Name: extraction and analysis of taiwanese green propolis
Uploaded: 2019-01-07T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Extraction and Analysis of Taiwanese Green Propolis at JoVE.com

כתב יד זה נערך על-ידי עריכה אקדמית וואלאס.

1. הכנת תרכובות אתנול, חילוץ
<ol><li>שוקלת 10 גרם של קפואים פרופוליס ירוק מטייוואן, אשר נאסף מתוך כוורות בטייוואן ממאי עד יולי, לטחון אותו באמצעות את מטחנת תבלינים. לאשר כי כל פיסות פרופוליס ירוק מטייוואן הם הקרקע לאבקה בסדר בלי שום חלקיקים גדולים.</li>
	<li>להוסיף 100 מ של ריכוזים שונים של אתנול (60%, 70...

<ol>
	<li>Zabaiou, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biological+properties+of+propolis+extracts:+Something+new+from+an+ancient+product.">Biological properties of propolis extracts: Something new from an ancient product.</a> Chemistry and Physics of Lipids. 207 (Pt B), 214-222 (2017).</li><li>Bankova, V. B., De Castro, S. L., Marcucci, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Propolis:+Recent+advances+in+chemistry+and+plant+origin.">Propolis: Recent advances in chemistry and plant origin.</a> Apidologie. 31 (1), 3-15 (2000).</li><li>Park, Y. K., Alencar, S. M., Aguiar, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Botanical+origin+and+chemical+composition+of+Brazilian+propolis.">Botanical origin and chemical composition of Brazilian propolis.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 50 (9), 2502-2506 (2002).</li><li>Chen, C. N., Wu, C. L., Shy, H. S., Lin, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytotoxic+prenylflavanones+from+Taiwanese+propolis.">Cytotoxic prenylflavanones from Taiwanese propolis.</a> Journal of Natural Products. 66 (4), 503-506 (2003).</li><li>Chen, C. N., Weng, M. S., Wu, C. L., Lin, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+radical+scavenging+activity,+cytotoxic+effects+and+apoptosis+induction+in+human+melanoma+cells+by+Taiwanese+propolis+from+different+sources.">Comparison of radical scavenging activity, cytotoxic effects and apoptosis induction in human melanoma cells by Taiwanese propolis from different sources.</a> Evidence-Based Complementary and Alternative. 1 (2), 175-185 (2004).</li><li>Chen, C. N., Wu, C. L., Lin, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Apoptosis+of+human+melanoma+cells+induced+by+the+novel+compounds+propolin+A+and+propolin+B+from+Taiwanese+propolis.">Apoptosis of human melanoma cells induced by the novel compounds propolin A and propolin B from Taiwanese propolis.</a> Cancer Letters. 24 (1-2), 218-231 (2007).</li><li>Huang, W. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Propolin+G,+a+prenylflavanone,+isolated+from+Taiwanese+propolis,+induces+caspase-dependent+apoptosis+in+brain+cancer+cells.">Propolin G, a prenylflavanone, isolated from Taiwanese propolis, induces caspase-dependent apoptosis in brain cancer cells.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 55 (18), 7366-7376 (2007).</li><li>Chen, Y. W., Ye, S. R., Ting, C., Yu, Y. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibacterial+activity+of+propolins+from+Taiwanese+green+propolis.">Antibacterial activity of propolins from Taiwanese green propolis.</a> Journal of Food and Drug Analysis. 26 (2), 761-768 (2018).</li><li>Hegazi, A. G., Abd El Hady, F. K., Abd Allah, F. A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+composition+and+antimicrobial+activity+of+European+propolis.">Chemical composition and antimicrobial activity of European propolis.</a> Zeitschrift f&#252;r Naturforschung. 55 (1-2), 70-75 (2000).</li><li>Sforcin, J. M., Fernandes, A., Lopes, C. A. M., Bankova, V., Funari, S. R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Seasonal+effect+on+Brazilian+propolis+antibacterial+activity.">Seasonal effect on Brazilian propolis antibacterial activity.</a> Journal of Ethnopharmacology. 73 (1-2), 243-249 (2000).</li><li>Chen, Y. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+Taiwanese+propolis+collected+from+different+locations+and+seasons.">Characterization of Taiwanese propolis collected from different locations and seasons.</a> Journal of the Science of Food and Agriculture. 88 (3), 412-419 (2008).</li><li>Grange, J. M., Davey, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibacterial+properties+of+propolis+(bee+glue).">Antibacterial properties of propolis (bee glue).</a> Journal of the Royal Society of Medicine. 83 (3), 159-160 (1990).</li><li>Kujumgiev, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibacterial,+antifungal+and+antiviral+activity+of+propolis+from+different+geographic+origins.">Antibacterial, antifungal and antiviral activity of propolis from different geographic origins.