Name: using enhanced green fluorescence protein-expressing escherichia coli to assess mouse peritoneal macrophage phagocytosis
Uploaded: 2019-01-04T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Using Enhanced Green Fluorescence Protein-expressing Escherichia Coli to Assess Mouse Peritoneal Macrophage Phagocytosis at JoVE.com

Den National Natural Science Foundation of China (nr. 31800046) og Natural Science Foundation i Liaoning provinsen (no. 20170540262) støttet dette arbejde. Dette arbejde blev udført i laboratorierne i videnskabelig Research Center på det andet Hospital i Dalian medicinske universitet. Forfatterne vil gerne takke Xiao-Lin Sang for hendes hjælp med flowcytometri, og Bo Qu og Dong-Chuan Yang for deres hjælp i at producere video.

Alle procedurer blev udført under de nationale institutter sundhed retningslinjer for pleje og brugen af forsøgsdyr, og protokollerne, der blev godkendt ved Animal Care og brug Udvalget af Dalian medicinske universitet. Seksten-måned-forhenværende (med en kropsvægt på 30-35 g) og otte uger gamle (20-25 g) SPF (specifikke-patogen-fri) mandlige C57BL/6 mus blev indhentet fra SPF dyr midt i Dalian medicinske universitet. Alle mus blev holdt i dyr bolig med adgang til mad og vand ad libitum. Temperaturen blev ...

<ol>
	<li>Layoun, A., Samba, M., Santos, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+murine+peritoneal+macrophages+to+carry+out+gene+expression+analysis+upon+Toll-like+receptors+stimulation.">Isolation of murine peritoneal macrophages to carry out gene expression analysis upon Toll-like receptors stimulation.</a> Journal of Visualized Experiments. 98, e52749 (2015).</li><li>Iskander, K. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sepsis:+multiple+abnormalities,+heterogeneous+responses,+and+evolving+understanding.">Sepsis: multiple abnormalities, heterogeneous responses, and evolving understanding.</a> Physiological Reviews. 93 (3), 1247-1288 (2013).</li><li>Girard, T. D., Opal, S. M., Ely, E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insights+into+severe+sepsis+in+older+patients:+from+epidemiology+to+evidence-based+management.">Insights into severe sepsis in older patients: from epidemiology to evidence-based management.</a> Clinical Infectious Diseases. 40 (5), 719-727 (2005).</li><li>Bicker, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+assay+to+measure+phagocytosis+of+live+bacteria.">A simple assay to measure phagocytosis of live bacteria.</a> Clinical Chemistry. 54 (5), 911-915 (2008).</li><li>Zhou, M. Y., Gomez-Sanchez, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Universal+TA+cloning.">Universal TA cloning.</a> Current Issues in Molecular Biology. 2 (1), 1-7 (2000).</li><li>Chen, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Triggering+receptor+expressed+on+myeloid+cells-2+protects+against+polymicrobial+sepsis+by+enhancing+bacterial+clearance.">Triggering receptor expressed on myeloid cells-2 protects against polymicrobial sepsis by enhancing bacterial clearance.</a> American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 188 (2), 201-212 (2013).</li><li>Lamberti, G., de Araujo, M. E., Huber, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+Macrophage+Early+and+Late+Endosomes+by+Latex+Bead+Internalization+and+Density+Gradient+Centrifugation.">Isolation of Macrophage Early and Late Endosomes by Latex Bead Internalization and Density Gradient Centrifugation.</a> Cold Spring Harbor Protocols. (12), (2015).</li><li>Miksa, M., Komura, H., Wu, R., Shah, K. G., Wang, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+method+to+determine+the+engulfment+of+apoptotic+cells+by+macrophages+using+pHrodo+succinimidyl+ester.">A novel method to determine the engulfment of apoptotic cells by macrophages using pHrodo succinimidyl ester.</a> Journal of Immunological Methods. 342 (1-2), 71-77 (2009).</li><li>Weingart, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+labels+influence+phagocytosis+of+Bordetella+pertussis+by+human+neutrophils.">Fluorescent labels influence phagocytosis of Bordetella pertussis by human neutrophils.</a> Infection and Immunity. 67 (8), 4264-4267 (1999).</li><li>Neaga, A., Lefor, J., Lich, K. E., Liparoto, S. F., Xiao, Y. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+validation+of+a+flow+cytometric+method+to+evaluate+phagocytosis+of+pHrodo+BioParticles(R)+by+granulocytes+in+multiple+species.">Development and validation of a flow cytometric method to evaluate phagocytosis of pHrodo BioParticles(R) by granulocytes in multiple species.</a> Journal of Immunological Methods. 390 (1-2), 9-17 (2013).</li><li>Ninkovic, J., Roy, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+throughput+fluorometric+technique+for+assessment+of+macrophage+phagocytosis+and+actin+polymerization.">High throughput fluorometric technique for assessment of macrophage phagocytosis and actin polymerization.</a> Journal of Visualized Experiments. (93), e52195 (2014).</li></ol>

