Name: extraction and analysis of taiwanese green propolis
Uploaded: 2019-01-07T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Extraction and Analysis of Taiwanese Green Propolis at JoVE.com

Dit manuscript werd uitgegeven door Wallace academische bewerken.

1. bereiding van Ethanol-geëxtraheerde verbindingen
<ol><li>Weeg 10 g van bevroren Taiwanese groene propolis, die werd bijeengezocht uit bijenkorven in Taiwan van mei tot juli, en met behulp van de molen kruid vermalen. Bevestigen dat hele stukken van Taiwanese groene propolis grond tot een fijn poeder zonder eventuele grote deeltjes.</li>
	<li>Voeg 100 mL van verschillende concentraties van ethanol (60%, 70%, 80%, 95% en 99,5%) en water te scheiden van de kolven en meng elke concentratie met 10 g van grond propolis.<...

<ol>
	<li>Zabaiou, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biological+properties+of+propolis+extracts:+Something+new+from+an+ancient+product.">Biological properties of propolis extracts: Something new from an ancient product.</a> Chemistry and Physics of Lipids. 207 (Pt B), 214-222 (2017).</li><li>Bankova, V. B., De Castro, S. L., Marcucci, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Propolis:+Recent+advances+in+chemistry+and+plant+origin.">Propolis: Recent advances in chemistry and plant origin.</a> Apidologie. 31 (1), 3-15 (2000).</li><li>Park, Y. K., Alencar, S. M., Aguiar, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Botanical+origin+and+chemical+composition+of+Brazilian+propolis.">Botanical origin and chemical composition of Brazilian propolis.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 50 (9), 2502-2506 (2002).</li><li>Chen, C. N., Wu, C. L., Shy, H. S., Lin, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytotoxic+prenylflavanones+from+Taiwanese+propolis.">Cytotoxic prenylflavanones from Taiwanese propolis.</a> Journal of Natural Products. 66 (4), 503-506 (2003).</li><li>Chen, C. N., Weng, M. S., Wu, C. L., Lin, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+radical+scavenging+activity,+cytotoxic+effects+and+apoptosis+induction+in+human+melanoma+cells+by+Taiwanese+propolis+from+different+sources.">Comparison of radical scavenging activity, cytotoxic effects and apoptosis induction in human melanoma cells by Taiwanese propolis from different sources.</a> Evidence-Based Complementary and Alternative. 1 (2), 175-185 (2004).</li><li>Chen, C. N., Wu, C. L., Lin, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Apoptosis+of+human+melanoma+cells+induced+by+the+novel+compounds+propolin+A+and+propolin+B+from+Taiwanese+propolis.">Apoptosis of human melanoma cells induced by the novel compounds propolin A and propolin B from Taiwanese propolis.</a> Cancer Letters. 24 (1-2), 218-231 (2007).</li><li>Huang, W. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Propolin+G,+a+prenylflavanone,+isolated+from+Taiwanese+propolis,+induces+caspase-dependent+apoptosis+in+brain+cancer+cells.">Propolin G, a prenylflavanone, isolated from Taiwanese propolis, induces caspase-dependent apoptosis in brain cancer cells.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 55 (18), 7366-7376 (2007).</li><li>Chen, Y. W., Ye, S. R., Ting, C., Yu, Y. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibacterial+activity+of+propolins+from+Taiwanese+green+propolis.">Antibacterial activity of propolins from Taiwanese green propolis.</a> Journal of Food and Drug Analysis. 26 (2), 761-768 (2018).</li><li>Hegazi, A. G., Abd El Hady, F. K., Abd Allah, F. A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+composition+and+antimicrobial+activity+of+European+propolis.">Chemical composition and antimicrobial activity of European propolis.</a> Zeitschrift f&#252;r Naturforschung. 55 (1-2), 70-75 (2000).</li><li>Sforcin, J. M., Fernandes, A., Lopes, C. A. M., Bankova, V., Funari, S. R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Seasonal+effect+on+Brazilian+propolis+antibacterial+activity.">Seasonal effect on Brazilian propolis antibacterial activity.</a> Journal of Ethnopharmacology. 73 (1-2), 243-249 (2000).</li><li>Chen, Y. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+Taiwanese+propolis+collected+from+different+locations+and+seasons.">Characterization of Taiwanese propolis collected from different locations and seasons.</a> Journal of the Science of Food and Agriculture. 88 (3), 412-419 (2008).</li><li>Grange, J. M., Davey, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibacterial+properties+of+propolis+(bee+glue).">Antibacterial properties of propolis (bee glue).