Name: using enhanced green fluorescence protein-expressing escherichia coli to assess mouse peritoneal macrophage phagocytosis
Uploaded: 2019-01-04T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Using Enhanced Green Fluorescence Protein-expressing Escherichia Coli to Assess Mouse Peritoneal Macrophage Phagocytosis at JoVE.com

Национальный фонд Китая естественных наук (№ 31800046) и естественные науки фонд провинции Ляонин (№ 20170540262) поддержали эту работу. Эта работа была выполнена в лаборатории научно-исследовательского центра на второй больницы Даляньский медицинский университет. Авторы хотели бы поблагодарить Сяо-Лин Санг за помощь с проточной цитометрии и Qu Бо и Донг-цюань Ян за их помощь в производстве видео.

Все процедуры были проведены под национальные институты здравоохранения руководящие принципы для ухода и использования лабораторных животных, и протоколы были одобрены животное уход и использование Комитета Даляньский медицинский университет. 16 месячного (с массой тела 30-35 g) и 8 неде...

<ol>
	<li>Layoun, A., Samba, M., Santos, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+murine+peritoneal+macrophages+to+carry+out+gene+expression+analysis+upon+Toll-like+receptors+stimulation.">Isolation of murine peritoneal macrophages to carry out gene expression analysis upon Toll-like receptors stimulation.</a> Journal of Visualized Experiments. 98, e52749 (2015).</li><li>Iskander, K. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sepsis:+multiple+abnormalities,+heterogeneous+responses,+and+evolving+understanding.">Sepsis: multiple abnormalities, heterogeneous responses, and evolving understanding.</a> Physiological Reviews. 93 (3), 1247-1288 (2013).</li><li>Girard, T. D., Opal, S. M., Ely, E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insights+into+severe+sepsis+in+older+patients:+from+epidemiology+to+evidence-based+management.">Insights into severe sepsis in older patients: from epidemiology to evidence-based management.</a> Clinical Infectious Diseases. 40 (5), 719-727 (2005).</li><li>Bicker, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+assay+to+measure+phagocytosis+of+live+bacteria.">A simple assay to measure phagocytosis of live bacteria.</a> Clinical Chemistry. 54 (5), 911-915 (2008).</li><li>Zhou, M. Y., Gomez-Sanchez, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Universal+TA+cloning.">Universal TA cloning.</a> Current Issues in Molecular Biology. 2 (1), 1-7 (2000).</li><li>Chen, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Triggering+receptor+expressed+on+myeloid+cells-2+protects+against+polymicrobial+sepsis+by+enhancing+bacterial+clearance.">Triggering receptor expressed on myeloid cells-2 protects against polymicrobial sepsis by enhancing bacterial clearance.</a> American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 188 (2), 201-212 (2013).</li><li>Lamberti, G., de Araujo, M. E., Huber, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+Macrophage+Early+and+Late+Endosomes+by+Latex+Bead+Internalization+and+Density+Gradient+Centrifugation.">Isolation of Macrophage Early and Late Endosomes by Latex Bead Internalization and Density Gradient Centrifugation.</a> Cold Spring Harbor Protocols. (12), (2015).</li><li>Miksa, M., Komura, H., Wu, R., Shah, K. G., Wang, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+method+to+determine+the+engulfment+of+apoptotic+cells+by+macrophages+using+pHrodo+succinimidyl+ester.">A novel method to determine the engulfment of apoptotic cells by macrophages using pHrodo succinimidyl ester.</a> Journal of Immunological Methods. 342 (1-2), 71-77 (2009).</li><li>Weingart, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+labels+influence+phagocytosis+of+Bordetella+pertussis+by+human+neutrophils.">Fluorescent labels influence phagocytosis of Bordetella pertussis by human neutrophils.</a> Infection and Immunity. 67 (8), 4264-4267 (1999).</li><li>Neaga, A., Lefor, J., Lich, K. E., Liparoto, S. F., Xiao, Y. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+validation+of+a+flow+cytometric+method+to+evaluate+phagocytosis+of+pHrodo+BioParticles(R)+by+granulocytes+in+multiple+species.">Development and validation of a flow cytometric method to evaluate phagocytosis of pHrodo BioParticles(R) by granulocytes in multiple species.</a> Journal of Immunological Methods. 390 (1-2), 9-17 (2013).</li><li>Ninkovic, J., Roy, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+throughput+fluorometric+technique+for+assessment+of+macrophage+phagocytosis+and+actin+polymerization.">High throughput fluorometric technique for assessment of macrophage phagocytosis and actin polymerization.</a> Journal of Visualized Experiments. (93), e52195 (2014).</li></ol>

Шаги в этом протоколе, являются довольно простое и понятное. Одним из важных шагов является побудить EGFP выражение на E. coli. Обычно когда ген от эукариот, как EGFP, планируется выразить в прокариотах, таких как кишечная палочка, есть риск, что белка образует неактивные агрегатов (вк?...

