Name: creation of colonic anastomosis in mice
Uploaded: 2019-01-17T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Creation of Colonic Anastomosis in Mice at JoVE.com

Följande protokoll har godkänts av University of Oklahoma Health Sciences Center institutionella djurvård och använda kommittén (IACUC) och uppfyller alla institutionella etiska riktlinjer angående användning av försöksdjur. Dessutom utfördes alla experimenten i enlighet med institutionella, statliga och federala förordningar om experimentella djurförsök.
Obs: För detta protokoll använde vi kvinnliga och manliga congenic i-uppfödda C57BL6/J möss vid 12 till 72 veckors ålder. ...

<ol>
	<li>Murrell, Z. A., Stamos, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reoperation+for+anastomotic+failure.">Reoperation for anastomotic failure.</a> Clinics in colon and rectal surgery. 19, 213-216 (2006).</li><li>Shaban, F., Carney, K., McGarry, K., Holtham, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perforated+Diverticulitis:+To+Anastomose+or+Not+to+Anastomose?+A+Systematic+Review+and+Meta-Analysis.">Perforated Diverticulitis: To Anastomose or Not to Anastomose? A Systematic Review and Meta-Analysis.</a> International journal of surgery (London, England). , (2018).</li><li>Chambers, W. M., Mortensen, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Postoperative+leakage+and+abscess+formation+after+colorectal+surgery.">Postoperative leakage and abscess formation after colorectal surgery.</a> Best practice, research. Clinical gastroenterology. 18, 865-880 (2004).</li><li>Ashkanani, F., Krukowski, Z. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surgery+-+Oxford+International+Edition.">Surgery - Oxford International Edition.</a> Intestinal Anastomosis. 20, 104-107 (2002).</li><li>Raptis, D., Pramateftakis, M. G., Kanellos, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Our+20-year+experience+with+experimental+colonic+anastomotic+healing.">Our 20-year experience with experimental colonic anastomotic healing.</a> Journal of medicine and life. 11, 5-14 (2018).</li><li>Pommergaard, H. C., Rosenberg, J., Schumacher-Petersen, C., Achiam, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Choosing+the+best+animal+species+to+mimic+clinical+colon+anastomotic+leakage+in+humans:+a+qualitative+systematic+review.">Choosing the best animal species to mimic clinical colon anastomotic leakage in humans: a qualitative systematic review.</a> European surgical research. Europaische chirurgische Forschung. Recherches chirurgicales europeennes. 47, 173-181 (2011).</li><li>Komen, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colorectal+anastomotic+leakage:+a+new+experimental+model.">Colorectal anastomotic leakage: a new experimental model.</a> The Journal of surgical research. 155, 7-12 (2009).</li><li>Perry, T., Borowiec, A., Dicken, B., Fedorak, R., Madsen, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+ileocolic+bowel+resection+with+primary+anastomosis.">Murine ileocolic bowel resection with primary anastomosis.</a> Journal of visualized experiments : JoVE. , e52106 (2014).</li><li>Pommergaard, H. C., Achiam, M. P., Rosenberg, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colon+anastomotic+leakage:+improving+the+mouse+model.">Colon anastomotic leakage: improving the mouse model.</a> Surgery today. 44, 933-939 (2014).</li><li>Bosmans, J. W. A. M., Jongen, A. C. H. M., Bouvy, N. D., Derikx, J. P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colorectal+anastomotic+healing:+why+the+biological+processes+that+lead+to+anastomotic+leakage+should+be+revealed+prior+to+conducting+intervention+studies.">Colorectal anastomotic healing: why the biological processes that lead to anastomotic leakage should be revealed prior to conducting intervention studies.</a> BMC Gastroenterology. 15, 180 (2015).</li></ol>

I området i närheten finns det flera viktiga steg för att säkerställa framgång och minimera sjukligheten/dödligheten är associerad med den här proceduren. Först säkerställa noggrann hantering av Tarmvävnaden och ta hand för att förhindra traktion skada när roterande inälvor för att exponera kolon. Onödig spänning på tarm eller tarmkäx kan skada tarmen eller blodkärlen och orsaka tarm nekros från platsen för anastomos. Dessutom bör vass tång eller pincett med tänder inte användas för att hant...

