKCdelta+and+p53.">deltaV1-1 Reduces Pulmonary Ischemia Reperfusion-Induced Lung Injury by Inhibiting Necrosis and Mitochondrial Localization of PKCdelta and p53.</a> American Journal of Transplantation. 16 (1), 83-98 (2016).</li><li>Lin, H. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Derangements+of+post-ischemic+cerebral+blood+flow+by+protein+kinase+C+delta.">Derangements of post-ischemic cerebral blood flow by protein kinase C delta.</a> Neuroscience. 171 (2), 566-576 (2010).</li><li>Lin, H. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+kinase+C+delta+modulates+endothelial+nitric+oxide+synthase+after+cardiac+arrest.">Protein kinase C delta modulates endothelial nitric oxide synthase after cardiac arrest.</a> Journal of Cerebral Blood Flow Metabolism. 34 (4), 613-620 (2014).</li><li>Albini, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HIV-tat+protein+is+a+heparin-binding+angiogenic+growth+factor.">HIV-tat protein is a heparin-binding angiogenic growth factor.</a> Oncogene. 12 (2), 289-297 (1996).</li><li>Kim, H., Moodley, S., Liu, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TAT+cell-penetrating+peptide+modulates+inflammatory+response+and+apoptosis+in+human+lung+epithelial+cells.">TAT cell-penetrating peptide modulates inflammatory response and apoptosis in human lung epithelial cells.</a> Drug Delivery and Translational Research. 5 (3), 275-278 (2015).</li><li>Lee, D., Pacheco, S., Liu, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biological+effects+of+Tat+cell-penetrating+peptide:+a+multifunctional+Trojan+horse.">Biological effects of Tat cell-penetrating peptide: a multifunctional Trojan horse.</a> Nanomedicine (Lond). 9 (1), 5-7 (2014).</li><li>Auffan, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Towards+a+definition+of+inorganic+nanoparticles+from+an+environmental,+health+and+safety+perspective.">Towards a definition of inorganic nanoparticles from an environmental, health and safety perspective.</a> Nature Nanotechnology. 4 (10), 634-641 (2009).</li><li>Ghosh, P., Han, G., De, M., Kim, C. K., Rotello, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gold+nanoparticles+in+delivery+applications.">Gold nanoparticles in delivery applications.</a> Advanced Drug Delivery Reviews. 60 (11), 1307-1315 (2008).</li><li>Yang, H., Fung, S. Y., Liu, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Programming+the+cellular+uptake+of+physiologically+stable+peptide-gold+nanoparticle+hybrids+with+single+amino+acids.">Programming the cellular uptake of physiologically stable peptide-gold nanoparticle hybrids with single amino acids.</a> Angewandte Chemie International Edition. 50 (41), 9643-9646 (2011).</li><li>Lee, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effective+delivery+of+a+rationally+designed+intracellular+peptide+drug+with+gold+nanoparticle-peptide+hybrids.">Effective delivery of a rationally designed intracellular peptide drug with gold nanoparticle-peptide hybrids.</a> Nanoscale. 7 (29), 12356-12360 (2015).</li><li>Cheng, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanotechnologies+for+biomolecular+detection+and+medical+diagnostics.">Nanotechnologies for biomolecular detection and medical diagnostics.</a> Current Opinion in Chemical Biology. 10 (1), 11-19 (2006).</li><li>Rosi, N. L., Mirkin, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanostructures+in+biodiagnostics.">Nanostructures in biodiagnostics.</a> Chemical Reviews. 105 (4), 1547-1562 (2005).</li><li>Saha, K., Agasti, S. S., Kim, C., Li, X., Rotello, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gold+nanoparticles+in+chemical+and+biological+sensing.">Gold nanoparticles in chemical and biological sensing.</a> Chemical Reviews. 