Name: creation of colonic anastomosis in mice
Uploaded: 2019-01-17T14:00:00
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El siguiente protocolo ha sido aprobado por la Universidad de Oklahoma Health Ciencias centro institucional cuidado de los animales y el Comité uso (IACUC) y cumple con todas las éticas con respecto al uso de animales de investigación. Además, todos los experimentos fueron realizados con arreglo a las normas institucionales, estatales y federales sobre las investigaciones experimentales en animales.
Nota: Para este protocolo, se utilizaron congenic hembras y machos criados en ratones de C5...

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	<li>Murrell, Z. A., Stamos, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reoperation+for+anastomotic+failure.">Reoperation for anastomotic failure.</a> Clinics in colon and rectal surgery. 19, 213-216 (2006).</li><li>Shaban, F., Carney, K., McGarry, K., Holtham, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perforated+Diverticulitis:+To+Anastomose+or+Not+to+Anastomose?+A+Systematic+Review+and+Meta-Analysis.">Perforated Diverticulitis: To Anastomose or Not to Anastomose? A Systematic Review and Meta-Analysis.</a> International journal of surgery (London, England). , (2018).</li><li>Chambers, W. M., Mortensen, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Postoperative+leakage+and+abscess+formation+after+colorectal+surgery.">Postoperative leakage and abscess formation after colorectal surgery.</a> Best practice, research. Clinical gastroenterology. 18, 865-880 (2004).</li><li>Ashkanani, F., Krukowski, Z. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surgery+-+Oxford+International+Edition.">Surgery - Oxford International Edition.</a> Intestinal Anastomosis. 20, 104-107 (2002).</li><li>Raptis, D., Pramateftakis, M. G., Kanellos, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Our+20-year+experience+with+experimental+colonic+anastomotic+healing.">Our 20-year experience with experimental colonic anastomotic healing.</a> Journal of medicine and life. 11, 5-14 (2018).</li><li>Pommergaard, H. C., Rosenberg, J., Schumacher-Petersen, C., Achiam, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Choosing+the+best+animal+species+to+mimic+clinical+colon+anastomotic+leakage+in+humans:+a+qualitative+systematic+review.">Choosing the best animal species to mimic clinical colon anastomotic leakage in humans: a qualitative systematic review.</a> European surgical research. Europaische chirurgische Forschung. Recherches chirurgicales europeennes. 47, 173-181 (2011).</li><li>Komen, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colorectal+anastomotic+leakage:+a+new+experimental+model.">Colorectal anastomotic leakage: a new experimental model.</a> The Journal of surgical research. 155, 7-12 (2009).</li><li>Perry, T., Borowiec, A., Dicken, B., Fedorak, R., Madsen, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+ileocolic+bowel+resection+with+primary+anastomosis.">Murine ileocolic bowel resection with primary anastomosis.</a> Journal of visualized experiments : JoVE. , e52106 (2014).</li><li>Pommergaard, H. C., Achiam, M. P., Rosenberg, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colon+anastomotic+leakage:+improving+the+mouse+model.">Colon anastomotic leakage: improving the mouse model.</a> Surgery today. 44, 933-939 (2014).</li><li>Bosmans, J. W. A. M., Jongen, A. C. H. M., Bouvy, N. D., Derikx, J. P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colorectal+anastomotic+healing:+why+the+biological+processes+that+lead+to+anastomotic+leakage+should+be+revealed+prior+to+conducting+intervention+studies.">Colorectal anastomotic healing: why the biological processes that lead to anastomotic leakage should be revealed prior to conducting intervention studies.</a> BMC Gastroenterology. 15, 180 (2015).</li></ol>

Hay varios pasos fundamentales para asegurar el éxito de y minimizar la morbilidad/mortalidad asociada a este procedimiento. En primer lugar, garantizar el manejo cuidadoso del tejido intestinal y tener cuidado para evitar lesiones de tracción al girar las vísceras para exponer los dos puntos. Tensión excesiva en el intestino o el mesenterio puede lesiones la necrosis intestinal del intestino o vasculatura y causa del sitio de la anastomosis. Además, afiladas pinzas o fórceps con dientes deben no utilizarse para ma...