</a> Journal of Ethnopharmacology. 64 (3), 235-240 (1999).</li><li>Krol, W., Scheller, S., Shani, J., Pietsz, G., Czuba, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synergistic+effect+of+ethanol+extract+of+propolis+and+antibiotics+in+the+growth+of+Staphylococcus+aureus.">Synergistic effect of ethanol extract of propolis and antibiotics in the growth of Staphylococcus aureus.</a> Drug Research. 43 (5), 607-609 (1993).</li><li>Lu, L. C., Chen, Y. W., Chou, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibacterial+and+DPPH+free+radical-scavenging+activities+of+the+ethanol+extract+of+propolis+collected+in+Taiwan.">Antibacterial and DPPH free radical-scavenging activities of the ethanol extract of propolis collected in Taiwan.</a> Journal of Food and Drug Analysis. 11 (4), 277-282 (2003).</li><li>Tosi, B., Donini, A., Romagnoli, C., Bruni, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antimicrobial+activity+of+some+commercial+extracts+of+propolis+prepared+with+different+solvents.">Antimicrobial activity of some commercial extracts of propolis prepared with different solvents.</a> Phytotherapy Research. 10 (4), 335-336 (1996).</li><li>Cunha, I. B. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Factors+that+influence+the+yield+and+composition+of+Brazilian+propolis+extracts.">Factors that influence the yield and composition of Brazilian propolis extracts.</a> Journal of the Brazilian Chemical Society. 15 (6), 964-970 (2004).</li><li>Woo, S. O., Hong, I. P., Han, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extraction+properties+of+propolis+with+ethanol+concentration.">Extraction properties of propolis with ethanol concentration.</a> Journal of Apicultural Research. 30 (3), 211-216 (2015).</li><li>Park, Y. K., Ikegaki, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+water+and+ethanolic+extracts+of+propolis+and+evaluation+of+the+preparations.">Preparation of water and ethanolic extracts of propolis and evaluation of the preparations.</a> Bioscience, Biotechnology, and Biochemistry. 62 (11), 2230-2232 (1998).</li><li>Ramanauskien&#279;, K., Ink&#279;nien&#279;, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Propolis+oil+extract:+quality+analysis+and+evaluation+of+its+antimicrobial+activity.">Propolis oil extract: quality analysis and evaluation of its antimicrobial activity.</a> Natural Product Research. 25 (15), 1463-1468 (2011).</li><li>Machado, B. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+composition+and+biological+activity+of+extracts+obtained+by+supercritical+extraction+and+ethanolic+extraction+of+brown,+green+and+red+propolis+derived+from+different+geographic+regions+in+brazil.">Chemical composition and biological activity of extracts obtained by supercritical extraction and ethanolic extraction of brown, green and red propolis derived from different geographic regions in brazil.</a> PLoS One. 11 (1), e0145954 (2016).</li><li>Monroy, Y. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brazilian+green+propolis+extracts+obtained+by+conventional+processes+and+by+processes+at+high+pressure+with+supercritical+carbon+dioxide,+ethanol+and+water.">Brazilian green propolis extracts obtained by conventional processes and by processes at high pressure with supercritical carbon dioxide, ethanol and water.</a> The Journal of Supercritical Fluids. 130, 189-197 (2017).</li><li>Popova, M., Chen, C. N., Chen, P. Y., Huang, C. Y., Bankova, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+validated+spectrophotometric+method+for+quantification+of+prenylated+flavanones+in+pacific+propolis+from+Taiwan.">A validated spectrophotometric method for quantification of prenylated flavanones in pacific propolis from Taiwan.</a> Phytochemical Analysis. 21 (2), 186-191 (2010).</li><li>Chen, L. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Taiwanese+green+propolis+ethanol+extract+delays+the+progression+of+type+2+diabetes+mellitus+in+rats+treated+with+streptozotocin/high-fat+diet.">Taiwanese green propolis ethanol extract delays the progression of type 2 diabetes mellitus in rats treated with streptozotocin/high-fat diet.</a> Nutrients. 10 (4), e503 (2018).</li></ol>

מחקר דיווחו כי השרייה, שאורכה, באמצעות ריכוזים שונים של אתנול, יכול לשמש עבור חילוץ פרופוליס ברזילאי17; עם זאת, התהליך היה זמן רב17. זה לקח לפחות 10 ימים כדי לחלץ את תרכובות ביו, כגון תוכן בעל תאים פנוליים, פרופוליס ברזילאי17. לחלופין, הפקת אתנול בשילוב עם ח...

