Name: using enhanced green fluorescence protein-expressing escherichia coli to assess mouse peritoneal macrophage phagocytosis
Uploaded: 2019-01-04T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Using Enhanced Green Fluorescence Protein-expressing Escherichia Coli to Assess Mouse Peritoneal Macrophage Phagocytosis at JoVE.com

Den National Natural Science Foundation i Kina (nr. 31800046) og Natural Science Foundation av provinsen Liaoning (nr. 20170540262) støttet dette arbeidet. Dette arbeidet ble gjort i laboratoriene i Scientific Research Center ved Universitetet i andre sykehus for Dalian medisinsk. Forfatterne vil gjerne takke Xiao-Lin Sang for henne hjelp med flowcytometri, og Bo Qu og Dong-Chuan Yang for deres hjelp i å produsere videoen.

Alle prosedyrer ble utført under nasjonale institutter for helse retningslinjene og bruk av forsøksdyr, og protokollene ble godkjent av Animal Care og bruk komiteen av Dalian Medical University. Seksten måneder gamle (med en kroppsvekt på 30-35 g) og åtte uke gamle (20-25 g) SPF (spesifikke patogen-gratis) mannlige C57BL/6 mus ble innhentet av SPF dyr Dalian medisinske universitet. Alle mus ble holdt i dyr boliger med tilgang til mat og vann ad libitum. Temperaturen ble holdt på 20-24 ° C, luftfuktighet v...

<ol>
	<li>Layoun, A., Samba, M., Santos, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+murine+peritoneal+macrophages+to+carry+out+gene+expression+analysis+upon+Toll-like+receptors+stimulation.">Isolation of murine peritoneal macrophages to carry out gene expression analysis upon Toll-like receptors stimulation.</a> Journal of Visualized Experiments. 98, e52749 (2015).</li><li>Iskander, K. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sepsis:+multiple+abnormalities,+heterogeneous+responses,+and+evolving+understanding.">Sepsis: multiple abnormalities, heterogeneous responses, and evolving understanding.</a> Physiological Reviews. 93 (3), 1247-1288 (2013).</li><li>Girard, T. D., Opal, S. M., Ely, E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insights+into+severe+sepsis+in+older+patients:+from+epidemiology+to+evidence-based+management.">Insights into severe sepsis in older patients: from epidemiology to evidence-based management.</a> Clinical Infectious Diseases. 40 (5), 719-727 (2005).</li><li>Bicker, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+assay+to+measure+phagocytosis+of+live+bacteria.">A simple assay to measure phagocytosis of live bacteria.</a> Clinical Chemistry. 54 (5), 911-915 (2008).</li><li>Zhou, M. Y., Gomez-Sanchez, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Universal+TA+cloning.">Universal TA cloning.</a> Current Issues in Molecular Biology. 2 (1), 1-7 (2000).</li><li>Chen, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Triggering+receptor+expressed+on+myeloid+cells-2+protects+against+polymicrobial+sepsis+by+enhancing+bacterial+clearance.">Triggering receptor expressed on myeloid cells-2 protects against polymicrobial sepsis by enhancing bacterial clearance.</a> American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 188 (2), 201-212 (2013).</li><li>Lamberti, G., de Araujo, M. E., Huber, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+Macrophage+Early+and+Late+Endosomes+by+Latex+Bead+Internalization+and+Density+Gradient+Centrifugation.">Isolation of Macrophage Early and Late Endosomes by Latex Bead Internalization and Density Gradient Centrifugation.</a> Cold Spring Harbor Protocols. (12), (2015).</li><li>Miksa, M., Komura, H., Wu, R., Shah, K. G., Wang, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+method+to+determine+the+engulfment+of+apoptotic+cells+by+macrophages+using+pHrodo+succinimidyl+ester.">A novel method to determine the engulfment of apoptotic cells by macrophages using pHrodo succinimidyl ester.</a> Journal of Immunological Methods. 342 (1-2), 71-77 (2009).</li><li>Weingart, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+labels+influence+phagocytosis+of+Bordetella+pertussis+by+human+neutrophils.">Fluorescent labels influence phagocytosis of Bordetella pertussis by human neutrophils.</a> Infection and Immunity. 67 (8), 4264-4267 (1999).</li><li>Neaga, A., Lefor, J., Lich, K. E., Liparoto, S. F., Xiao, Y. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+validation+of+a+flow+cytometric+method+to+evaluate+phagocytosis+of+pHrodo+BioParticles(R)+by+granulocytes+in+multiple+species.">Development and validation of a flow cytometric method to evaluate phagocytosis of pHrodo BioParticles(R) by granulocytes in multiple species.</a> Journal of Immunological Methods. 390 (1-2), 9-17 (2013).</li><li>Ninkovic, J., Roy, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+throughput+fluorometric+technique+for+assessment+of+macrophage+phagocytosis+and+actin+polymerization.">High throughput fluorometric technique for assessment of macrophage phagocytosis and actin polymerization.</a> Journal of Visualized Experiments. (93), e52195 (2014).</li></ol>

