Name: using enhanced green fluorescence protein-expressing escherichia coli to assess mouse peritoneal macrophage phagocytosis
Uploaded: 2019-01-04T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Using Enhanced Green Fluorescence Protein-expressing Escherichia Coli to Assess Mouse Peritoneal Macrophage Phagocytosis at JoVE.com

La Fondation nationale des sciences naturelles de Chine (no 31800046) et la Fondation sciences naturelles de la Province de Liaoning (no 20170540262) prise en charge de ce travail. Ce travail a été accompli dans les laboratoires du centre de recherche scientifique à l’Université deuxième hôpital de Dalian Medical. Les auteurs aimeraient remercier Xiao-Lin Sang pour son aide avec la cytométrie en flux, ainsi Bo Qu et Dong-Chuan Yang pour leur aide dans la production de la vidéo.

Toutes les procédures ont été effectuées en vertu de la National Institutes of Health Guidelines pour le soin et l’utilisation des animaux de laboratoire, et les protocoles ont été approuvées par le Comité emploi de Dalian Medical University et animalier. Seize mois (avec un poids de 30-35 g) et huit semaines (20-25 g) SPF (spécifique-exempts de micro-organismes pathogènes) C57BL/6 des souris mâles ont été obtenues du centre animaux SPF de l’université médicale de Dalian. Toutes les souris étaient gar...

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	<li>Layoun, A., Samba, M., Santos, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+murine+peritoneal+macrophages+to+carry+out+gene+expression+analysis+upon+Toll-like+receptors+stimulation.">Isolation of murine peritoneal macrophages to carry out gene expression analysis upon Toll-like receptors stimulation.</a> Journal of Visualized Experiments. 98, e52749 (2015).</li><li>Iskander, K. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sepsis:+multiple+abnormalities,+heterogeneous+responses,+and+evolving+understanding.">Sepsis: multiple abnormalities, heterogeneous responses, and evolving understanding.</a> Physiological Reviews. 93 (3), 1247-1288 (2013).</li><li>Girard, T. D., Opal, S. M., Ely, E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insights+into+severe+sepsis+in+older+patients:+from+epidemiology+to+evidence-based+management.">Insights into severe sepsis in older patients: from epidemiology to evidence-based management.</a> Clinical Infectious Diseases. 40 (5), 719-727 (2005).</li><li>Bicker, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+assay+to+measure+phagocytosis+of+live+bacteria.">A simple assay to measure phagocytosis of live bacteria.</a> Clinical Chemistry. 54 (5), 911-915 (2008).</li><li>Zhou, M. Y., Gomez-Sanchez, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Universal+TA+cloning.">Universal TA cloning.</a> Current Issues in Molecular Biology. 2 (1), 1-7 (2000).</li><li>Chen, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Triggering+receptor+expressed+on+myeloid+cells-2+protects+against+polymicrobial+sepsis+by+enhancing+bacterial+clearance.">Triggering receptor expressed on myeloid cells-2 protects against polymicrobial sepsis by enhancing bacterial clearance.</a> American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 188 (2), 201-212 (2013).</li><li>Lamberti, G., de Araujo, M. E., Huber, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+Macrophage+Early+and+Late+Endosomes+by+Latex+Bead+Internalization+and+Density+Gradient+Centrifugation.">Isolation of Macrophage Early and Late Endosomes by Latex Bead Internalization and Density Gradient Centrifugation.</a> Cold Spring Harbor Protocols. (12), (2015).</li><li>Miksa, M., Komura, H., Wu, R., Shah, K. G., Wang, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+method+to+determine+the+engulfment+of+apoptotic+cells+by+macrophages+using+pHrodo+succinimidyl+ester.">A novel method to determine the engulfment of apoptotic cells by macrophages using pHrodo succinimidyl ester.</a> Journal of Immunological Methods. 342 (1-2), 71-77 (2009).</li><li>Weingart, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+labels+influence+phagocytosis+of+Bordetella+pertussis+by+human+neutrophils.">Fluorescent labels influence phagocytosis of Bordetella pertussis by human neutrophils.</a> Infection and Immunity. 67 (8), 4264-4267 (1999).</li><li>Neaga, A., Lefor, J., Lich, K. E., Liparoto, S. F., Xiao, Y. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+validation+of+a+flow+cytometric+method+to+evaluate+phagocytosis+of+pHrodo+BioParticles(R)+by+granulocytes+in+multiple+species.">Development and validation of a flow cytometric method to evaluate phagocytosis of pHrodo BioParticles(R) by granulocytes in multiple species.</a> Journal of Immunological Methods. 390 (1-2), 9-17 (2013).</li><li>Ninkovic, J., Roy, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+throughput+fluorometric+technique+for+assessment+of+macrophage+phagocytosis+and+actin+polymerization.">High throughput fluorometric technique for assessment of macrophage phagocytosis and actin polymerization.</a> Journal of Visualized Experiments. (93), e52195 (2014).</li></ol>

