Name: using enhanced green fluorescence protein-expressing escherichia coli to assess mouse peritoneal macrophage phagocytosis
Uploaded: 2019-01-04T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Using Enhanced Green Fluorescence Protein-expressing Escherichia Coli to Assess Mouse Peritoneal Macrophage Phagocytosis at JoVE.com

A Fundação Nacional de ciências naturais da China (n. º 31800046) e a ciência Natural Fundação da província de Liaoning (n º 20170540262) com suporte a este trabalho. Este trabalho foi realizado nos laboratórios do centro de pesquisa científica na Universidade segundo Hospital de Dalian Medical. Os autores gostaria agradecer Xiao-Lin Sang pela sua assistência com a citometria de fluxo e Bo Qu e Dong-Chuan Yang por sua assistência na produção do vídeo.

Todos os procedimentos foram realizados sob os institutos nacionais de saúde orientações para o cuidado e o uso de animais de laboratório, e os protocolos foram aprovados pelo Comitê de uso de Dalian médica Universidade e cuidado Animal. Dezesseis meses (com um peso de 30-35 g) e oito semanas de idade (específicos-isentos de organismos patogénicos) masculinos ratos de C57BL/6 (20-25 g) SPF foram obtidos do centro animal SPF da universidade médica de Dalian. Todos os ratos foram mantidos no alojamento dos animais...

<ol>
	<li>Layoun, A., Samba, M., Santos, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+murine+peritoneal+macrophages+to+carry+out+gene+expression+analysis+upon+Toll-like+receptors+stimulation.">Isolation of murine peritoneal macrophages to carry out gene expression analysis upon Toll-like receptors stimulation.</a> Journal of Visualized Experiments. 98, e52749 (2015).</li><li>Iskander, K. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sepsis:+multiple+abnormalities,+heterogeneous+responses,+and+evolving+understanding.">Sepsis: multiple abnormalities, heterogeneous responses, and evolving understanding.</a> Physiological Reviews. 93 (3), 1247-1288 (2013).</li><li>Girard, T. D., Opal, S. M., Ely, E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insights+into+severe+sepsis+in+older+patients:+from+epidemiology+to+evidence-based+management.">Insights into severe sepsis in older patients: from epidemiology to evidence-based management.</a> Clinical Infectious Diseases. 40 (5), 719-727 (2005).</li><li>Bicker, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+assay+to+measure+phagocytosis+of+live+bacteria.">A simple assay to measure phagocytosis of live bacteria.</a> Clinical Chemistry. 54 (5), 911-915 (2008).</li><li>Zhou, M. Y., Gomez-Sanchez, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Universal+TA+cloning.">Universal TA cloning.</a> Current Issues in Molecular Biology. 2 (1), 1-7 (2000).</li><li>Chen, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Triggering+receptor+expressed+on+myeloid+cells-2+protects+against+polymicrobial+sepsis+by+enhancing+bacterial+clearance.">Triggering receptor expressed on myeloid cells-2 protects against polymicrobial sepsis by enhancing bacterial clearance.</a> American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 188 (2), 201-212 (2013).</li><li>Lamberti, G., de Araujo, M. E., Huber, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+Macrophage+Early+and+Late+Endosomes+by+Latex+Bead+Internalization+and+Density+Gradient+Centrifugation.">Isolation of Macrophage Early and Late Endosomes by Latex Bead Internalization and Density Gradient Centrifugation.</a> Cold Spring Harbor Protocols. (12), (2015).</li><li>Miksa, M., Komura, H., Wu, R., Shah, K. G., Wang, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+method+to+determine+the+engulfment+of+apoptotic+cells+by+macrophages+using+pHrodo+succinimidyl+ester.">A novel method to determine the engulfment of apoptotic cells by macrophages using pHrodo succinimidyl ester.</a> Journal of Immunological Methods. 342 (1-2), 71-77 (2009).</li><li>Weingart, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+labels+influence+phagocytosis+of+Bordetella+pertussis+by+human+neutrophils.">Fluorescent labels influence phagocytosis of Bordetella pertussis by human neutrophils.</a> Infection and Immunity. 67 (8), 4264-4267 (1999).</li><li>Neaga, A., Lefor, J., Lich, K. E., Liparoto, S. F., Xiao, Y. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+validation+of+a+flow+cytometric+method+to+evaluate+phagocytosis+of+pHrodo+BioParticles(R)+by+granulocytes+in+multiple+species.">Development and validation of a flow cytometric method to evaluate phagocytosis of pHrodo BioParticles(R) by granulocytes in multiple species.</a> Journal of Immunological Methods. 390 (1-2), 9-17 (2013).</li><li>Ninkovic, J., Roy, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+throughput+fluorometric+technique+for+assessment+of+macrophage+phagocytosis+and+actin+polymerization.">High throughput fluorometric technique for assessment of macrophage phagocytosis and actin polymerization.</a> Journal of Visualized Experiments. (93), e52195 (2014).</li></ol>