Trinnene i denne protokollen er ganske enkel og grei. En av de avgjørende skritt er å indusere EGFP uttrykk på E. coli. Vanligvis når et gen fra eukaryoter, som EGFP, er planlagt å uttrykke prokaryoter som E. coli, er det en risiko for at protein vil danne inaktive aggregater (inkludering organer), som endrer protein's opprinnelige struktur og aktivitet. Ved hjelp av pET-SUMO vektoren og lage pET-SUMO-EGFP plasmider, EGFP-SUMO fusion protein uttrykt vellykket, og lyssignal var sterk nok til å bli ...

Macrophage fagocytose analyser brukes ofte til å studere medfødte immunforsvar. Medfødte immunforsvaret kan indikere mottakelighet for infeksjon. Macrophage linjer er mye brukt i immunologi studier. Men lengre passasje kan forårsake genet tap og svekket immunforsvar funksjoner i disse linjer. Dermed er de primære peritoneal makrofagene ideelle objektet i å studere celle funksjon1.
Selv om medfødte immunforsvaret var tenkt å være intakt i alderen kroppen, kan phagocytic evnen redusere forhold til at i yngre kroppen2,3. Her viser vi en metode for å vurdere fagocytose av peritoneal makrofager fra young (åtte uke gamle) og alderen (16-måned gamle) mus ved hjelp av EGFP-uttrykke E. colisom er praktisk, rask og økonomisk gjennomførbart.
Bruk av en EGFP-uttrykke E. coli belastning er en av fordelene med denne analysen fordi disse bakteriene er stabile og vise et sterk fluorescens signal, selv etter makrofager er løst av 4% (w/v) paraformaldehyde. I tillegg bruker den EGFP-uttrykke E. coli, forskere trenger ikke videre flekker etter fagocytose, noe som sparer tid. Videre er makrofager immunoresponsive for E. coli overflate antigen, gjør E. coli mer egnet for fagocytose analysen enn EGFP-uttrykke sopp eller fluorescein-merket perler.
Med EGFP-uttrykke E. coli, kan en fagocytose analysen lett oppnådd i 2t og målt ved begge flyt cytometri og fluorescens mikroskopi, avhengig av forskerens hensikt. Siden denne metoden måler direkte phagocytic evnen, er resultatene mer reproduserbar enn andre indirekte metoder.
Denne metoden har også blitt validert i en RAW264.7 celle linje og menneskelige perifert blod mononukleære celler4. Teksten nedenfor inneholder detaljerte trinnvise instruksjoner for å utføre denne analysen og uthever de avgjørende skritt som forskerne kan endre for å møte behovene til sine eksperimenter.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:886px;" width="887">
	<tbody>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:417px;">BD FACSCanto II Flow cytometer</td>
			<td style="width:176px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:123px;">-</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:417px;">Biotin anti-mouse CD16/32 Antibody</td>
			<td style="width:176px;">Biolegend</td>
			<td style="width:123px;">Cat101303</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:417px;">Champion pET SUMO Protein Expression system</td>
			<td style="width:176px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:123px;">K300-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:417px;">Custom Gene Synthesis Service</td>
			<td style="width:176px;">Takara Biotech.</td>
			<td style="width:123px;">-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:417px;">DAPI(4&#39;,6-Diamidino-2-Phenylindole, Dihydrochloride)</td>
			<td style="width:176px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:123px;">D1306</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:417px;">F4/80-PE anti-mouse antibody for FACS</td>
			<td style="width:176px;">Biolegend</td>
			<td style="width:123px;">Cat123110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:417px;">Leica DMI3000 B&#160; Inverted Microscope</td>
			<td style="width:176px;">Leica Microsystems</td>
			<td style="width:123px;">-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:417px;">PE Rat IgG2a, &#954;-isotype control</td>
			<td style="width:176px;">Biolegend</td>
			<td style="width:123px;">Cat400507</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:417px;">Phalloidin 633 fluorescence dye conjugated working solution</td>
			<td style="width:176px;">AAT Bioquest</td>
			<td style="width:123px;">Cat23125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:417px;">Thioglycollate medium</td>
			<td style="width:176px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:123px;">T9032</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

using enhanced green fluorescence protein-expressing escherichia coli to assess mouse peritoneal macrophage phagocytosis