Trinene i denne protokol er ganske enkel og ligetil. Et af de vigtige skridt er at fremkalde EGFP udtryk på E. coli. Normalt, når et gen fra eukaryoter, som EGFP, er planlagt til at udtrykke i prokaryoter som E. coli, er der en risiko at proteinet vil danne inaktive aggregater (inklusion organer), som ændrer proteinets indfødte struktur og aktivitet. Ved hjælp af pET-SUMO vektor og konstruere pET-SUMO-EGFP plasmid, EGFP-SUMO fusion protein udtrykt med succes, og den lyssignal var stærk nok til at ...

Makrofag fagocytose assays bruges ofte til at studere det medfødte immunforsvar. Det medfødte immunforsvar kan indikere modtagelighed for infektion. Makrofag cellelinjer er meget udbredt i immunologi undersøgelser. Men den udvidede passage kan medføre tab af genet og kompromitteret immun funktioner i disse cellelinjer. De primære peritoneal makrofager er derfor det ideelle objekt i at studere celle funktion1.
Selv om den medfødte immunforsvar var menes at være intakt i alderen kroppen, kan fagocyterende evnen falde i forhold til, at i den yngre krop2,3. Her vil vi vise en metode til at vurdere fagocytose af peritoneal makrofager fra young (otte uger gamle) og alderen (16-måned-forhenværende) mus ved hjælp af EGFP-udtrykker E. coli, som er nem, hurtig og økonomisk gennemførlig.
Brug af en EGFP-udtrykker E. coli -stamme er en af fordelene ved denne analyse, fordi disse bakterier er stabil og vise en stærk fluorescens signal, selv efter makrofager fastsættes ved 4% (w/v) PARAFORMALDEHYD. Derudover ved hjælp af de EGFP udtryk for E. coli, forskerne behøver ikke yderligere farvning efter fagocytose, hvilket sparer tid. Makrofager er desuden immunoresponsive for E. coli overflade antigen, hvilket gør E. coli mere velegnet til fagocytose assay end ved hjælp af EGFP-udtrykker svampe eller fluorescein-mærket perler.
Med EGFP-udtrykker E. coli, kan en fagocytose assay nemt udført i 2 h og målt af begge flow flowcytometri og Fluorescens mikroskopi, afhængigt af forskerens formål. Da denne metode måler direkte fagocyterende evne, er resultaterne mere reproducerbare end andre indirekte metoder.
Denne metode er også blevet valideret i en RAW264.7 cellelinje og humant perifert blod mononukleære celler4. Nedenstående tekst giver detaljerede trinvise instruktioner til at udføre denne analyse og fremhæver de kritiske faser, som forskerne kan ændre for at opfylde behovene hos deres eksperimenter.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:886px;" width="887">
	<tbody>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:417px;">BD FACSCanto II Flow cytometer</td>
			<td style="width:176px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:123px;">-</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:417px;">Biotin anti-mouse CD16/32 Antibody</td>
			<td style="width:176px;">Biolegend</td>
			<td style="width:123px;">Cat101303</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:417px;">Champion pET SUMO Protein Expression system</td>
			<td style="width:176px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:123px;">K300-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:417px;">Custom Gene Synthesis Service</td>
			<td style="width:176px;">Takara Biotech.</td>
			<td style="width:123px;">-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:417px;">DAPI(4&#39;,6-Diamidino-2-Phenylindole, Dihydrochloride)</td>
			<td style="width:176px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:123px;">D1306</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:417px;">F4/80-PE anti-mouse antibody for FACS</td>
			<td style="width:176px;">Biolegend</td>
			<td style="width:123px;">Cat123110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:417px;">Leica DMI3000 B&#160; Inverted Microscope</td>
			<td style="width:176px;">Leica Microsystems</td>
			<td style="width:123px;">-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:417px;">PE Rat IgG2a, &#954;-isotype control</td>
			<td style="width:176px;">Biolegend</td>
			<td style="width:123px;">Cat400507</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:417px;">Phalloidin 633 fluorescence dye conjugated working solution</td>
			<td style="width:176px;">AAT Bioquest</td>
			<td style="width:123px;">Cat23125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:417px;">Thioglycollate medium</td>
			<td style="width:176px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:123px;">T9032</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

using enhanced green fluorescence protein-expressing escherichia coli to assess mouse peritoneal macrophage phagocytosis