Les étapes décrites dans le présent protocole sont assez simples et clairs. Une des étapes essentielles est d’induire l’expression EGFP sur e. coli. Habituellement, lorsqu’un gène d’eucaryotes, comme EGFP, est prévu d’exprimer chez les procaryotes comme e. coli, il y a un risque que la protéine se forment des agrégats inactifs (corps d’inclusion), qui modifie la structure native et l’activité de la protéine. En utilisant le vecteur animal-SUMO et construire le plasmide de pET-SUM...

Tests de phagocytose des macrophages sont souvent utilisés pour étudier le système immunitaire inné. La réponse immunitaire innée peut indiquer la susceptibilité à l’infection. Lignées de cellules macrophages sont largement utilisées dans les études d’immunologie. Toutefois, le passage prolongé peut causer la perte de gènes et compromis les fonctions immunitaires dans ces lignées de cellules. Ainsi, les macrophages péritonéaux primaires font l’objet idéal permettant d’étudier la fonction des cellules1.
Bien que la réponse immunitaire innée pensait être intacte dans le corps âgé, la capacité phagocytaire peut diminuer par rapport à que dans le jeune corps2,3. Ici, nous allons démontrer une méthode pour évaluer la phagocytose des macrophages péritonéaux d’young (huit semaines) et les personnes âgées (16 mois) souris aide exprimant EGFP e. coli, qui est pratique, rapide et rentable.
L’utilisation d’une souche exprimant EGFP e. coli est un des avantages de ce test, car ces bactéries sont stables et de visualiser un signal de fluorescence forte, même après que les macrophages sont fixés par la paraformaldéhyde à 4 % (p/v). En outre, en utilisant l' exprimant EGFP e. coli, les chercheurs n’ont pas besoin de coloration plus loin après la phagocytose, qui fait gagner du temps. En outre, les macrophages sont immunoresponsive pour l’antigène de surface d’e. coli , ce e. coli davantage adapté pour le dosage de la phagocytose que d’utiliser les champignons exprimant EGFP ou perles marqué à la fluorescéine.
Avec exprimant EGFP e. coli, un dosage de phagocytose peut être facilement réalisé en 2 h et mesuré par les deux microscopie écoulement cytometry et fluorescence, selon le but du chercheur. Étant donné que cette méthode permet de mesurer directement la capacité phagocytaire, les résultats sont plus reproductibles que d’autres méthodes indirectes.
Cette méthode a également été validée dans une lignée de cellules RAW264.7 et des cellules mononucléaires de sang périphérique humain4. Le texte ci-dessous fournit les instructions détaillées pour la réalisation de cet essai et met en évidence les étapes critiques que les chercheurs peuvent modifier pour répondre aux besoins de leurs expériences.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:886px;" width="887">
	<tbody>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:417px;">BD FACSCanto II Flow cytometer</td>
			<td style="width:176px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:123px;">-</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:417px;">Biotin anti-mouse CD16/32 Antibody</td>
			<td style="width:176px;">Biolegend</td>
			<td style="width:123px;">Cat101303</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:417px;">Champion pET SUMO Protein Expression system</td>
			<td style="width:176px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:123px;">K300-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:417px;">Custom Gene Synthesis Service</td>
			<td style="width:176px;">Takara Biotech.</td>
			<td style="width:123px;">-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:417px;">DAPI(4&#39;,6-Diamidino-2-Phenylindole, Dihydrochloride)</td>
			<td style="width:176px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:123px;">D1306</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:417px;">F4/80-PE anti-mouse antibody for FACS</td>
			<td style="width:176px;">Biolegend</td>
			<td style="width:123px;">Cat123110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:417px;">Leica DMI3000 B&#160; Inverted Microscope</td>
			<td style="width:176px;">Leica Microsystems</td>
			<td style="width:123px;">-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:417px;">PE Rat IgG2a, &#954;-isotype control</td>
			<td style="width:176px;">Biolegend</td>
			<td style="width:123px;">Cat400507</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:417px;">Phalloidin 633 fluorescence dye conjugated working solution</td>
			<td style="width:176px;">AAT Bioquest</td>
			<td style="width:123px;">Cat23125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:417px;">Thioglycollate medium</td>
			<td style="width:176px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:123px;">T9032</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

using enhanced green fluorescence protein-expressing escherichia coli to assess mouse peritoneal macrophage phagocytosis