Макрофагального фагоцитоза анализов часто используются для изучения врожденной иммунной функции. Врожденный иммунный ответ может указывать восприимчивость к инфекции. Линии клетки макрофагального широко используются в исследования иммунологии. Однако расширенный отрывок может привести к потере гена и скомпрометировано иммунной функции в этих клеточных линий. Таким образом основной перитонеальные макрофаги являются идеальный объект для изучения клеток функции1.
Хотя считалось, что врожденный иммунный ответ быть нетронутыми в возрасте тело, фагоцитарной способности может уменьшиться по сравнению с что в младшей тела2,3. Здесь мы покажем способ оценить фагоцитоза перитонеальных макрофагов от молодых (8 недельных) и возраста (16-месячного) мыши, с помощью выражения EGFP E. coli, который удобно, быстро и экономически.
Использование штамма EGFP-выражая E. coli является одним из преимуществ этот assay, потому что эти бактерии являются стабильными и отображать сигнал сильная флуоресценция, даже после того, как макрофаги фиксируются параформальдегида 4% (w/v). Кроме того, с помощью выражения EGFP E. coli, исследователи не требуется дальнейшее окрашивание после фагоцитоза, который экономит время. Кроме того макрофаги являются immunoresponsive для поверхностного антигена E. coli , делая E. coli больше подходит для assay фагоцитоза чем используя EGFP-выражая грибов или помечены флуоресцеин бусины.
С EGFP-выражая E. coliфагоцитоз пробирного можно легко осуществляется в 2 h и измеряется как поток цитометрии и флуоресценции микроскопии, в зависимости от назначения исследователя. Так как этот метод напрямую меры фагоцитарной способности, результаты более воспроизводимые чем другие косвенные методы.
Этот метод также были проверены в линии клетки RAW264.7 и периферической крови человека мононуклеарных клеток4. Приведенный ниже текст содержит подробные пошаговые инструкции для выполнения этот assay и освещаются важнейшие шаги, которые исследователи могут изменять для удовлетворения потребностей своих экспериментов.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:886px;" width="887">
	<tbody>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:417px;">BD FACSCanto II Flow cytometer</td>
			<td style="width:176px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:123px;">-</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:417px;">Biotin anti-mouse CD16/32 Antibody</td>
			<td style="width:176px;">Biolegend</td>
			<td style="width:123px;">Cat101303</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:417px;">Champion pET SUMO Protein Expression system</td>
			<td style="width:176px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:123px;">K300-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:417px;">Custom Gene Synthesis Service</td>
			<td style="width:176px;">Takara Biotech.</td>
			<td style="width:123px;">-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:417px;">DAPI(4&#39;,6-Diamidino-2-Phenylindole, Dihydrochloride)</td>
			<td style="width:176px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:123px;">D1306</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:417px;">F4/80-PE anti-mouse antibody for FACS</td>
			<td style="width:176px;">Biolegend</td>
			<td style="width:123px;">Cat123110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:417px;">Leica DMI3000 B&#160; Inverted Microscope</td>
			<td style="width:176px;">Leica Microsystems</td>
			<td style="width:123px;">-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:417px;">PE Rat IgG2a, &#954;-isotype control</td>
			<td style="width:176px;">Biolegend</td>
			<td style="width:123px;">Cat400507</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:417px;">Phalloidin 633 fluorescence dye conjugated working solution</td>
			<td style="width:176px;">AAT Bioquest</td>
			<td style="width:123px;">Cat23125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:417px;">Thioglycollate medium</td>
			<td style="width:176px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:123px;">T9032</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

using enhanced green fluorescence protein-expressing escherichia coli to assess mouse peritoneal macrophage phagocytosis

