Name: protein kinase c-delta inhibitor peptide formulation using gold nanoparticles
Uploaded: 2019-03-09T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Protein Kinase C-delta Inhibitor Peptide Formulation using Gold Nanoparticles at JoVE.com

Эта работа поддерживается научно-исследовательских грантов от канадской институты здравоохранения исследований (PJT-148847), Министерство исследований и инноваций Онтарио (RE-08-029) и Канада первой исследований передового опыта программы, медицина дизайн в университете Торонто. Д-р Лю Mingyao, Джеймс и Мэри Дэви стул в легких повреждений, ремонт и восстановление.

1. Приготовление растворов пептида
<ol><li>Извлечение пептидов (P2: CAAAAE, P4: CAAAAW, PKCδi: CSFNSYELGSL) от-20 ° C морозильника и разморозить при комнатной температуре (RT). Примечание: Держите бутылку закрыты, чтобы предотвратить влаги от конденсации на пептиды.</li>
	<li>Весят 0,01 г каждый пептид на микромасшт...

<ol>
	<li>Yusen, R. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+registry+of+the+International+Society+for+Heart+and+Lung+Transplantation:+thirty-first+adult+lung+and+heart-lung+transplant+report--2014;+focus+theme:+retransplantation.">The registry of the International Society for Heart and Lung Transplantation: thirty-first adult lung and heart-lung transplant report--2014; focus theme: retransplantation.</a> The Journal of Heart and Lung Transplantation. 33 (10), 1009-1024 (2014).</li><li>Lee, J. C., Christie, J. D., Keshavjee, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primary+graft+dysfunction:+definition,+risk+factors,+short-+and+long-term+outcomes.">Primary graft dysfunction: definition, risk factors, short- and long-term outcomes.</a> Seminars in Respiratory and Critical. 31 (2), 161-171 (2010).</li><li>Chatterjee, S., Nieman, G. F., Christie, J. D., Fisher, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Shear+stress-related+mechanosignaling+with+lung+ischemia:+lessons+from+basic+research+can+inform+lung+transplantation.">Shear stress-related mechanosignaling with lung ischemia: lessons from basic research can inform lung transplantation.</a> American Journal of Physiology-Lung Cellular and Molecular Physiology. 307 (9), 668-680 (2014).</li><li>Inagaki, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+delta-protein+kinase+C+protects+against+reperfusion+injury+of+the+ischemic+heart+in+vivo.">Inhibition of delta-protein kinase C protects against reperfusion injury of the ischemic heart in vivo.</a> Circulation. 108 (19), 2304-2307 (2003).</li><li>Lincoff, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+delta-protein+kinase+C+by+delcasertib+as+an+adjunct+to+primary+percutaneous+coronary+intervention+for+acute+anterior+ST-segment+elevation+myocardial+infarction:+results+of+the+PROTECTION+AMI+Randomized+Controlled+Trial.">Inhibition of delta-protein kinase C by delcasertib as an adjunct to primary percutaneous coronary intervention for acute anterior ST-segment elevation myocardial infarction: results of the PROTECTION AMI Randomized Controlled Trial.</a> European Heart Journal. 35 (37), 2516-2523 (2014).</li><li>Kim, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=deltaV1-1+Reduces+Pulmonary+Ischemia+Reperfusion-Induced+Lung+Injury+by+Inhibiting+Necrosis+and+Mitochondrial+Localization+of+PKCdelta+and+p53.">deltaV1-1 Reduces Pulmonary Ischemia Reperfusion-Induced Lung Injury by Inhibiting Necrosis and Mitochondrial Localization of PKCdelta and p53.</a> American Journal of Transplantation. 16 (1), 83-98 (2016).</li><li>Lin, H. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Derangements+of+post-ischemic+cerebral+blood+flow+by+protein+kinase+C+delta.">Derangements of post-ischemic cerebral blood flow by protein kinase C delta.</a> Neuroscience. 171 (2), 566-576 (2010).</li><li>Lin, H. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+kinase+C+delta+modulates+endothelial+nitric+oxide+synthase+after+cardiac+arrest.">Protein kinase C delta modulates endothelial nitric oxide synthase after cardiac arrest.</a> Journal of Cerebral Blood Flow Metabolism. 34 (4), 613-620 (2014).</li><li>Albini, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HIV-tat+protein+is+a+heparin-binding+angiogenic+growth+factor.">HIV-tat protein is a heparin-binding angiogenic growth factor.</a> Oncogene. 12 (2), 289-297 (1996).</li><li>Kim, H., Moodley, S., Liu, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TAT+cell-penetrating+peptide+modulates+inflammatory+response+and+apoptosis+in+human+lung+epithelial+cells.">TAT cell-penetrating peptide modulates inflammatory response and apoptosis in human lung epithelial cells.</a> Drug Delivery and Translational Research. 5 (3), 275-278 (2015).</li><li>Lee, D., Pacheco, S., Liu, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biological+effects+of+Tat+cell-penetrating+peptide:+a+multifunctional+Trojan+horse.">Biological effects of Tat cell-penetrating peptide: a multifunctional Trojan horse.</a> Nanomedicine (Lond). 9 (1), 5-7 (2014).</li><li>Auffan, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Towards+a+definition+of+inorganic+nanoparticles+from+an+environmental,+health+and+safety+perspective.">Towards a definition of inorganic nanoparticles from an environmental, health and safety perspective.</a> Nature Nanotechnology. 4 (10), 634-641 (2009).</li><li>Ghosh, P., Han, G., De, M., Kim, C. K., Rotello, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gold+nanoparticles+in+delivery+applications.">Gold nanoparticles in delivery applications.</a> Advanced Drug Delivery Reviews. 60 (11), 1307-1315 (2008).</li><li>Yang, H., Fung, S. Y., Liu, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Programming+the+cellular+uptake+of+physiologically+stable+peptide-gold+nanoparticle+hybrids+with+single+amino+acids.">Programming the cellular uptake of physiologically stable peptide-gold nanoparticle hybrids with single amino acids.</a> Angewandte Chemie International Edition. 50 (41), 9643-9646 (2011).</li><li>Lee, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effective+delivery+of+a+rationally+designed+intracellular+peptide+drug+with+gold+nanoparticle-peptide+hybrids.">Effective delivery of a rationally designed intracellular peptide drug with gold nanoparticle-peptide hybrids.</a> Nanoscale. 7 (29), 12356-12360 (2015).</li><li>Cheng, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanotechnologies+for+biomolecular+detection+and+medical+diagnostics.">Nanotechnologies for biomolecular detection and medical diagnostics.</a> Current Opinion in Chemical Biology. 10 (1), 11-19 (2006).</li><li>Rosi, N. L., Mirkin, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanostructures+in+biodiagnostics.">Nanostructures in biodiagnostics.</a> Chemical Reviews. 105 (4), 1547-1562 (2005).</li><li>Saha, K., Agasti, S. S., Kim, C., Li, X., Rotello, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gold+nanoparticles+in+chemical+and+biological+sensing.">Gold nanoparticles in chemical and biological sensing.</a> Chemical Reviews. 112 (5), 2739-2779 (2012).