Name: using enhanced green fluorescence protein-expressing escherichia coli to assess mouse peritoneal macrophage phagocytosis
Uploaded: 2019-01-04T13:00:00
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La Fundación Nacional de Ciencias naturales de China (Nº 31800046) y la Fundación Ciencias naturales de la provincia de Liaoning (Nº 20170540262) apoyan este trabajo. Este trabajo fue realizado en los laboratorios del centro de investigación científica en el segundo Hospital de Dalian Medical University. Los autores desean agradecer a Xiao-Lin Sang su asistencia con la citometría de flujo y Bo Qu y Dong Chuan Yang por su asistencia en la producción de vídeo.

Todos los procedimientos fueron realizados en los institutos nacionales de salud directrices para el cuidado y uso de animales de laboratorio y los protocolos fueron aprobados por el cuidado Animal y uso Comité de Dalian Universidad médica. Dieciséis meses de edad (con un peso de 30-35 g) y ocho semanas de edad se obtuvieron ratones de C57BL/6 (específicos del patógeno-libre) machos (20-25 g) SPF SPF animal del centro de la de la Universidad médica de Dalian. Todos los ratones se mantuvieron en el alojamiento de lo...

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	<li>Layoun, A., Samba, M., Santos, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+murine+peritoneal+macrophages+to+carry+out+gene+expression+analysis+upon+Toll-like+receptors+stimulation.">Isolation of murine peritoneal macrophages to carry out gene expression analysis upon Toll-like receptors stimulation.</a> Journal of Visualized Experiments. 98, e52749 (2015).</li><li>Iskander, K. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sepsis:+multiple+abnormalities,+heterogeneous+responses,+and+evolving+understanding.">Sepsis: multiple abnormalities, heterogeneous responses, and evolving understanding.</a> Physiological Reviews. 93 (3), 1247-1288 (2013).</li><li>Girard, T. D., Opal, S. M., Ely, E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insights+into+severe+sepsis+in+older+patients:+from+epidemiology+to+evidence-based+management.">Insights into severe sepsis in older patients: from epidemiology to evidence-based management.</a> Clinical Infectious Diseases. 40 (5), 719-727 (2005).</li><li>Bicker, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+assay+to+measure+phagocytosis+of+live+bacteria.">A simple assay to measure phagocytosis of live bacteria.</a> Clinical Chemistry. 54 (5), 911-915 (2008).</li><li>Zhou, M. Y., Gomez-Sanchez, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Universal+TA+cloning.">Universal TA cloning.</a> Current Issues in Molecular Biology. 2 (1), 1-7 (2000).</li><li>Chen, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Triggering+receptor+expressed+on+myeloid+cells-2+protects+against+polymicrobial+sepsis+by+enhancing+bacterial+clearance.">Triggering receptor expressed on myeloid cells-2 protects against polymicrobial sepsis by enhancing bacterial clearance.</a> American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 188 (2), 201-212 (2013).</li><li>Lamberti, G., de Araujo, M. E., Huber, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+Macrophage+Early+and+Late+Endosomes+by+Latex+Bead+Internalization+and+Density+Gradient+Centrifugation.">Isolation of Macrophage Early and Late Endosomes by Latex Bead Internalization and Density Gradient Centrifugation.</a> Cold Spring Harbor Protocols. (12), (2015).</li><li>Miksa, M., Komura, H., Wu, R., Shah, K. G., Wang, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+method+to+determine+the+engulfment+of+apoptotic+cells+by+macrophages+using+pHrodo+succinimidyl+ester.">A novel method to determine the engulfment of apoptotic cells by macrophages using pHrodo succinimidyl ester.</a> Journal of Immunological Methods. 342 (1-2), 71-77 (2009).</li><li>Weingart, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+labels+influence+phagocytosis+of+Bordetella+pertussis+by+human+neutrophils.">Fluorescent labels influence phagocytosis of Bordetella pertussis by human neutrophils.</a> Infection and Immunity. 67 (8), 4264-4267 (1999).</li><li>Neaga, A., Lefor, J., Lich, K. E., Liparoto, S. F., Xiao, Y. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+validation+of+a+flow+cytometric+method+to+evaluate+phagocytosis+of+pHrodo+BioParticles(R)+by+granulocytes+in+multiple+species.">Development and validation of a flow cytometric method to evaluate phagocytosis of pHrodo BioParticles(R) by granulocytes in multiple species.</a> Journal of Immunological Methods. 390 (1-2), 9-17 (2013).</li><li>Ninkovic, J., Roy, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+throughput+fluorometric+technique+for+assessment+of+macrophage+phagocytosis+and+actin+polymerization.">High throughput fluorometric technique for assessment of macrophage phagocytosis and actin polymerization.</a> Journal of Visualized Experiments. (93), e52195 (2014).</li></ol>