Una complicación muy temida de anastomosis quirúrgica del intestino es anastomosis ruptura o fuga. Fuga anastomótica, que causa derramamiento del contenido intraluminal en la cavidad abdominal, es potencialmente mortal y puede rápidamente llevar a sepsis intraabdominal; tasas de descarga varían de 0.3% a 5.5% después de anastomosis del intestino y levantan a entre 0.5% y 26% para la anastomosis colónica1,2. Las tasas de mortalidad después de fugas pueden ser tan altas como 39% debido a la rápida aparición de sepsis y progresión rápida a la muerte tras contaminación intraabdominal3. Estrategias preventivas y modalidades de tratamiento actualmente se basan en Fisiopatología que no se entiende completamente.
Actualmente, cicatrización anastomótica es a menudo comparado con la curación de herida cutánea más ampliamente estudiado, que está demostrando para ser un facsímil relativamente pobre. Se produce la consolidación de una serie de fases superpuestas, a partir de la fase de retraso inicial. Durante los días 0-4 después de la creación de la anastomosis intestinal, la fase lag se define por una respuesta inflamatoria aguda que borra la herida de restos celulares. A continuación, durante días 3-4, proliferación fibroblástica y la producción de colágeno tipifica la fase fibrophasia. Finalmente, después de 10 días, un período prolongado de colágeno que remodela se conoce como la fase de maduración. Es importante que tenga en cuenta que fuerza anastomótica es bastante baja y depende del apoyo extrínseco de quirúrgicamente colocados grapas o la sutura hasta el colágeno es depositado4. Entender el papel y el momento cada capa de la pared del intestino desempeña en la cicatrización anastomótica y la participación en tipos de la célula inflamatoria mediada por los macrófagos, así como marcadores sustitutos desdoblamiento para predecir fracaso anastomótico o éxito podría reducir la morbilidad, mortalidad y gastos sanitarios, siguiendo las indicaciones de las operaciones de colon5.
El modelo murino se ha demostrado en estudios previos para ser útil en mímica anastomosis humana6. Mientras que son populares, probadas y bien estudiado el modelo murino de anastomosis colónico, particularmente el método descrito por Komen et al. 7, estos modelos favorecen ileocecal o ascendente colocolonic técnicas anastomóticas8. Estudios previos de pacientes humanos han demostrado diferencias significativas en las tasas de fuga entre colocolonic, ileocecal y anastomosis colorrectales, resaltando la necesidad de más modelos experimentales en diferentes localizaciones anatómicas. Métodos adicionales, popularmente usados están dirigidos al desarrollo de un modelo que crea intencionalmente una fuga anastomótica en lugar de dilucidar los mecanismos celulares necesarios para la normal cicatrización anastomótica9. Modelos de ratón se han intentado en el pasado pero tienen las tasas de dehiscencia de la anastomosis o signos de fugas (es decir, formación de absceso) significativamente menor que los seres humanos y ratones6,7. Además, las líneas experimentales más genéticamente modificadas están disponibles en ratones de ratas. Esto hace que el modelo de rata menos útiles para un modelo de anastomosis. Además, porcinos y caninos modelos han tenido investigación clínica menos que el modelo murino6,7.
Proponemos un procedimiento seguro, técnicamente sencillo y rápidamente y fácilmente reproducible para la creación de anastomosis colónicas en un modelo murino que debe facilitar la mayor investigación en el mecanismo de herida anastomótica curación10 .