</li><li>Boisselier, E., Astruc, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gold+nanoparticles+in+nanomedicine:+preparations,+imaging,+diagnostics,+therapies+and+toxicity.">Gold nanoparticles in nanomedicine: preparations, imaging, diagnostics, therapies and toxicity.</a> Chemical Society Reviews. 38 (6), 1759-1782 (2009).</li><li>Yang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amino+Acid-Dependent+Attenuation+of+Toll-like+Receptor+Signaling+by+Peptide-Gold+Nanoparticle+Hybrids.">Amino Acid-Dependent Attenuation of Toll-like Receptor Signaling by Peptide-Gold Nanoparticle Hybrids.</a> ACS Nano. 9 (7), 6774-6784 (2015).</li><li>Yang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endosomal+pH+modulation+by+peptide-gold+nanoparticle+hybrids+enables+potent+anti-inflammatory+activity+in+phagocytic+immune+cells.">Endosomal pH modulation by peptide-gold nanoparticle hybrids enables potent anti-inflammatory activity in phagocytic immune cells.</a> Biomaterials. 111, 90-102 (2016).</li><li>Yang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amino+Acid+Structure+Determines+the+Immune+Responses+Generated+by+Peptide-Gold+Nanoparticle+Hybrids.">Amino Acid Structure Determines the Immune Responses Generated by Peptide-Gold Nanoparticle Hybrids.</a> Particle &amp; Particle Systems Characterization. 30 (12), 1039-1043 (2013).</li><li>Pamies, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aggregation+behaviour+of+gold+nanoparticles+in+saline+aqueous+media.">Aggregation behaviour of gold nanoparticles in saline aqueous media.</a> Journal of Nanoparticle Research. 16 (4), (2014).</li><li>Perrault, S. D., Walkey, C., Jennings, T., Fischer, H. C., Chan, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mediating+tumor+targeting+efficiency+of+nanoparticles+through+design.">Mediating tumor targeting efficiency of nanoparticles through design.</a> Nano Letters. 9 (5), 1909-1915 (2009).</li><li>Connor, E. E., Mwamuka, J., Gole, A., Murphy, C. J., Wyatt, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gold+nanoparticles+are+taken+up+by+human+cells+but+do+not+cause+acute+cytotoxicity.">Gold nanoparticles are taken up by human cells but do not cause acute cytotoxicity.</a> Small. 1 (3), 325-327 (2005).</li><li>Kim, C. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Entrapment+of+Hydrophobic+Drugs+in+Nanoparticle+Monolayers+with+Efficient+Release+into+Cancer+Cells.">Entrapment of Hydrophobic Drugs in Nanoparticle Monolayers with Efficient Release into Cancer Cells.</a> Journal of the American Chemical Society. 131 (4), 1360 (2009).</li><li>Sonavane, G., Tomoda, K., Makino, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biodistribution+of+colloidal+gold+nanoparticles+after+intravenous+administration:+Effect+of+particle+size.">Biodistribution of colloidal gold nanoparticles after intravenous administration: Effect of particle size.</a> Colloids and Surfaces B-Biointerfaces. 66 (2), 274-280 (2008).</li><li>Balasubramanian, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biodistribution+of+gold+nanoparticles+and+gene+expression+changes+in+the+liver+and+spleen+after+intravenous+administration+in+rats.">Biodistribution of gold nanoparticles and gene expression changes in the liver and spleen after intravenous administration in rats.</a> Biomaterials. 31 (8), 2034-2042 (2010).</li><li>Lipka, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biodistribution+of+PEG-modified+gold+nanoparticles+following+intratracheal+instillation+and+intravenous+injection.">Biodistribution of PEG-modified gold nanoparticles following intratracheal instillation and intravenous injection.</a> Biomaterials. 31 (25), 6574-6581 (2010).</li></ol>