Los pasos de este protocolo están muy simple y sencilla. Uno de los pasos críticos es inducir la expresión de EGFP en e. coli. Generalmente, cuando un gen de eucariotes, como EGFP, está previsto expresar en procariotes como la e. coli, existe el riesgo de que la proteína forma agregados inactivos (cuerpos de inclusión), que cambia la estructura nativa de la proteína y la actividad. Utilizando el vector pET-SUMO y construyendo el plásmido pET-SUMO-EGFP, la proteína de la fusión de EGFP-SUMO exp...

Ensayos de fagocitosis del macrófago se utilizan a menudo para el estudio de la función inmune innata. La respuesta inmunitaria innata puede indicar susceptibilidad a la infección. Líneas celulares de macrófagos son ampliamente utilizadas en estudios de Inmunología. Sin embargo, el paso extendido puede causar la pérdida de gene y compromete las funciones inmunológicas en estas líneas celulares. Así, los macrófagos peritoneales primarios son el objeto ideal para estudiar la función de células1.
Aunque fue probablemente intacto en el cuerpo de la respuesta inmunitaria innata, la capacidad fagocítica puede disminuir con respecto a que en el más joven del cuerpo2,3. Aquí le mostraremos un método para evaluar la fagocitosis de los macrófagos peritoneales de jóvenes (8 semanas de edad) y el ratón de edad (16-month-old) con expresión de EGFP e. coli, que es conveniente, rápida y económicamente factible.
El uso de una cepa de expresión de EGFP e. coli es una de las ventajas de este ensayo ya que estas bacterias son estables y mostrar una señal de fluorescencia fuerte, incluso después de que los macrófagos son fijos por paraformaldehído al 4% (w/v). Además, mediante el uso de la expresión de EGFP e. coli, los investigadores no necesitan tinción más después de la fagocitosis, que ahorra tiempo. Además, los macrófagos son immunoresponsive para el antígeno de superficie de e. coli , lo que e. coli más adecuado para el ensayo de fagocitosis que el uso de la expresión de EGFP hongos o granos marcados con fluoresceína.
Con expresión de EGFP e. coli, un ensayo de fagocitosis puede ser fácilmente realizado en 2 h y medido por tanto flujo cytometry y fluorescencia microscopía, dependiendo del propósito del investigador. Puesto que este método mide directamente la capacidad fagocítica, los resultados son más reproducibles que otros métodos indirectos.
Este método ha sido validado también en una línea de 264.7 células y células de sangre periférica mononuclear4. El texto siguiente proporciona las instrucciones detalladas paso a paso para realizar este análisis y destaca los pasos críticos que los investigadores pueden modificar para satisfacer las necesidades de sus experimentos.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:886px;" width="887">
	<tbody>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:417px;">BD FACSCanto II Flow cytometer</td>
			<td style="width:176px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:123px;">-</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:417px;">Biotin anti-mouse CD16/32 Antibody</td>
			<td style="width:176px;">Biolegend</td>
			<td style="width:123px;">Cat101303</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:417px;">Champion pET SUMO Protein Expression system</td>
			<td style="width:176px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:123px;">K300-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:417px;">Custom Gene Synthesis Service</td>
			<td style="width:176px;">Takara Biotech.</td>
			<td style="width:123px;">-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:417px;">DAPI(4&#39;,6-Diamidino-2-Phenylindole, Dihydrochloride)</td>
			<td style="width:176px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:123px;">D1306</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:417px;">F4/80-PE anti-mouse antibody for FACS</td>
			<td style="width:176px;">Biolegend</td>
			<td style="width:123px;">Cat123110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:417px;">Leica DMI3000 B&#160; Inverted Microscope</td>
			<td style="width:176px;">Leica Microsystems</td>
			<td style="width:123px;">-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:417px;">PE Rat IgG2a, &#954;-isotype control</td>
			<td style="width:176px;">Biolegend</td>
			<td style="width:123px;">Cat400507</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:417px;">Phalloidin 633 fluorescence dye conjugated working solution</td>
			<td style="width:176px;">AAT Bioquest</td>
			<td style="width:123px;">Cat23125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:417px;">Thioglycollate medium</td>
			<td style="width:176px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:123px;">T9032</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

using enhanced green fluorescence protein-expressing escherichia coli to assess mouse peritoneal macrophage phagocytosis