פרופוליס הוא תערובת שרפי הטבעי המיוצר על ידי דבורה המין בומבוס. פרופוליס כבר בשימוש נרחב מאז ימי קדם בפולק תרופות. מחקר דיווח לאחרונה שכי הפרופוליס הינו מועיל למניעת זיהומים חיידקים, דלקת1. מחקרים רבים הראו כי תרכובות ביו הראשי של פרופוליס הם פלבנואידים, בעל תאים פנוליים אסטרים חומצה, prenylated p-חומצות coumaric ו- diterpenic חומצות2,3. עד כה, זוהו prenylated 10 flavanone נגזרות של פרופוליס ירוק מטייוואן באמצעות כרומטוגרפיה נוזלית ביצועים גבוהים (HPLC)4,5,6,7. הנפוץ ביותר בקרב אלה הם propolins C, D, F ו- G5,7. השפעות ביולוגיות ניכר של פרופוליס ירוק מטייוואן נמצאים בקורלציה עם שלה תכולה גבוהה של propolins8.
הריכוזים של תרכובות ביו בפרופוליס משתנים במידה רבה בהתאם העונה והמיקום הגיאוגרפי שממנו מתקבל פרופוליס. פרופוליס האירופית מכיל בעיקר פלבנואיד אגליקון ו בעל תאים פנוליים חומצות9. תרכובות ביו העיקריים של פרופוליס מברזיל הם prenylated p-חומצות coumaric, כגון artepillin C10. מחקר הוכיח כי העונה הוא גורם קריטי בקביעת התכנים propolin הכולל פרופוליס ירוק מטייוואן11. התוכן propolin הטייוואנית פרופוליס ירוק הוא הגבוה ביותר בחודשי הקיץ (מאי - יולי), הנמוך ביותר חורף11. המאפיין אנטיבקטריאלי של פרופוליס נחשב באופן נרחב כדי להיות מחוון פעילות ביולוגית. בדרך כלל, הדגימות של פרופוליס שנאספו מאזורים שונים שכישוריי אנטיבקטריאלי נכס דומה; לדוגמה, זה בדרך כלל יעילה כנגד כמעט כל חיידקים גראם חיוביים ותערוכות השפעה אנטי-בקטריאלי מוגבלת נגד חיידקים גראם שליליים10,12,13. האינטראקציות סינרגטי בין פלבנואידים ב פרופוליס היו הפגינו יש השפעה אנטי-בקטריאלית של14. באופן דומה, פרופוליס ירוק מטייוואן דווח להשפיע מיקרוביאלית כנגד חיידקים גראם חיוביים15. יתר על כן, מחקר זיהה גם אפקט מיקרוביאלית של פעולת הגומלין בין propolins פרופוליס ירוק מטייוואן8.
האפיון של תרכובות ביו של פרופוליס קשה בגלל ההרכב הכימי שלה יכולה להשתנות, בהתאם למקורו של המקור. לכן, זה הכרחי ליצור שיטה אפשרית הדיר לקביעת איכות פרופוליס ירוק מטייוואן. עם זאת, אין נוהל הוקם עבור חילוץ פרופוליס ירוק מטייוואן, אנליזה פונקציונלית עוקבות. מספר שיטות החלות ממיסים אורגניים ואנאורגניים בדרכים שונות הוצעו פרופוליס החילוץ16,17,18,19,20. כי הפרופוליס הינו תערובת lipophilic, מחקרים הראו החילוץ אורגני עדיף אורגניים החילוץ8,18,19. ריכוז propolin הכולל פרופוליס ירוק מטייוואן, שלה תכונות אנטיבקטריאליות הם מחווני מפתח של האיכות של פרופוליס ירוק מטייוואן. לפיכך, מטרת מחקר זה היא להציג פרוטוקול להצפנה באמצעות אתנול כמו הממס כדי לחלץ לאפיין את תכונות אנטיבקטריאליות של פרופוליס ירוק מטייוואן.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>ethanol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>E7023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Whatman no. 4 filter paper</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>WHA1004125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>methanol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>34860</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>reverse phase RP-18 column</td>
			<td>Phenomenex Inc.</td>
			<td>00G-0234-E0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Staphylococcus aureus</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>BCRC 10780</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Escherichia coli</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>BCRC 10675</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tryptic soy broth</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>22092</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>nutrient broth</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>70122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dimethyl sulfoxide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D2650</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>spice grinder</td>
			<td>Waring</td>
			<td>WSG60K</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>microplate Reader</td>
			<td>Molecular Devices</td>
			<td>EMAX PLUS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HPLC system</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>1200 Series</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>vacuum evaporation</td>
			<td>B&#220;CHI</td>
			<td>Rotavapor R-215</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