112 (5), 2739-2779 (2012).</li><li>Boisselier, E., Astruc, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gold+nanoparticles+in+nanomedicine:+preparations,+imaging,+diagnostics,+therapies+and+toxicity.">Gold nanoparticles in nanomedicine: preparations, imaging, diagnostics, therapies and toxicity.</a> Chemical Society Reviews. 38 (6), 1759-1782 (2009).</li><li>Yang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amino+Acid-Dependent+Attenuation+of+Toll-like+Receptor+Signaling+by+Peptide-Gold+Nanoparticle+Hybrids.">Amino Acid-Dependent Attenuation of Toll-like Receptor Signaling by Peptide-Gold Nanoparticle Hybrids.</a> ACS Nano. 9 (7), 6774-6784 (2015).</li><li>Yang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endosomal+pH+modulation+by+peptide-gold+nanoparticle+hybrids+enables+potent+anti-inflammatory+activity+in+phagocytic+immune+cells.">Endosomal pH modulation by peptide-gold nanoparticle hybrids enables potent anti-inflammatory activity in phagocytic immune cells.</a> Biomaterials. 111, 90-102 (2016).</li><li>Yang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amino+Acid+Structure+Determines+the+Immune+Responses+Generated+by+Peptide-Gold+Nanoparticle+Hybrids.">Amino Acid Structure Determines the Immune Responses Generated by Peptide-Gold Nanoparticle Hybrids.</a> Particle &amp; Particle Systems Characterization. 30 (12), 1039-1043 (2013).</li><li>Pamies, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aggregation+behaviour+of+gold+nanoparticles+in+saline+aqueous+media.">Aggregation behaviour of gold nanoparticles in saline aqueous media.</a> Journal of Nanoparticle Research. 16 (4), (2014).</li><li>Perrault, S. D., Walkey, C., Jennings, T., Fischer, H. C., Chan, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mediating+tumor+targeting+efficiency+of+nanoparticles+through+design.">Mediating tumor targeting efficiency of nanoparticles through design.</a> Nano Letters. 9 (5), 1909-1915 (2009).</li><li>Connor, E. E., Mwamuka, J., Gole, A., Murphy, C. J., Wyatt, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gold+nanoparticles+are+taken+up+by+human+cells+but+do+not+cause+acute+cytotoxicity.">Gold nanoparticles are taken up by human cells but do not cause acute cytotoxicity.</a> Small. 1 (3), 325-327 (2005).</li><li>Kim, C. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Entrapment+of+Hydrophobic+Drugs+in+Nanoparticle+Monolayers+with+Efficient+Release+into+Cancer+Cells.">Entrapment of Hydrophobic Drugs in Nanoparticle Monolayers with Efficient Release into Cancer Cells.</a> Journal of the American Chemical Society. 131 (4), 1360 (2009).</li><li>Sonavane, G., Tomoda, K., Makino, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biodistribution+of+colloidal+gold+nanoparticles+after+intravenous+administration:+Effect+of+particle+size.">Biodistribution of colloidal gold nanoparticles after intravenous administration: Effect of particle size.</a> Colloids and Surfaces B-Biointerfaces. 66 (2), 274-280 (2008).</li><li>Balasubramanian, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biodistribution+of+gold+nanoparticles+and+gene+expression+changes+in+the+liver+and+spleen+after+intravenous+administration+in+rats.">Biodistribution of gold nanoparticles and gene expression changes in the liver and spleen after intravenous administration in rats.</a> Biomaterials. 31 (8), 2034-2042 (2010).</li><li>Lipka, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biodistribution+of+PEG-modified+gold+nanoparticles+following+intratracheal+instillation+and+intravenous+injection.">Biodistribution of PEG-modified gold nanoparticles following intratracheal instillation and intravenous injection.</a> Biomaterials. 31 (25), 6574-6581 (2010).</li></ol>