Для обеспечения надлежащей разработки, важно, что δPKCi раствор подвергается sonication шаг, изложенные в 1.6. ΔPKCi пептид последовательность содержит гидрофобные постановление, так что sonicator помогает в растворении PKCi в ацетонитриле 50% растворе. Кроме того очень важно тщательно, как указано в ша?...

Трансплантации легких сохраняет больных с терминальной стадии легких заболеваний1. Однако серьезные осложнения после трансплантации легких остаются препятствием. На ранних этапах после трансплантации легких, первичный трансплантата дисфункция является наиболее вредных осложнение1, и ее основной причиной является ишемии реперфузии (ИК)-индуцированной ОПЛ травмы2.
При холодной сохранения метаболизм в донорских легких ограничен до очень низкого уровня. Однако из-за прекращения потока крови3активизируются реактивнооксигенных видов и синтеза оксида азота. После пересадки восстанавливается кровообращение, и активных форм кислорода и окиси азота, созданные во время холодной ишемии повышение воспаления и клеток смерти, травме ткани.
Чтобы предотвратить травмы ИК, ингибитор Cδ киназы протеина (PKCδi) был использован в сердце, мозг и легких4,5,6,7,8. Эти исследования показали, что PKCδi снижение воспаления и апоптоза при реперфузии. Это также мешало легочной ИК травмы в крыс и в пересадке легких модель6. PKCδi обычно проспряганное с клетки проникая пептид, ТАТ, внутриклеточный доставки. Однако было показано, что ТАТ пептид только имеет неспецифической биологические эффекты, включая содействие ангиогенезе, апоптозе и ингибирование несколько цитокинов9,10,11. Наночастицы, мелкие частицы, от 1 до 100 Нм в диаметре12, были изучены как кандидатов в содействии наркотиков доставки13. В частности наночастиц золота (ВНП) рассматриваются как неинвазивной и нетоксичен. Таким образом мы разработали ВНП как носители доставки наркотиков на основе пептидные препараты14,15.
На поверхности ВНП можно манипулировать для конкретных приложений, таких как Молекулярное распознавание16,17, химические зондирования18, изображений19и доставки лекарств. Была разработана ВНП/пептид гибридной системы, содержащие 20 Нм ВНП и два коротких пептидов (P2: CAAAAE и P4: CAAAAW) в соотношении 95:5, чтобы изменить свойства поверхности ВНП. P2 пептид с отрицательно заряженных глутаминовая кислота (Е) в конце, стабилизирует ВНП в водном растворе, и P4 пептид с гидрофобным триптофан (W) в конце, помогает ВНП вход в клетки14. Остатков цистеина (C) на конечной остановке N этих пептидов содержит тиоловых группу, которая может конъюгат на золотых поверхностях14. Далее этот пептид/ВНП гибрид использовался для доставки PKCδi (CSFNSYELGSL). Оптимизированный молярное соотношение P2:P4 к PKCδi-47.5:2.5:50. ВНП, конъюгированных с PKCδi (ВНП/PKCi), стабильная в дистиллированной воде, 0,9% NaCl и PBS, содержащие альбумина bovine или плода бычьим сывороточным14. Внутривенные инъекции ВНП/PKCi было показано для предотвращения ишемии реперфузии травмы легких15. Эта статья описывает метод для разработки ВНП/PKCi и описывает способы оценки физико-химических свойств ВНП/PKCi. Мы использовали аналогичные методы формулировать другие препараты на основе пептида, конъюгированных ВНП20,,2122. Мы надеемся, что эта статья будет привлечь больше внимания к этот роман формулировка для доставки внутриклеточных лекарств.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:603px;" width="603">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="126">
			<td height="126" style="height:126px;width:216px;">negatively charged glutamic acid peptide (P2)</td>
			<td style="width:189px;">CanPeptide</td>
			<td></td>
			<td style="width:197px;">Sequence: CAAAAE-NH2 
			Length: 6aa 
			Modification: C-terminal amidation 
			Quantity: 50mg 
			Purity: &#62;95%</td>
		</tr>
		<tr height="126">
			<td height="126" style="height:126px;width:216px;">hydrophobic tryptophan peptide (P4)</td>
			<td>CanPeptide</td>
			<td></td>
			<td style="width:197px;">Sequence: CAAAAW-NH2 
			Length: 6aa 
			Modification: C-terminal amidation 
			Quantity: 50mg 
			Purity: &#62;95%</td>
		</tr>
		<tr height="147">
			<td height="147" style="height:147px;width:216px;">&#948;PKCi peptide</td>
			<td>CanPeptide</td>
			<td></td>
			<td style="width:197px;">Seqeuence: CSFNSYELGSL-NH2 
			Length: 11aa 
			Modification: C-terminal amidation 
			Quantity: 50mg 
			Purity: &#62;95%</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Conical tube(50ml)</td>
			<td>Corning Life Sciences</td>
			<td align="right" style="width:119px;">3582070</td>
			<td style="width:197px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Conical tube(15ml)</td>
			<td>Corning Life Sciences</td>
			<td align="right" style="width:119px;">3582096</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Acetonitrile</td>
			<td style="width:71px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">271004-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Sonicator</td>
			<td style="width:71px;">Branson Ultrasonics Corp.</td>
			<td style="width:119px;">Branson 2510MTH</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Microtube</td>
			<td>Diamed.ca</td>
			<td style="width:119px;">AD 150-N</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Gold nanoparticle solution</td>
			<td>Ted Pella</td>
			<td style="width:119px;">15705-5</td>
			<td>A particle size is 20nm</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Rocking Platform shaker</td>
			<td style="width:71px;">VWR international</td>
			<td style="width:119px;">40000-304&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Microcentrifuge</td>
			<td style="width:71px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:119px;">5417R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Acryl cuvette</td>
			<td style="width:71px;">SARSREDT</td>
			<td align="right" style="width:119px;">67.758</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">UV-Vis spectrophotometer</td>
			<td style="width:71px;">Agilent</td>
			<td style="width:119px;">Caty 60 UV-Vis</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