Dette manuskript beskriver en simpel og reproducerbar metode for at udføre en fagocytose assay. Den første del af denne metode indebærer etablering af en pET-SUMO-EGFP vektor (SUMO = lille ubiquitin-lignende modifier) og give udtryk for forbedret grønne fluorescens protein (EGFP) i Escherichia coli (BL21DE). EGFP-udtrykker E. coli er coincubated med makrofager i 1 timer ved 37 ° C; negativ kontrolgruppen er udruget på is i den samme mængde tid. Makrofager er klar til vurdering. Fordelene ved denne teknik omfatter dens enkel og ligetil trin, og fagocytose kan måles ved begge flow forskellige og fluorescens mikroskop. EGFP-udtrykker E. coli er stabil og vise en stærk fluorescens signal, selv efter makrofager er rettet med PARAFORMALDEHYD. Denne metode er ikke kun egnet til vurdering af makrofag cellelinjer eller primære makrofager in vitro- men også egnet til evaluering af granulocyt og monocyt fagocytose i perifert blod mononukleære celler. Resultaterne viser, at peritoneal makrofager fra unge (otte uger gamle) mus fagocyterende kapacitet er større end makrofager fra alderen (16-måned-forhenværende) mus. I Resumé, denne metode måler makrofag fagocytose og er velegnet til at studere funktionen medfødte immunsystem.

PET-SUMO vektor udnytter en lille ubiquitin-lignende modifier for at give udtryk for native proteiner i E. coli. SUMO fusion kan markant forbedre EGFP opløselighed, gør det muligt at blive opdaget nemt. Hvis EGFP udtrykket er med held induceret af laktose, kan grønne kolonier observeres i mørke (figur 1A). Grønne prikker, som repræsenterer den EGFP giver udtryk for E. coli, kan overholdes under et fluorescens mikroskop ved hjælp af en...

Watch this Scientific Journal Video about Using Enhanced Green Fluorescence Protein-expressing Escherichia Coli to Assess Mouse Peritoneal Macrophage Phagocytosis at JoVE.com

Using Enhanced Green Fluorescence Protein-expressing Escherichia Coli to Assess Mouse Peritoneal Macrophage Phagocytosis

Ved hjælp af forbedret grønne fluorescens Protein-udtryk for Escherichia Coli at vurdere musen Peritoneal makrofag fagocytose

Vi præsenterer her, en protokol for at vurdere musen peritoneal makrofag fagocytose ved hjælp af forbedrede grønne fluorescens protein-udtrykker Escherichia coli.

This manuscript describes a simple and reproducible method to perform a phagocytosis assay. The first part of this method involves building a ...

