Name: creation of colonic anastomosis in mice
Uploaded: 2019-01-17T14:00:00
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以下议定书已获得俄克拉荷马大学健康科学中心机构动物护理和使用委员会 (iacuc) 的批准, 并遵守所有关于使用研究动物的机构伦理准则。此外, 所有实验都是根据关于实验动物研究的机构、州和联邦条例进行的。
注: 在这个协议中, 我们使用了女性和男性的康生在繁殖 c57bl6 在12至72周大的小鼠。所有用于这一程序的小鼠在手术前至少一周都被关押在我们的非屏障设施中, 以适?...

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	<li>Murrell, Z. A., Stamos, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reoperation+for+anastomotic+failure.">Reoperation for anastomotic failure.</a> Clinics in colon and rectal surgery. 19, 213-216 (2006).</li><li>Shaban, F., Carney, K., McGarry, K., Holtham, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perforated+Diverticulitis:+To+Anastomose+or+Not+to+Anastomose?+A+Systematic+Review+and+Meta-Analysis.">Perforated Diverticulitis: To Anastomose or Not to Anastomose? A Systematic Review and Meta-Analysis.</a> International journal of surgery (London, England). , (2018).</li><li>Chambers, W. M., Mortensen, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Postoperative+leakage+and+abscess+formation+after+colorectal+surgery.">Postoperative leakage and abscess formation after colorectal surgery.</a> Best practice, research. Clinical gastroenterology. 18, 865-880 (2004).</li><li>Ashkanani, F., Krukowski, Z. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surgery+-+Oxford+International+Edition.">Surgery - Oxford International Edition.</a> Intestinal Anastomosis. 20, 104-107 (2002).</li><li>Raptis, D., Pramateftakis, M. G., Kanellos, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Our+20-year+experience+with+experimental+colonic+anastomotic+healing.">Our 20-year experience with experimental colonic anastomotic healing.</a> Journal of medicine and life. 11, 5-14 (2018).</li><li>Pommergaard, H. C., Rosenberg, J., Schumacher-Petersen, C., Achiam, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Choosing+the+best+animal+species+to+mimic+clinical+colon+anastomotic+leakage+in+humans:+a+qualitative+systematic+review.">Choosing the best animal species to mimic clinical colon anastomotic leakage in humans: a qualitative systematic review.</a> European surgical research. Europaische chirurgische Forschung. Recherches chirurgicales europeennes. 47, 173-181 (2011).</li><li>Komen, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colorectal+anastomotic+leakage:+a+new+experimental+model.">Colorectal anastomotic leakage: a new experimental model.</a> The Journal of surgical research. 155, 7-12 (2009).</li><li>Perry, T., Borowiec, A., Dicken, B., Fedorak, R., Madsen, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+ileocolic+bowel+resection+with+primary+anastomosis.">Murine ileocolic bowel resection with primary anastomosis.</a> Journal of visualized experiments : JoVE. , e52106 (2014).</li><li>Pommergaard, H. C., Achiam, M. P., Rosenberg, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colon+anastomotic+leakage:+improving+the+mouse+model.">Colon anastomotic leakage: improving the mouse model.</a> Surgery today. 44, 933-939 (2014).</li><li>Bosmans, J. W. A. M., Jongen, A. C. H. M., Bouvy, N. D., Derikx, J. P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colorectal+anastomotic+healing:+why+the+biological+processes+that+lead+to+anastomotic+leakage+should+be+revealed+prior+to+conducting+intervention+studies.">Colorectal anastomotic healing: why the biological processes that lead to anastomotic leakage should be revealed prior to conducting intervention studies.</a> BMC Gastroenterology. 15, 180 (2015).</li></ol>

有几个关键的步骤, 以确保成功, 并最大限度地减少与此程序相关的疾病死亡率。首先, 确保仔细处理肠道组织, 并注意防止牵引损伤时旋转内脏, 以暴露结肠。肠道或肠系膜上的不适当张力会损害肠道或血管, 并导致肠坏死远离吻合部位。此外, 不应使用锋利的钳子或带牙齿的钳子来处理肠道。
与计划吻合部位分开的肠道损伤, 无论是在内脏旋转过程中, 还是通过钝探针穿孔, 都...