Este manuscrito describe un método simple y reproducible para realizar un ensayo de fagocitosis. La primera parte de este método implica la construcción de un vector pET-SUMO-EGFP (SUMO = pequeño ubiquitin-like modifier) y expresión de la proteína de fluorescencia verde (EGFP) en Escherichia coli (BL21DE). Expresión de EGFP e. coli es coincubated con los macrófagos por 1 h a 37 ° C; el grupo control negativo se incuba en hielo para la misma cantidad de tiempo. Entonces, los macrófagos están listos para la evaluación. Las ventajas de esta técnica incluyen sus pasos sencillo y fagocitosis puede ser medida por ambos microscopio de flujo citómetro y fluorescencia. La expresión de EGFP e. coli son estables y mostrar una señal de fluorescencia fuerte incluso después de que los macrófagos son fijados con paraformaldehido. Este método no sólo es adecuado para la evaluación de las líneas celulares de macrófagos o macrófagos primarios en vitro pero también conveniente para la evaluación de la fagocitosis de granulocitos y monocitos en células mononucleares de sangre periférica. Los resultados muestran que la capacidad fagocitaria de los macrófagos peritoneales de ratones jóvenes (ocho semanas de edad) es mayor que la de los macrófagos de ratones (16 meses de edad) años de edad. En Resumen, este método mide la fagocitosis de macrófagos y es conveniente para estudiar la función del sistema inmune innato.

El vector pET-SUMO utiliza un pequeño modificador de ubiquitina-como para permitir la expresión de proteínas nativas en la e. coli. Fusión de SUMO puede mejorar considerablemente la solubilidad EGFP, lo que le permite ser detectado fácilmente. Si la expresión de EGFP con éxito es inducida por lactosa, se observan colonias verdes en la oscuridad (figura 1A). Puntos verdes, que representan la expresión de EGFP e. coli, se observan bajo...

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Using Enhanced Green Fluorescence Protein-expressing Escherichia Coli to Assess Mouse Peritoneal Macrophage Phagocytosis

Utilizando mayor expresión de proteína de fluorescencia verde Escherichia Coli evaluar fagocitosis de macrófagos peritoneales de ratón

Aquí, presentamos un protocolo para evaluar la fagocitosis de macrófagos peritoneales de ratón usando la fluorescencia verde mayor expresando proteínas de Escherichia coli.

This manuscript describes a simple and reproducible method to perform a phagocytosis assay. The first part of this method involves building a ...