Denne protokol viste en enkel og producible metode til at vurdere fagocytose evne makrofager ved hjælp af EGFP-udtryk Escherichia coli. Hej, mit navn er Jun-Yu fra The Second Hospital of Dalian Medical University. I dag vil vi vise dig en nem og visualisere den måde at vurdere makrofag fagocytose, som let kan gøres inden for to timer.Denne metode blev meget anvendt i studiet af den medfødte immunfunktion. Det menes, at medfødte immunfunktion forblev intakt hos ældre. Så i dag vil vi isolere de peritoneale makrofager fra de gamle og unge mus og se disse to gruppers fagocytiske evner.Lad os komme i gang. For det første syntetisere EGFP-genfragmentet og klon fragmentet ved hjælp af high-fidelity Taq DNA polymerase. Du skal derefter lasere PCR-produktet i pET SUMO-vektoren.For det tredje omdanne ligationsprodukterne til E.coli-stammen og fremkalde EGFP, der udtrykker sig med laktose. Disse EGFP-udtryk E.coli tjente som markør for fagocytose assay. Dernæst blev en mus bughinde makrofager isoleret og dyrket.Derefter blev EGFP-udtryk E.coli coincubated med makrofager i en time ved 37 grader centigrees. Efter quenching trin, makrofagerne var klar til vurdering af både fluorescens mikroskop og flow cytometer. Syntetisere EGFP-genfragmentet og forstærke fragmentet med en fremad- og bakprimer ved hjælp af high-fidelity Taq DNA polymerase.For at sikre, at PCR-produkterne havde enkelt tre-end adenin udhæng til TA kloning i næste trin, anbefales en 30-minutters forlængelse ved 72 grader centigrees efter den sidste cyklus. Kontroller PCR-produktet ved agarosegelelektroforese. Hvis fragmentet blev forstærket korrekt, kan der observeres et 717 bp-bånd på gelen.Klon PCR-produktet i pET SUMO-vektoren ved hjælp af TA-kloningsmetoden med T4 DNA-ligase. Inkuber reaktionen ved stuetemperatur i 30 minutter. Der tilsættes fem mikroliter PCR-produkt til 100 mikroliter af BL21 kompetente celler.Varme chok cellerne ved 42 grader centigrees i 90 sekunder, derefter holde blandingen på is i tre minutter. Tilføj 400 mikroliter LB medium, forvarmet ved 37 grader centigrees. Ryster en time ved 37 grader centigrees og 120 rpm.Inokuler bakterierne på overfladen af LB plade med 100 mikrogram per milliliter kanamycin at screene vektor-forvandlet E.coli. Inkuber pladen i 37 grader centigrees ovnen natten over. Den næste dag, vaccinere en positiv koloni i fem milliliter LB medier med 100 mikrogram per milliliter kanamycin.Inkuberes i 37 graders centigrees rystende inkubator ved 120 rpm i to timer. Derefter tilsættes inducer laktose til en endelig koncentration på 0,5 millimole per liter og fortsætte med at ryste seks timer, inducere EGFP udtryk. Empirisk, når du ryster seks timer, kan OD600 nå 0,7 eller højere.Endelig ved hjælp af fluorescensmikroskop til at kontrollere omfanget af EGFP-udtryk. Tilføj 10 mikroliter af bakteriekulturmediet til et dias. Derefter dække med et dæksel slip.Undersøg ekspressionen af EGF under fluorescensmikroskopet. Der tilsættes 3,5 gram thioglycollat til 100 milliliter destilleret vand. Steriliser i autoklave før brug.Aspirer thioglycollatmediet ind i en milliliter steril sprøjte i emhætten. En mus pr. sprøjte for at undgå infektionen. Indsprøjt en milliliter 3,5% thioglycollat medium i musen bughulen ved hjælp af en 23-gauge nål og vedligeholde musen med vand og mad ad libitum i tre dage.Efter tre dage, aflive musen ved cervikal dislokation efter hurtigt inducerende anæstesi ved sevofluran i en lukket kasse. Derefter sætte musen i en skål med 75% ethanol til steril og overføre i hætten hurtigt. Placer musen på pladen og pin den forreste pote på brættet for at fastsætte musen position.Brug en fem millilitersprøjte med en 20-gauge nål, injicere fem milliliter kold PBS i underlivet ind i musens bughulen, undgå at punktere tarmen. Udfør en blid massage på to sider af musens mave. Derefter aspirere abdominalvæsken forsigtigt og langsomt.Peritonealvæsken afgørs i et centrifugerør med 50 milliliter. Gentag disse trin to eller tre gange. Centrifuge de suspenderede celler i 10 minutter ved 400 g i fire til otte centigrade.Supernatanten kasseres, og cellepelleten skal resuspeneres i RPMI 1640-medium med 10 % føtalt kvægserum. Tilføj fem millioner celler i hver brønd af de seks-brønd plade for flow cytometri assay og 500, 000 celler pr godt ind