Name: extraction and analysis of taiwanese green propolis
Uploaded: 2019-01-07T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Extraction and Analysis of Taiwanese Green Propolis at JoVE.com

تم تحرير هذه المخطوطة عن طريق "تحرير والاس الأكاديمية".

1-إعداد المركبات الإيثانول المستخرج
<ol><li>تزن 10 غم دنج الأخضر التايوانية المجمدة، التي تم جمعها من خلايا النحل في تايوان من أيار/مايو إلى تموز/يوليه، وطحن باستخدام مطحنة التوابل. تأكد من أن قطعة كاملة من دنج الأخضر التايوانية الأرض إلى مسحوق ناعم دون أي الجزيئات الكبيرة.</li>
	<li>إضافة 100 مل تر...

<ol>
	<li>Zabaiou, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biological+properties+of+propolis+extracts:+Something+new+from+an+ancient+product.">Biological properties of propolis extracts: Something new from an ancient product.</a> Chemistry and Physics of Lipids. 207 (Pt B), 214-222 (2017).</li><li>Bankova, V. B., De Castro, S. L., Marcucci, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Propolis:+Recent+advances+in+chemistry+and+plant+origin.">Propolis: Recent advances in chemistry and plant origin.</a> Apidologie. 31 (1), 3-15 (2000).</li><li>Park, Y. K., Alencar, S. M., Aguiar, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Botanical+origin+and+chemical+composition+of+Brazilian+propolis.">Botanical origin and chemical composition of Brazilian propolis.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 50 (9), 2502-2506 (2002).</li><li>Chen, C. N., Wu, C. L., Shy, H. S., Lin, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytotoxic+prenylflavanones+from+Taiwanese+propolis.">Cytotoxic prenylflavanones from Taiwanese propolis.</a> Journal of Natural Products. 66 (4), 503-506 (2003).</li><li>Chen, C. N., Weng, M. S., Wu, C. L., Lin, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+radical+scavenging+activity,+cytotoxic+effects+and+apoptosis+induction+in+human+melanoma+cells+by+Taiwanese+propolis+from+different+sources.">Comparison of radical scavenging activity, cytotoxic effects and apoptosis induction in human melanoma cells by Taiwanese propolis from different sources.</a> Evidence-Based Complementary and Alternative. 1 (2), 175-185 (2004).</li><li>Chen, C. N., Wu, C. L., Lin, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Apoptosis+of+human+melanoma+cells+induced+by+the+novel+compounds+propolin+A+and+propolin+B+from+Taiwanese+propolis.">Apoptosis of human melanoma cells induced by the novel compounds propolin A and propolin B from Taiwanese propolis.</a> Cancer Letters. 24 (1-2), 218-231 (2007).</li><li>Huang, W. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Propolin+G,+a+prenylflavanone,+isolated+from+Taiwanese+propolis,+induces+caspase-dependent+apoptosis+in+brain+cancer+cells.">Propolin G, a prenylflavanone, isolated from Taiwanese propolis, induces caspase-dependent apoptosis in brain cancer cells.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 55 (18), 7366-7376 (2007).</li><li>Chen, Y. W., Ye, S. R., Ting, C., Yu, Y. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibacterial+activity+of+propolins+from+Taiwanese+green+propolis.">Antibacterial activity of propolins from Taiwanese green propolis.</a> Journal of Food and Drug Analysis. 26 (2), 761-768 (2018).</li><li>Hegazi, A. G., Abd El Hady, F. K., Abd Allah, F. A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+composition+and+antimicrobial+activity+of+European+propolis.">Chemical composition and antimicrobial activity of European propolis.</a> Zeitschrift f&#252;r Naturforschung. 55 (1-2), 70-75 (2000).</li><li>Sforcin, J. M., Fernandes, A., Lopes, C. A. M., Bankova, V., Funari, S. R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Seasonal+effect+on+Brazilian+propolis+antibacterial+activity.">Seasonal effect on Brazilian propolis antibacterial activity.</a> Journal of Ethnopharmacology. 73 (1-2), 243-249 (2000).</li><li>Chen, Y. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+Taiwanese+propolis+collected+from+different+locations+and+seasons.">Characterization of Taiwanese propolis collected from different locations and seasons.</a> Journal of the Science of Food and Agriculture. 88 (3), 412-419 (2008).</li><li>Grange, J. M., Davey, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibacterial+properties+of+propolis+(bee+glue).">Antibacterial properties of propolis (bee glue).</a> Journal of the Royal Society of Medicine. 83 (3), 159-160 (1990).</li><li>Kujumgiev, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibacterial,+antifungal+and+antiviral+activity+of+propolis+from+different+geographic+origins.">Antibacterial, antifungal and antiviral activity of propolis from different geographic origins.