一个非常可怕的并发症的手术吻合的肠道是吻合破裂或泄漏。吻合口泄漏, 导致腔内物质溢出到腹腔, 有生命危险, 可迅速导致腹腔内败血症;小肠吻合术后的休克率从0.3% 到5.5% 不等, 结肠吻合术的休克率上升到0.5% 至26% 之间。由于败血症迅速发作, 腹部内污染3后迅速上升至死亡, 泄漏后的死亡率可能高达 39%.预防策略和治疗方式目前是建立在病理生理学的基础上的, 而病理生理学并没有得到充分的了解。
目前, 吻合口愈合往往被比作更广泛研究的皮肤伤口愈合, 这被证明是一个相对较差的传真。愈合发生在一系列重叠阶段, 从初始滞后阶段开始。在肠道吻合术产生后的0-4 天, 滞后期的定义是急性炎症反应, 清除细胞碎片的伤口。接下来, 在3-4天的时间里, 成纤维细胞的增殖和胶原蛋白的产生是成纤维相的典型。最后, 在第10天之后, 长时间的胶原蛋白重塑被称为成熟阶段。重要的是要注意, 吻合口的强度是相当低的, 取决于手术放置的订书针或缝合线的外在支持, 直到胶原蛋白沉积4。了解肠壁每一层在吻合伤口愈合和参与炎症介导的细胞类型 (如巨噬细胞) 中的作用和时间, 以及阐明替代标记以预测吻合失败或成功的情况。大幅降低结肠手术后的发病率、死亡率和医疗费用5。
在以前的研究中, 小鼠模型被证明是模拟人类吻合术的有用方法。虽然有流行的、经过验证的和经过充分研究的小鼠结肠吻合模型的例子, 特别是科明等人描述的方法.7、这些模型有利于回肠或上升的结肠吻合术技术 8。以前对人类患者的研究表明, 回肠、结肠结肠和结直肠吻合的泄漏率存在显著差异, 这突出表明需要在不同的解剖位置建立更多的实验模型。另外, 常用的方法旨在开发一个模型, 故意造成吻合口泄漏, 而不是阐明正常吻合伤口愈合所需的细胞机制9。老鼠模型曾尝试过, 但吻合口裂开的比率和/或泄漏的迹象 (即脓肿形成) 明显低于人类和小鼠6,7。此外, 小鼠的转基因实验线比老鼠多。这使得大鼠模型对吻合模型不太有用。此外, 猪和犬模型的临床调查也比6、7 型少。
我们提出了一个安全的, 技术上简单, 容易和快速可重复的程序, 以创建结肠吻合在一个小鼠模型, 这将有助于进一步调查未报告的机制吻合伤口愈合10.

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	<tbody>
		<tr>
			<td>C57BL6/J mice</td>
			<td>Jackson Labs</td>
			<td>#00664&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand Absorbent Underpads, 20&#34; x 24&#34;</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-206-62</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polylined Sterile Field, 18&#34; x 24&#34;</td>
			<td>Busse Hospital Disposables</td>
			<td>696</td>
			<td>Cut a rectangular hole&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isothesia isoflurane</td>
			<td>Henry Schein&#160;</td>
			<td>50033</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand Sterile cotton gauze pad, 4&#34; x 4&#34;</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22-415-469</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Puralube petrolatum ophthalmic ointment, 1/8 oz. tube</td>
			<td>Dechra Veterinary Products</td>
			<td>NDC 17033-211-38</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nair depilatory cream</td>
			<td>Church &#38; Dwight Co.</td>
			<td>22339-05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenex buprenorphine&#160; 0.3 mg/ml</td>
			<td>Reckitt Benckiser Pharma Inc</td>
			<td>NDC 12496-0757-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 cc insulin syringe, 27&#160;G</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>329412</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloraprep Shampoo</td>
			<td>Medline</td>
			<td>APL82287</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Webcol alcohol prep swabs</td>
			<td>Covidien</td>
			<td>6818</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BioGel PI surgical gloves</td>
			<td>M&#246;lnlycke Health Care</td>
			<td>ALA42675Z</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Forceps with teeth</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-5150</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine scissors- sharp</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14060-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Straight serrated forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11050-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Castro-Viejo needle driver</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>12565-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.9% Sodium Chloride Irrigation</td>
			<td>Baxter</td>
			<td>BHL2F7121</td>
			<td>Warm to 37 &#176;C prior to use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 ml syringe</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>309604</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-0 Vicryl absorbable braided suture, 18&#34;, PS-2 needle</td>
			<td>Henry Schein&#160;</td>
			<td>6546037</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blue monofilament suture 24&#8221; BV-1 needle</td>
			<td>Henry Schein&#160;</td>
			<td>8305H</td>
			<td>Usually comes double-armed. Cut the suture at the midway point to generate two usable sutures.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cole-Parmer Microscissors, Standard Grade, Straight, 4&#34;.</td>
			<td>Cole- Parmer</td>
			<td>EW-10818-06</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medline Sterile lubricating jelly</td>
			<td>Medline</td>
			<td>MDS032273H</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