i en 24-brønd plade for fluorescens mikroskop. Kultur cellerne ved 37 grader centigrees i en 5% kuldioxid inkubator natten over.Kulturmediet kan opdateres efter tre timer for at fjerne ikke-vedhæftige celler, fordi de fleste af disse var lymfocytter. Overhold cellerne under et lyst feltmikroskop for at evaluere cellernes levedygtighed og celletætheden. Det billede, der vises her, var i normal tilstand af den primære celle.Normalt var makrofagcelletætheden ikke høj, fordi en stor del af bughindecellerne var lymfocytter. Fjern kulturmediet fra 24-brøndspladen. Tilføj 100 mikroliter frisk kultur medium og 10 mikroliter af bakteriel medium.Derefter inkuberes pladen ved 37 grader centigrees i en 5% kuldioxid inkubator i en time. Vask forsigtigt med 500 mikroliter kold PBS pr. brønd tre til fem gange for at vaske ikke-internaliserede bakterier ud. Inkuber cellerne med 4% formaldehyd i PBS ved stuetemperatur i 30 minutter.Cellerne vaskes med PBS tre gange. Tilføj falloidin 633 konjugat arbejder løsning til pletten F-actin. Opbevares på et mørkt, fugtigt sted ved stuetemperatur i 60 minutter.Tilføj DAPI arbejdsløsning til at plette cellen nukleare og inkubere i fem minutter i et mørkt sted ved stuetemperatur. Skyl én gang med PBS og én gang med samme volumen i destilleret vand. EGFP-udtryk E.coli vises i grøn tjente som markør for fagocytose.For at minimere eksperimentelle fejl og foretage en korrekt fortolkning af resultaterne skal du angive grupper og kontrolrør til forsøget som anført i tabel 2. For den kontrolgruppe, der placeres på isen, fjernes mediet fra den sekse brøndplade og vaskes med PBS én gang. Derefter tilsættes 70 millimol per liter kold EDTA en milliliter i brønden for at løsne cellerne og overføre i flow cytometri røret.Tilsæt 50 mikroliter bakteriel suspension i røret og læg den på isen i en time. For de andre grupper skal du fjerne kulturmediet, tilføje et milliliter frisk medium i hver brønd. Tilføj 50 mikroliter af bakterier suspension i brøndene i henhold til gruppen indstilling som beskrevet i tabel to.Derefter placere seks-brønd plade i 37 graders centigrees 5% kuldioxid inkubator i en time. At slukke fluorescens af ikke-internaliseret E.coli, tilsæt 200 mikroliter af 0,8% krystal violet vand opløsning i brønden og svaje kort tid. Dette trin havde til formål at undgå falsk positivt resultat af EGFP E.coli bindende til overfladen af makrofagerne, men ikke internaliseret.Cellerne vaskes med PBS tre gange for at fjerne eventuel resterende krystalviolet. Derefter tilsættes 70 millimol per liter kold EDTA en milliliter i brønden for at løsne cellerne og overføre i flow cytometri røret. Centrifuge rørene 2, 000 rpm fem minutter og kassér supernatant.Tilsæt 100 mikroliter PBS for at resuspendre cellerne. Der tilsættes fem mikroliter F4 ATP konjugeret antistof i rørene eller isotypen i henhold til gruppeindstillingen. Vortex kort og inkubere prøverne på is i fem til 10 minutter i mørke.Der tilsættes en milliliter PBS i hvert rør og centrifuge 2.000 omdr./min. fem minutter. Kassér supernatanten. Opslæmning af cellepillerne med 200 til 300 mikroliter PBS til flowcytometrianalyse.Kør hvert rør og erhverve data for mindst 10, 000 tilfælde af F4/80-positive celler. Her er fluorescens billeder af bughinde makrofager fra de unge og ældre grupper. Den røde fluorescens repræsenterer F-actin.Den grønne repræsenterer EGFP-udtryk E.coli, og den blå repræsenterer kerne plettet af DAPI. Disse billeder tyder på, at makrofager fra den unge mus havde en stærkere fagocytiske evner end dem fra den gamle mus. F4/80-positive og EGFP-positive celler indikerede makrofagernes fagocytiske evne.Disse resultater er i overensstemmelse med tendensen til fluorescens mikroskop resultater. Selv om antallet af medfødte immunceller kan bevares i alderen mus, faldt den fagocytiske evne betydeligt i forhold til den unge mus. Mange metoder er blevet anvendt til at vurdere makrofag fagocytose.Her demonstrerer vi en forbedret metode, som er praktisk, hurtig og økonomisk gennemførlig. Med EGFP-udtryk E.coli, en fagocytose assay kan let udføres og måles ved både flow cytometer og fluorescerende mikroskop i henhold til forskerens foretrækker. Også denne metode direkte måler den fagocytiske evne.Resultaterne er mere reproducerbare end andre indirekte metoder.