As etapas neste protocolo são bastante simples e direta. Um dos passos essenciais é induzir a expressão EGFP em Escherichia coli. Geralmente, quando um gene de eucariotas, como EGFP, é planejado para expressar em procariontes como e. coli, há um risco de que a proteína irá formar agregados inativos (corpos de inclusão), que altera a estrutura nativa da proteína e atividade. Usando o vetor de animal de estimação-sumô e construindo o plasmídeo de animal de estimação-sumô-EGFP, a proteína ...

Ensaios de fagocitose de macrófagos são frequentemente utilizados para estudar a função imunitária inata. A resposta imune inata pode indicar a susceptibilidade à infecção. Linhas de células de macrófagos são amplamente utilizadas em estudos de Imunologia. No entanto, a passagem prolongada pode causar perda de gene e comprometidas as funções imunológicas nestas linhas de célula. Assim, os macrófagos peritoneais primários são o objeto ideal em que para estudar a célula função1.
Embora a resposta imune inata, pensava-se estar intacta no corpo envelhecido, a capacidade fagocítica pode diminuir em relação ao que no mais novo corpo de2,3. Aqui, vamos demonstrar um método para avaliar a fagocitose de macrófagos peritoneais de jovens (oito semanas de idade) e idosos (16 meses) rato usando EGFP-expressando Escherichia coli, que é conveniente, rápido e economicamente viável.
O uso de uma estirpe de EGFP-expressando a Escherichia coli é uma das vantagens deste teste porque estas bactérias são estáveis e exibir um sinal forte fluorescência, mesmo depois de macrófagos são fixados pelo paraformaldeído 4% (p/v). Além disso, usando o EGFP-expressando Escherichia coli, os pesquisadores não precisa manchar ainda mais após a fagocitose, o que economiza tempo. Além disso, os macrófagos são immunoresponsive para o antígeno de superfície de e. coli , tornando Escherichia coli mais adequada para o ensaio de fagocitose do que usando o EGFP-expressando fungos ou grânulos de fluoresceína-rotulados.
Com EGFP-expressando Escherichia coli, um ensaio de fagocitose pode ser facilmente realizado em 2h e medido por ambos fluxo cytometry e fluorescência microscopia, dependendo da finalidade do pesquisador. Desde que este método mede diretamente a capacidade fagocitária, os resultados são mais reprodutíveis do que outros métodos indirectos.
Este método também foi validado em uma linhagem de células RAW264.7 e mononucleares do sangue periférico humano células4. O texto abaixo fornece as instruções detalhadas passo a passo para a realização deste ensaio e destaca as etapas críticas que os pesquisadores podem modificar para atender às necessidades de seus experimentos.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:886px;" width="887">
	<tbody>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:417px;">BD FACSCanto II Flow cytometer</td>
			<td style="width:176px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:123px;">-</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:417px;">Biotin anti-mouse CD16/32 Antibody</td>
			<td style="width:176px;">Biolegend</td>
			<td style="width:123px;">Cat101303</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:417px;">Champion pET SUMO Protein Expression system</td>
			<td style="width:176px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:123px;">K300-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:417px;">Custom Gene Synthesis Service</td>
			<td style="width:176px;">Takara Biotech.</td>
			<td style="width:123px;">-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:417px;">DAPI(4&#39;,6-Diamidino-2-Phenylindole, Dihydrochloride)</td>
			<td style="width:176px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:123px;">D1306</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:417px;">F4/80-PE anti-mouse antibody for FACS</td>
			<td style="width:176px;">Biolegend</td>
			<td style="width:123px;">Cat123110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:417px;">Leica DMI3000 B&#160; Inverted Microscope</td>
			<td style="width:176px;">Leica Microsystems</td>
			<td style="width:123px;">-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:417px;">PE Rat IgG2a, &#954;-isotype control</td>
			<td style="width:176px;">Biolegend</td>
			<td style="width:123px;">Cat400507</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:417px;">Phalloidin 633 fluorescence dye conjugated working solution</td>
			<td style="width:176px;">AAT Bioquest</td>
			<td style="width:123px;">Cat23125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:417px;">Thioglycollate medium</td>
			<td style="width:176px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:123px;">T9032</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

using enhanced green fluorescence protein-expressing escherichia coli to assess mouse peritoneal macrophage phagocytosis