En mycket fruktad komplikation av kirurgiska anastomos i tarmen är anastomotic nedbrytnings- eller läcka. Anastomotic läcka, vilket orsakar spill av intraluminal innehållet i bukhålan, är livshotande och kan snabbt leda till intraabdominella sepsis; chock priser varierar från 0,3% till 5,5% efter tunntarmen anastomoser och stiga till mellan 0,5% och 26% för kolon anastomoser1,2. Dödlighet efter läckor kan vara så hög som 39% på grund av den snabba uppkomsten av sepsis och snabb progression till döden efter intraabdominal kontaminering3. Förebyggande strategier och behandlingsmetoder baseras för närvarande på patofysiologi som inte är helt klarlagt.
För närvarande jämförs anastomotic healing ofta med de mer allmänt studerade kutan sårläkning, som har visat sig vara en relativt dålig faksimil. Läkning sker i en serie överlappande faser, börjar med den första lag fasen. Under dagarna 0-4 efter skapandet av intestinal anastomos definieras fasen lag av en akut inflammatorisk reaktion som rensar såret av cellulära skräp. Nästa, under dagarna 3-4, fibroblastic spridning och produktionen av kollagen kännetecknar den fibrophasia fasen. Slutligen, efter dag 10, en långvarig period av kollagen remodeling kallas den mognad fasen. Det är viktigt att Observera att anastomotic styrka är ganska låg och beror på yttre stöd av kirurgiskt placerad häftklamrar eller sutur tills kollagen är deponerade4. Förstå rollen och timing varje lager av tarmväggen spelar i anastomotic sårläkning och inblandning i inflammatoriska-medierad celltyper som makrofager, samt belysa surrogatmarkörer att förutsäga anastomotic misslyckande eller framgång kunde kraftigt minska sjuklighet, dödlighet och vårdkostnader efter kolon verksamhet5.
Murina modellen har visat i tidigare studier att vara den användbara i härma mänskliga anastomos6. Medan det finns populära, beprövade och väl studerat exempel av murina colonic anastomotic modellen, särskilt den metod som beskrivs av Komen o.a. 7, dessa modeller för ileocecal eller stigande colocolonic anastomotic tekniker8. Tidigare studier av mänskliga patienter har visat signifikant skillnad i läcka priser mellan ileocecal, colocolonic och kolorektal anastomoser, belyser behovet av ytterligare experimentella modeller på varierande anatomiska platser. Ytterligare, populärt används metoder syftar till att utveckla en modell som avsiktligt skapar en anastomotic läcka snarare än belysa de cellulära mekanismer som krävs för normal anastomotic sårläkning9. Rat modeller har varit försökt tidigare men har andelen anastomotic sårruptur och/eller tecken på läckage (dvs abscess formation) betydligt lägre än människor och möss6,7. Dessutom finns mer genetiskt modifierade experimentella linjerna hos möss än råttor. Detta gör råtta modellen mindre användbar för en anastomotic modell. Svin och hund modeller har dessutom haft mindre klinisk utredning än murina modell6,7.
Vi föreslår en säker, tekniskt enkel och snabbt och enkelt reproducerbar förfarande för skapandet av kolon anastomoser i en murin modell som bör underlätta ytterligare utredning av underrapporterat mekanismen av anastomotic såret helande10 .