</a> Journal of the Royal Society of Medicine. 83 (3), 159-160 (1990).</li><li>Kujumgiev, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibacterial,+antifungal+and+antiviral+activity+of+propolis+from+different+geographic+origins.">Antibacterial, antifungal and antiviral activity of propolis from different geographic origins.</a> Journal of Ethnopharmacology. 64 (3), 235-240 (1999).</li><li>Krol, W., Scheller, S., Shani, J., Pietsz, G., Czuba, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synergistic+effect+of+ethanol+extract+of+propolis+and+antibiotics+in+the+growth+of+Staphylococcus+aureus.">Synergistic effect of ethanol extract of propolis and antibiotics in the growth of Staphylococcus aureus.</a> Drug Research. 43 (5), 607-609 (1993).</li><li>Lu, L. C., Chen, Y. W., Chou, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibacterial+and+DPPH+free+radical-scavenging+activities+of+the+ethanol+extract+of+propolis+collected+in+Taiwan.">Antibacterial and DPPH free radical-scavenging activities of the ethanol extract of propolis collected in Taiwan.</a> Journal of Food and Drug Analysis. 11 (4), 277-282 (2003).</li><li>Tosi, B., Donini, A., Romagnoli, C., Bruni, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antimicrobial+activity+of+some+commercial+extracts+of+propolis+prepared+with+different+solvents.">Antimicrobial activity of some commercial extracts of propolis prepared with different solvents.</a> Phytotherapy Research. 10 (4), 335-336 (1996).</li><li>Cunha, I. B. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Factors+that+influence+the+yield+and+composition+of+Brazilian+propolis+extracts.">Factors that influence the yield and composition of Brazilian propolis extracts.</a> Journal of the Brazilian Chemical Society. 15 (6), 964-970 (2004).</li><li>Woo, S. O., Hong, I. P., Han, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extraction+properties+of+propolis+with+ethanol+concentration.">Extraction properties of propolis with ethanol concentration.</a> Journal of Apicultural Research. 30 (3), 211-216 (2015).</li><li>Park, Y. K., Ikegaki, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+water+and+ethanolic+extracts+of+propolis+and+evaluation+of+the+preparations.">Preparation of water and ethanolic extracts of propolis and evaluation of the preparations.</a> Bioscience, Biotechnology, and Biochemistry. 62 (11), 2230-2232 (1998).</li><li>Ramanauskien&#279;, K., Ink&#279;nien&#279;, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Propolis+oil+extract:+quality+analysis+and+evaluation+of+its+antimicrobial+activity.">Propolis oil extract: quality analysis and evaluation of its antimicrobial activity.</a> Natural Product Research. 25 (15), 1463-1468 (2011).</li><li>Machado, B. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+composition+and+biological+activity+of+extracts+obtained+by+supercritical+extraction+and+ethanolic+extraction+of+brown,+green+and+red+propolis+derived+from+different+geographic+regions+in+brazil.">Chemical composition and biological activity of extracts obtained by supercritical extraction and ethanolic extraction of brown, green and red propolis derived from different geographic regions in brazil.</a> PLoS One. 11 (1), e0145954 (2016).</li><li>Monroy, Y. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brazilian+green+propolis+extracts+obtained+by+conventional+processes+and+by+processes+at+high+pressure+with+supercritical+carbon+dioxide,+ethanol+and+water.">Brazilian green propolis extracts obtained by conventional processes and by processes at high pressure with supercritical carbon dioxide, ethanol and water.</a> The Journal of Supercritical Fluids. 130, 189-197 (2017).</li><li>Popova, M., Chen, C. N., Chen, P. Y., Huang, C. Y., Bankova, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+validated+spectrophotometric+method+for+quantification+of+prenylated+flavanones+in+pacific+propolis+from+Taiwan.">A validated spectrophotometric method for quantification of prenylated flavanones in pacific propolis from Taiwan.</a> Phytochemical Analysis. 21 (2), 186-191 (2010).</li><li>Chen, L. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Taiwanese+green+propolis+ethanol+extract+delays+the+progression+of+type+2+diabetes+mellitus+in+rats+treated+with+streptozotocin/high-fat+diet.">Taiwanese green propolis ethanol extract delays the progression of type 2 diabetes mellitus in rats treated with streptozotocin/high-fat diet.</a> Nutrients. 10 (4), e503 (2018).</li></ol>