Este manuscrito descreve um método simples e reprodutível para realizar um ensaio de fagocitose. A primeira parte deste método envolve a construção de um vetor de animal de estimação-sumô-EGFP (sumô = pequeno ubiquitin-como modificador) e expressando reforçada proteínas fluorescência verde (EGFP) em Escherichia coli (BL21DE). EGFP-expressando a Escherichia coli é coincubated com macrófagos durante 1 h a 37 ° C; o grupo de controle negativo é incubado no gelo para a mesma quantidade de tempo. Em seguida, os macrófagos estão prontos para avaliação. As vantagens desta técnica incluem seus passos simples e direto, e fagocitose pode ser medida por ambos os microscópio de fluxo citômetro e fluorescência. O EGFP-expressando Escherichia coli são estáveis e exibir um sinal forte fluorescência mesmo depois que os macrófagos são fixos com paraformaldeído. Este método não é apenas adequado para a avaliação da linha de celular de macrófagos ou macrófagos primários em vitro mas também apropriado para a avaliação de fagocitose de granulócitos e monócitos em células mononucleares de sangue periférico. Os resultados mostram que a capacidade fagocítica de macrófagos peritoneais de ratos jovens de (oito semanas de idade) é maior que a de macrófagos de ratos envelhecidos de (16 meses). Em resumo, este método mede a fagocitose de macrófagos e é adequado para estudar a função do sistema imune inato.

O vetor de animal de estimação-sumô utiliza um modificador ubiquitin-como pequeno para permitir a expressão de proteínas nativas na e. coli. Fusão de sumô pode melhorar consideravelmente a solubilidade EGFP, permitindo-lhe ser detectado facilmente. Se a expressão EGFP com êxito é induzida pela lactose, colônias verdes podem ser observadas no escuro (figura 1A). Pontos verdes, que representam o EGFP-expressando Escherichia coli, po...

Watch this Scientific Journal Video about Using Enhanced Green Fluorescence Protein-expressing Escherichia Coli to Assess Mouse Peritoneal Macrophage Phagocytosis at JoVE.com

Using Enhanced Green Fluorescence Protein-expressing Escherichia Coli to Assess Mouse Peritoneal Macrophage Phagocytosis

Usando avançada proteína de fluorescência verde-expressando Escherichia Coli para avaliar a fagocitose de macrófagos peritoneais de Mouse

Aqui, apresentamos um protocolo para avaliar a fagocitose de macrófagos peritoneais de rato usando reforçada fluorescência verde proteína-expressando a Escherichia coli.

This manuscript describes a simple and reproducible method to perform a phagocytosis assay. The first part of this method involves building a ...