Эта рукопись описывает простой и воспроизводимый метод для выполнения анализа фагоцитоза. В первой части этого метода предполагает строительство ПЭТ сумо-EGFP вектор (сумо = небольшой убиквитин как модификатор) и выражая зеленый флуоресценции белков (EGFP) в Escherichia coli (BL21DE). Выражая EGFP E. coli coincubated с макрофаги за 1 ч при 37 ° C; отрицательный контроль группы инкубированы на льду за такое же количество времени. Затем макрофаги готовы для оценки. Преимущества этого метода включают шаги его простой и прямой, и фагоцитоза могут быть измерены оба потока цитометр и флуоресцентным микроскопом. Выражая EGFP E. coli являются стабильными и отображать сигнал сильная флуоресценция, даже после того, как макрофаги крепятся с помощью параформальдегида. Этот метод является не только подходит для оценки макрофагов клеточных линий или первичной макрофагов в пробирке, но также подходит для оценки фагоцитоза гранулоцитов и моноцитов в периферической крови мононуклеаров. Результаты показывают, что фагоцитарной способности перитонеальных макрофагов от молодых мышей (8 недельных) выше, чем макрофагов от возраста (16-месячного) мышах. Таким образом этот метод меры макрофагального фагоцитоза и подходит для изучения функции иммунной системы.

ПЭТ сумо вектор использует модификатор маленький убиквитин как разрешить выражение собственных белков в E. coli. СУМО Фьюжн может значительно улучшить EGFP растворимости, что позволяет легко обнаружить. Если выражение EGFP успешно индуцированных лактозы, зеленых коло?...

Watch this Scientific Journal Video about Using Enhanced Green Fluorescence Protein-expressing Escherichia Coli to Assess Mouse Peritoneal Macrophage Phagocytosis at JoVE.com

Using Enhanced Green Fluorescence Protein-expressing Escherichia Coli to Assess Mouse Peritoneal Macrophage Phagocytosis

С помощью усиленной зеленый флуоресценции белков выражая Escherichia Coli оценить мыши перитонеальных макрофагов фагоцитоз

Здесь мы представляем протокол для оценки мыши фагоцитоза перитонеальных макрофагов с помощью расширенной зеленого флуоресценции белков выражая Escherichia coli.

This manuscript describes a simple and reproducible method to perform a phagocytosis assay. The first part of this method involves building a ...