Ce manuscrit décrit une méthode simple et reproductible pour effectuer un test de la phagocytose. La première partie de cette méthode consiste à construire un vecteur animal-SUMO-EGFP (SUMO = petite ubiquitin-comme modificateur) et exprimant accrue de protéine de fluorescence verte (EGFP) chez Escherichia coli (BL21DE). Exprimant EGFP e. coli est co-incubée avec macrophages pendant 1 h à 37 ° C ; le groupe témoin négatif est incubé sur glace pendant le même laps de temps. Ensuite, les macrophages sont prêts pour évaluation. Les avantages de cette technique sont ses étapes simples et clairs, et phagocytose peut être mesurée par les deux flux cytomètre et fluorescence microscope. Les e. coli exprimant EGFP sont stables et de visualiser un signal de fluorescence forte même après que les macrophages sont fixés avec du paraformaldéhyde. Cette méthode est non seulement approprié pour l’évaluation de lignées de cellules macrophages ou macrophages primaires in vitro mais convient également pour l’évaluation des granulocytes et macrophages phagocytose dans les cellules mononucléaires de sang périphérique. Les résultats montrent que la capacité phagocytaire des macrophages péritonéaux de jeunes souris (huit semaines) est supérieure à celui des macrophages de souris âgées de (16 mois). En résumé, cette méthode mesure phagocytose du macrophage et est adaptée pour l’étude de la fonction du système immunitaire inné.

Le vecteur de pET-SUMO utilise un modificateur d’ubiquitin-comme petit pour permettre l’expression des protéines natives dans le e. coli. Fusion de SUMO peut considérablement améliorer la solubilité EGFP, lui permettant d’être détecté facilement. Si l’expression EGFP est induite avec succès en lactose, vous peuvent observer des colonies vertes dans l’obscurité (Figure 1 a). Les points verts, qui représentent l' exprimant EGFP ...

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Using Enhanced Green Fluorescence Protein-expressing Escherichia Coli to Assess Mouse Peritoneal Macrophage Phagocytosis

Utilisant amélioré Fluorescence verte exprimant protéines Escherichia Coli pour évaluer la phagocytose des macrophages péritonéaux de souris

Nous présentons ici un protocole pour évaluer la phagocytose des macrophages péritonéaux de souris aide améliorée fluorescence verte exprimant protéines Escherichia coli.

This manuscript describes a simple and reproducible method to perform a phagocytosis assay. The first part of this method involves building a ...