protein kinase c-delta inhibitor peptide formulation using gold nanoparticles

Белка ингибитора киназы C-Дельта (PKCδi) является перспективным наркотиков для предотвращения ишемии реперфузии индуцированной орган травмы. Это обычно спрягаются для ячейки проникая пептид, ТАТ, внутриклеточный доставки. Однако ТАТ показал неспецифической биологической деятельности. Наночастиц золота (ВНП) может использоваться в качестве перевозчиков наркотиков доставки без признанного токсичности. Таким образом мы использовали ВНП/пептид гибрид для доставки PKCδi. Два коротких пептидов (P2: CAAAAE и P4: CAAAAW), в соотношении 95:5, были использованы для изменения свойств поверхности ВНП. ВНП, конъюгированных с PKCδi (ВНП/PKCi) являются стабильными в дистиллированной воде, 0,9% NaCl и фосфат амортизированное saline (PBS), содержащие бычьим сывороточным альбумином или плода бычьим сывороточным. Внутривенные инъекции ВНП-PKCi был ранее виден для предотвращения ишемии реперфузии повреждения легких. Эта статья конспектирует протокол сформулировать ВНП/PKCi и оценить свойства физико ВНП/PKCi. Мы использовали аналогичные методы для разработки других препаратов на основе пептида с ВНП. Эта статья будет мы надеемся привлечь больше внимания к этой технологии доставки Роман внутриклеточных наркотиков и ее применения в естественных условиях.

Следует для оценки биофизических свойств ВНП/PKCi гибрид, как ВНП, как правило, чтобы совокупные в растворителе. При агрегировании ВНП, цвет раствора меняется от розового до пурпурного (рис. 1a). Спектрофотометр UV-Vis способен обнаружить изменения более чутк...

Watch this Scientific Journal Video about Protein Kinase C-delta Inhibitor Peptide Formulation using Gold Nanoparticles at JoVE.com

Protein Kinase C-delta Inhibitor Peptide Formulation using Gold Nanoparticles

Ранее мы использовали гибридом пептид золотых наночастиц внутривенно доставить синтетический пептид, белка ингибитора киназы C-Дельта, который сокращен индуцированной ишемии реперфузии острого повреждения легких. Здесь мы покажем подробный протокол разработки препарата. Другие внутриклеточные пептиды могут быть сформулированы аналогичным образом.

Протеин киназы C-Дельта ингибитор пептид формулировка с использованием наночастиц золота

Protein kinase C-delta inhibitor (PKC&#948;i) is a promising drug to prevent ischemia-reperfusion-induced organ injury. It is usually conjugated to a ...