Este protocolo demostró un método simple y producible para evaluar la capacidad de la fagocitosis de los macrófagos utilizando Escherichia coli, que expresa EGFP. Hola, mi nombre es Jun-Yu de The Second Hospital de la Universidad Médica de Dalian. Hoy vamos a mostrarte una manera fácil y visualizar la manera de evaluar la fagocitosis de macrófagos que se puede hacer fácilmente dentro de dos horas.Este método fue ampliamente utilizado en el estudio de la función inmune innata. Se cree que la función inmune innata permaneció intacta en los ancianos. Así que hoy vamos a aislar los macrófagos peritoneales de los ratones ancianos y jóvenes y a ver la capacidad fagocítica de estos dos grupos.Bueno, empecemos. En primer lugar, sintetizar el fragmento del gen EGFP y clonar el fragmento utilizando la polimerasa de ADN Taq de alta fidelidad. A continuación, ligar el producto PCR en el vector pET SUMO.En tercer lugar, transformar los productos de ligadura en la cepa E.coli e inducir EGFP expresar con lactosa. Estos E.coli que expresan EGFP sirvieron como marcador para el ensayo de fagocitosis. A continuación, se aislaron y cultivaron macrófagos peritoneo de ratón.Entonces, E.coli, expresión de EGFP, fueron acuñados con los macrófagos durante una hora a 37 grados centigrees. Después de la etapa de enfriamiento, los macrófagos estaban listos para ser evaluados tanto por el microscopio de fluorescencia como por el citómetro de flujo. Sintetice el fragmento del gen EGFP y amplifica el fragmento con una imprimación hacia adelante y hacia atrás utilizando polimerasa de ADN Taq de alta fidelidad.Para garantizar que los productos de PCR tuvieran voladizos de adenina de tres extremos para clonación de TA en el siguiente paso, se recomienda una extensión de 30 minutos a 72 grados centigrees después del último ciclo. Compruebe el producto PCR mediante electroforesis de gel de agarosa. Si el fragmento se ha amplificado correctamente, se puede observar una banda de 717 bp en el gel.Clonar el producto PCR en el vector pET SUMO utilizando el método de clonación TA con ligasa de ADN T4. Incubar la reacción a temperatura ambiente durante 30 minutos. Agregue cinco microlitros de producto PCR en 100 microlitrotro de células competentes para BL21.Caliente los golpes de las células a 42 grados centígrados durante 90 segundos, luego mantenga la mezcla sobre hielo durante tres minutos. Añadir 400 microlitrotro de medio LB, precalentado a 37 grados centígrados. Temblando una hora a 37 grados centígrados y 120 rpm.Inocular las bacterias sobre la superficie de la placa LB con 100 microgramos por mililitro de kanamicina para cribar la E.coli transformada en vector. Incubar la placa en el horno de 37 grados centigrees durante la noche. Al día siguiente, inocular una colonia positiva en cinco mililitros de medios LB con 100 microgramos por mililitro de kanamicina.Incubar en la incubadora de temblores de 37 grados a 120 rpm durante dos horas. A continuación, añadir la lactosa inductora a una concentración final de 0,5 mililitros por litro y continuar agitando seis horas, induciendo la expresión EGFP. Empíricamente, al agitar seis horas, el OD600 puede llegar a 0.7 o superior.Por último, utilizando el microscopio de fluorescencia para verificar la extensión de la expresión de EGFP. Añadir 10 microlitrotro del medio de cultivo bacteriano a un portaobjetos. A continuación, cubra con un resbalón de cubierta.Examine la expresión de EGFP bajo el microscopio de fluorescencia. Añadir 3,5 gramos de tioginato en 100 mililitros de agua destilada. Esterilizar en autoclave antes de su uso.Aspirar el medio de tioboleo en la jeringa estéril de un mililitro en la capucha. Un ratón por jeringa para evitar la infección. Inyecte un mililitro de 3,5% de medio de tiolicivo en la cavidad peritoneal del ratón utilizando una aguja de calibre 23 y mantenga el ratón con agua y alimentos ad libitum durante tres días.Después de tres días, eutanasia el ratón por luxación cervical después de inducir rápidamente la anestesia por sevoflurano en una caja cerrada. Luego, ponga el ratón en un plato con 75% de etanol a estéril y transfiera a la capucha rápidamente. Coloque el ratón sobre la placa y coloque la pata delantera en la placa para fijar la posición del ratón.Usando una jeringa de cinco mililitros con una aguja de calibre 20, inyecte cinco mililitros de PBS frío en la parte inferior del abdomen en la cavidad peritoneal del ratón, evitando perforar el intestino. Realice un suave masaje en dos lados del abdomen del ratón. A continuación, aspirar el líquido abdominal suavemente y lentamente.Dispensar el líquido peritoneal en un tubo centrífugo de 50 mililitros. Repita estos pasos dos o tres veces. Centrifugar las células suspendidas durante 10 minutos a 400 g en cuatro a ocho grados centígrados.Deseche el sobrenadante y resuspendir el pellet celular en el medio RPMI 1640 con 10%suero bovino fetal. Agregue cinco millones de células a cada pozo de la placa de seis pozos para el ensayo