Ce protocole a démontré une méthode simple et producible pour évaluer la capacité de phagocytose des macrophages utilisant Escherichia coli EGFP-exprimant. Bonjour, je m’appelle Jun-Yu du Deuxième Hôpital de l’Université Médicale de Dalian. Aujourd’hui, nous allons vous montrer un facile et visualiser la façon d’évaluer la phagocytose macrophage qui peut être facilement fait en moins de deux heures.Cette méthode a été employée couramment dans l’étude de la fonction immunisée innée. On croit que la fonction immunitaire innée est restée intacte chez les personnes âgées. Aujourd’hui, nous allons donc isoler les macrophages péritonéaux des souris âgées et jeunes et voir la capacité phagocytique de ces deux groupes.Eh bien, commençons. Tout d’abord, synthétiser le fragment du gène EGFP et cloner le fragment à l’aide de polymése d’ADN Taq haute fidélité. Ensuite, ligate le produit PCR dans le vecteur pET SUMO.Troisièmement, transformer les produits de ligature en souche E.coli et induire l’expression EGFP avec du lactose. Ces E.coli exprimant l’EGFP ont servi de marqueur pour l’essai de phagocytose. Ensuite, un macrophages péritoine de souris ont été isolés et cultivés.Puis, e.coli exprimant l’EGFP ont été inventés avec les macrophages pendant une heure à 37 degrés centigrees. Après l’étape d’assaisage, les macrophages étaient prêts pour l’évaluation par microscope de fluorescence et cytomètre d’écoulement. Synthétiser le fragment du gène EGFP et amplifier le fragment à l’aide d’amorces avant et arrière à l’aide d’une polymése d’ADN Taq haute fidélité.Pour s’assurer que les produits PCR avaient un seul surplomb d’adénine à trois extrémités pour le clonage TA dans l’étape suivante, une extension de 30 minutes à 72 degrés centigrees après le dernier cycle est recommandée. Vérifiez le produit PCR par électrophorèse gel agarose. Si le fragment a été amplifié correctement, une bande de 717 bp peut être observée sur le gel.Clonez le produit PCR dans le vecteur pET SUMO en utilisant la méthode de clonage TA avec ligase d’ADN T4. Incuber la réaction à température ambiante pendant 30 minutes. Ajouter cinq microlitres de produit PCR dans 100 microlitres de cellules compétentes BL21.La chaleur choque les cellules à 42 degrés centigrees pendant 90 secondes, puis garder le mélange sur la glace pendant trois minutes. Ajouter 400 microlitres de LB moyen, préchauffé à 37 degrés centigrans. Secousses d’une heure à 37 degrés centigrans et 120 rpm.Inoculer les bactéries à la surface de la plaque LB avec 100 microgrammes par kanamycine millilitre pour filtrer l’E.coli transformé par vecteur. Incuber la plaque dans le four à 37 degrés centigrans pendant la nuit. Le lendemain, inoculer une colonie positive en cinq millilitres de médias LB avec 100 microgrammes par kanamycine millilitre.Incuber dans l’incubateur de secousses de 37 degrés à 120 rpm pendant deux heures. Ajouter ensuite le lactose inducteur à une concentration finale de 0,5 millimole par litre et continuer à secouer six heures, induisant l’expression EGFP. Empiriquement, en secouant six heures, l’OD600 peut atteindre 0,7 ou plus.Enfin, à l’aide d’un microscope à fluorescence pour vérifier l’étendue de l’expression EGFP. Ajouter 10 microlitres du milieu de culture bactérienne à une diapositive. Couvrir ensuite d’un bordereau de couverture.Examiner l’expression de l’EGFP au microscope à fluorescence. Ajouter 3,5 grammes de thioglycollate dans 100 millilitres d’eau distillée. Stériliser en autoclave avant utilisation.Aspirer le milieu de thioglycollate dans la seringue stérile d’un millilitre dans le capot. Une souris par seringue pour éviter l’infection. Injectez un millilitre de milieu de thioglycollate de 3,5 % dans la cavité péritonéale de la souris à l’aide d’une aiguille de calibre 23 et maintenez la souris avec de l’eau et de l’ad libitum alimentaire pendant trois jours.Après trois jours, euthanasier la souris par dislocation cervicale après avoir rapidement induire l’anesthésie par sevoflurane dans une boîte fermée. Ensuite, mettez la souris dans un plat avec 75% d’éthanol pour stériler et transférer dans le capot rapidement. Placez la souris sur la plaque et épinglez la patte avant sur le plateau pour fixer la position de la souris.À l’aide d’une seringue de cinq millilitres avec une aiguille de calibre 20, injecter cinq millilitres de PBS froid au bas-ventre dans la cavité péritonéale de la souris, en évitant de percer l’intestin. Effectuez un massage doux sur les deux côtés de l’abdomen de la souris. Puis aspirer le liquide abdominal doucement et lentement.Distribuez le liquide péritonéal dans un tube de centrifugeuse de 50 millilitres. Répétez ces étapes deux ou trois fois. Centrifuger les cellules suspendues pendant 10 minutes à 400 g en quatre à huit centigrades.Jetez le supernatant et resuspendez la pastille cellulaire dans rpmi 1640 moyen avec 10% sérum bovin fœtal. Ajoutez cinq millions de cellules dans chaque puits de la plaque de six puits pour l’analyse de cytométrie d’écoulement et 500 000 cellules par puits dans une plaque de 24 puits pour le microscope à fluorescence. Culture des cellules à 37 degrés centigrans dans un incubateur