Этот протокол продемонстрировал простой и продукуемый метод оценки фагоцитозной способности макрофагов с использованием EGFP-экспрессии кишечной палочки. Здравствуйте, меня зовут Джун-ю из Второй больницы Даляньского медицинского университета. Сегодня мы собираемся показать вам легко и визуализировать способ оценки макрофаг фагоцитоза, который можно легко сделать в течение двух часов.Этот метод широко использовался при изучении врожденной иммунной функции. Считается, что врожденная иммунная функция осталась нетронутой у пожилых людей. Поэтому сегодня мы собираемся изолировать перитонеальные макрофаги от пожилых и молодых мышей и увидеть фагоцитическую способность этих двух групп.Ну, давайте начнем. Во-первых, синтезировать фрагмент гена EGFP и клонировать фрагмент с помощью высокой точности Taq ДНК полимеразы. Затем завягайте продукт ПЦР в вектор PET SUMO.В-третьих, трансформировать перевязочные продукты в штамм E.coli и вызвать EGFP экспрессии с лактозой. Эти EGFP-выражение E.coli служил маркером для анализа фагоцитоза. Затем, мышь peritoneum макрофаги были изолированы и культурные.Затем, EGFP-выражая E.coli были coincubated с макрофагами в течение одного часа при 37 градусов centigrees. После закалки макрофаги были готовы к оценке как флуоресцентный микроскоп, так и цитометр потока. Синтезировать фрагмент гена EGFP и усилить фрагмент с помощью вперед и пять грунтовки с использованием высокой точности Taq ДНК полимеразы.Для обеспечения того, чтобы продукты ПЦР имели одиночные трехкурсные аденин-свесы для клонирования TA на следующем этапе, рекомендуется 30-минутное расширение на 72 градуса цельсия после последнего цикла. Проверьте продукт ПЦР с помощью электрофорезов агарозного геля. Если фрагмент был усилен правильно, 717 bp полоса может наблюдаться на гель.Клонировать продукт ПЦР в вектор pET SUMO с помощью метода клонирования TA с помощью лигозы ДНК T4. Инкубировать реакцию при комнатной температуре в течение 30 минут. Добавьте пять микролитров продукта ПЦР в 100 микролитров компетентных клеток BL21.Тепло удар клеток на 42 градусов градусов в течение 90 секунд, а затем держать смесь на льду в течение трех минут. Добавьте 400 микролитров ЛБ среднего, разогретого при 37 градусах градусов. Встряхивание один час при 37 градусах градусов и 120 об/мин.Прививка бактерий на поверхности пластины LB с 100 микрограмм на миллилитр канамицин для проверки вектор-преобразованный E.coli. Инкубировать пластину в 37 градусов градусов градусов духовке на ночь. На следующий день, привить положительную колонию в пять миллилитров LB сми со 100 микрограмм на миллилитр канамицин.Инкубировать в 37 градусов centigrees встряхивания инкубатор при 120 об / мин в течение двух часов. Затем добавьте лактозу индуктора в окончательную концентрацию 0,5 миллимоля на литр и продолжайте трястись шесть часов, вызывая выражение EGFP. Эмпирически, при встряхивании шесть часов, OD600 может достигать 0,7 или выше.Наконец, с помощью флуоресцентный микроскоп для проверки степени выражения EGFP. Добавьте 10 микролитров среды бактериальной культуры к слайду. Затем накройте крышкой скольжения.Изучите экспрессию EGFP под флуоресцентный микроскоп. Добавьте 3,5 грамма тиогликолата в 100 миллилитров дистиллированной воды. Стерилизовать в автоклаве перед использованием.Аспирировать тиогликоллатную среду в одномиллилитровый стерильный шприц в капюшоне. Одна мышь на шприц, чтобы избежать инфекции. Ввините один миллилитр 3,5%thioglycollate среды в брюшной полости мыши с помощью 23-го калибра иглы и поддерживать мышь с водой и пищевой ад libitum в течение трех дней.Через три дня усыпляйте мышь путем вывиха шейки матки после быстрого индуцирования анестезии севофлюраном в закрытой коробке. Затем положите мышь в блюдо с 75%этанолом, чтобы стерилизовать и быстро перенести в капюшон. Поместите мышь на тарелку и прикрепите переднюю лапу на доске, чтобы зафиксировать положение мыши.Используя пятими миллилитровый шприц с иглой 20-го калибра, ввимите пять миллилитров холодного PBS в нижнюю часть живота в брюшную полость мыши, избегая прокола кишечника. Выполните нежный массаж с двух сторон живота мыши. Затем аспирировать брюшной жидкости осторожно и медленно.Выпределите брюшной жидкости в 50-миллилитровую центрифугу трубки. Повторите эти шаги два или три раза. Центрифуга подвесных клеток в течение 10 минут при 400 г в четыре-восемь по Цельсию.Отбросьте супернатант и повторно посовекуйте клеточные гранулы в RPMI 1640 среды с 10%фетальной сывороткой крупного рогатого скота. Добавьте пять миллионов клеток в каждый колодец из шести-хорошо пластины для анализа цитометрии потока и 500 000 клеток на колодец в 24-хорошо пластины для флуоресцентного микроскопа. Культура клеток на 37 градусов centigrees в 5%carbon двуокиси инкубатора на ночь.