</a> Journal of Ethnopharmacology. 64 (3), 235-240 (1999).</li><li>Krol, W., Scheller, S., Shani, J., Pietsz, G., Czuba, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synergistic+effect+of+ethanol+extract+of+propolis+and+antibiotics+in+the+growth+of+Staphylococcus+aureus.">Synergistic effect of ethanol extract of propolis and antibiotics in the growth of Staphylococcus aureus.</a> Drug Research. 43 (5), 607-609 (1993).</li><li>Lu, L. C., Chen, Y. W., Chou, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibacterial+and+DPPH+free+radical-scavenging+activities+of+the+ethanol+extract+of+propolis+collected+in+Taiwan.">Antibacterial and DPPH free radical-scavenging activities of the ethanol extract of propolis collected in Taiwan.</a> Journal of Food and Drug Analysis. 11 (4), 277-282 (2003).</li><li>Tosi, B., Donini, A., Romagnoli, C., Bruni, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antimicrobial+activity+of+some+commercial+extracts+of+propolis+prepared+with+different+solvents.">Antimicrobial activity of some commercial extracts of propolis prepared with different solvents.</a> Phytotherapy Research. 10 (4), 335-336 (1996).</li><li>Cunha, I. B. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Factors+that+influence+the+yield+and+composition+of+Brazilian+propolis+extracts.">Factors that influence the yield and composition of Brazilian propolis extracts.</a> Journal of the Brazilian Chemical Society. 15 (6), 964-970 (2004).</li><li>Woo, S. O., Hong, I. P., Han, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extraction+properties+of+propolis+with+ethanol+concentration.">Extraction properties of propolis with ethanol concentration.</a> Journal of Apicultural Research. 30 (3), 211-216 (2015).</li><li>Park, Y. K., Ikegaki, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+water+and+ethanolic+extracts+of+propolis+and+evaluation+of+the+preparations.">Preparation of water and ethanolic extracts of propolis and evaluation of the preparations.</a> Bioscience, Biotechnology, and Biochemistry. 62 (11), 2230-2232 (1998).</li><li>Ramanauskien&#279;, K., Ink&#279;nien&#279;, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Propolis+oil+extract:+quality+analysis+and+evaluation+of+its+antimicrobial+activity.">Propolis oil extract: quality analysis and evaluation of its antimicrobial activity.</a> Natural Product Research. 25 (15), 1463-1468 (2011).</li><li>Machado, B. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+composition+and+biological+activity+of+extracts+obtained+by+supercritical+extraction+and+ethanolic+extraction+of+brown,+green+and+red+propolis+derived+from+different+geographic+regions+in+brazil.">Chemical composition and biological activity of extracts obtained by supercritical extraction and ethanolic extraction of brown, green and red propolis derived from different geographic regions in brazil.</a> PLoS One. 11 (1), e0145954 (2016).</li><li>Monroy, Y. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brazilian+green+propolis+extracts+obtained+by+conventional+processes+and+by+processes+at+high+pressure+with+supercritical+carbon+dioxide,+ethanol+and+water.">Brazilian green propolis extracts obtained by conventional processes and by processes at high pressure with supercritical carbon dioxide, ethanol and water.</a> The Journal of Supercritical Fluids. 130, 189-197 (2017).</li><li>Popova, M., Chen, C. N., Chen, P. Y., Huang, C. Y., Bankova, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+validated+spectrophotometric+method+for+quantification+of+prenylated+flavanones+in+pacific+propolis+from+Taiwan.">A validated spectrophotometric method for quantification of prenylated flavanones in pacific propolis from Taiwan.</a> Phytochemical Analysis. 21 (2), 186-191 (2010).</li><li>Chen, L. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Taiwanese+green+propolis+ethanol+extract+delays+the+progression+of+type+2+diabetes+mellitus+in+rats+treated+with+streptozotocin/high-fat+diet.">Taiwanese green propolis ethanol extract delays the progression of type 2 diabetes mellitus in rats treated with streptozotocin/high-fat diet.</a> Nutrients. 10 (4), e503 (2018).</li></ol>

وأفادت دراسة أن تعطن، باستخدام تركيزات مختلفة من الإيثانول، يمكن أن تستخدم ل استخراج دنج البرازيلي17؛ ومع ذلك، هو العملية تستغرق وقتاً طويلاً17. استغرق 10 أيام على الأقل لاستخراج المركبات النشطة بيولوجيا، مثل محتوى الفينولية، من دنج البرازيلي17. واقتر...