Наша уникальная система доставки лекарств, которая использует 20 нанометровых частиц золота в двух конкретных коротких пептидах, может стабилизировать частицы золота в физиологическом растворе и повысить его клеточное поглощение, и, таким образом, эффективно доставить пептидные или другие препараты в клетки. Наш пептидный гибрид ВНП легко синтезируется и стабилен. Используя гибрид пептида наночастиц золота в качестве носителей наркотиков, мы можем передавать пептидные препараты в клетки эффективно и в изобилии.Мы лечили ишемию-реперфузии травмы в легких с нашей GNP / PKCi гибрид. ВНП приносит пептиды ингибитора PKC в цитоплазму. Этот метод доставки был в состоянии уменьшить более тяжелые травмы легких, используя более низкую дозировку PKCi, чем другие методы доставки.Чтобы начать эту процедуру, получить пептиды из морозильной камеры при температуре минус 20 градусов по Цельсию, и разморозить их при комнатной температуре. Используйте микро-шкалу, чтобы весить 0,01 грамма каждого оттаявого пептида, и передать каждый пептид в отдельную 50 миллилитровую коническую трубку. Добавьте 18,74 миллилитров деионизированной воды в трубку P2 и 16,93 миллилитров деионизированной воды в трубку P4.Добавьте 8,21 миллилитров 50%ацетонитрила, разбавленного деионизированной водой, в трубку ингибитора дельты PKC. Вихрь пептидных растворов кратко. Затем поместите трубки в звуковой на 40 мегагерц в течение пяти минут.После этого перенесите растворы в кабинет биобезопасности. Очень важно поместить коническую трубку 50 мл в звуковой в течение пяти минут. Если этот шаг будет пропущен, GNP/PKCi сформирует агрегации.Перенесите один миллилитр каждого пептидного раствора в свою новую 50-миллилитровую коническую трубку. Добавьте 19 миллилитров деионизированной воды в трубки, содержащие P2 и P4. И добавьте 19 миллилитров 50%ацетонитрила в трубку, содержащую ингибитор дельты PKC. Добавьте 475 миллилитров раствора P2, 25 микролитров раствора P4, 500 микролитров раствора ингибитора дельты PKC в 15 миллилитровую трубку.Затем добавьте девять миллилитров 20 нанометрового раствора ВНП в ту же трубку. Удалите комбинированный раствор из шкафа биобезопасности и заверните трубку в алюминиевую фольгу. Поместите трубку на шейкер на ночь.На следующий день верните образцы в кабинет биобезопасности. Перенесите одну миллилитровую алицита раствора GNP/PKCi в микротрубки диаметром 1,5 миллилитра. Центрифуга микротрубок в микро центрифуге в 15294 раза г и при четырех градусах Цельсия в течение 30 минут.Перенесите микротрубки обратно в шкаф биобезопасности и удалите супернатант из каждой трубки, гарантируя при этом, что гранулы ВНП не нарушаются. Переусейте каждую гранулу в нужном растворители в соответствии с требуемой концентрацией. Для оценки гибридной растворимости GNP/PKCi, залить 0,5 миллилитров решения GNP/PKCi в накопительный кювет.Поместите кювет на спектрофотометр UV-Vis и проверьте пик поглощения. В этом исследовании ингибитор протеиновой киназы C-дельта спрягается с золотыми наночастицами для формирования гибрида GNP/PKCi. Необходимо позаботиться об оценке биофизических свойств гибрида, так как золотые наночастицы, как правило, агрегируются в растворителя.Когда наночастицы агрегируются, цвет раствора изменится с розового на фиолетовый. Образцы анализируются с помощью спектрофотометра UV-Vis, который способен обнаруживать с высокой степенью чувствительности. Если гибрид не агрегируется, пик поглощения должен быть на уровне 525 нанометров.Если ВНП будет агрегирован, пик поглощения будет перенесен вправо. Как видно, когда образуются агрегаты, плотность дельты оптической уменьшается. При разработке гибридов пептидов ВНП важно помнить, что соотношение пептидов и раствора ВНП должно быть от одного до девяти.Эта формула GNP/PKCi может быть использована для травмы ишемии-реперфузии в системах органов, кроме легких. Любые пептиды могут прикрепляться к ВНП, если эти пептиды имеют остатки цистеина в N-термине. Это означает, что пептидный гибрид ВНП может быть использован для транспортировки других пептидных препаратов в клетку.Рационально разработанные пептиды являются новой технологией, которая может привнося в эти клетки специфическое белково-белковое взаимодействие. Этот метод, разработанный здесь, может быть использован для доставки новых пептидных препаратов или для модифицированных версий существующих препаратов.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Formulation of Diblock Polymeric Nanoparticles through Nanoprecipitation Technique