Культурная среда может быть обновлена через три часа, чтобы удалить неадъедерентные клетки, потому что большинство из них были лимфоциты. Наблюдайте за клетками под ярким полевым микроскопом, чтобы оценить жизнеспособность клеток и плотность клеток. Изображение, показанное здесь, было в нормальном состоянии первичной клетки.Как правило, плотность макрофаговых клеток не была высокой, потому что большая часть перитонеаных клеток были лимфоциты. Удалите культурную среду с пластины из 24 колодец. Добавьте 100 микролитров свежей культуры среднего и 10 микролитров бактериальной среды.Затем инкубировать пластину при 37 градусах градусов в 5%углеродного диоксида инкубатора в течение одного часа. Вымойте осторожно с 500 микролитер холодного PBS на хорошо три-пять раз, чтобы вымыть не интернализированных бактерий. Инкубировать клетки с 4%формальдегида в PBS при комнатной температуре в течение 30 минут.Вымойте клетки с PBS три раза. Добавьте фаллоидин 633 конъюгированный рабочий раствор, чтобы окрашивать F-актин. Хранить в темном, влажном месте при комнатной температуре в течение 60 минут.Добавьте рабочий раствор DAPI, чтобы окрашивать ядерную клетку и инкубировать в течение пяти минут в темном месте при комнатной температуре. Промыть один раз с PBS и один раз с тем же объемом в дистиллированной воде. EGFP-выражение E.coli отображается в зеленом служил маркером фагоцитоза.Чтобы свести к минимуму экспериментальные ошибки и сделать надлежащую интерпретацию результатов, установите группы и контрольные трубки для эксперимента, перечисленные в таблице 2. Для контрольной группы, которая будет размещена на льду, удалить среду из шести хорошо пластины и мыть с PBS один раз. Затем добавьте 70 миллимол на литр холодного ЭДТА на миллилитр в колодец, чтобы отсоединить клетки и перенести в поток цитометрии трубки.Добавьте 50 микролитров бактериальной суспензии в трубку и поместите его на лед в течение одного часа. Для других групп, удалить культуру среды, добавить один миллилитр свежей среде в каждом хорошо. Добавьте 50 микролитров суспензии бактерий в скважины в соответствии с группой настройки, как описано в таблице 2.Затем поместите шести-хорошо пластины в 37 градусов centigrees 5%carbon диоксида инкубатора в течение одного часа. Чтобы утолить флуоресценцию не интернализированной E.coli, добавьте 200 микролитров 0,8%кристаллического фиолетового раствора воды в колодец и покачивайся в ближайшее время. Этот шаг был направлен на то, чтобы избежать ложноположительного результата путем привязки EGFP E.coli к поверхности макрофагов, но не интернализированной.Вымойте клетки с PBS три раза, чтобы удалить остатки кристалл фиолетовый. Затем добавьте 70 миллимол на литр холодного ЭДТА на миллилитр в колодец, чтобы отсоединить клетки и перенести в поток цитометрии трубки. Центрифуга труб 2000 об / мин пять минут и отказаться от супернатанта.Добавьте 100 микролитров PBS для повторного перерасхода клеток. Добавьте пять микролитров конъюгированных антител F4 ATP в трубки или изотип в соответствии с настройками группы. Vortex кратко и инкубировать образцы на льду в течение пяти до 10 минут в темноте.Добавьте один миллилитр PBS в каждую трубку и центрифугу 2000 об/мин пять минут. Откажитесь от супернатанта. Повторное распределение клеточных гранул с 200 до 300 микролитров PBS для анализа цитометрии потока.Запустите каждую трубку и получить данные, по крайней мере 10000 событий F4/80-положительных клеток. Вот флуоресценции изображения перитонеального макрофагов из молодых и возрастных групп. Красная флуоресценция представляет F-актин.Зеленый цвет представляет EGFP-экспрессинг E.coli, а синий представляет ядро, окрашенное DAPI. Эти изображения показывают, что макрофаги от молодой мыши имели более сильную фагоцитаную способность, чем у пожилой мыши. F4/80-положительные и EGFP-положительные клетки указали фагоцитическую способность макрофагов.Эти результаты согласуются с тенденцией результатов флуоресценции микроскопа. Ну, вы видите, хотя количество врожденных иммунных клеток может сохраняться в возрасте мыши, фагоцитатические способности значительно снизились по сравнению с молодой мышью. Многие методы были использованы для оценки макрофаг фагоцитоза.Здесь мы демонстрируем усовершенствованные методы, которые удобны, быстры и экономически осуществимы. С EGFP-экспрессирования E.coli, фагоцитоз анализ может быть легко выполнена и измерена как поток цитометра и флуоресцентного микроскопа в соответствии с предпочитает исследователь. Также этот метод непосредственно измеряет фагоцитическую способность.Результаты более воспроизводимы, чем другие косвенные методы.