دنج خليط راتنجية طبيعية التي تنتجها أنواع النحل Apis mellifera. دنج قد استخدمت على نطاق واسع منذ العصور القديمة في الأدوية الشعبية. وأفادت دراسة مؤخرا أن دنج مفيد للوقاية من العدوى الميكروبية والالتهاب1. وقد أثبتت دراسات عديدة أن المركبات الحيوية النشطة الرئيسية في دنج هي الفلافونويد، استرات الأحماض الفينولية، برينيلاتيد فكوماريك الأحماض والأحماض ديتيربينيك2،3. وحتى الآن، تم تحديد 10 مشتقات فلافانوني برينيلاتيد من دنج الأخضر التايوانية من خلال كروماتوغرافيا سائلة عالية الأداء ([هبلك])4،5،،من67. هي الأكثر وفرة من بين هذه بروبولينس جيم ودال، واو، وزاي5،7. آثار دنج الأخضر التايوانية بيولوجية كبيرة ترتبط بمحتواه العالي من بروبولينس8.
تركيزات المركبات النشطة بيولوجيا في دنج تختلف اختلافاً كبيرا تبعاً للموسم والموقع الجغرافي التي يتم الحصول عليها في دنج. ويتضمن دنج الأوروبية أساسا الفلافونويد aglycone والفينوليه الأحماض9. المركبات الحيوية النشطة الرئيسية في دنج من البرازيل هي برينيلاتيد فكوماريك الأحماض، مثل artepillin جيم10. أظهرت دراسة أن هذا الموسم عامل حاسم لتحديد المحتوى الإجمالي بروبولين في دنج الأخضر التايوانية11. المحتوى بروبولين في دنج الأخضر التايوانية أعلى في الصيف (أيار/مايو-تموز/يوليه)، وأدنى في فصل الشتاء11. خاصية مضادة للجراثيم دنج اعتبرت على نطاق واسع أن يكون مؤشرا على النشاط البيولوجي. وبصفة عامة، أظهرت عينات دنج جمعت من مختلف مناطق خاصية المضادة للبكتيريا مماثلة؛ على سبيل المثال، وهي عموما فعالة ضد تقريبا جميع البكتيريا إيجابية ويسلك تأثير محدود للبكتيريا ضد البكتيريا سلبية الغرام10،،من1213. التفاعلات التآزر بين الفلافونويدات في دنج أظهرت أن تأثير البكتيريا14. وبالمثل، أبلغ دنج الأخضر التايوانية ليكون لها تأثير مضادات الميكروبات ضد البكتيريا إيجابية15. وعلاوة على ذلك، كما حددت دراسة تأثير مضادات الميكروبات من التفاعلات بين بروبولينس في دنج الأخضر التايوانية8.
من الصعب وصف المركبات النشطة بيولوجيا في دنج نظراً لتكوينها الكيميائي يمكن أن تختلف وفقا لمصدرها الأصلي. ولذلك، من الضروري وضع طريقة مجدية وقابلة للتكرار لتحديد نوعية دنج الأخضر التايوانية. ومع ذلك، أنشئ لا الإجراء القياسي لاستخراج دنج الأخضر التايوانية والتحليل الوظيفي اللاحقة. واقترحت عدة طرق مختلفة تطبيق المذيبات العضوية وغير العضوية دنج استخراج16،،من1718،،من1920. لأن دنج خليط محبتين، بينت الدراسات أن استخراج العضوية أفضل من الاستخراج غير العضوية8،،من1819. تركيز مجموع بروبولين في دنج الأخضر التايوانية وخصائصه المضادة للبكتيريا هي المؤشرات الرئيسية لنوعية دنج الأخضر التايوانية. وهكذا، والغرض من هذه الدراسة تقديم بروتوكول لاستخدام الإيثانول كمذيب لاستخلاص وتوصيف خصائص مضادة للجراثيم دنج الأخضر التايوانية.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>ethanol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>E7023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Whatman no. 4 filter paper</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>WHA1004125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>methanol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>34860</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>reverse phase RP-18 column</td>
			<td>Phenomenex Inc.</td>
			<td>00G-0234-E0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Staphylococcus aureus</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>BCRC 10780</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Escherichia coli</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>BCRC 10675</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tryptic soy broth</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>22092</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>nutrient broth</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>70122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dimethyl sulfoxide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D2650</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>spice grinder</td>
			<td>Waring</td>
			<td>WSG60K</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>microplate Reader</td>
			<td>Molecular Devices</td>
			<td>EMAX PLUS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HPLC system</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>1200 Series</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>vacuum evaporation</td>
			<td>B&#220;CHI</td>
			<td>Rotavapor R-215</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