extraction and analysis of taiwanese green propolis

פרופוליס ירוק מטייוואן עשיר prenylated פלבנואידים ותערוכות במגוון רחב של פעילויות ביולוגיות, כגון נוגדי חמצון, אנטי בקטריאלי, ואת אלה נגד סרטן. Bioactive תרכובות של פרופוליס ירוק מטייוואן הם propolins, כלומר C, D, F ו- G. הריכוז של propolins ב פרופוליס ירוק מטייוואן משתנה בהתאם העונה והמיקום הגיאוגרפי. לפיכך, חיוני להקים הליך סטנדרטי, הדיר לקביעת האיכות של פרופוליס ירוק מטייוואן. כאן, אנו מציגים פרוטוקול העושה האתנול מבוססי החילוץ, כרומטוגרפיה נוזלית ביצועים גבוהים, ניתוח פעילות נגד חיידקים לאפיון איכות פרופוליס ירוק מטייוואן. שיטה זו מציינת כי 95% ו- 99.5% אתנול עקירות להשיג את היבול המרבי חומר יבש של פרופוליס ירוק מטייוואן, ובכך מניב הריכוזים הגבוהים ביותר של propolins יש תכונות אנטיבקטריאליות. על פי ממצאים אלה, בפרוטוקול הנוכחי נחשבת הדיר לקביעת האיכות של פרופוליס ירוק מטייוואן ואמין.

נציג נתונים חיוביים להפקת אתנול מוצגים בטבלה1. התשואה חומר יבש של פרופוליס ירוק מטייוואן היה קשור באופן חיובי הריכוז של אתנול. תמציות אתנול 95% ו- 99.5% היה החומר היבש הגבוה ביותר תשואה של פרופוליס ירוק מטייוואן. התשואה חומר יבש הנמוכה מפרופוליס ירוק מטייוואן אירעה ?...

Watch this Scientific Journal Video about Extraction and Analysis of Taiwanese Green Propolis at JoVE.com

Extraction and Analysis of Taiwanese Green Propolis

חילוץ וניתוח של פרופוליס ירוק מטייוואן

אנו מציגים פרוטוקול להצפנה באמצעות אתנול כמו הממס כדי לחלץ לאפיין פרופוליס ירוק מטייוואן זה מוצגים אנטיבקטריאלי.

Taiwanese green propolis is rich in prenylated flavonoids and exhibits a broad range of biological activities, such as antioxidant, antibacterial, and ...