Research

Education

JoVE Journal

JoVE Core

Cell Biology

Immunology and Infection

Using Enhanced Green Fluorescence Protein-expressing Escherichia Coli to Assess Mouse Peritoneal Macrophage Phagocytosis

Unit 1

Endocytosis and Exocytosis

SCIENTISTS IN ACTION

Isolation of Mouse Peritoneal Cavity Cells

Выделение мышью перитонеальных клеток полости

The peritoneal cavity is a membrane-bound and fluid-filled abdominal cavity of mammals, which contains the liver, spleen, most of the gastro-intestinal ...

Non-Invasive Model of Neuropathogenic Escherichia coli Infection in the Neonatal Rat

Non-Invasive Model of Neuropathogenic Escherichia coli Infection in the Neonatal Rat

Неинвазивного Модель Neuropathogenic<em&gt; Кишечная палочка</em&gt; Инфекция в новорожденной крысы

Investigation of the interactions between animal host and bacterial pathogen is only meaningful if the infection model employed replicates the principal ...

High Throughput Fluorometric Technique for Assessment of Macrophage Phagocytosis and Actin Polymerization

Высокая техника Пропускная Флуорометрический по оценке фагоцитоз макрофагов и полимеризации актина

The goal of fluorometric analysis is to serve as an efficient, cost effective, high throughput method of analyzing phagocytosis and other cellular ...

Macrophage Cholesterol Depletion and Its Effect on the Phagocytosis of Cryptococcus neoformans

Macrophage Cholesterol Depletion and Its Effect on the Phagocytosis of Cryptococcus neoformans

Макрофагов Холестерин истощение и ее влияние на фагоцитоз<em&gt; Cryptococcus neoformans</em

Cryptococcosis is a life-threatening infection caused by pathogenic fungi of the genus Cryptococcus. Infection occurs upon inhalation of spores, which are ...

One-step Negative Chromatographic Purification of Helicobacter pylori Neutrophil-activating Protein Overexpressed in Escherichia coli in Batch Mode

One-step Negative Chromatographic Purification of Helicobacter pylori Neutrophil-activating Protein Overexpressed in Escherichia coli in Batch Mode

Один шаг Отрицательный хроматографической очистки<em&gt; Хеликобактерной</em&gt; Активирующий нейтрофилы белок избыточно экспрессируется в<em&gt; Кишечная палочка</em&gt; В пакетном режиме

Helicobacter pylori neutrophil-activating protein (HP-NAP) is a major virulence factor of Helicobacter pylori (H. pylori). It plays a critical role in H. ...

Creation of a Dense Transposon Insertion Library Using Bacterial Conjugation in Enterobacterial Strains Such As Escherichia Coli or Shigella flexneri

Creation of a Dense Transposon Insertion Library Using Bacterial Conjugation in Enterobacterial Strains Such As Escherichia Coli or Shigella flexneri

Создание плотного Transposon вставки библиотеки с использованием бактериальной сопряжения в энтеробактерий штаммов таких как Кишечная палочка или шигеллам Флекснера

Transposon mutagenesis is a method that allows gene disruption via the random genomic insertion of a piece of DNA called a transposon. The protocol below ...

Overexpression and Purification of Human Cis-prenyltransferase in Escherichia coli

Overexpression and Purification of Human Cis-prenyltransferase in Escherichia coli

Сверхэкспрессия и очищение человека<em&gt; Cis</em&gt; -пренилтрансфераза в<em&gt; Escherichia coli</em

Prenyltransferases (PT) are a group of enzymes that catalyze chain elongation of allylic diphosphate using isopentenyl diphosphate (IPP) via multiple ...

Visualizing Macrophage Extracellular Traps Using Confocal Microscopy

Визуализация внеклеточного ловушки макрофагов с помощью конфокальной микроскопии

A primary method used to define the presence of neutrophil extracellular traps (NETs) is confocal microscopy. We have modified established confocal ...

Assessment of Antibody-based Drugs Effects on Murine Bone Marrow and Peritoneal Macrophage Activation

Оценки воздействия наркотиков на основе антител на мышиных костного мозга и перитонеальных макрофагов активации

Macrophages are phagocytic innate immune cells, which initiate immune responses to pathogens and contribute to healing and tissue restitution. Macrophages ...

A Facile Protocol to Generate Site-Specifically Acetylated Proteins in Escherichia Coli

A Facile Protocol to Generate Site-Specifically Acetylated Proteins in Escherichia Coli

Легковесные протокол для создания Site-Specifically ацетилированный белков в Escherichia Coli

Post-translational modifications that occur at specific positions of proteins have been shown to play important roles in a variety of cellular processes. ...