extraction and analysis of taiwanese green propolis

دنج الأخضر التايوانية غنية في الفلافونويدات برينيلاتيد ومعارض طائفة واسعة من الأنشطة البيولوجية، مثل مضادات الأكسدة، مضاد للجراثيم، ومنها السرطان. أن المركبات النشطة بيولوجيا من دنج الأخضر التايوانية بروبولينس، إلا وهي جيم ودال، وواو، وزاي تركيز بروبولينس في دنج الأخضر التايوانية تختلف حسب الموسم والموقع الجغرافي. وهكذا، من المهم لوضع إجراءات موحدة وقابلة للتكرار لتحديد نوعية دنج الأخضر التايوانية. نقدم هنا، هو بروتوكول يستخدم كروماتوغرافيا سائلة عالية الأداء، المستندة إلى الإيثانول استخراج وتحليل نشاط المضاد للبكتيريا لتوصيف نوعية دنج الأخضر التايوانية. هذا الأسلوب يشير إلى أن استخراج الإيثانول 95% و 99.5% تحقيق محصول المادة الجافة كحد أقصى من التايوانيين دنج الأخضر، مما تسفر عن تركيزات أعلى من بروبولينس التي لها خصائص مضادة للجراثيم. ووفقا لهذه النتائج، يعتبر هذا البروتوكول يمكن الاعتماد عليها وقابلة للتكرار لتحديد نوعية دنج الأخضر التايوانية.

وترد في الجدول 1بيانات تمثيلية لاستخراج الإيثانول إيجابية. وكان محصول المادة الجافة من دنج الأخضر التايوانية ارتباطاً إيجابيا مع تركيز الإيثانول. وكان مقتطفات الإيثانول 95% و 99.5% المادة الجافة أعلى العائد من دنج الأخضر التايوانية. محصول المادة الجافة أقل من دنج ?...

Watch this Scientific Journal Video about Extraction and Analysis of Taiwanese Green Propolis at JoVE.com

Extraction and Analysis of Taiwanese Green Propolis

استخراج وتحليل للتايوانيين دنج الأخضر

نقدم بروتوكول لاستخدام الإيثانول كمذيب لاستخراج وتميز التايوانية دنج الأخضر الذي يسلك النشاط المضاد للبكتيريا.

Taiwanese green propolis is rich in prenylated flavonoids and exhibits a broad range of biological activities, such as antioxidant, antibacterial, and ...