כדי להבטיח ניסוח תקין, חשוב כי הפתרון δPKCi עובר את השלב sonication המתוארות ב 1.6. ΔPKCi פפטיד רצף מכיל moieties הידרופוביות, כך sonicator מסייע המסת PKCi בפתרון 50% acetonitrile. בנוסף, חשוב מאוד לערבב הממס בקפידה, כמתואר בשלב 2.7.  היברידית תל ג/PKCi לא טוב יגובש אם שלבים אלה אינם נעשים כראוי, עקב הצבירה של פפטיד δPKCi<sup class=...

השתלת ריאה שומר בחולים עם מחלת ריאות בשלב הסופי1. עם זאת, סיבוכים חמורים לאחר השתלת ריאה נשארים מכשול. בשלבים המוקדמים בעקבות השתלת ריאה, תפקוד שתל העיקרי הוא סיבוך המזיקים ביותר1, את הגורם הראשוני הוא איסכמיה-פגיעה reperfusion (IR)-induced ריאות חריפה פגיעה2.
תחת שימור קר, חילוף החומרים ריאה התורם הוא מוגבל לרמה מאוד נמוכה. עם זאת, מינים חמצן תגובתי, תחמוצת החנקן סינתזה מופעלות עקב הפסקת זרימת הדם3. לאחר ההשתלה, מחזור הדם משוחזר, מינים חמצן תגובתי תחמוצת החנקן שנוצרו במהלך איסכמיה קר לשפר את דלקת מוות תאים, וכתוצאה מכך פגיעה ברקמות.
כדי למנוע פציעה IR, שימש מעכב Cδ קינאז חלבון (PKCδi), לב, מוח, ריאות4,5,6,7,8. מחקרים אלה הראו כי PKCδi ירד אפופטוזיס דלקות במהלך פגיעה reperfusion. זה גם מנעה פגיעה IR ריאתי בחולדות, מודל השתלת ריאות6. PKCδi היא מצומדת בדרך כלל עם חודר לתא פפטיד, TAT, למסירה תאיים. עם זאת, הוכח כי פפטיד TAT לבד יש השפעות ביולוגיות שאינם ספציפיים, כולל קידום של אנגיוגנזה, אפופטוזיס עיכוב של מספר ציטוקינים9,10,11. חלקיקים, חלקיקים קטנים הנע בין 1 ל- 100 ננומטר קוטר12, נחקרו זהה להקל על משלוח סמים13. בפרט, חלקיקי זהב (GNPs) נחשבים כמו לא פולשנית ולא רעילים. לכן, פיתחנו GNPs כמו ספקיות שירות משלוח סמים עבור מבוססת על פפטיד סמים14,15.
ניתן לטפל השטח של GNPs עבור יישומים ספציפיים כגון הכרה מולקולרית16,17, חישה כימית18, הדמיה19ומסירת סמים. פותחה מערכת היברידית תל ג/פפטיד, המכילה 20 ננומטר GNPs, שני פפטידים קצרים (P2: CAAAAE ו- P4: CAAAAW)-יחס 95:5, כדי לשנות את המאפיינים פני שטח של GNPs. פפטיד P2, עם החומצה גלוטמית טעונים שלילית (E) בסוף, מייצב GNPs בתמיסה המימית ומסייעת פפטיד P4, עם טריפטופן הידרופובי (W) בסוף, GNPs הכניסה לתוך תאים14. שאריות ציסטאין (ג) התחנה הסופית N של פפטידים אלה מכיל קבוצה תיול יכול נזווג משטחי זהב14. היברידית פפטיד/תל ג זו שימשה נוסף כדי לספק PKCδi (CSFNSYELGSL). היחס טוחנת אופטימיזציה של P2:P4 כדי PKCδi הוא 47.5:2.5:50. GNPs מצומדת עם PKCδi (תל ג/PKCi) הם יציבים במים מזוקקים, 0.9% NaCl, PBS המכיל אלבומין שור או עוברי סרום שור14. תל ג/PKCi תוך ורידיות הוכח כדי למנוע פגיעה reperfusion-איסכמיה פציעה של ריאות15. מאמר זה מתאר שיטה לגבש תל ג/PKCi, ומתאר כיצד להעריך את המאפיינים physicochemical של תל ג/PKCi. השתמשנו בשיטות דומות על מנת לגבש תרופות אחרות מבוססות-פפטיד מצומדת לתל ג20,21,22. אנו מקווים שמאמר זה ימשוך יותר תשומת לב זה ניסוח רומן למשלוח סמים תאיים.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:603px;" width="603">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="126">
			<td height="126" style="height:126px;width:216px;">negatively charged glutamic acid peptide (P2)</td>
			<td style="width:189px;">CanPeptide</td>
			<td></td>
			<td style="width:197px;">Sequence: CAAAAE-NH2 
			Length: 6aa 
			Modification: C-terminal amidation 
			Quantity: 50mg 
			Purity: &#62;95%</td>
		</tr>
		<tr height="126">
			<td height="126" style="height:126px;width:216px;">hydrophobic tryptophan peptide (P4)</td>
			<td>CanPeptide</td>
			<td></td>
			<td style="width:197px;">Sequence: CAAAAW-NH2 
			Length: 6aa 
			Modification: C-terminal amidation 
			Quantity: 50mg 
			Purity: &#62;95%</td>
		</tr>
		<tr height="147">
			<td height="147" style="height:147px;width:216px;">&#948;PKCi peptide</td>
			<td>CanPeptide</td>
			<td></td>
			<td style="width:197px;">Seqeuence: CSFNSYELGSL-NH2 
			Length: 11aa 
			Modification: C-terminal amidation 
			Quantity: 50mg 
			Purity: &#62;95%</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Conical tube(50ml)</td>
			<td>Corning Life Sciences</td>
			<td align="right" style="width:119px;">3582070</td>
			<td style="width:197px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Conical tube(15ml)</td>
			<td>Corning Life Sciences</td>
			<td align="right" style="width:119px;">3582096</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Acetonitrile</td>
			<td style="width:71px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">271004-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Sonicator</td>
			<td style="width:71px;">Branson Ultrasonics Corp.</td>
			<td style="width:119px;">Branson 2510MTH</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Microtube</td>
			<td>Diamed.ca</td>
			<td style="width:119px;">AD 150-N</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Gold nanoparticle solution</td>
			<td>Ted Pella</td>
			<td style="width:119px;">15705-5</td>
			<td>A particle size is 20nm</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Rocking Platform shaker</td>
			<td style="width:71px;">VWR international</td>
			<td style="width:119px;">40000-304&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Microcentrifuge</td>
			<td style="width:71px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:119px;">5417R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Acryl cuvette</td>
			<td style="width:71px;">SARSREDT</td>
			<td align="right" style="width:119px;">67.758</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">UV-Vis spectrophotometer</td>
			<td style="width:71px;">Agilent</td>
			<td style="width:119px;">Caty 60 UV-Vis</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