Dette manuskriptet beskriver en enkel og reproduserbar metode for å utføre en fagocytose analysen. Den første delen av denne metoden innebærer å bygge en pET-SUMO-EGFP vektor (SUMO = liten ubiquitin-lignende modifikator) og uttrykke forbedret grønne fluorescens protein (EGFP) i Escherichia coli (BL21DE). EGFP-uttrykke E. coli er coincubated med makrofager 1t på 37 ° C; negativ kontrollgruppen er ruges på is for samme mengde tid. Så er makrofagene klar for vurdering. Fordelene med denne teknikken inkluderer enkel og grei trinnene og fagocytose kan måles ved begge flyt cytometer og fluorescens mikroskop. EGFP-uttrykke E. coli er stabile og viser en sterk fluorescens signalet selv etter makrofagene er løst med paraformaldehyde. Denne metoden er ikke bare egnet for vurdering av macrophage linjer eller primære makrofager i vitro men også egnet for vurdering av granulocytt og monocytt fagocytose i perifert blod mononukleære celler. Resultatene viser at phagocytic evnen til peritoneal makrofager fra unge (åtte uke gamle) mus er høyere enn makrofager fra alderen (16-måned gamle) mus. I sammendraget, denne metoden måler macrophage fagocytose og er egnet for å studere funksjonen medfødte immunsystemet.

PET-SUMO vektoren benytter en liten ubiquitin-lignende modifikator tillatelse uttrykket native proteiner i E. coli. SUMO fusion kan betydelig forbedre EGFP løselighet, slik at den kan oppdages lett. Hvis det EGFP uttrykket er vellykket indusert av laktose, kan grønne kolonier observeres i mørket (figur 1A). Grønne prikker, som representerer den EGFP-uttrykke E. coli, kan observeres under fluorescens mikroskop med en 40 x linsen (<strong ...

Watch this Scientific Journal Video about Using Enhanced Green Fluorescence Protein-expressing Escherichia Coli to Assess Mouse Peritoneal Macrophage Phagocytosis at JoVE.com

Using Enhanced Green Fluorescence Protein-expressing Escherichia Coli to Assess Mouse Peritoneal Macrophage Phagocytosis

Bruke forbedret grønne fluorescens Protein-uttrykke Escherichia Coli å vurdere musen Peritoneal Macrophage fagocytose

Her presenterer vi en protokoll for å vurdere musen peritoneal macrophage fagocytose med forbedret grønne fluorescens protein-uttrykke Escherichia coli.

This manuscript describes a simple and reproducible method to perform a phagocytosis assay. The first part of this method involves building a ...