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>C57BL6/J mice</td>
			<td>Jackson Labs</td>
			<td>#00664&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand Absorbent Underpads, 20&#34; x 24&#34;</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-206-62</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polylined Sterile Field, 18&#34; x 24&#34;</td>
			<td>Busse Hospital Disposables</td>
			<td>696</td>
			<td>Cut a rectangular hole&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isothesia isoflurane</td>
			<td>Henry Schein&#160;</td>
			<td>50033</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand Sterile cotton gauze pad, 4&#34; x 4&#34;</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22-415-469</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Puralube petrolatum ophthalmic ointment, 1/8 oz. tube</td>
			<td>Dechra Veterinary Products</td>
			<td>NDC 17033-211-38</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nair depilatory cream</td>
			<td>Church &#38; Dwight Co.</td>
			<td>22339-05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenex buprenorphine&#160; 0.3 mg/ml</td>
			<td>Reckitt Benckiser Pharma Inc</td>
			<td>NDC 12496-0757-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 cc insulin syringe, 27&#160;G</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>329412</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloraprep Shampoo</td>
			<td>Medline</td>
			<td>APL82287</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Webcol alcohol prep swabs</td>
			<td>Covidien</td>
			<td>6818</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BioGel PI surgical gloves</td>
			<td>M&#246;lnlycke Health Care</td>
			<td>ALA42675Z</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Forceps with teeth</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-5150</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine scissors- sharp</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14060-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Straight serrated forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11050-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Castro-Viejo needle driver</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>12565-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.9% Sodium Chloride Irrigation</td>
			<td>Baxter</td>
			<td>BHL2F7121</td>
			<td>Warm to 37 &#176;C prior to use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 ml syringe</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>309604</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-0 Vicryl absorbable braided suture, 18&#34;, PS-2 needle</td>
			<td>Henry Schein&#160;</td>
			<td>6546037</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blue monofilament suture 24&#8221; BV-1 needle</td>
			<td>Henry Schein&#160;</td>
			<td>8305H</td>
			<td>Usually comes double-armed. Cut the suture at the midway point to generate two usable sutures.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cole-Parmer Microscissors, Standard Grade, Straight, 4&#34;.</td>
			<td>Cole- Parmer</td>
			<td>EW-10818-06</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medline Sterile lubricating jelly</td>
			<td>Medline</td>
			<td>MDS032273H</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

creation of colonic anastomosis in mice

Intestinal anastomoser utförs vanligen i såväl elektiv som framväxande verksamhet. Trots detta anastomotic läckor är en mycket fruktade komplikationer av kolon operationer och kan förekomma hos upp till 26% av kirurgiska anastomoser, med dödligheten vara upp till 39% för patienter med sådan en läcka. För närvarande fortfarande finns det en brist på data som beskriver de cellulära mekanismerna anastomotic helande. Utforma förebyggande strategier och behandlingsmetoder för anastomotic läcka kan kraftigt Genauair och en bättre förståelse av lämpliga anastomotic healing.
En murin modell är perfekt som tidigare studier har visat att murina anastomos är den mest kliniskt liknar mänskliga fallet jämfört med andra djurmodeller. Vi erbjuder en lätt reproducerbar murina modell av kolon anastomos i möss som kommer att möjliggöra ytterligare illustration av anastomotic healing.

På 7 dagar efter operation, bör anastomos vara väl läkt. Anastomos kan skördas vid tidpunkter före och efter sju dagar för att bättre illustrera stadier av anastomotic healing. I figur 9, den histologiska analysen visar en fibrotisk (kollagen visualiseras genom trikrom färgning) svar medieras av glatt muskulatur alpha-aktin positiva myofibroblaster. Vi har dock funnit att resultaten från histologiska analyser varierar mellan möss, särskilt graden ...

Watch this Scientific Journal Video about Creation of Colonic Anastomosis in Mice at JoVE.com

Creation of Colonic Anastomosis in Mice

Anastomotic läcka eller uppdelning efter operationen är en viktig orsak till postoperativ morbiditet och mortalitet. Vår kirurgi för att skapa en colonic anastomos är en pålitlig och reproducerbar metod för att studera den helande mekanismen av anastomoser.

Skapandet av kolon anastomos i möss

Intestinal anastomoses are commonly performed in both elective and emergent operations. Even so, anastomotic leaks are a highly feared complications of ...