Een studie gemeld dat maceratie, met behulp van verschillende concentraties van ethanol, kan worden gebruikt voor Braziliaanse propolis extractie17; het proces was echter tijdrovend17. Het duurde ten minste 10 dagen de bioactieve stoffen, zoals fenolische inhoud, om uit te halen Braziliaanse propolis17. Als alternatief, ethanol extractie in combinatie met verwarming op 37 ° C, 50 ° C en 70 ° C gedurende 30 minuten heeft voorgesteld voor het extrah...

Propolis is een natuurlijke harsachtige mengsel geproduceerd door de bee soorten Apis mellifera. Propolis is wijd verbeid gebruikt sinds de oudheid in folk geneesmiddelen. Een studie heeft onlangs gemeld dat propolis is gunstig voor het voorkomen van microbiële infecties en ontstekingen1. Talrijke studies hebben aangetoond dat de belangrijkste bioactieve stoffen in propolis flavonoïden, fenolische esters van, prenylated p-coumaric zuren en diterpenic zuren2,3. Tot op heden, zijn 10 prenylated flavanone derivaten van Taiwanese groene propolis geïdentificeerd door middel van krachtige vloeibare chromatografie (HPLC)4,,5,,6,7. De meest voorkomende daaronder zijn propolins C, D, F en G5,7. De aanzienlijke biologische effecten van Taiwanese groene propolis zijn gecorreleerd met het hoge gehalte aan propolins8.
De concentraties van bioactieve stoffen in propolis variëren sterk afhankelijk van het seizoen en de geografische locatie waar de propolis is verkregen. Europese propolis bevat voornamelijk de flavonoïde aglyconen en phenolic zuren9. De grote bioactieve stoffen in propolis uit Brazilië zijn prenylated p-coumaric van zuren, zoals artepillin C10. Een studie aangetoond dat het seizoen een kritische factor is voor de vaststelling van de inhoud van de totale propolin in Taiwanese groene propolis11. De inhoud van de propolin in Taiwanese groene propolis is het hoogst in de zomer (mei - juli) en laagste in winter11. De antibacteriële eigendom van propolis heeft zijn algemeen beschouwd als een indicator van biologische activiteit. In het algemeen, de monsters van propolis verzameld uit verschillende regio's zijn tentoongesteld een vergelijkbare antibacteriële woning; bijvoorbeeld, het is in het algemeen effectief tegen bijna alle gram-positieve bacteriën en vertoont een beperkte antibacteriële werking tegen gram-negatieve bacteriën10,12,13. Synergetische interactie tussen de flavonoïden in propolis werden gedemonstreerd hebben een antibacteriële werking14. Taiwanese groene propolis werd ook gemeld te hebben een antimicrobiële werking tegen gram-positieve bacteriën15. Bovendien wordt in een studie ook gebleken dat een antimicrobiële werking van de interacties tussen propolins in Taiwanese groene propolis8.
De karakterisering van de bioactieve stoffen in propolis is moeilijk, omdat de chemische samenstelling kan variëren naar gelang de bron van oorsprong. Het is daarom noodzakelijk een haalbaar en herhaalbare methode voor het bepalen van de kwaliteit van de Taiwanese groene propolis vast te stellen. Echter is geen standaardprocedure opgezet voor de Taiwanese groene propolis extractie en de daaropvolgende functionaalanalyse. Verschillende methoden afwisselend organische en anorganische oplosmiddelen zijn voorgesteld voor propolis extractie16,17,18,19,20. Omdat propolis een lipofiele mengsel is, hebben studies aangetoond dat biologische extractie beter dan de anorganische extractie8,18,19 is. De concentratie van de totale propolin in Taiwanese groene propolis en de antibacteriële eigenschappen zijn belangrijke indicatoren van de kwaliteit van de Taiwanese groene propolis. Dus, is het doel van deze studie te presenteren van een protocol voor het gebruik van ethanol als oplosmiddel te halen en karakteriseren van de antibacteriële eigenschappen van Taiwanese groene propolis.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>ethanol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>E7023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Whatman no. 4 filter paper</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>WHA1004125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>methanol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>34860</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>reverse phase RP-18 column</td>
			<td>Phenomenex Inc.</td>
			<td>00G-0234-E0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Staphylococcus aureus</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>BCRC 10780</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Escherichia coli</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>BCRC 10675</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tryptic soy broth</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>22092</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>nutrient broth</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>70122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dimethyl sulfoxide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D2650</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>spice grinder</td>
			<td>Waring</td>
			<td>WSG60K</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>microplate Reader</td>
			<td>Molecular Devices</td>
			<td>EMAX PLUS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HPLC system</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>1200 Series</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>vacuum evaporation</td>
			<td>B&#220;CHI</td>
			<td>Rotavapor R-215</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