Research

Education

JoVE Journal

JoVE Core

Cell Biology

Immunology and Infection

Using Enhanced Green Fluorescence Protein-expressing Escherichia Coli to Assess Mouse Peritoneal Macrophage Phagocytosis

Unit 1

Endocytosis and Exocytosis

SCIENTISTS IN ACTION

Isolation of Mouse Peritoneal Cavity Cells

The peritoneal cavity is a membrane-bound and fluid-filled abdominal cavity of mammals, which contains the liver, spleen, most of the gastro-intestinal ...

Non-Invasive Model of Neuropathogenic Escherichia coli Infection in the Neonatal Rat

Non-Invasive Model of Neuropathogenic Escherichia coli Infection in the Neonatal Rat

Non-invasive Model of Neuropathogenic<em&gt; Escherichia coli</em&gt; Infektion i Neonatal Rat

Investigation of the interactions between animal host and bacterial pathogen is only meaningful if the infection model employed replicates the principal ...

High Throughput Fluorometric Technique for Assessment of Macrophage Phagocytosis and Actin Polymerization

High Throughput Fluorometrisk Teknik for Vurdering af makrofag Fagocytose og actinpolymerisation

The goal of fluorometric analysis is to serve as an efficient, cost effective, high throughput method of analyzing phagocytosis and other cellular ...

Macrophage Cholesterol Depletion and Its Effect on the Phagocytosis of Cryptococcus neoformans

Macrophage Cholesterol Depletion and Its Effect on the Phagocytosis of Cryptococcus neoformans

Makrofag Kolesterol Udtømmelse og dens indflydelse på fagocytose af<em&gt; Cryptococcus neoformans</em

Cryptococcosis is a life-threatening infection caused by pathogenic fungi of the genus Cryptococcus. Infection occurs upon inhalation of spores, which are ...

One-step Negative Chromatographic Purification of Helicobacter pylori Neutrophil-activating Protein Overexpressed in Escherichia coli in Batch Mode

One-step Negative Chromatographic Purification of Helicobacter pylori Neutrophil-activating Protein Overexpressed in Escherichia coli in Batch Mode

Et-trins Negativ kromatografisk oprensning af<em&gt; Helicobacter pylori</em&gt; Neutrofilaktiverende protein overudtrykt i<em&gt; Escherichia coli</em&gt; I Batch Mode

Helicobacter pylori neutrophil-activating protein (HP-NAP) is a major virulence factor of Helicobacter pylori (H. pylori). It plays a critical role in H. ...

Creation of a Dense Transposon Insertion Library Using Bacterial Conjugation in Enterobacterial Strains Such As Escherichia Coli or Shigella flexneri

Creation of a Dense Transposon Insertion Library Using Bacterial Conjugation in Enterobacterial Strains Such As Escherichia Coli or Shigella flexneri

Oprettelsen af en tætte Transposon indsættelse bibliotek ved hjælp af bakteriel konjugation i Enterobacterial stammer som Escherichia Coli eller Shigella flexneri

Transposon mutagenesis is a method that allows gene disruption via the random genomic insertion of a piece of DNA called a transposon. The protocol below ...

Overexpression and Purification of Human Cis-prenyltransferase in Escherichia coli

Overexpression and Purification of Human Cis-prenyltransferase in Escherichia coli

Overekspression og oprensning af mennesket<em&gt; Cis</em&gt; -prenyltransferase i<em&gt; Escherichia coli</em

Prenyltransferases (PT) are a group of enzymes that catalyze chain elongation of allylic diphosphate using isopentenyl diphosphate (IPP) via multiple ...

Visualizing Macrophage Extracellular Traps Using Confocal Microscopy

Visualisere makrofag ekstracellulære fælder ved hjælp af konfokalmikroskopi

A primary method used to define the presence of neutrophil extracellular traps (NETs) is confocal microscopy. We have modified established confocal ...

Assessment of Antibody-based Drugs Effects on Murine Bone Marrow and Peritoneal Macrophage Activation

Vurdering af antistof-baserede lægemidler virkninger på Murine knoglemarven og Peritoneal makrofag aktivering

Macrophages are phagocytic innate immune cells, which initiate immune responses to pathogens and contribute to healing and tissue restitution. Macrophages ...

A Facile Protocol to Generate Site-Specifically Acetylated Proteins in Escherichia Coli

A Facile Protocol to Generate Site-Specifically Acetylated Proteins in Escherichia Coli

En letkøbt protokol til at generere Site-Specifically acetyleret proteiner i Escherichia Coli

Post-translational modifications that occur at specific positions of proteins have been shown to play important roles in a variety of cellular processes. ...