Denna metod kan hjälpa till att besvara viktiga frågor om läkningsmekanismer colo-colonic anastomoses, och kan ge en modell för att minska anastomotic läcka priser och deras potentiellt förödande konsekvenser. Vår teknik erbjuder en relativt enkel och reproducerbar metod för att utföra colo-colonic eller colo-rektalkapslar anastomos i en djurmodell med liknande kliniska läcka priser till mänskliga patienter. Börja med att säkra lemmarna hos en sövd mus till den kirurgiska ytan, och desinficera den exponerade buken med klorhexidin.Nästa plats en steril drapera över djuret, och göra ett hud snitt längs mittlinjen i nedre delen av buken till xiphoid. Använd töväder för att lyfta upp mittlinjen av bukväggen, och var noga med att inte skada de intra-abdominala strukturer incise längden på mittlinjen buken fascia. När tarmarna är utsatta, lokalisera cecum och små tarm, och rotera vänster sidig viscera medialt att exponera fallande och sigmoid kolon.Täck sedan inälvorna med fuktig, steril gasväv. Coat en trubbig sond spets med smörjande gelé, och försiktigt föra sonden i ändtarmen för att hjälpa identifiering av fallande sigmoid kolon. När tjocktarmen har identifierats, delvis dra tillbaka sonden, och använda atraumatiska tlysen för att försiktigt greppa sigmoid kolon överlägsen bäckenhålorna inloppet.Använda vassa mikro sax, gör ett snitt längs sigmoid kolon, vinkelrätt mot tarmvävnaden, och sträcker sig 80 till 90%över bredden av kolon. Om ett mesenterialt blodkärl skadas under den viscerala rotationens gång, eller den kolostomi, försiktigt utöva påtryckningar på åsynen av skadan i upp till två minuter. För att reparera sigmoid colotomy, använd en castroviejo nål förare och fem till sex enkla avbrutna åtta O icke-absorberbara polypropylen stygn för att reparera kolostomi.Utför anastomos vid mesenteri gränsen och arbeta dig bilateralt till anti-mesenteri gränsen hjälper till att säkerställa ett patent och icke-stenos anastomos. Under reparationens gång, föra fram transanal, trubbig spets dissektion sond för att spänna över reparationen innan de första suturer placeras för att förhindra alltför smal reparation, och att minska andelen anastomotic striktur. När alla suturer har placerats, använd en 10 milliliter spruta fylld med uppvärmd steril saltlösning för att bevattna buken flera gånger.Under den slutliga bevattning fylla buken med steril koksaltlösning, och försiktigt förväg en smord, 18 gage angiocatheter i ändtarmen för att blåsa upp tjocktarmen med 5 till en kubikcentimeter luft, för identifiering av en läckor inom anastomos. Placera sedan en extra sutur för reparation, och blåsa upp kolon igen för att se till att det inte finns några läckor. Töm tjocktarmen med angiokatetern före avlägsnande, och försiktigt tillbaka den mediaialiserade inälvorna till sin normala anatomiska position.Använd fyra O resorberbara flätade suturer för att stänga bukantalet, med en löpande sutur längs det muskulösa lagret av bukväggen, med början på toppen av snittet, och efterbehandling vid sämre aspekt av snittet. Använd sedan en fyra O monofilament sutur för att stänga huden, och övervaka musen tills den har återhämtat sig helt från anestesi. Vid lämplig experimentell slutpunkt, sterilisera buken med klorhexidin och 70%etanol, och använd vass sax för att åter incise den ursprungliga mittlinjen snitt.Använd saxen för att skära i muskulös lager, och noggrant utföra en vänster mediala visceral rotation för att exponera den reparerade sigmoid kolon. Identifiera reparationssiktet genom att lokalisera svansarna på polypropylensuturen som används för reparationen. Försiktigt och rakt på sak dissekera någon tarm till tarm sammanväxningar bort från åsynen av reparation, var noga med att inte störa anastomos.Använd en markeringspenna för att avgränsa den antimesenteriska gränsen för kolon, före avlägsnande av kolonsegmentet. Därefter använder saxen för att tvärgående tvärgående tvärgående genom den fallande kolon, en centimeter från paret, upp till en centimeter distala från åsynen av anastomos. De postoperativa vävnaderna tenderar att vara extremt ömtåliga och kirurgiska slingor samt varsam och noggrann hantering av vävnad, bidra till att säkerställa mot störningar av den kirurgiska anastomos.Använd fina saxar att skarpt dissekera tjocktarmen från den bifogade mesenteri längs den bakre gränsen av kolon för att ta bort sigmoidal segmentet. Och skär längs längden på den mesenteriala gränsen på ett längsgående sätt, för att skapa en rektangulär del av kolon från det tidigare borttagna cylindriska exemplaret. Och gör en längsgående snitt längs längden på tjocktarmen, mittemot märkningen.Sedan fixa, imbed, och skär provet vävnad som behövs för histologi och eller immunfärgning. Histologisk analys, sju dagar efter skada, avslöjar en fibrotic helande svar, medierad av smooth muscle alpha aktin positiva myofibroblasts. Medan du försöker detta förfarande, det är viktigt att komma ihåg att utföra ett insufflation test med anastomos nedsänkt under normal saltlösning, att bekräfta patency av anastomos, och att säkerställa att ingen läcka är närvarande.Denna procedur kan utföras på genetiskt modifierade, eller patogena möss med sårläkningsstörningar, såsom diabetiker eller immun undertryckta möss, för att svara på ytterligare frågor om de faktorer som bidrar till en anastomotisk läcka. Efter denna procedur kan immunohistokemi och cellodling utföras från anastomotic vävnad skördas vid specifika tidpunkter efter operationen, för att ge en bättre förståelse av de celler som är inblandade, och deras roller i den anastomotiska läkningsprocessen. Glöm inte att det kan vara extremt farligt att arbeta med Isoflurane, och att försiktighetsåtgärder, som att använda kolfiltrering och ventilationshuvar alltid bör vidtas när du utför detta förfarande.