Este protocolo demonstrou um método simples e produtível para avaliar a capacidade de fagocitose de macrófagos usando Escherichia coli expressante pelo EGFP. Olá, meu nome é Jun-Yu do Segundo Hospital da Universidade Médica de Dalian. Hoje vamos mostrar-lhe uma maneira fácil e visualizar a maneira de avaliar a fagocitose macrófago que pode ser facilmente feito dentro de duas horas.Este método foi amplamente utilizado no estudo da função imunológica inata. Acredita-se que a função imunológica inata permaneceu intacta em idosos. Então hoje vamos isolar os macrófagos peritoneal dos camundongos idosos e jovens e ver a capacidade fagocítica desses dois grupos.Bem, vamos começar. Em primeiro lugar, sintetize o fragmento genético EGFP e clone o fragmento usando polimerase de DNA Taq de alta fidelidade. Em seguida, liga o produto PCR no vetor pET SUMO.Em terceiro lugar, transforme os produtos de ligadura na cepa E.coli e induza a expressão EGFP com lactose. Estes E.coli expressos em EGFP serviram como o marcador para o ensaio de fagocitose. Em seguida, um macrófago de peritônio do rato foi isolado e cultivado.Em seguida, egfp-expressing E.coli foram coincubated com os macrófagos por uma hora a 37 graus centígrees. Após a etapa de saciamento, os macrófagos estavam prontos para avaliação tanto pelo microscópio de fluorescência quanto pelo citômetro de fluxo. Sintetizar o fragmento genético EGFP e amplificar o fragmento com um primers para frente e para trás usando polimerase de DNA Taq de alta fidelidade.Para garantir que os produtos PCR tivessem saliências únicas de adenina de três extremidades para clonagem de TA na etapa seguinte, recomenda-se uma extensão de 30 minutos a 72 graus centígrados após o último ciclo. Verifique o produto PCR por eletroforese de gel agarose. Se o fragmento foi amplificado corretamente, uma banda de 717 bp pode ser observada no gel.Clone o produto PCR no vetor pET SUMO usando o método de clonagem TA com ligase de DNA T4. Incubar a reação à temperatura ambiente por 30 minutos. Adicione cinco microliter de produto PCR em 100 microliter de células competentes BL21.Choque térmico das células a 42 graus centígrado por 90 segundos, em seguida, manter a mistura no gelo por três minutos. Adicione 400 microliter de meio LB, pré-aquecido a 37 graus centígrados. Balançando uma hora a 37 graus centígrados e 120 rpm.Inocular a bactéria na superfície da placa LB com 100 microgramas por mililitro kanamycin para testar o E.coli transformado em vetor. Incubar a placa no forno centigres de 37 graus durante a noite. No dia seguinte, inocular uma colônia positiva em cinco mililitros de mídia LB com 100 microgramas por mililitro kanamycin.Incubar na incubadora de centígres de 37 graus a tremer a 120 rpm por duas horas. Em seguida, adicione a lactose indutor a uma concentração final de 0,5 milimole por litro e continue tremendo seis horas, induzindo a expressão EGFP. Empiricamente, ao tremer seis horas, o OD600 pode chegar a 0,7 ou mais.Finalmente, utilizando microscópio de fluorescência para verificar a extensão da expressão EGFP. Adicione 10 microliter do meio de cultura bacteriana a um slide. Em seguida, cubra com um deslizamento de cobertura.Examine a expressão de EGFP sob o microscópio de fluorescência. Adicione 3,5 gramas de tioglicolato em 100 mililitros de água destilada. Esterilize em autoclave antes de usar.Aspire o meio de tioglicolato na seringa estéril de um mililitro no capô. Um rato por seringa para evitar a infecção. Injete um mililitro de 3,5% de thioglycollate médio na cavidade peritoneal do camundongo usando uma agulha de calibre 23 e mantenha o rato com água e ad libitum alimentar por três dias.Após três dias, eutanize o rato por deslocamento cervical depois de induzir rapidamente anestesia por sevoflurano em uma caixa fechada. Em seguida, coloque o mouse em um prato com 75% de etanol para estéril e transfira para o capô rapidamente. Coloque o mouse na placa e fixe a pata dianteira na placa para fixar a posição do mouse.Usando uma seringa de cinco mililitros com uma agulha de calibre 20, injete cinco mililitros de PBS frio no abdômen inferior na cavidade peritoneal do rato, evitando perfurar o intestino. Faça uma massagem suave em dois lados do abdômen do rato. Em seguida, aspire o fluido abdominal suavemente e lentamente.Distribua o fluido peritoneal em um tubo de centrífuga de 50 mililitros. Repita esses passos duas ou três vezes. Centrifugar as células suspensas por 10 minutos a 400 g em quatro a oito centígradas.Descarte o supernasal e resuspenque a pelota celular em meio RPMI 1640 com soro bovino fetal de 10%. Adicione cinco milhões de células em cada poço da placa de seis poços para o ensaio de citometria de fluxo e 500.000 células por poço