creation of colonic anastomosis in mice

肠道吻合术通常在选择性和急诊手术中进行。即使如此, 吻合口泄漏是结肠手术中非常可怕的并发症, 可发生在多达26% 的手术吻合口, 此类口漏患者的死亡率高达39%。目前, 仍然缺乏详细说明吻合血管愈合细胞机制的数据。通过更好地了解适当的吻合口愈合, 可以大大加强吻合口泄漏的预防策略和治疗方式。
小鼠模型是理想的, 因为此前的研究表明, 与其他动物模型相比, 小鼠吻合术在临床上与人类的情况最相似。我们提供了一个易于重现的小鼠结肠吻合术模型, 这将允许进一步说明吻合口愈合。

手术后 7天, 吻合口应得到很好的愈合。吻合术可以在七天之前和之后的时间点收获, 以更好地说明吻合愈合的各个阶段。在图 9中, 组织学分析显示了由平滑肌α-肌动蛋白阳性肌成纤维细胞介导的纤维化 (三色体染色显示的胶原蛋白) 反应。然而, 我们发现, 从组织学分析的结果在小鼠之间不同, 特别是在吻合部位的再上皮化程度和肌成纤维细胞的浓度?...

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Creation of Colonic Anastomosis in Mice

手术后吻合口泄漏或破裂是术后发病和死亡的主要原因。我们的手术创建结肠吻合术是一个可靠和可重复的方法, 研究吻合术的愈合机制。

小鼠结肠吻合术的建立

Intestinal anastomoses are commonly performed in both elective and emergent operations. Even so, anastomotic leaks are a highly feared complications of ...

这种方法可以帮助回答有关结肠结肠麻醉的愈合机制的关键问题，并可能提供一个模型，以减少麻醉泄漏率及其潜在的破坏性后果。我们的技术提供了一种相对简单和可重复的方法，用于在具有类似临床泄漏率的动物模型中进行结肠结肠或结肠直肠结解剖学。首先将麻醉小鼠的四肢固定到手术表面，用氯己丁对裸露的腹部进行消毒。接下来，在动物的上放置一个无菌的窗帘，沿着下腹部的中线向西腓做一个皮肤切口。使用钳子抬起腹壁的中线，并注意不要伤害腹部内结构，使中线腹部筋膜的长度扩大。当肠子暴露时，找到肠子和小肠，并旋转左侧内脏，以暴露下降和西格莫德结肠。然后用潮湿、无菌的纱布盖住内脏。用润滑果冻涂上钝探针尖端，并小心地将探针推进到直肠，以帮助识别下降的西格莫德结肠。一旦结肠被识别，部分撤回探针，并使用创伤钳轻轻地抓住比骨盆入口优越的西格莫德结肠。使用锋利的微型剪刀，沿着西格莫德结肠进行切割，垂直于肠道组织，并延伸80至90%的结肠宽度。如果肠内血管在内脏旋转或结肠切除术过程中受伤，则轻轻地对受伤的视线施加压力长达两分钟。要修复西格莫德结肠切除术，请使用 castroviejo 针头驱动器和五到六个简单的中断八 O 不可吸收聚丙烯缝合来修复结肠切除术。在中肠边界进行心肺病，并双边工作到抗血栓边界，有助于确保专利和非狭窄性解剖学。随着修复的进行，在放置初始缝合之前，先推进跨肛门、钝尖解剖探针以跨越修复，以帮助防止修复过窄，并降低肛门严格性。当所有缝合线都放置好时，使用充满温暖无菌盐水的10毫升注射器多次灌溉腹部。在最后的灌溉过程中，腹部充满无菌盐水，并小心翼翼地将润滑的18个量具血管导管推进到直肠中，用5至1立方厘米的空气充气结肠，以识别动脉瘤内的泄漏。然后放置一个额外的缝合线进行修复，并再次充气结肠，以确保没有泄漏。在切除前用血管导管将结肠放气，然后轻轻地将内化内脏返回到其正常解剖位置。使用四个 O 可吸收编织缝合线关闭腹部切口，沿着腹壁的肌肉层运行缝合线，从切口顶部开始，在切口的下层完成。然后使用四O单丝缝合线关闭皮肤，并监测小鼠，直到它完全从麻醉中恢复过来。在适当的实验端点，用氯己丁和70%乙醇对腹部进行消毒，并使用锋利的剪刀重新切合原有的中线切口。使用剪刀切割到肌肉层，并小心地执行左中下内脏旋转，以暴露修复的西格莫德结肠。通过定位用于维修的聚丙烯缝合线尾部，确定维修视线。轻轻地和钝解任何肠到肠粘附远离修复的视线，注意不要破坏动脉瘤。在移除冒号段之前，使用标记笔标出结肠的时肠边框。接下来，用剪刀横穿下降结肠，从对一厘米，到离眼影远一厘米远。术后组织往往极其脆弱，手术回路以及温和细致的组织处理，有助于确保手术性肺病的破坏。使用细剪刀从沿结肠后边框的附着的内肠中尖锐地解剖结肠，以去除西格莫德段。并沿着中肠边界的长度以纵向的方式切割，以创建一个矩形的结肠部分，从先前删除的圆柱形标本。沿着结肠的长度进行纵向切割，在标记的对面。然后修复、imbed，并切割样本组织，以必要的组织学和/或免疫污染。组织学分析，在受伤七天后，揭示了一个纤维愈合反应，由平滑肌肉阿尔法行为素阳性肌纤维细胞调解。在尝试此程序时，重要的是要记住在正常盐水下浸没的鼻烟中毒进行窒息测试，确认鼻烟的性，并确保不存在泄漏。这个程序可以在转基因的，或致病性小鼠与伤口愈合障碍，如糖尿病或免疫抑制小鼠，回答有关因素导致阿托马蒂奇泄漏的其他问题。按照这个程序，免疫组织化学和细胞培养可以从手术后的特定时间点收获的原子组织进行，以提供更好的理解所涉及的细胞，及其在解剖学愈合过程中的作用。不要忘记，使用异氟兰非常危险，在执行此过程时，应始终采取预防措施，例如使用碳过滤和通风罩。