Denne protokollen demonstrerte en enkel og producibel metode for å vurdere phagocytosis evne til makrofager ved hjelp av EGFP-uttrykkende Escherichia coli. Hei, jeg heter Jun-Yu fra The Second Hospital of Dalian Medical University. I dag skal vi vise deg en enkel og visualisere måten å vurdere makrofag fagocytose som lett kan gjøres innen to timer.Denne metoden ble mye brukt i studien av den medfødte immunfunksjonen. Det antas at medfødt immunforsvar forble intakt hos eldre. Så i dag skal vi isolere de peritoneale makrofagene fra de eldre og unge musene og se disse to gruppenes fagocytiske evne.Vel, la oss komme i gang. For det første syntetisere EGFP genfragmentet og klone fragmentet ved hjelp av high-fidelity Taq DNA polymerase. Deretter ligate PCR-produktet inn i pET SUMO vektoren.For det tredje, forvandle ligation produkter til E.coli belastning og indusere EGFP uttrykker med laktose. Disse EGFP-uttrykkende E.coli fungerte som markør for fagocytoseanalysen. Deretter ble en museperitoneum makrofager isolert og kultivert.Deretter ble EGFP-uttrykkende E.coli sammenfalt med makrofagene i en time ved 37 grader centigrees. Etter slukketrinnet var makrofagene klare for vurdering av både fluorescensmikroskop og strømningscytometer. Syntetisere EGFP genfragmentet og forsterke fragmentet med en fremover og omvendt primere ved hjelp av high-fidelity Taq DNA polymerase.For å sikre at PCR-produktene hadde enkle tre-end adeninoverheng for TA-kloning i neste trinn, anbefales en 30-minutters forlengelse ved 72 grader centigrees etter den siste syklusen. Kontroller PCR-produktet ved agarose gel elektroforese. Hvis fragmentet ble forsterket riktig, kan et 717 bp-bånd observeres på gelen.Klone PCR-produktet i pET SUMO-vektoren ved hjelp av TA-kloningsmetoden med T4 DNA-ligase. Inkuber reaksjonen ved romtemperatur i 30 minutter. Legg til fem mikroliter PCR-produkt i 100 mikroliter BL21 kompetente celler.Varmesjokk cellene ved 42 grader centigrees i 90 sekunder, og hold blandingen på is i tre minutter. Tilsett 400 mikroliter LB medium, forvarmet ved 37 grader centigrees. Risting en time på 37 grader centigrees og 120 rpm.Inokuler bakteriene på overflaten av LB plate med 100 mikrogram per milliliter kanamycin for å screene vektor-forvandlet E.coli. Inkuber platen i 37 grader centigrees ovnen over natten. På neste dag, inokulere en positiv koloni i fem milliliter LB media med 100 mikrogram per milliliter kanamycin.Inkuber i 37 graders centigrees risting inkubator på 120 rpm i to timer. Tilsett deretter induktorlaktosen til en endelig konsentrasjon på 0,5 millimol per liter og fortsett å riste seks timer, noe som induserer EGFP-uttrykk. Empirisk, når du rister seks timer, kan OD600 nå 0,7 eller høyere.Til slutt, ved hjelp av fluorescensmikroskop for å verifisere omfanget av EGFP-uttrykk. Tilsett 10 mikroliter av bakteriekulturmediet til et lysbilde. Dekk deretter med en dekselslipp.Undersøk uttrykket av EGFP under fluorescensmikroskopet. Tilsett 3,5 gram tioglycollate i 100 milliliter destillert vann. Steriliser i autoklav før bruk.Aspirer tioglycollate mediet i en milliliter steril sprøyte i panseret. En mus per sprøyte for å unngå infeksjonen. Injiser en milliliter 3,5% tioglycollate medium i museperitonealhulen ved hjelp av en 23-gauge nål og opprettholde musen med vann og mat ad libitum i tre dager.Etter tre dager, euthanize musen ved cervical forvridning etter raskt indusere anestesi ved sevoflurane i en lukket boks. Deretter legger du musen i en tallerken med 75% etanol for å sterilisere og overføre inn i panseret raskt. Plasser musen på platen og fest den fremre poten på brettet for å fikse museposisjonen.Bruk en fem milliliter sprøyte med en 20-gauge nål, injisere fem milliliter kald PBS på underlivet i musen peritoneal hulrom, unngå punktering tarmen. Utfør en mild massasje på to sider av muselivet. Deretter aspirerer du magevæsken forsiktig og sakte.Dispenser peritonealvæsken i et 50-milliliter sentrifugerør. Gjenta disse trinnene to eller tre ganger. Sentrifuger de suspenderte cellene i 10 minutter ved 400 g i fire til åtte sentrifuger.Kast den overnaturlige og resuspend cellepellet i RPMI 1640 medium med 10% fosterbovin serum. Tilsett fem millioner celler i hver brønn av seksbrønnsplaten for strømningscytometrianalysen og 500 000 