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	<tbody>
		<tr>
			<td>C57BL6/J mice</td>
			<td>Jackson Labs</td>
			<td>#00664&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand Absorbent Underpads, 20&#34; x 24&#34;</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-206-62</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polylined Sterile Field, 18&#34; x 24&#34;</td>
			<td>Busse Hospital Disposables</td>
			<td>696</td>
			<td>Cut a rectangular hole&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isothesia isoflurane</td>
			<td>Henry Schein&#160;</td>
			<td>50033</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand Sterile cotton gauze pad, 4&#34; x 4&#34;</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22-415-469</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Puralube petrolatum ophthalmic ointment, 1/8 oz. tube</td>
			<td>Dechra Veterinary Products</td>
			<td>NDC 17033-211-38</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nair depilatory cream</td>
			<td>Church &#38; Dwight Co.</td>
			<td>22339-05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenex buprenorphine&#160; 0.3 mg/ml</td>
			<td>Reckitt Benckiser Pharma Inc</td>
			<td>NDC 12496-0757-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 cc insulin syringe, 27&#160;G</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>329412</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloraprep Shampoo</td>
			<td>Medline</td>
			<td>APL82287</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Webcol alcohol prep swabs</td>
			<td>Covidien</td>
			<td>6818</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BioGel PI surgical gloves</td>
			<td>M&#246;lnlycke Health Care</td>
			<td>ALA42675Z</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Forceps with teeth</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-5150</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine scissors- sharp</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14060-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Straight serrated forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11050-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Castro-Viejo needle driver</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>12565-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.9% Sodium Chloride Irrigation</td>
			<td>Baxter</td>
			<td>BHL2F7121</td>
			<td>Warm to 37 &#176;C prior to use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 ml syringe</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>309604</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-0 Vicryl absorbable braided suture, 18&#34;, PS-2 needle</td>
			<td>Henry Schein&#160;</td>
			<td>6546037</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blue monofilament suture 24&#8221; BV-1 needle</td>
			<td>Henry Schein&#160;</td>
			<td>8305H</td>
			<td>Usually comes double-armed. Cut the suture at the midway point to generate two usable sutures.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cole-Parmer Microscissors, Standard Grade, Straight, 4&#34;.</td>
			<td>Cole- Parmer</td>
			<td>EW-10818-06</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medline Sterile lubricating jelly</td>
			<td>Medline</td>
			<td>MDS032273H</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

creation of colonic anastomosis in mice

Anastomosis intestinales se realizan comúnmente en las operaciones electivas y emergentes. Aún así, si existen pérdidas anastomóticas son un muy temidas complicaciones de cirugías de colon y pueden ocurrir en hasta un 26% de las anastomosis quirúrgicas, con mortalidad que hasta un 39% para los pacientes con una pérdida de tal. Actualmente, existe una escasez de datos que detalla los mecanismos celulares de cicatrización anastomótica. Diseñar estrategias preventivas y tratamiento modalidades de fuga anastomótica se podría potenciada enormemente por una mejor comprensión de la cicatrización anastomótica apropiado.
Un modelo murino es ideal, ya que estudios anteriores han demostrado que la anastomosis murina es la más clínico similar al caso humano en comparación con otros modelos animales. Ofrecemos un modelo murino fácilmente reproducible de la anastomosis colónica en ratones que permitirá otra ilustración de la cicatrización anastomótica.

A los 7 días después de la cirugía, la anastomosis debe curarse bien. La anastomosis puede ser cosechada en momentos antes y después de siete días para mejor ilustrar las etapas de la cicatrización anastomótica. En la figura 9, el análisis histológico muestra un fibroso (colágeno visualizado por tinción tricrómica) respuesta mediada por la alfa-actina de músculo liso positivos myofibroblasts. Sin embargo, hemos encontrado que los resultados de lo...

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Creation of Colonic Anastomosis in Mice

Fuga anastomótica o avería después de la cirugía es una causa importante de morbimortalidad postoperatoria. La cirugía para crear una anastomosis colónica es un método confiable y reproducible para el estudio de los mecanismos de cicatrización de las anastomosis.

Creación de Anastomosis de colon en ratones

Intestinal anastomoses are commonly performed in both elective and emergent operations. Even so, anastomotic leaks are a highly feared complications of ...