em uma placa de 24 poços para microscópio de fluorescência. Cultura as células a 37 graus centígrado em uma incubadora de dióxido de carbono 5% durante a noite.O meio de cultura pode ser atualizado após três horas para remover células não aadeentes porque a maioria delas eram linfócitos. Observe as células sob um microscópio de campo brilhante para avaliar a viabilidade celular e a densidade celular. A imagem mostrada aqui estava em condições normais da célula primária.Normalmente, a densidade das células macrófagos não era alta, porque grande parte das células peritoneais eram linfócitos. Remova o meio de cultura da placa de 24 poços. Adicione 100 microliter de cultura fresca média e 10 microliter de meio bacteriano.Em seguida, incubar a placa a 37 graus centígrado em uma incubadora de dióxido de carbono de 5% por uma hora. Lave suavemente com 500 microliter de PBS frio por poço três a cinco vezes para lavar bactérias não internalizadas. Incubar as células com 4% de formaldeído em PBS à temperatura ambiente por 30 minutos.Lave as células com PBS três vezes. Adicione a solução de trabalho conjugal 633 conjugada para manchar f-actin. Guarde em um lugar escuro e úmido à temperatura ambiente por 60 minutos.Adicione a solução de trabalho DAPI para manchar a célula nuclear e incubar por cinco minutos em um lugar escuro à temperatura ambiente. Enxágüe uma vez com PBS e uma vez com o mesmo volume em água destilada. O EGFP-expressing E.coli exibido em verde serviu como marcador de fagocitose.Para minimizar erros experimentais e fazer a interpretação adequada dos resultados, defina grupos e tubos de controle para o experimento conforme listado na Tabela 2. Para o grupo controle que será colocado no gelo, remova o meio da placa de seis poços e lave com PBS uma vez. Em seguida, adicione 70 milimole por litro frio EDTA um mililitro no poço para desapegar as células e transferir para o tubo de citometria de fluxo.Adicione 50 microliter de suspensão bacteriana no tubo e coloque-o no gelo por uma hora. Para os outros grupos, remova o meio de cultura, adicione um mililitro fresco em cada poço. Adicione 50 microliter de suspensão de bactérias nos poços de acordo com a configuração do grupo, conforme descrito na tabela dois.Em seguida, coloque a placa de seis poços na incubadora centígrada de 37 graus de 5% de dióxido de carbono por uma hora. Para saciar a fluorescência de E.coli não internalizado, adicione 200 microliter de 0,8% de solução de água violeta cristalina no poço e balance em breve. Esta etapa visava evitar o resultado falso positivo pela ligação E.coli EGFP à superfície dos macrófagos, mas não internalizada.Lave as células com PBS três vezes para remover qualquer violeta residual. Em seguida, adicione 70 milimole por litro frio EDTA um mililitro no poço para desapegar as células e transferir para o tubo de citometria de fluxo. Centrifugar os tubos 2.000 rpm cinco minutos e descartar o supernasal.Adicione 100 microliter de PBS para resuspensar as células. Adicione cinco microliter de anticorpo conjugado ATP F4 nos tubos ou isótipo de acordo com a configuração do grupo. Vórtice brevemente e incubar as amostras no gelo por cinco a 10 minutos no escuro.Adicione um PBS mililitro em cada tubo e centrífuga 2.000 rpm cinco minutos. Descarte o supernaspeso. Resuspense as pelotas celulares com 200 a 300 microliter de PBS para análise de citometria de fluxo.Execute cada tubo e adquira dados para pelo menos 10.000 eventos de células F4/80 positivas. Aqui estão as imagens de fluorescência de macrófagos peritoneais dos grupos jovens e idosos. A fluorescência vermelha representa f-actin.O verde representa e.coli expressante e.coli, e o azul representa núcleo manchado pelo DAPI. Essas imagens sugerem que os macrófagos do camundongo jovem tinham uma habilidade fagocítica mais forte do que os do rato envelhecido. As células F4/80 positivos e EGFP-positivo indicaram a capacidade fagocítica dos macrófagos.Esses resultados são consistentes com a tendência dos resultados do microscópio de fluorescência. Bem, veja, embora o número de células imunes inatas possa ser preservado em camundongos envelhecidos, a habilidade fagocítica diminuiu significativamente em comparação com o camundongo jovem. Muitos métodos têm sido empregados para avaliar a fagocitose macrófago.Aqui demonstramos um método aprimorado que seja conveniente, rápido e economicamente viável. Com egfp expressando E.coli, um ensaio de fagocitose pode ser facilmente realizado e medido tanto pelo citómetro de fluxo quanto pelo microscópio fluorescente, de acordo com as preferências do pesquisador. Além disso, este método mede diretamente a capacidade fagocítica.Os resultados são mais reprodutíveis do que outros métodos indiretos.