de citometría de flujo y 500.000 células por pozo en una placa de 24 pozos para microscopio de fluorescencia. Cultivo de las células a 37 grados centigrees en una incubadora de dióxido de carbono 5% durante la noche.El medio de cultivo se puede actualizar después de tres horas para eliminar las células no adherentes porque la mayoría de estos eran linfocitos. Observe las células bajo un microscopio de campo brillante para evaluar la viabilidad celular y la densidad celular. La imagen que se muestra aquí estaba en condiciones normales de la celda primaria.Por lo general, la densidad celular del macrófago no era alta, porque la mayor parte de las células peritoneales eran linfocitos. Retire el medio de cultivo de la placa de 24 pozos. Añadir 100 microlitrotro de medio de cultivo fresco y 10 microlitrotro de medio bacteriano.Luego incubar la placa a 37 grados centígrados en una incubadora de dióxido de carbono del 5% durante una hora. Lavar suavemente con 500 microlitro de PBS frío por pozo de tres a cinco veces para lavar las bacterias no internalizadas. Incubar las células con 4%formaldehído en PBS a temperatura ambiente durante 30 minutos.Lave las células con PBS tres veces. Añadir solución de trabajo conjugada de faloide 633 para manchar la F-actina. Conservar en un lugar oscuro y húmedo a temperatura ambiente durante 60 minutos.Agregue la solución de trabajo DAPI para manchar la célula nuclear e incubar durante cinco minutos en un lugar oscuro a temperatura ambiente. Enjuagar una vez con PBS y una vez con el mismo volumen en agua destilada. El E.coli que expresa EGFP en verde sirvió como marcador de fagocitosis.Para minimizar los errores experimentales y hacer una interpretación adecuada de los resultados, establezca grupos y tubos de control para el experimento como se indica en la Tabla 2. Para el grupo de control que se colocará sobre el hielo, retire el medio de la placa de seis pozos y lave con PBS una vez. Luego agregue 70 mililitros por litro de EDTA frío un mililitro en el pozo para separar las células y transferirlas al tubo de citometría de flujo.Agregue 50 microlitro de suspensión bacteriana en el tubo y colóquelo en el hielo durante una hora. Para los otros grupos, retire el medio de cultivo, agregue un medio fresco mililitro en cada pozo. Añadir 50 microlitro de suspensión de bacterias en los pozos de acuerdo con la configuración del grupo como se describe en la tabla dos.A continuación, coloque la placa de seis pozos en la incubadora de 37 grados centigrees 5% de dióxido de carbono durante una hora. Para apagar la fluorescencia de E.coli no internalizado, agregue 200 microlitrotro de 0.8% de solución de agua violeta cristalina en el pozo y se balancee en breve. Este paso pretendía evitar el resultado falso positivo mediante la unión EGFP E.coli a la superficie de los macrófagos pero no interiorizado.Lavar las células con PBS tres veces para eliminar cualquier cristal violeta residual. Luego agregue 70 mililitros por litro de EDTA frío un mililitro en el pozo para separar las células y transferirlas al tubo de citometría de flujo. Centrifugar los tubos 2.000 rpm cinco minutos y desechar el sobrenadante.Agregue 100 microlitros de PBS para resuspender las células. Agregue cinco microlitros de anticuerpo conjugado F4 ATP en los tubos o isotipos según la configuración del grupo. Vortex brevemente e incubar las muestras sobre hielo durante cinco a 10 minutos en la oscuridad.Añadir un mililitro DE PBS en cada tubo y centrifugar 2.000 rpm cinco minutos. Deseche el sobrenadante. Resuspender los gránulos celulares con 200 a 300 microlitros de PBS para el análisis de citometría de flujo.Ejecute cada tubo y adquiera datos para al menos 10.000 eventos de células F4/80 positivas. Aquí están las imágenes de fluorescencia de los macrófagos peritoneales de los grupos jóvenes y envejecidos. La fluorescencia roja representa F-actina.El verde representa E.coli, expresión de EGFP, y el azul representa el núcleo manchado por DAPI. Estas imágenes sugieren que los macrófagos del ratón joven tenían una capacidad fagocítica más fuerte que los del ratón envejecido. Las células F4/80-positivas y EGFP-positivas indicaron la capacidad fagocítica de los macrófagos.Estos resultados son consistentes con la tendencia de los resultados del microscopio de fluorescencia. Bueno, ya ves, aunque el número de las células inmunitarias innatas puede preservarse en ratón envejecido, la capacidad fagocítica disminuyó significativamente en comparación con el ratón joven. Se han empleado muchos métodos para evaluar la fagocitosis macrófago.Aquí demostramos un método mejorado que es conveniente, rápido y económicamente factible. Con E.coli, expresión de EGFP, un ensayo de fagocitosis se puede realizar y medir fácilmente mediante citómetro de flujo y microscopio fluorescente según las preferencias del investigador. También este método mide directamente la capacidad fagocítica.Los resultados son más reproducibles que otros métodos indirectos.