כאן, אנו מציגים את הפרוטוקול לשימוש באתנול כממס כדי לחלץ ולאפיין פרופוליס ירוק טייוואני המעכב פעילות אנטיבקטריאלית. פרוטוקול זה הוא שיטה אמינה וחוזרת על עצמה לקביעת האיכות של פרופוליס ירוק טייוואני. הליך ההדגמה יהיה צ'ונינג צ'ן ו Yi'Hsuan Chien, דוקטורנטים מהמעבדה שלי.כדי להתחיל, לשקול 100 גרם של פרופוליס ירוק טייוואני. בעזרת מטחנת תבלינים, טוחנים את הפרופוליס ומוודאים שהחתיכות טחונות לאבקה דקה ללא חלקיקים גדולים. מניחים חמישה בקבוקונים ומוסיפים 100 מיליליטר של ריכוזים שונים של אתנול במים לכל אחד מהם.מערבבים 10 גרם של פרופוליס הקרקע לתוך פתרון אתנול בכל בקבוק, ו דגירה ב 25 מעלות צלזיוס עם רועד ב 250 סל"ד במשך 48 שעות. לאחר מכן, השתמש בנייר סינון עם גודל נקבובית 25 מיקרומטר כדי לסנן את תמציות האתנול. באמצעות בקבוקון נפחי, מחדש את filtrates לנפח המקורי שלהם של 100 מיליליטר עם 95%אתנול.לאחסן את התמציות מחדש במינוס 20 מעלות צלזיוס עד מוכן לשימוש. כאשר מוכן להכין את התמציות עבור HPLC, להשתמש אידוי ואקום לרכז 10 מיליליטר של כל תמצית ב 40 מעלות צלזיוס במשך 10 דקות. אופים את החומר היבש ב 45 מעלות צלזיוס במשך 24 שעות.לאחר מכן, מחדש כל מדגם של חומר יבש עם 10 מיליליטר של 95% אתנול. באמצעות מסנן מזרק עם גודל נקבובית 0.22 מיקרומטר, לסנן מחדש כל תמצית ולאסוף את הסינון לניתוח ישיר עם HPLC. כדי להתחיל בהקמת עקומה סטנדרטית, הכינו ליטר אחד של מתנול השלב הנייד לפתרון מים ביחס של 88.8 עד 11.2.באמצעות פתרון הפאזה הנייד כממס, הכן דילול סדרתי של הריכוזים הסטנדרטיים של הפרופולין כמתואר בפרוטוקול הטקסט. הזרק 20 מיקרוליטרים של כל ריכוז סטנדרטי לעמודי הפאזה ההפוכים ברצף מהריכוז הנמוך ביותר לגבוה ביותר. לאחר מכן, הגדר את עמודת HPLC ל- 30 מעלות צלזיוס, הגדר את אורך ההיוותר של גלאי ה- UV ל- 280 ננומטר, ואת קצב הזרימה למיליליטר אחד לדקה, ואת זמן המקליט ל- 20 דקות.לנתח את הסטנדרטים לפחות שלוש פעמים. לאחר מכן, השתמש בתוכנת גליון חישוב כדי לחבר את תגובת המדידה כנגד הריכוז וכתוצאה מכך עקומה סטנדרטית עם משוואה נחושה וערך R בריבוע. כדי להתחיל לנתח את התמציות, להזריק 20 microliters של כל תמצית לתוך עמודת הפאזה ההפוכה.הגדר את עמודת HPLC לטמפרטורה של 30 מעלות צלזיוס וקצב זרימה של מיליליטר לדקה. הגדר את אורך ה-UV של גלאי ה-UV ל-280 ננומטר, ואת זמן המקליט ל-20 דקות. לנתח את התמציות לפחות שלוש פעמים.לאחר מכן, להשתמש בעקומה הסטנדרטית כדי לקבוע את הריכוז של פרופולין בכל תמצית אתנול. לאחר הכנת אורגניזמים הבדיקה ותמציות אתנול, להוסיף 10 microliters של תמצית אתנול מדולל, החל 0.156 כדי 640 מיקרוגרם למיליליטר לתוך הבאר של צלחת 96 גם. השתמש במרק כדי לכוונן את עוצמת הקול בכל באר ל-100 מיקרוליטרים כדי לשמור על 5%DMSO בכל הדילולים.לאחר מכן, לחסן 100 microliters של תרבות חיידקית לתוך כל באר של צלחת 96 היטב. תרבות ב 37 מעלות צלזיוס במשך 48 שעות. השתמש בקורא מיקרופלסטיק ב 590 ננומטר כדי לנתח את הצמיחה החיידקית על פי מערבולת ולקבוע את הריכוז המעכב המינימלי.לאחר מכן, לחסן 10 microliters של תרבות נוזלית מכל באר שהפגינו לצמיחה על צלחת אגר. דגירה ב 37 מעלות צלזיוס במשך 24 שעות. זהה את הריכוז הנמוך ביותר שלא חשף צמיחה חיידקית נראית לעין כדי לקבוע את פעילות החיידקים.הריכוז שחיסל לחלוטין את צמיחת התאים נחשב לריכוז החיידקים המינימלי. במחקר זה, פרופוליס ירוק טייוואני מופק עם אתנול. תפוקת החומר היבש נראית הגבוהה ביותר כאשר נעשה שימוש בריכוז גבוה של אתנול, והנמוך ביותר כאשר נעשה שימוש במים.תוצאות אלה מצביעות על כך ממס אורגני מבצע בצורה הטובה ביותר במהלך מיצוי זה, כי התשואה קשורה באופן חיובי עם ריכוז אתנול. כמו כן, נראה כי ריכוז הפרופולנים קשור באופן חיובי לריכוז האתנול במהלך החילוץ, כאשר התשואה הגבוהה ביותר של פרופולנים מתקבלת בתמציות האתנול 95%ו-99.5%. ההשפעות האנטיבקטריאליות של תמציות האתנול נגד Aureus S ו- E coli נחקרים לאחר מכן.הריכוז המעכב המינימלי הממוצע עבור S aureus הוא נראה בין 10 ל 20 מיקרוגרם למיליליטר ואת הריכוז החיידקי הממוצע הוא נראה 20 מיקרוגרם למיליליטר. תמציות מים, עם זאת, לא היה כל השפעה אנטיבקטריאלית נגד S aureus. אין השפעה אנטיבקטריאלית נצפתה עבור E coli בעת שימוש או תמציות מים או אתנול.אחד ההליך הניסיוני העיקרי הוא היסחפות האחידות של פרופוליס ירוק טייוואני במהלך שחיקה.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Thermostabilization, Expression, Purification, and Crystallization of the Human Serotonin Transporter Bound to S-citalopram