Este método puede ayudar a responder preguntas clave sobre los mecanismos de curación de las análisismosas colocolones, y puede proporcionar un modelo para reducir las tasas de fugas anastomóticas y sus consecuencias potencialmente devastadoras. Nuestra técnica ofrece un método relativamente simple y reproducible para realizar anastomosis colo colonica o colo-rectal en un modelo animal con tasas de fugas clínicas similares a las pacientes humanos. Comience por asegurar las extremidades de un ratón anestesiado a la superficie quirúrgica, y desinfectar el abdomen expuesto con clorhexidina.A continuación, coloque una cortina estéril sobre el animal, y haga una incisión en la piel a lo largo de la línea media de la parte inferior del abdomen hasta el xifoide. Utilice fórceps para levantar la línea media de la pared abdominal, y tenga cuidado de no lesionar las estructuras intraabdominales incise la longitud de la fascia abdominal de línea media. Cuando los intestinos estén expuestos, localice el cecum y el intestino delgado, y gire las vísceras del lado izquierdo medialmente para exponer el colon descendente y sigmoide.A continuación, cubra las vísceras con gasas húmedas y estériles. Recubrir una punta de sonda contundente con jalea lubricante, y avanzar cuidadosamente la sonda en el recto para ayudar a la identificación del colon sigmoide descendente. Una vez que el colon ha sido identificado, retire parcialmente la sonda y use fórceps atraumáticos para agarrar suavemente el colon sigmoide superior a la entrada pélvica.Usando micro tijeras afiladas, haz un corte a lo largo del colon sigmoide, perpendicular al tejido intestinal, y extendiendo 80 a 90% a través de la anchura del colon. Si un vaso sanguíneo mesentérico se lesiona durante el transcurso de la rotación visceral, o la colotomía, aplique suavemente presión a la vista de la lesión durante un máximo de dos minutos. Para reparar la colotomía sigmoidea, utilice un controlador de agujas castroviejo y de cinco a seis puntadas de polipropileno no absorbibles de ocho O interrumpidas para reparar la colostomía.Realizar la anastomosis en la frontera del mesente y trabajar su camino bilateral a la frontera anti-mesentería ayuda a garantizar una anastomosis de patente y no estenosis. A medida que avanza la reparación, avance la sonda de disección de puntas anzonadas y trans-anal para abarcar la reparación antes de que se coloquen las suturas iniciales para ayudar a prevenir una reparación demasiado estrecha y para disminuir las tasas de estenosis anastomótica. Una vez colocadas todas las suturas, utilice una jeringa de 10 mililitros llena de solución salina estéril caliente para regar el abdomen varias veces.Durante el riego final llenar el abdomen con solución salina estéril, y avanzar cuidadosamente un lubricado, 18 gage angiocatéter en el recto para inflar el colon con 5 a un centímetro cúbico de aire, para la identificación de una fuga dentro de la anastomosis. A continuación, coloque una sutura adicional para la reparación, e infle el colon de nuevo para asegurarse de que no haya fugas. Desinflar el colon con el angiocatéter antes de la extracción, y devolver suavemente las vísceras mediales a su posición anatómica normal.Utilice cuatro suturas trenzadas absorbibles O para cerrar la incisión abdominal, con una sutura corriente a lo largo de la capa muscular de la pared abdominal, comenzando en la parte superior de la incisión, y terminando en el aspecto inferior de la incisión. A continuación, utilice una sutura monofilamento de cuatro O para cerrar la piel, y monitoree el ratón hasta que se haya recuperado completamente de la anestesia. En el punto final experimental apropiado, esteriliza el abdomen con clorhexidina y 70%etanol, y usa tijeras afiladas para re-incitar la incisión de línea media original.Utilice las tijeras para cortar en la capa muscular, y realizar cuidadosamente una rotación visceral medial izquierda para exponer el colon sigmoide reparado. Identifique la mira de reparación localizando las colas de la sutura de polipropileno utilizada para la reparación. Diseccionar suave y contundentemente cualquier adherencia intestinal al intestino lejos de la vista de la reparación, teniendo cuidado de no interrumpir la anastomosis.Utilice una pluma de marcado para demarcar el borde antimesentérico del colon, antes de la eliminación del segmento de colon. A continuación, utilice las tijeras para transeccionar transversalmente a través del colon descendente, a un centímetro de la pareja, hasta un centímetro distal de la vista de la anastomosis. Los tejidos postoperatorios tienden a ser extremadamente frágiles y los bucles quirúrgicos, así como el manejo suave y meticuloso del tejido, ayudan a asegurar contra la interrupción de la anastomosis quirúrgica.Utilice tijeras finas para diseccionar bruscamente el colon del mesenterio adjunto a lo largo del borde posterior del colon para eliminar el segmento sigmoideal. Y cortar a lo largo de la longitud del borde mesentérico de una manera longitudinal, para crear una sección rectangular de colon a partir de la muestra cilíndrica previamente eliminada. Y hacer un corte longitudinal a lo largo de la longitud del colon, frente a la marca.A continuación, fije, imle y corte el tejido de la muestra según sea necesario para la histología y o la inmunosumanidad. El análisis histológico, siete días después de la lesión, revela una respuesta curativa fibrosa, mediada por miofibroblastos positivos de alfa muscular liso. Al intentar este procedimiento, es importante recordar realizar una prueba de insuflación con la anastomosis sumergida bajo solución salina normal, para confirmar la patencia de la anastomosis y para asegurarse de que no hay ninguna fuga presente.Este procedimiento se puede realizar en ratones genéticamente modificados o patógenos con trastornos de cicatrización de heridas, como ratones diabéticos o inmunosuprimidos, para responder preguntas adicionales sobre los factores que contribuyen a una fuga anstomótica. Después de este procedimiento, la inmunohistoquímica y el cultivo celular se pueden realizar a partir de tejido anastomótico cosechado en puntos de tiempo específicos después de la cirugía, para proporcionar una mejor comprensión de las células involucradas, y sus funciones en el proceso de curación anastomótica. No olvide que trabajar con isoflurano puede ser extremadamente peligroso, y que las precauciones, como el uso de campanas de filtración de carbono y ventilación, siempre deben tomarse durante la realización de este procedimiento.