Research

Education

JoVE Journal

JoVE Core

Cell Biology

Immunology and Infection

Using Enhanced Green Fluorescence Protein-expressing Escherichia Coli to Assess Mouse Peritoneal Macrophage Phagocytosis

Unit 1

Endocytosis and Exocytosis

SCIENTISTS IN ACTION

Isolation of Mouse Peritoneal Cavity Cells

Isolamento de células de camundongo Peritoneal Cavity

The peritoneal cavity is a membrane-bound and fluid-filled abdominal cavity of mammals, which contains the liver, spleen, most of the gastro-intestinal ...

Imunologia e Infecção

Non-Invasive Model of Neuropathogenic Escherichia coli Infection in the Neonatal Rat

Non-Invasive Model of Neuropathogenic Escherichia coli Infection in the Neonatal Rat

Modelo não-invasiva da neuropatogênicos<em&gt; Escherichia coli</em&gt; Infecção no Rato Neonatal

Investigation of the interactions between animal host and bacterial pathogen is only meaningful if the infection model employed replicates the principal ...

High Throughput Fluorometric Technique for Assessment of Macrophage Phagocytosis and Actin Polymerization

Técnica High Throughput Fluorometric de Avaliação da macrófago fagocitose e actina Polimerização

The goal of fluorometric analysis is to serve as an efficient, cost effective, high throughput method of analyzing phagocytosis and other cellular ...

Macrophage Cholesterol Depletion and Its Effect on the Phagocytosis of Cryptococcus neoformans

Macrophage Cholesterol Depletion and Its Effect on the Phagocytosis of Cryptococcus neoformans

Macrófago Colesterol Exaustão e seu efeito sobre a fagocitose de<em&gt; Cryptococcus neoformans</em

Cryptococcosis is a life-threatening infection caused by pathogenic fungi of the genus Cryptococcus. Infection occurs upon inhalation of spores, which are ...

One-step Negative Chromatographic Purification of Helicobacter pylori Neutrophil-activating Protein Overexpressed in Escherichia coli in Batch Mode

One-step Negative Chromatographic Purification of Helicobacter pylori Neutrophil-activating Protein Overexpressed in Escherichia coli in Batch Mode

Um passo de purificação cromatográfica de Negativo<em&gt; Helicobacter pylori</em&gt; Neutrófilos-proteína de activação sobre-expresso em<em&gt; Escherichia coli</em&gt; Em Modo Batch

Helicobacter pylori neutrophil-activating protein (HP-NAP) is a major virulence factor of Helicobacter pylori (H. pylori). It plays a critical role in H. ...

Creation of a Dense Transposon Insertion Library Using Bacterial Conjugation in Enterobacterial Strains Such As Escherichia Coli or Shigella flexneri

Creation of a Dense Transposon Insertion Library Using Bacterial Conjugation in Enterobacterial Strains Such As Escherichia Coli or Shigella flexneri

Criação de um denso Transposon inserção biblioteca usando bacteriana conjugação em entérobactérienne cepas tais como Escherichia Coli ou Shigella flexneri

Transposon mutagenesis is a method that allows gene disruption via the random genomic insertion of a piece of DNA called a transposon. The protocol below ...

Overexpression and Purification of Human Cis-prenyltransferase in Escherichia coli

Overexpression and Purification of Human Cis-prenyltransferase in Escherichia coli

Sobreexpressão e purificação do ser humano<em&gt; Cis</em&gt; -preniltransferase em<em&gt; Escherichia coli</em

Prenyltransferases (PT) are a group of enzymes that catalyze chain elongation of allylic diphosphate using isopentenyl diphosphate (IPP) via multiple ...

Visualizing Macrophage Extracellular Traps Using Confocal Microscopy

Visualizando o macrófago armadilhas extracelular usando microscopia Confocal

A primary method used to define the presence of neutrophil extracellular traps (NETs) is confocal microscopy. We have modified established confocal ...

Assessment of Antibody-based Drugs Effects on Murine Bone Marrow and Peritoneal Macrophage Activation

Avaliação dos efeitos de drogas baseados em anticorpo murino da medula óssea e ativação de macrófagos peritoneais

Macrophages are phagocytic innate immune cells, which initiate immune responses to pathogens and contribute to healing and tissue restitution. Macrophages ...

A Facile Protocol to Generate Site-Specifically Acetylated Proteins in Escherichia Coli

A Facile Protocol to Generate Site-Specifically Acetylated Proteins in Escherichia Coli

Um protocolo Facile para gerar proteínas Site-Specifically acetiladas em Escherichia Coli

Post-translational modifications that occur at specific positions of proteins have been shown to play important roles in a variety of cellular processes. ...