Research

JoVE Journal

Medicine

The C-seal: A Biofragmentable Drain Protecting the Stapled Colorectal Anastomosis from Leakage

C密封：一个Biofragmentable漏漏电保护吻合结直肠吻合

Colorectal anastomotic leakage (AL) is a serious complication in colorectal surgery leading to high morbidity and mortality rates1. The incidence of AL ...

科研

医学

Creation of Reversible Cholestatic Rat Model

可逆的胆汁淤积大鼠模型的建立

Cholestasis is a clinical condition commonly encountered by both surgeons and gastroenterologists. Cholestasis can cause various physiological changes and ...

Adult Mouse Venous Hypertension Model: Common Carotid Artery to External Jugular Vein Anastomosis.

成年小鼠静脉高压型号：颈总动脉，以颈外静脉吻合。

The understanding of the pathophysiology of brain arteriovenous malformations and arteriovenous fistulas has improved thanks to animal models. A rat model ...

Ascending Aortic Constriction in Rats for Creation of Pressure Overload Cardiac Hypertrophy Model

大鼠建立压力超负荷心肌肥厚模型在升主动脉缩窄

Ascending aortic constriction is the most common and successful surgical model for creating pressure overload induced cardiac hypertrophy and heart ...

Carotid Artery Infusions for Pharmacokinetic and Pharmacodynamic Analysis of Taxanes in Mice

颈动脉输液的紫杉烷类化合物在小鼠体内的药代动力学和药效学分析

When proposing the use of a drug, drug combination, or drug delivery into a novel system, one must assess the pharmacokinetics of the drug in the study ...

Murine Ileocolic Bowel Resection with Primary Anastomosis

鼠回结肠肠管切除原发性吻合

Intestinal resections are frequently required for treatment of diseases involving the gastrointestinal tract, with Crohn&#8217;s disease and colon cancer ...

Creation of Abdominal Adhesions in Mice

小鼠腹腔粘连的创建

Abdominal adhesions consist of fibrotic tissue that forms in the peritoneal space in response to an inflammatory insult, typically surgery or ...

Creation of a Rodent Model of Abdominal Aortic Aneurysm by Blocking Adventitial Vasa Vasorum Perfusion

阻断外瓦萨血管灌注对腹主动脉瘤鼠模型的建立

The adventitial vasa vasorum (VV) provides oxygen and nourishment to the aortic wall. Hypoxia in the aortic wall can cause enlarged abdominal aortic ...

Application of End-to-end Anastomosis in Robotic Central Pancreatectomy

端到端吻合技术在机器人中心胰腺中的应用

Central pancreatectomy is carried out for the treatment of benign or low-malignant potential tumors located in the pancreatic neck or proximal part of ...

Vessel-sparing Excision and Primary Anastomosis

血管保留切除术与原发性吻合术

Urethroplasty is considered to be the standard treatment for urethral strictures since it provides excellent long-term success rates. For isolated short ...