protein kinase c-delta inhibitor peptide formulation using gold nanoparticles

מעכבי קינאז C-דלתא חלבון (PKCδi) היא תרופה מבטיח למנוע פגיעה איסכמיה-פגיעה reperfusion-induced איברים. זה הוא בדרך כלל מצומדת כדי חודר לתא פפטיד, TAT, למסירה תאיים. עם זאת, TAT הראו פעילות ביולוגית שאינם ספציפיים. חלקיקי זהב (GNPs) יכול לשמש גם ספקיות שירות משלוח סמים ללא רעילות שזוהה. לכן, השתמשנו היברידית תל ג/פפטיד להעביר PKCδi. 2. קצר פפטידים (P2: CAAAAE ו- P4: CAAAAW), ביחס 95:5, שימשו כדי לשנות את המאפיינים משטח של תל ג. GNPs מצומדת עם PKCδi (תל ג/PKCi) יציבים במים מזוקקים, 0.9% NaCl, באגירה פוספט תמיסת מלח (PBS) המכיל שור אלבומין או סרום שור בעובר. תל ג-PKCi תוך ורידיות הוצגה קודם לכן כדי למנוע פגיעה reperfusion-איסכמיה פציעה של הריאה. מאמר זה מתאר פרוטוקול כדי לגבש תל ג/PKCi ולהעריך את המאפיינים physiochemical של תל ג/PKCi. השתמשנו בשיטות דומות על מנת לגבש תרופות אחרות מבוססות-פפטיד עם תל ג. מאמר זה בתקווה ימשוך יותר תשומת לב הטכנלוגיה משלוח סמים תאיים הרומן ויישומיה ויוו.

צריך לקחת כדי להעריך את המאפיינים ביופיזיקלי של היברידית תל ג/PKCi, כפי תל ג נוטה צבירה של הממס. כאשר תל ג נצבר, הצבע של הפתרון משתנה מוורוד לסגול (איור 1 א'). ספקטרופוטומטרים UV-Vis הוא מסוגל לזהות את השינויים יותר ברגישות. אם תל ג/PKCi לא נצבר הפסגה של קליטה צריך לה?...

Watch this Scientific Journal Video about Protein Kinase C-delta Inhibitor Peptide Formulation using Gold Nanoparticles at JoVE.com

Protein Kinase C-delta Inhibitor Peptide Formulation using Gold Nanoparticles

בעבר השתמשנו היברידית פפטיד nanoparticle זהב להעביר דרך הווריד של פפטיד סינתטי, חלבון קינאז C-דלתא מעכב, אשר מופחת איסכמיה-פגיעה reperfusion-induced ריאות חריפה פציעה. הנה אנחנו מראים את פרוטוקול מפורט של ניסוח סמים. פפטידים תאיים אחרים יכול לנסח באופן דומה.

חלבון קינאז C-דלתא מעכב פפטיד ניסוח באמצעות חלקיקי זהב

Protein kinase C-delta inhibitor (PKC&#948;i) is a promising drug to prevent ischemia-reperfusion-induced organ injury. It is usually conjugated to a ...