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Using Enhanced Green Fluorescence Protein-expressing Escherichia Coli to Assess Mouse Peritoneal Macrophage Phagocytosis

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Isolation of Mouse Peritoneal Cavity Cells

Aislamiento de células de ratón cavidad peritoneal

The peritoneal cavity is a membrane-bound and fluid-filled abdominal cavity of mammals, which contains the liver, spleen, most of the gastro-intestinal ...

Investigación

Inmunología e Infección

Non-Invasive Model of Neuropathogenic Escherichia coli Infection in the Neonatal Rat

Non-Invasive Model of Neuropathogenic Escherichia coli Infection in the Neonatal Rat

Modelo no invasiva de neuropatogénico<em&gt; Escherichia coli</em&gt; La infección en Neonatología Rata

Investigation of the interactions between animal host and bacterial pathogen is only meaningful if the infection model employed replicates the principal ...

High Throughput Fluorometric Technique for Assessment of Macrophage Phagocytosis and Actin Polymerization

Alto Rendimiento Fluorométrico Técnica de Evaluación de macrófagos fagocitosis y actina polimerización

The goal of fluorometric analysis is to serve as an efficient, cost effective, high throughput method of analyzing phagocytosis and other cellular ...

Macrophage Cholesterol Depletion and Its Effect on the Phagocytosis of Cryptococcus neoformans

Macrophage Cholesterol Depletion and Its Effect on the Phagocytosis of Cryptococcus neoformans

El colesterol de los macrófagos agotamiento y su efecto sobre la fagocitosis de<em&gt; Cryptococcus neoformans</em

Cryptococcosis is a life-threatening infection caused by pathogenic fungi of the genus Cryptococcus. Infection occurs upon inhalation of spores, which are ...

One-step Negative Chromatographic Purification of Helicobacter pylori Neutrophil-activating Protein Overexpressed in Escherichia coli in Batch Mode

One-step Negative Chromatographic Purification of Helicobacter pylori Neutrophil-activating Protein Overexpressed in Escherichia coli in Batch Mode

De un solo paso negativo Purificación cromatográfica de<em&gt; Helicobacter pylori</em&gt; La proteína activadora de neutrófilos sobreexpresa en<em&gt; Escherichia coli</em&gt; En modo batch

Helicobacter pylori neutrophil-activating protein (HP-NAP) is a major virulence factor of Helicobacter pylori (H. pylori). It plays a critical role in H. ...

Creation of a Dense Transposon Insertion Library Using Bacterial Conjugation in Enterobacterial Strains Such As Escherichia Coli or Shigella flexneri

Creation of a Dense Transposon Insertion Library Using Bacterial Conjugation in Enterobacterial Strains Such As Escherichia Coli or Shigella flexneri

Creación de un denso Transposon inserción biblioteca usando Conjugación bacteriana en cepas enterobacterianas tales como Escherichia Coli o Shigella flexneri

Transposon mutagenesis is a method that allows gene disruption via the random genomic insertion of a piece of DNA called a transposon. The protocol below ...

Overexpression and Purification of Human Cis-prenyltransferase in Escherichia coli

Overexpression and Purification of Human Cis-prenyltransferase in Escherichia coli

Sobreexpresión y Purificación de Humanos<em&gt; Cis</em&gt; -preniltransferasa en<em&gt; Escherichia coli</em

Prenyltransferases (PT) are a group of enzymes that catalyze chain elongation of allylic diphosphate using isopentenyl diphosphate (IPP) via multiple ...

Visualizing Macrophage Extracellular Traps Using Confocal Microscopy

Visualización de macrófagos trampas extracelular mediante Microscopía Confocal

A primary method used to define the presence of neutrophil extracellular traps (NETs) is confocal microscopy. We have modified established confocal ...

Assessment of Antibody-based Drugs Effects on Murine Bone Marrow and Peritoneal Macrophage Activation

Evaluación de los efectos de drogas basados en anticuerpos en médula ósea murina y activación de los macrófagos peritoneales

Macrophages are phagocytic innate immune cells, which initiate immune responses to pathogens and contribute to healing and tissue restitution. Macrophages ...

A Facile Protocol to Generate Site-Specifically Acetylated Proteins in Escherichia Coli

A Facile Protocol to Generate Site-Specifically Acetylated Proteins in Escherichia Coli

Un protocolo fácil de generar proteínas Site-Specifically acetiladas en Escherichia Coli

Post-translational modifications that occur at specific positions of proteins have been shown to play important roles in a variety of cellular processes. ...