extraction and analysis of taiwanese green propolis

Taiwanese groene propolis is rijk aan prenylated flavonoïden en exposeert een breed scala van biologische activiteit, zoals anti-oxidant, antibacteriële, en antikanker ones. De biologische actieve stoffen van Taiwanese groene propolis zijn propolins, namelijk C, D, F en G. De concentratie van propolins in Taiwanese groene propolis is afhankelijk van het seizoen en de geografische locatie. Dus, is het essentieel om een standaard en herhaalbare methode voor het bepalen van de kwaliteit van de Taiwanese groene propolis. Hier presenteren we een protocol dat wordt gebruikt op basis van ethanol extractie, hoge-prestatie vloeistofchromatografie en een analyse van de antibacteriële activiteit te karakteriseren Taiwanese groene propolis kwaliteit. Deze methode geeft aan dat 95% en 99,5% ethanol extracties de maximale droge stof oogsten van Taiwanese groene propolis bereiken, waardoor de opbrengst van de hoogste concentraties van propolins die antibacteriële eigenschappen hebben. Volgens deze bevindingen, wordt dit protocol beschouwd als betrouwbare en herhaalbare voor het bepalen van de kwaliteit van de Taiwanese groene propolis.

Positieve representatieve gegevens voor de winning van ethanol zijn opgenomen in tabel 1. De opbrengst van de droge stof van Taiwanese groene propolis werd positief geassocieerd met de concentratie van ethanol. De 95% en 99,5% ethanol extracten had de hoogste droge stof opleveren van Taiwanese groene propolis. De opbrengst van de laagste droge stof van Taiwanese groene propolis is opgetreden wanneer water werd gebruikt als de extractievloeistof. Deze resultaten wijzen ero...

Watch this Scientific Journal Video about Extraction and Analysis of Taiwanese Green Propolis at JoVE.com

Extraction and Analysis of Taiwanese Green Propolis

Extractie en analyse van Taiwanese groene Propolis

Presenteren we een protocol voor het gebruik van ethanol als oplosmiddel te halen en karakteriseren van Taiwanese groene propolis dat antibacteriële activiteit vertoont.

Taiwanese green propolis is rich in prenylated flavonoids and exhibits a broad range of biological activities, such as antioxidant, antibacterial, and ...