celler per brønn i en 24-brønns plate for fluorescensmikroskop. Kultur cellene ved 37 grader centigrees i en 5% karbondioksid inkubator over natten.Kulturmediet kan oppdateres etter tre timer for å fjerne ikke-adadherent celler fordi de fleste av disse var lymfocytter. Observer cellene under et lyst feltmikroskop for å evaluere celle levedyktighet og celletetthet. Bildet som vises her var i normal tilstand av primærcellen.Vanligvis var makrofagcelletettheten ikke høy, fordi hoveddelen av bukhinnecellene var lymfocytter. Fjern kulturmediet fra 24-brønnplaten. Tilsett 100 mikroliter frisk kulturmedium og 10 mikroliter bakteriemedium.Inkuber deretter platen ved 37 grader centigrees i en 5% karbondioksid inkubator i en time. Vask forsiktig med 500 mikroliter kald PBS per brønn tre til fem ganger for å vaske ut ikke-internaliserte bakterier. Inkuber cellene med 4% formaldehyd i PBS ved romtemperatur i 30 minutter.Vask cellene med PBS tre ganger. Tilsett falloidin 633 konjugat arbeidsløsning for å flekke F-actin. Oppbevares på et mørkt, fuktig sted ved romtemperatur i 60 minutter.Legg dapi arbeidsløsning for å flekke cellen kjernefysisk og inkubere i fem minutter på et mørkt sted ved romtemperatur. Skyll én gang med PBS og én gang med samme volum i destillert vann. EGFP-uttrykkende E.coli vist i grønt fungerte som markør for fagocytose.Hvis du vil minimere eksperimentelle feil og gjøre riktig tolkning av resultatene, angir du grupper og kontrollrør for eksperimentet som oppført i tabell 2. For kontrollgruppen som skal plasseres på isen, fjern mediet fra seksbrønnsplaten og vask med PBS en gang. Tilsett deretter 70 millimol per liter kald EDTA en milliliter i brønnen for å løsne cellene og overføre til strømningscytometrirøret.Tilsett 50 mikroliter bakteriell suspensjon i røret og legg den på isen i en time. For de andre gruppene fjerner du kulturmediet, legger til ett milliliter friskt medium i hver brønn. Tilsett 50 mikroliter bakterier suspensjon i brønnene i henhold til gruppeinnstillingen som beskrevet i tabell to.Plasser deretter seksbrønnsplaten i 37 graders centigrees 5% karbondioksidinkubator i en time. For å slukke fluorescensen av ikke-internalisert E.coli, tilsett 200 mikroliter 0,8% krystallfiolett vannoppløsning i brønnen og sving snart. Dette trinnet ment å unngå falskt positivt resultat av EGFP E.coli binding til overflaten av makrofagene, men ikke internalisert.Vask cellene med PBS tre ganger for å fjerne eventuelle gjenværende krystallfiolette. Tilsett deretter 70 millimol per liter kald EDTA en milliliter i brønnen for å løsne cellene og overføre til strømningscytometrirøret. Sentrifuge rørene 2, 000 rpm fem minutter og kast supernatanten.Tilsett 100 mikroliter PBS for å gjenbruke cellene. Tilsett fem mikroliter F4 ATP konjugert antistoff i rørene eller isotypen i henhold til gruppeinnstillingen. Vortex kort og inkuber prøvene på is i fem til 10 minutter i mørket.Legg til en milliliter PBS i hvert rør og sentrifuge 2, 000 rpm fem minutter. Kast det overnaturlige. Resuspend cellepellets med 200 til 300 mikroliter PBS for flytcytometri analyse.Kjør hvert rør og hent data for minst 10 000 hendelser med F4/80-positive celler. Her er fluorescensbildene av peritoneale makrofager fra de unge og eldre gruppene. Den røde fluorescensen representerer F-actin.Den grønne representerer EGFP-uttrykkende E.coli, og den blå representerer kjernen farget av DAPI. Disse bildene tyder på at makrofager fra den unge musen hadde en sterkere fagocytisk evne enn de fra den aldrende musen. De F4/80-positive og EGFP-positive cellene indikerte makrofagenes fagocytiske evne.Disse resultatene er i samsvar med trenden med fluorescensmikroskopresultater. Vel, du skjønner, selv om antall medfødte immunceller kan bevares i alderen mus, den fagocytiske evnen redusert betydelig sammenlignet med den unge musen. Mange metoder har blitt brukt for å vurdere makrofagfagocytose.Her demonstrerer vi en forbedret metode som er praktisk, rask og økonomisk gjennomførbar. Med EGFP-uttrykkende E.coli kan en fagocytoseanalyse enkelt utføres og måles ved både strømningssytometer og fluorescerende mikroskop i henhold til forskerens foretrekker. Også denne metoden måler direkte den fagocytiske evnen.Resultatene er mer reproduserbare enn andre indirekte metoder.