هنا، نقدم بروتوكول لاستخدام الإيثانول كمذيب لاستخراج وتوصيف الدنجة الخضراء التايوانية التي تمنع النشاط المضاد للبكتيريا. هذا البروتوكول هو طريقة موثوقة وقابلة للتكرار لتحديد نوعية البروبوليس الأخضر التايواني. الإجراء البرهاني سيكون تشون تينغ تشين ويهسنوان شين، طلاب الدكتوراه من مختبري.للبدء، تزن بها 100 غرام من البروبوليس الأخضر التايواني. باستخدام طاحونة التوابل، طحن البروبوليس التأكد من أن القطع هي الأرض في مسحوق ناعم دون أي جزيئات كبيرة. حدد خمس قارورة وأضف 100 ملليلتر من تركيزات مختلفة من الإيثانول في الماء إلى كل منها.اخلط 10 جرامات من البروبوليس الأرضي في محلول الإيثانول في كل قارورة، وحضن في درجة حرارة 25 درجة مئوية مع اهتزاز عند 250 دورة في الدقيقة لمدة 48 ساعة. بعد ذلك، استخدم ورقة التصفية بحجم مسام 25 ميكرومتر لتصفية مستخلصات الإيثانول. باستخدام قارورة حجمية، إعادة تشكيل filtrates إلى حجمها الأصلي من 100 ملليلتر مع 95٪ الإيثانول.تخزين المقتطفات المعاد تشكيلها في ناقص 20 درجة مئوية حتى جاهزة للاستخدام. عندما تكون جاهزة لإعداد مقتطفات لHPLC، واستخدام تبخر فراغ لتركيز 10 ملليلتر من كل استخراج في 40 درجة مئوية لمدة 10 دقيقة. خبز المادة الجافة في 45 درجة مئوية لمدة 24 ساعة.ثم، إعادة تشكيل كل عينة من المادة الجافة مع 10 ملليلتر من 95٪الإيثانول. باستخدام مرشح حقنة مع حجم المسام 0.22 ميكرومتر، refilter كل استخراج وجمع الترشيح للتحليل المباشر مع HPLC. للبدء في إنشاء منحنى قياسي، قم بإعداد لتر واحد من الميثانول المرحلة المتنقلة إلى محلول المياه بنسبة 88.8 إلى 11.2.باستخدام حل المرحلة المتنقلة كمذيب، إعداد التخفيفات التسلسلية من تركيزات البروبيلين القياسية على النحو المبين في بروتوكول النص. اِنْفِن 20 ميكرولترات من كل تركيز معياري في أعمدة المرحلة العكسية بشكل متتابع من أدنى تركيز إلى أعلى. ثم، تعيين العمود HPLC إلى 30 درجة مئوية، تعيين طول التنازل عن كاشف الأشعة فوق البنفسجية إلى 280 نانومتر، ومعدل التدفق إلى ملليلتر واحد في الدقيقة الواحدة، ووقت مسجل إلى 20 دقيقة.تحليل المعايير ثلاث مرات على الأقل. بعد ذلك، استخدم برنامج ورقة الحساب لتوصيل استجابة القياس مقابل التركيز الناتج عن منحنى قياسي مع معادلة محددة وقيمة R-تربيع. للبدء في تحليل مقتطفات، حقن 20 ميكرولترات من كل استخراج في العمود المرحلة العكسية.تعيين العمود HPLC إلى درجة حرارة 30 درجة مئوية، ومعدل تدفق من ملليلتر واحد في الدقيقة. تعيين مدة التنازل عن كاشف الأشعة فوق البنفسجية إلى 280 نانومتر، ووقت مسجل إلى 20 دقيقة. تحليل مقتطفات ثلاث مرات على الأقل.ثم، استخدم المنحنى القياسي لتحديد تركيز البروبيلين في كل مستخلص الإيثانول. بعد إعداد الكائنات الحية الاختبارية ومستخلصات الإيثانول، أضف 10 ميكرولترات من مستخلص الإيثانول المخفف، تتراوح بين 0.156 إلى 640 ميكروغرام لكل ملليلتر في آبار لوحة 96 بئر. استخدام مرق لضبط حجم في كل بئر إلى 100 ميكرولتررز التأكد من الحفاظ على 5٪ DMSO في جميع التخفيفات.بعد ذلك ، تلقيح 100 ميكرولترات من الثقافة البكتيرية في كل بئر من 96 بئر. الثقافة في 37 درجة مئوية لمدة 48 ساعة. استخدام قارئ microplate في 590 نانومتر لتحليل النمو البكتيري وفقا لالتكدر ولتحديد الحد الأدنى من التركيز المثبط.بعد هذا، تلقيح 10 ميكرولترات من الثقافة السائلة من كل بئر التي أظهرت للنمو على لوحة أجار. احتضان في 37 درجة مئوية لمدة 24 ساعة. تحديد أدنى تركيز التي كشفت عن عدم وجود نمو البكتيرية مرئية لتحديد النشاط البكتيري.ويعتبر التركيز الذي قضى تماما نمو الخلايا ليكون الحد الأدنى تركيز البكتيريا. في هذه الدراسة، يتم استخراج البروبوليس الأخضر التايواني مع الإيثانول. ويبدو أن غلة المادة الجافة تكون أعلى عندما يتم استخدام تركيز عال من الإيثانول، وأقل عندما يتم استخدام المياه.وتشير هذه النتائج إلى أن المذيب العضوي يؤدي أفضل خلال هذا الاستخراج، وأن العائد يرتبط إيجابيا مع تركيز الإيثانول. وبالمثل، يبدو أن تركيز البروبولينات يرتبط بشكل إيجابي بتركيز الإيثانول أثناء الاستخراج، مع الحصول على أعلى عائد من البروبولين في مستخلصات الإيثانول 95٪و 99.5٪. ثم يتم التحقيق في الآثار المضادة للبكتيريا من مستخلصات الإيثانول ضد Aureus S والإشريكية القولونية.ويبدو أن متوسط الحد الأدنى للتركيز المثبط لـ S aureus يتراوح بين 10 و20 ميكروغرامًا لكل ملليلتر، ويبدو أن متوسط التركيز البكتيري هو 20 ميكروغرامًا لكل ملليلتر. ومع ذلك، لم يكن لدى مستخلصات الماء أي تأثير مضاد للبكتيريا ضد S aureus. لا يلاحظ أي تأثير مضاد للبكتيريا لـ E coli عند استخدام إما مستخلصات الماء أو الإيثانول.واحدة من الإجراءات التجريبية الرئيسية هو تجنب توحيد البروبوليس الأخضر التايوانية أثناء الطحن.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Thermostabilization, Expression, Purification, and Crystallization of the Human Serotonin Transporter Bound to S-citalopram