Формулировка диблок Полимерные наночастицы через Nanoprecipitation Техника

Nanotechnology is a relatively new branch of science that involves harnessing the unique properties of particles that are nanometers in scale ...

Synthesis, Assembly, and Characterization of Monolayer Protected Gold Nanoparticle Films for Protein Monolayer Electrochemistry

Синтез, монтаж, и характеристика монослоя охраняемые пленок золота наночастицы для Белки электрохимии монослоя

Colloidal gold nanoparticles protected with alkanethiolate ligands called monolayer protected gold clusters (MPCs) are synthesized and subsequently ...

Analysis of Targeted Viral Protein Nanoparticles Delivered to HER2+ Tumors

Анализ целевой вирусного белка Наночастицы доставляется в HER2 + опухолей

The HER2+ tumor-targeted nanoparticle, HerDox, exhibits tumor-preferential accumulation and tumor-growth ablation in an animal model of HER2+ cancer. ...

Microfabrication of Nanoporous Gold Patterns for Cell-material Interaction Studies

Микротехнологий нанопористого Шаблоны золото для сотового материала исследования взаимодействия

Nanostructured materials with feature sizes in tens of nanometers have enhanced the performance of several technologies, including fuel cells, biosensors, ...

Programming Stem Cells for Therapeutic Angiogenesis Using Biodegradable Polymeric Nanoparticles

Стволовые Программирование Клетки для терапевтической ангиогенеза Использование биоразлагаемых полимерных наночастиц

Controlled vascular growth is critical for successful tissue regeneration and wound healing, as well as for treating ischemic diseases such as stroke, ...

Harmonic Nanoparticles for Regenerative Research

Гармоник Наночастицы регенеративной исследований

In this visualized experiment, protocol details are provided for in vitro labeling of human embryonic stem cells (hESC) with second harmonic generation ...

Correlative Light- and Electron Microscopy Using Quantum Dot Nanoparticles

Коррелятивное свето- и электронной микроскопии с помощью Quantum Dot Наночастицы

A method is described whereby quantum dot (QD) nanoparticles can be used for correlative immunocytochemical studies of human pathology tissue using ...

Surface Functionalization of Hepatitis E Virus Nanoparticles Using Chemical Conjugation Methods

Поверхности функционализации наночастиц вирус гепатита Е, используя методы химической спряжение

Virus-like particles (VLPs) have been used as nanocarriers to display foreign epitopes and/or deliver small molecules in the detection and treatment of ...

In Vesiculo Synthesis of Peptide Membrane Precursors for Autonomous Vesicle Growth

В Vesiculo Синтез прекурсоров пептидной Мембраны для автономного роста Весикл

Compartmentalization of biochemical reactions is a central aspect of synthetic cells. For this purpose, peptide-based reaction compartments serve as an ...

Production of E. coli-expressed Self-Assembling Protein Nanoparticles for Vaccines Requiring Trimeric Epitope Presentation

Production of E. coli-expressed Self-Assembling Protein Nanoparticles for Vaccines Requiring Trimeric Epitope Presentation

Производство E.coli-выраженные самосборки белковых наночастиц для вакцин, требующих тримерной эпитопной презентации

Self-assembling protein nanoparticles (SAPNs) function as repetitive antigen displays and can be used to develop a wide range of vaccines for different ...