Thermostabilization, Expression, Purification, and Crystallization of the Human Serotonin Transporter Bound to S-citalopram

Thermostabilization, ביטוי, טיהור, התגבשות של Transporter סרוטונין האדם Bound כדי<em&gt; S</em&gt; -citalopram

The serotonin transporter is a sodium and chloride-coupled transporter that &#34;pumps&#34; extracellular serotonin into cells. S-citalopram is a drug ...

A Simple Fractionated Extraction Method for the Comprehensive Analysis of Metabolites, Lipids, and Proteins from a Single Sample

שיטה פשוטה הפיצול מופץ לניתוח מקיף של מטבוליטים, שומנים וחלבונים מדגם יחיד

Understanding of complex biological systems requires the measurement, analysis and integration of multiple compound classes of the living cell, usually ...

Characterization of Membrane Transporters by Heterologous Expression in E. coli and Production of Membrane Vesicles

Characterization of Membrane Transporters by Heterologous Expression in E. coli and Production of Membrane Vesicles

אפיון מובילי הממברנה על ידי ביטוי הטרוולוגי ב -E. coli וייצור ממברנה ושלפוחיות

Several methods have been developed to functionally characterize novel membrane transporters. Polyamines are ubiquitous in all organisms, but polyamine ...

Assessment of Cellular Oxidation using a Subcellular Compartment-Specific Redox-Sensitive Green Fluorescent Protein

הערכה של חמצון הסלולר באמצעות מערכת משנית ספציפי לחמצון-רגיש ירוק פלורסנט ירוקה

Measuring the intracellular oxidation/reduction balance provides an overview of the physiological and/or pathophysiological redox status of an organism. ...

Rapid and Cost-Effective RNA Extraction of Rat Pancreatic Tissue

מיצוי RNA מהיר וחסכוני של רקמת הלבלב חולדה

Regardless of the extraction method, optimized RNA extraction of tissues and cell lines are carried out in four stages: 1) homogenization, 2) effective ...

Ganglioside Extraction, Purification and Profiling

מיצוי גנגליוסייד, טיהור ופרופיל

Gangliosides are glycosphingolipids that contain one or more sialic acid residues. They are found on all vertebrate cells and tissues but are especially ...

The Extraction of Liver Glycogen Molecules for Glycogen Structure Determination

Liver glycogen is a hyperbranched glucose polymer that is involved in the maintenance of blood sugar levels in animals. The properties of glycogen are ...

Extraction and Purification of FAHD1 Protein from Swine Kidney and Mouse Liver

מיצוי וטיהור של חלבון FAHD1 מכבד כליות ועכבר חזירים

Fumarylacetoacetate hydrolase domain-containing protein 1 (FAHD1) is the first identified member of the FAH superfamily in eukaryotes, acting as ...

Routine Collection of High-Resolution cryo-EM Datasets Using 200 KV Transmission Electron Microscope

איסוף שגרתי של מערכי נתונים cryo-EM ברזולוציה גבוהה באמצעות מיקרוסקופ אלקטרונים של 200 KV

Cryo-electron microscopy (cryo-EM) has been established as a routine method for protein structure determination during the past decade, taking an ...

A Nanobar-Supported Lipid Bilayer System for the Study of Membrane Curvature Sensing Proteins in vitro

A Nanobar-Supported Lipid Bilayer System for the Study of Membrane Curvature Sensing Proteins in vitro

מערכת דו-שכבתית של שומנים נתמכת ננו-בר לחקר חלבונים קולטי עקמומיות ממברנה במבחנה

Membrane curvature plays important roles&#160;in various essential processes of cells, such as cell migration, cell division, and vesicle trafficking. It ...