מערכת אספקת התרופות הייחודית שלנו, המשתמשת ב-20 חלקיקי זהב ננומטר בשני פפטידים קצרים ספציפיים, יכולה לייצב חלקיקי ננו זהב בת פתרון פיזיולוגי ולשפר את ספיגת התאים שלה, ובכך, לספק ביעילות תרופות מבוססות פפטיד או תרופות אחרות לתאים. ההיברידית פפטיד GNP שלנו קל לסנתז ויציב. באמצעות זהב ננו-חלקיקים פפטיד היברידית כמו נשאי סמים, אנחנו יכולים להעביר תרופות פפטיד לתוך התאים ביעילות בשפע.טיפלנו בפגיעה אצ'מיה-reperfusion בריאות עם GNP שלנו / PKCi היברידית. GNP מביא פפטידים מעכבי PKC לתוך הציטופלסמה. שיטת מסירה זו הצליחה להפחית פגיעה חמורה יותר ריאות באמצעות מינון נמוך יותר של PKCi מאשר שיטות משלוח אחרות.כדי להתחיל בהליך זה, לאחזר את הפפטידים ממקפיא במינוס 20 מעלות צלזיוס, ולהפשיר אותם בטמפרטורת החדר. השתמש בסולם מיקרו כדי לשקול 0.01 גרם של כל פפטיד מופשר, ולהעביר כל פפטיד לתוך צינור חרוט 50 מיליליטר נפרד. הוסף 18.74 מיליליטר של מים deionized לצינור P2, ו 16.93 מיליליטר של מים deionized לצינור P4.הוסף 8.21 מיליליטר של 50% אצטוניטריל מדולל במים deionized לצינור מעכבי הדלתא PKC. וורטקס פתרונות הפפטיד בקצרה. ואז למקם את הצינורות לתוך sonicator ב 40 מגה הרץ במשך חמש דקות.לאחר מכן, להעביר את הפתרונות לארון biosafety. זה קריטי לשים את הצינור חרוט 50 מ"ל ב sonicator במשך חמש דקות. אם המערכת תדלג על שלב זה, ה- GNP/PKCi יתגבשו צבירה.מעבירים מיליליטר אחד של כל פתרון פפטיד לצינור חרוט חדש של 50 מיליליטר. הוסף 19 מיליליטר של מים deionized לצינורות המכילים P2 ו P4. ולהוסיף 19 מיליליטר של 50% אצטוניטריל לצינור המכיל מעכבי דלתא PKC. הוסף 475 מיליליטר של פתרון P2, 25 מיקרוליטרים של פתרון P4, 500 מיקרוליטרים של פתרון מעכבי הדלתא PKC לצינור 15 מיליליטר.לאחר מכן להוסיף תשעה מיליליטר של פתרון GNP 20 ננומטר לאותו צינור. הסר את הפתרון המשולב מן הארון biosafety ולעטוף את הצינור בנייר אלומיניום. מניחים את הצינור על שייקר לילה.למחרת, תחזיר את הדגימות לארון הביו-בטיחות. העבר aliquots מיליליטר אחד של פתרון GNP / PKCi לתוך צינורות מיקרו 1.5 מיליליטר. צנטריפוגה צינורות מיקרו במיקרו צנטריפוגה ב 15294 פעמים g וב ארבע מעלות צלזיוס במשך 30 דקות.מעבירים את צינורות המיקרו בחזרה לארון ה-biosafety, ומסירים את העל-טבעי מכל צינור, תוך הבטחה שכדור ה-GNP לא יופרע. תן מחדש כל גלולה בממס הרצוי על פי הריכוז הנדרש. כדי להעריך את המבודדות ההיברידית GNP/PKCi, יוצקים 0.5 מיליליטר של פתרון GNP/PKCi לקובטה צבירה.מניחים את הקוט על ספקטרופוטומטר UV-Vis ולבדוק את ספיגת השיא. במחקר זה, מעכבי חלבון קינאז C-delta הוא מצומד עם חלקיקי זהב כדי ליצור GNP / PKCi היברידית. יש לדאוג עם הערכת המאפיינים הביופיזיים של היברידית, כמו חלקיקי זהב נוטים לצבור ממס.כאשר הננו-חלקיקים מצטברים, צבע הפתרון ישתנה וריוד לסגול. הדגימות מנותחות עם ספקטרופוטומטר UV-Vis אשר מסוגל לזהות עם רמה גבוהה של רגישות. אם ההיברידי אינו מצטבר, שיא הספיגה צריך להיות ב 525 ננומטר.אם ה-GNP יצטבר, שיא הספיגה יועבר ימינה. כפי שניתן לראות, כאשר נוצרו אגרגטים, הצפיפות האופטית דלתא פוחתת. בעת גיבוש היברידיות פפטיד GNP, חשוב לזכור את היחס בין פפטידים לפתרון GNP צריך להיות אחד עד תשע.נוסחת GNP/PKCi זו יכולה לשמש לפגיעה בעיסכמיה במערכות איברים שאינן הריאה. כל פפטידים יכולים לצרף GNP אם פפטידים אלה יש שאריות ציסטאין ב N-terminus. משמעות הדבר היא GNP פפטיד היברידית ניתן להשתמש כדי להעביר תרופות פפטיד אחרים לתוך התא.פפטידים שתוכננו באופן רציונלי הם טכנולוגיה חדשה שיכולה להביא אינטראקציה ספציפית בין חלבון לחלבון בתוך תאים אלה. טכניקה זו, שפותחה כאן, יכולה לשמש לאספקת תרופות פפטיד חדשות או לגרסאות מותאמות של תרופות קיימות.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Formulation of Diblock Polymeric Nanoparticles through Nanoprecipitation Technique