Research

JoVE Journal

Medicine

The C-seal: A Biofragmentable Drain Protecting the Stapled Colorectal Anastomosis from Leakage

C-tätning: En Biofragmentable Tappa Skydda Häftade Kolorektal anastomos från läckage

Colorectal anastomotic leakage (AL) is a serious complication in colorectal surgery leading to high morbidity and mortality rates1. The incidence of AL ...

Creation of Reversible Cholestatic Rat Model

Skapande av Vändbar Kolestatisk Rat Model

Cholestasis is a clinical condition commonly encountered by both surgeons and gastroenterologists. Cholestasis can cause various physiological changes and ...

Adult Mouse Venous Hypertension Model: Common Carotid Artery to External Jugular Vein Anastomosis.

Adult Mouse Venös Hypertoni Modell: gemensamma halspulsådern till extern halsvenen Anastomos.

The understanding of the pathophysiology of brain arteriovenous malformations and arteriovenous fistulas has improved thanks to animal models. A rat model ...

Ascending Aortic Constriction in Rats for Creation of Pressure Overload Cardiac Hypertrophy Model

Stigande Aorta Förträngning i råttor för att skapa övertryck hjärthypertrofi Model

Ascending aortic constriction is the most common and successful surgical model for creating pressure overload induced cardiac hypertrophy and heart ...

Carotid Artery Infusions for Pharmacokinetic and Pharmacodynamic Analysis of Taxanes in Mice

Halspulsådern Tinkturer för farmakokinetiska och farmakodynamiska Analys av taxaner i möss

When proposing the use of a drug, drug combination, or drug delivery into a novel system, one must assess the pharmacokinetics of the drug in the study ...

Murine Ileocolic Bowel Resection with Primary Anastomosis

Murina Ileocolic tarm resektion med primär anastomos

Intestinal resections are frequently required for treatment of diseases involving the gastrointestinal tract, with Crohn&#8217;s disease and colon cancer ...

Creation of Abdominal Adhesions in Mice

Skapande av buken adhesioner hos möss

Abdominal adhesions consist of fibrotic tissue that forms in the peritoneal space in response to an inflammatory insult, typically surgery or ...

Creation of a Rodent Model of Abdominal Aortic Aneurysm by Blocking Adventitial Vasa Vasorum Perfusion

Skapa en gnagare modell av pulsåderbråck i buken genom att blockera Adventitial Vasa Vasorum Perfusion

The adventitial vasa vasorum (VV) provides oxygen and nourishment to the aortic wall. Hypoxia in the aortic wall can cause enlarged abdominal aortic ...

Application of End-to-end Anastomosis in Robotic Central Pancreatectomy

Tillämpningen av End-to-end anastomos i Robotic centrala Pancreatectomy

Central pancreatectomy is carried out for the treatment of benign or low-malignant potential tumors located in the pancreatic neck or proximal part of ...

Vessel-sparing Excision and Primary Anastomosis

Fartyg-sparing Excision och primär anastomos

Urethroplasty is considered to be the standard treatment for urethral strictures since it provides excellent long-term success rates. For isolated short ...