Thermostabilization, Expression, Purification, and Crystallization of the Human Serotonin Transporter Bound to S-citalopram

Thermostabilization والتعبير وتنقية، وتبلور من السيروتونين الناقل الإنسان ملزمة ل<em&gt; S</em&gt; -citalopram

The serotonin transporter is a sodium and chloride-coupled transporter that &#34;pumps&#34; extracellular serotonin into cells. S-citalopram is a drug ...

A Simple Fractionated Extraction Method for the Comprehensive Analysis of Metabolites, Lipids, and Proteins from a Single Sample

وهناك طريقة استخراج مجزأة بسيطة للتحليل الشامل من الأيض، والليبيدات، والبروتينات من عينة واحدة

Understanding of complex biological systems requires the measurement, analysis and integration of multiple compound classes of the living cell, usually ...

Characterization of Membrane Transporters by Heterologous Expression in E. coli and Production of Membrane Vesicles

Characterization of Membrane Transporters by Heterologous Expression in E. coli and Production of Membrane Vesicles

توصيف الناقلات غشاء بواسطة تعبير مغاير في كولاي وإنتاج الحويصلات الغشائية

Several methods have been developed to functionally characterize novel membrane transporters. Polyamines are ubiquitous in all organisms, but polyamine ...

Assessment of Cellular Oxidation using a Subcellular Compartment-Specific Redox-Sensitive Green Fluorescent Protein

تقييم الأكسدة الخلوية باستخدام مقصورة فرعية خاصة ببروتين الفلورسنت الأخضر الحساس للأكسدة الحمراء

Measuring the intracellular oxidation/reduction balance provides an overview of the physiological and/or pathophysiological redox status of an organism. ...

Rapid and Cost-Effective RNA Extraction of Rat Pancreatic Tissue

استخراج RNA سريع وفعال من حيث التكلفة من أنسجة البنكرياس الجرذ

Regardless of the extraction method, optimized RNA extraction of tissues and cell lines are carried out in four stages: 1) homogenization, 2) effective ...

Ganglioside Extraction, Purification and Profiling

استخراج جانجليوسيد وتنقيته وتوصيفه

Gangliosides are glycosphingolipids that contain one or more sialic acid residues. They are found on all vertebrate cells and tissues but are especially ...

The Extraction of Liver Glycogen Molecules for Glycogen Structure Determination

Liver glycogen is a hyperbranched glucose polymer that is involved in the maintenance of blood sugar levels in animals. The properties of glycogen are ...

Extraction and Purification of FAHD1 Protein from Swine Kidney and Mouse Liver

استخراج وتنقية بروتين FAHD1 من كبد الخنازير والكلى والفئران

Fumarylacetoacetate hydrolase domain-containing protein 1 (FAHD1) is the first identified member of the FAH superfamily in eukaryotes, acting as ...

Routine Collection of High-Resolution cryo-EM Datasets Using 200 KV Transmission Electron Microscope

الجمع الروتيني لمجموعات بيانات التبريد EM عالية الدقة باستخدام المجهر الإلكتروني الناقل 200 كيلو فولت

Cryo-electron microscopy (cryo-EM) has been established as a routine method for protein structure determination during the past decade, taking an ...

A Nanobar-Supported Lipid Bilayer System for the Study of Membrane Curvature Sensing Proteins in vitro

A Nanobar-Supported Lipid Bilayer System for the Study of Membrane Curvature Sensing Proteins in vitro

نظام ثنائي الطبقة الدهنية المدعوم بشريط نانوي لدراسة بروتينات استشعار انحناء الغشاء في المختبر

Membrane curvature plays important roles&#160;in various essential processes of cells, such as cell migration, cell division, and vesicle trafficking. It ...