Research

Education

JoVE Journal

JoVE Core

Cell Biology

Immunology and Infection

Using Enhanced Green Fluorescence Protein-expressing Escherichia Coli to Assess Mouse Peritoneal Macrophage Phagocytosis

Unit 1

Endocytosis and Exocytosis

SCIENTISTS IN ACTION

Isolation of Mouse Peritoneal Cavity Cells

The peritoneal cavity is a membrane-bound and fluid-filled abdominal cavity of mammals, which contains the liver, spleen, most of the gastro-intestinal ...

Non-Invasive Model of Neuropathogenic Escherichia coli Infection in the Neonatal Rat

Non-Invasive Model of Neuropathogenic Escherichia coli Infection in the Neonatal Rat

Non-invasiv Model of Neuropathogenic<em&gt; Escherichia coli</em&gt; Infeksjon i Neonatal Rat

Investigation of the interactions between animal host and bacterial pathogen is only meaningful if the infection model employed replicates the principal ...

High Throughput Fluorometric Technique for Assessment of Macrophage Phagocytosis and Actin Polymerization

Høy gjennomstrømning Fluorometrisk Teknikk for Vurdering av Macrophage Fagocytose og Actin Polymerisering

The goal of fluorometric analysis is to serve as an efficient, cost effective, high throughput method of analyzing phagocytosis and other cellular ...

Macrophage Cholesterol Depletion and Its Effect on the Phagocytosis of Cryptococcus neoformans

Macrophage Cholesterol Depletion and Its Effect on the Phagocytosis of Cryptococcus neoformans

Makrofag Kolesterol Nedbryting og dens effekt på Fagocytose av<em&gt; Cryptococcus neoformans</em

Cryptococcosis is a life-threatening infection caused by pathogenic fungi of the genus Cryptococcus. Infection occurs upon inhalation of spores, which are ...

One-step Negative Chromatographic Purification of Helicobacter pylori Neutrophil-activating Protein Overexpressed in Escherichia coli in Batch Mode

One-step Negative Chromatographic Purification of Helicobacter pylori Neutrophil-activating Protein Overexpressed in Escherichia coli in Batch Mode

Ett-trinns Negativ kromatografiske rensing i<em&gt; Helicobacter pylori</em&gt; Neutrofilaktiverende Protein overuttrykkes i<em&gt; Escherichia coli</em&gt; I batch-modus

Helicobacter pylori neutrophil-activating protein (HP-NAP) is a major virulence factor of Helicobacter pylori (H. pylori). It plays a critical role in H. ...

Creation of a Dense Transposon Insertion Library Using Bacterial Conjugation in Enterobacterial Strains Such As Escherichia Coli or Shigella flexneri

Creation of a Dense Transposon Insertion Library Using Bacterial Conjugation in Enterobacterial Strains Such As Escherichia Coli or Shigella flexneri

Etableringen av et tett Transposon innsetting biblioteket bruker bakteriell bøyning i Enterobacterial stammer som Escherichia Coli eller Shigella flexneri

Transposon mutagenesis is a method that allows gene disruption via the random genomic insertion of a piece of DNA called a transposon. The protocol below ...

Overexpression and Purification of Human Cis-prenyltransferase in Escherichia coli

Overexpression and Purification of Human Cis-prenyltransferase in Escherichia coli

Overekspresjon og rensing av menneske<em&gt; Cis</em&gt; -prenyltransferase i<em&gt; Escherichia coli</em

Prenyltransferases (PT) are a group of enzymes that catalyze chain elongation of allylic diphosphate using isopentenyl diphosphate (IPP) via multiple ...

Visualizing Macrophage Extracellular Traps Using Confocal Microscopy

Visualisere Macrophage ekstracellulære feller bruker AC Confocal mikroskopi

A primary method used to define the presence of neutrophil extracellular traps (NETs) is confocal microscopy. We have modified established confocal ...

Assessment of Antibody-based Drugs Effects on Murine Bone Marrow and Peritoneal Macrophage Activation

Vurdering av antistoff-baserte narkotika effekter på Murine benmargen og Peritoneal Macrophage aktivisering

Macrophages are phagocytic innate immune cells, which initiate immune responses to pathogens and contribute to healing and tissue restitution. Macrophages ...

A Facile Protocol to Generate Site-Specifically Acetylated Proteins in Escherichia Coli

A Facile Protocol to Generate Site-Specifically Acetylated Proteins in Escherichia Coli

En lettvinte protokoll for å generere Site-Specifically Acetylated proteiner i Escherichia Coli

Post-translational modifications that occur at specific positions of proteins have been shown to play important roles in a variety of cellular processes. ...