Hier presenteren we het protocol voor het gebruik van ethanol als oplosmiddel om Taiwanese groene propolis te extraheren en te karakteriseren die antibacteriële activiteit remt. Dit protocol is een betrouwbare en herhaalbare methode voor het bepalen van de kwaliteit van taiwanese groene propolis. Demonstrerende procedure zijn Chun'Ting Chen en Yi'Hsuan Chien, promovendi van mijn laboratorium.Om te beginnen, wegen 100 gram Taiwanese groene propolis. Maal met behulp van een kruidenmolen de propolis om ervoor te zorgen dat de stukken worden vermalen tot een fijn poeder zonder grote deeltjes. Stel vijf kolven en voeg 100 milliliter van verschillende concentraties ethanol in water aan elk.Meng 10 gram gemalen propolis in de ethanoloplossing in elke kolf en broed op 25 graden Celsius met 48 uur schudden bij 250 RPM. Gebruik hierna filterpapier met een poriegrootte van 25 micrometer om de ethanolextracten te filteren. Met behulp van een volumetrische kolf, reconstrueren van de filtrates om hun oorspronkelijke volume van 100 milliliter met 95%ethanol.Bewaar de gereconstitueerde extracten bij min 20 graden Celsius tot ze klaar zijn voor gebruik. Wanneer u klaar bent om de extracten voor HPLC voor te bereiden, gebruikt u vacuümverdamping om 10 milliliter van elk extract gedurende 10 minuten op 40 graden Celsius te concentreren. Bak de droge stof op 45 graden Celsius gedurende 24 uur.Reconstrueren vervolgens elk monster van droge stof met 10 milliliter ethanol. Met behulp van een spuitfilter met een poriegrootte van 0,22 micrometer, filtert u elk extract opnieuw en verzamelt u het filtraat voor directe analyse met HPLC. Om te beginnen met het vaststellen van een standaardcurve, bereidt u een liter van de mobiele fase methanol naar wateroplossing voor bij een verhouding van 88,8 tot 11,2.Met behulp van de mobiele fase oplossing als een oplosmiddel, voor te bereiden seriële verdunningen van de propolin standaard concentraties zoals beschreven in het tekstprotocol. Injecteer 20 microliter van elke standaardconcentratie in de omgekeerde fase kolommen achtereenvolgens van de laagste concentratie naar de hoogste. Stel vervolgens de HPLC-kolom in op 30 graden Celsius, stel de afstandsduur van de UV-detector in op 280 nanometer en de stroomsnelheid op één milliliter per minuut en de recordertijd op 20 minuten.Analyseer de normen ten minste drie keer. Gebruik hierna berekeningsbladsoftware om de meetrespons aan te sluiten op de concentratie, wat resulteert in een standaardcurve met een bepaalde vergelijking en R-kwadraatwaarde. Om te beginnen met het analyseren van de extracten, injecteren 20 microliter van elk extract in de omgekeerde fase kolom.Stel de HPLC-kolom in op een temperatuur van 30 graden Celsius en een stroomsnelheid van één milliliter per minuut. Stel de afstandsduur van de UV-detector in op 280 nanometer en de recordertijd op 20 minuten. Analyseer de extracten ten minste drie keer.Gebruik vervolgens de standaardcurve om de concentratie propolin in elk ethanolextract te bepalen. Voeg na het bereiden van de testorganismen en ethanolextracten 10 microliter verdunde ethanolextract toe, variërend van 0,156 tot 640 microgram per milliliter in de putten van een 96 putplaat. Gebruik bouillon om het volume in elke put aan te passen aan 100 microliters om ervoor te zorgen dat 5%DMSO in alle verdunningen te behouden.Vervolgens inenten 100 microliter van bacteriële cultuur in elke put van de 96 put plaat. Cultuur op 37 graden Celsius gedurende 48 uur. Gebruik een microplatelezer op 590 nanometer om de bacteriële groei te analyseren op basis van troebelheid en om de minimale remmende concentratie te bepalen.Na deze, inenten 10 microliter van vloeibare cultuur van elke put die tentoongesteld aan de groei op een agar plaat. Incubeer op 37 graden Celsius gedurende 24 uur. Identificeer de laagste concentratie die geen zichtbare bacteriële groei aan het licht bracht om de bacteriële activiteit te bepalen.De concentratie die volledig geëlimineerd celgroei wordt beschouwd als de minimale bacteriële concentratie. In deze studie wordt Taiwanese groene propolis gewonnen met ethanol. De droge stof opbrengst lijkt het hoogst te zijn wanneer een hoge concentratie ethanol wordt gebruikt, en het laagst wanneer water wordt gebruikt.Deze resultaten geven aan dat een organisch oplosmiddel het beste presteert tijdens deze extractie en dat de opbrengst positief geassocieerd is met de ethanolconcentratie. Evenzo lijkt de concentratie propolins positief geassocieerd te zijn met de ethanolconcentratie tijdens de extractie, waarbij de hoogste opbrengst van propolins werd verkregen in de 95% en 99,5% ethanolextracten. De antibacteriële invloed van de ethanolextracten tegen de S aureus en E coli wordt vervolgens onderzocht.De gemiddelde minimale remmende concentratie voor S aureus lijkt tussen de 10 en 20 microgram per milliliter te liggen en de gemiddelde bacteriële concentratie lijkt 20 microgram per milliliter te zijn. Waterextracten hadden echter geen antibacteriële invloed op S aureus. Er wordt geen antibacteriële invloed waargenomen voor E coli bij het gebruik van de water- of ethanolextracten.Een van de belangrijkste experimentele procedure is het vermijden van de uniformiteit van de Taiwanese groene propolis tijdens het slijpen.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Thermostabilization, Expression, Purification, and Crystallization of the Human Serotonin Transporter Bound to S-citalopram