גיבוש חלקיקים פולימריים Diblock באמצעות טכניקה Nanoprecipitation

Nanotechnology is a relatively new branch of science that involves harnessing the unique properties of particles that are nanometers in scale ...

Synthesis, Assembly, and Characterization of Monolayer Protected Gold Nanoparticle Films for Protein Monolayer Electrochemistry

סינתזה, הרכבה, אפיון monolayer מוגן סרטים Nanoparticle זהב עבור אלקטרוכימיה monolayer חלבון

Colloidal gold nanoparticles protected with alkanethiolate ligands called monolayer protected gold clusters (MPCs) are synthesized and subsequently ...

Analysis of Targeted Viral Protein Nanoparticles Delivered to HER2+ Tumors

ניתוח של חלבון נגיפי ממוקד חלקיקים מובא לHER2 + גידולים

The HER2+ tumor-targeted nanoparticle, HerDox, exhibits tumor-preferential accumulation and tumor-growth ablation in an animal model of HER2+ cancer. ...

Microfabrication of Nanoporous Gold Patterns for Cell-material Interaction Studies

Microfabrication של דפוסי זהב Nanoporous לסלולרי מהותי מחקרי אינטראקציה

Nanostructured materials with feature sizes in tens of nanometers have enhanced the performance of several technologies, including fuel cells, biosensors, ...

Programming Stem Cells for Therapeutic Angiogenesis Using Biodegradable Polymeric Nanoparticles

תאי גזע תכנות טיפולי אנגיוגנזה שימוש אורגניים פולימריים חלקיקים

Controlled vascular growth is critical for successful tissue regeneration and wound healing, as well as for treating ischemic diseases such as stroke, ...

Harmonic Nanoparticles for Regenerative Research

הרמוני חלקיקים למחקר הרגנרציה

In this visualized experiment, protocol details are provided for in vitro labeling of human embryonic stem cells (hESC) with second harmonic generation ...

Correlative Light- and Electron Microscopy Using Quantum Dot Nanoparticles

מיקרוסקופי אלקטרונים בהירי-עור גומל באמצעות חלקיקי נקודה קוונטית

A method is described whereby quantum dot (QD) nanoparticles can be used for correlative immunocytochemical studies of human pathology tissue using ...

Surface Functionalization of Hepatitis E Virus Nanoparticles Using Chemical Conjugation Methods

Functionalization פני השטח של חלקיקי וירוס הפטיטיס E בשיטות כימיות ההטיה

Virus-like particles (VLPs) have been used as nanocarriers to display foreign epitopes and/or deliver small molecules in the detection and treatment of ...

In Vesiculo Synthesis of Peptide Membrane Precursors for Autonomous Vesicle Growth

ב והשרירים סינתזה של ממברנות פפטיד הפרה עבור הצמיחה שלפוחית אוטונומית

Compartmentalization of biochemical reactions is a central aspect of synthetic cells. For this purpose, peptide-based reaction compartments serve as an ...

Production of E. coli-expressed Self-Assembling Protein Nanoparticles for Vaccines Requiring Trimeric Epitope Presentation

Production of E. coli-expressed Self-Assembling Protein Nanoparticles for Vaccines Requiring Trimeric Epitope Presentation

ייצור של E. coli-הביע עצמית הרכבה חלקיקי חלבון עבור חיסונים הדורשים Trimeric אפירופה מצגת

Self-assembling protein nanoparticles (SAPNs) function as repetitive antigen displays and can be used to develop a wide range of vaccines for different ...