de dioxyde de carbone de 5% pendant la nuit.Le milieu de culture peut être rafraîchi après trois heures pour enlever les cellules nonherent parce que la plupart d’entre eux étaient des lymphocytes. Observez les cellules sous un microscope à champ lumineux pour évaluer la viabilité cellulaire et la densité cellulaire. L’image montrée ici était dans l’état normal de la cellule primaire.Habituellement, la densité cellulaire de macrophage n’était pas élevée, parce que la partie principale des cellules péritonéales était lymphocytes. Retirer le milieu de culture de la plaque de 24 puits. Ajouter 100 microlitres de culture fraîche moyenne et 10 microlitres de milieu bactérien.Puis incuber la plaque à 37 degrés centigrans dans un incubateur de dioxyde de carbone de 5% pendant une heure. Lavez doucement avec 500 microlitres de PBS froid par puits trois à cinq fois pour éliminer les bactéries non intériorisées. Incuber les cellules avec 4% de formaldéhyde dans PBS à température ambiante pendant 30 minutes.Lavez les cellules avec PBS trois fois. Ajouter la phalloidine 633 conjuguée solution de travail pour tacher F-actin. Conserver dans un endroit sombre et humide à température ambiante pendant 60 minutes.Ajouter la solution de travail DAPI pour tacher la cellule nucléaire et incuber pendant cinq minutes dans un endroit sombre à température ambiante. Rincer une fois avec PBS et une fois avec le même volume dans de l’eau distillée. L’E.coli exprimant l’EGFP affiché en vert a servi de marqueur de phagocytose.Pour minimiser les erreurs expérimentales et faire une interprétation correcte des résultats, définissez des groupes et des tubes de commande pour l’expérience telle qu’elle est énumérée dans le tableau 2. Pour le groupe témoin qui sera placé sur la glace, retirez le milieu de la plaque de six puits et lavez-le avec du PBS une fois. Ajouter ensuite 70 millimole par litre d’EDTA froid d’un millilitre dans le puits pour détacher les cellules et les transférer dans le tube de cytométrie d’écoulement.Ajouter 50 microlitres de suspension bactérienne dans le tube et le placer sur la glace pendant une heure. Pour les autres groupes, retirer le milieu de culture, ajouter un milieu frais millilitre dans chaque puits. Ajouter 50 microlitres de suspension bactérienne dans les puits selon le réglage du groupe tel que décrit dans le tableau deux.Ensuite, placez la plaque de six puits dans l’incubateur de 37 degrés centigrees 5% de dioxyde de carbone pendant une heure. Pour étancher la fluorescence d’E.coli non intériorisé, ajoutez 200 microlitres de solution d’eau violette cristalline de 0,8 % dans le puits et balancez-vous sous peu. Cette étape visait à éviter un résultat faussement positif par la liaison EGFP E.coli à la surface des macrophages mais non intériorisée.Lavez les cellules avec PBS trois fois pour enlever toute violette cristalline résiduelle. Ajouter ensuite 70 millimole par litre d’EDTA froid d’un millilitre dans le puits pour détacher les cellules et les transférer dans le tube de cytométrie d’écoulement. Centrifugeuse les tubes 2000 rpm cinq minutes et jeter le supernatant.Ajouter 100 microlitres de PBS pour résuser les cellules. Ajouter cinq microlitres d’anticorps conjugués F4 ATP dans les tubes ou l’isotype selon le réglage du groupe. Vortex brièvement et incuber les échantillons sur la glace pendant cinq à 10 minutes dans l’obscurité.Ajouter un millilitre de PBS dans chaque tube et centrifugeuse 2000 rpm cinq minutes. Jeter le surnatant. Resuspendez les granulés cellulaires avec 200 à 300 microlitres de PBS pour l’analyse de cytométrie de flux.Exécutez chaque tube et obtenez des données pour au moins 10 000 événements de cellules F4/80 positives. Voici les images de fluorescence des macrophages péritonéaux des groupes jeunes et âgés. La fluorescence rouge représente la F-actine.Le vert représente E.coli exprimant l’EGFP, et le bleu représente le noyau taché par DAPI. Ces images suggèrent que les macrophages de la jeune souris avaient une capacité phagocytique plus forte que ceux de la souris âgée. Les cellules F4/80-positives et EGFP-positives ont indiqué la capacité phagocytique des macrophages.Ces résultats sont conformes à la tendance des résultats du microscope à fluorescence. Eh bien, vous voyez, bien que le nombre de cellules immunitaires innées peut préservé chez la souris âgée, la capacité phagocytique a diminué de façon significative par rapport à la jeune souris. De nombreuses méthodes ont été utilisées pour évaluer la phagocytose macrophage.Ici, nous démontrons une méthode améliorée qui est pratique, rapide et économiquement faisable. Avec E.coli exprimant l’EGFP, un essai de phagocytose peut être facilement exécuté et mesuré par le cytomètre d’écoulement et le microscope fluorescent selon les préfère du chercheur. Aussi cette méthode mesure directement la capacité phagocytique.Les résultats sont plus reproductibles que d’autres méthodes indirectes.

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Using Enhanced Green Fluorescence Protein-expressing Escherichia Coli to Assess Mouse Peritoneal Macrophage Phagocytosis

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