Thermostabilization, Expression, Purification, and Crystallization of the Human Serotonin Transporter Bound to S-citalopram

Thermostabilization, expressie, zuivering en kristallisatie van het Human serotonine transporter Gebonden aan<em&gt; S</em&gt; citalopram

The serotonin transporter is a sodium and chloride-coupled transporter that &#34;pumps&#34; extracellular serotonin into cells. S-citalopram is a drug ...

A Simple Fractionated Extraction Method for the Comprehensive Analysis of Metabolites, Lipids, and Proteins from a Single Sample

Een eenvoudige gefractieerde extractie methode voor de uitgebreide analyse van metabolieten, lipiden en proteïnen uit een enkele monster

Understanding of complex biological systems requires the measurement, analysis and integration of multiple compound classes of the living cell, usually ...

Characterization of Membrane Transporters by Heterologous Expression in E. coli and Production of Membrane Vesicles

Characterization of Membrane Transporters by Heterologous Expression in E. coli and Production of Membrane Vesicles

Karakterisering van membraan transporters door Heterologeuze expressie in E. coli en productie van membraan blaasjes

Several methods have been developed to functionally characterize novel membrane transporters. Polyamines are ubiquitous in all organisms, but polyamine ...

Assessment of Cellular Oxidation using a Subcellular Compartment-Specific Redox-Sensitive Green Fluorescent Protein

Beoordeling van cellulaire oxidatie met behulp van een subcellulair compartiment-specifieke Redox-gevoelige groene fluorescerende eiwitten

Measuring the intracellular oxidation/reduction balance provides an overview of the physiological and/or pathophysiological redox status of an organism. ...

Rapid and Cost-Effective RNA Extraction of Rat Pancreatic Tissue

Snelle en kosteneffectieve RNA-extractie van rattenlelfum

Regardless of the extraction method, optimized RNA extraction of tissues and cell lines are carried out in four stages: 1) homogenization, 2) effective ...

Ganglioside Extraction, Purification and Profiling

Ganglioside extractie, zuivering en profilering

Gangliosides are glycosphingolipids that contain one or more sialic acid residues. They are found on all vertebrate cells and tissues but are especially ...

The Extraction of Liver Glycogen Molecules for Glycogen Structure Determination

Liver glycogen is a hyperbranched glucose polymer that is involved in the maintenance of blood sugar levels in animals. The properties of glycogen are ...

Extraction and Purification of FAHD1 Protein from Swine Kidney and Mouse Liver

Extractie en zuivering van FAHD1-eiwit uit varkensnier en muizenlever

Fumarylacetoacetate hydrolase domain-containing protein 1 (FAHD1) is the first identified member of the FAH superfamily in eukaryotes, acting as ...

Routine Collection of High-Resolution cryo-EM Datasets Using 200 KV Transmission Electron Microscope

Routinematige verzameling van cryo-EM-datasets met hoge resolutie met behulp van 200 KV transmissie-elektronenmicroscoop

Cryo-electron microscopy (cryo-EM) has been established as a routine method for protein structure determination during the past decade, taking an ...

A Nanobar-Supported Lipid Bilayer System for the Study of Membrane Curvature Sensing Proteins in vitro

A Nanobar-Supported Lipid Bilayer System for the Study of Membrane Curvature Sensing Proteins in vitro

Een nanobar-ondersteund lipide bilayer-systeem voor de studie van membraankrommingsgevoelige eiwitten in vitro

Membrane curvature plays important roles&#160;in various essential processes of cells, such as cell migration, cell division, and vesicle trafficking. It ...