Research

JoVE Journal

Medicine

The C-seal: A Biofragmentable Drain Protecting the Stapled Colorectal Anastomosis from Leakage

El C-sello: Un drenaje Biofragmentable protección de la anastomosis colorrectal grapada de fuga

Colorectal anastomotic leakage (AL) is a serious complication in colorectal surgery leading to high morbidity and mortality rates1. The incidence of AL ...

Investigación

Medicina

Creation of Reversible Cholestatic Rat Model

Creación de un modelo reversible Rata colestásica

Cholestasis is a clinical condition commonly encountered by both surgeons and gastroenterologists. Cholestasis can cause various physiological changes and ...

Adult Mouse Venous Hypertension Model: Common Carotid Artery to External Jugular Vein Anastomosis.

Adultos Mouse hipertensión venosa: Modelo: arteria carótida común a la vena yugular externa anastomosis.

The understanding of the pathophysiology of brain arteriovenous malformations and arteriovenous fistulas has improved thanks to animal models. A rat model ...

Ascending Aortic Constriction in Rats for Creation of Pressure Overload Cardiac Hypertrophy Model

Ascendente aórtica Constricción en ratas para la Creación de la sobrecarga de presión hipertrofia cardíaca Modelo

Ascending aortic constriction is the most common and successful surgical model for creating pressure overload induced cardiac hypertrophy and heart ...

Carotid Artery Infusions for Pharmacokinetic and Pharmacodynamic Analysis of Taxanes in Mice

Infusiones de la arteria carótida para farmacocinéticas y farmacodinámicas Análisis de taxanos en ratones

When proposing the use of a drug, drug combination, or drug delivery into a novel system, one must assess the pharmacokinetics of the drug in the study ...

Murine Ileocolic Bowel Resection with Primary Anastomosis

Murino ileocólica Resección intestinal con anastomosis primaria

Intestinal resections are frequently required for treatment of diseases involving the gastrointestinal tract, with Crohn&#8217;s disease and colon cancer ...

Creation of Abdominal Adhesions in Mice

Creación de abdominales adherencias en ratones

Abdominal adhesions consist of fibrotic tissue that forms in the peritoneal space in response to an inflammatory insult, typically surgery or ...

Creation of a Rodent Model of Abdominal Aortic Aneurysm by Blocking Adventitial Vasa Vasorum Perfusion

Creación de un modelo de roedor del Aneurysm aórtico Abdominal bloqueando Adventitial de la Vasa Vasorum de la perfusión

The adventitial vasa vasorum (VV) provides oxygen and nourishment to the aortic wall. Hypoxia in the aortic wall can cause enlarged abdominal aortic ...

Application of End-to-end Anastomosis in Robotic Central Pancreatectomy

Aplicación de End-to-end Anastomosis en robótica Pancreatectomía Central

Central pancreatectomy is carried out for the treatment of benign or low-malignant potential tumors located in the pancreatic neck or proximal part of ...

Vessel-sparing Excision and Primary Anastomosis

La supresión conservadora de vasos y Anastomosis primaria

Urethroplasty is considered to be the standard treatment for urethral strictures since it provides excellent long-term success rates. For isolated short ...