Name: detecting the ligand-binding domain dimerization activity of estrogen receptor alpha using the mammalian two-hybrid assay
Uploaded: 2018-12-19T13:00:00
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作者感谢国家环境卫生科学研究所 (niehs) 的 sueyoshi 博士和 wang 博士对手稿的批判性解读, 并感谢坦纳·杰斐逊在视频中执行的程序。这项工作得到了 niehs 内部研究司的国家卫生研究所 1zaaes070065 (至 k. s. k.) 的支持。

1. 哺乳动物双杂交法质粒的制备
<ol><li>使用以下质粒: pg5-luc、pbind-erαef 和 apst-erαef。 注: 这些质粒可根据要求从作者处获得, 并通过滤纸发送。pg5-luc 是一种带记者的质粒, 它包含与荧光素酶表达单元融合的 gal4 反应元素的5次重复 (图 1a)。pbind-erαef 是 gal4dbd-熔融 erα lbd 蛋白的蛋白表达质粒。pbind-erαef 包含一个雷尼利亚荧光素酶表达单位, 用于使转染效率正?...

<ol>
	<li>Arao, Y., Korach, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+F+domain+of+estrogen+receptor+&#945;+is+involved+in+species-specific,+tamoxifen-mediated+transactivation.">The F domain of estrogen receptor &#945; is involved in species-specific, tamoxifen-mediated transactivation.</a> Journal of Biological Chemistry. 293 (22), 8495-8507 (2018).</li><li>Brzozowski, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+basis+of+agonism+and+antagonism+in+the+oestrogen+receptor.">Molecular basis of agonism and antagonism in the oestrogen receptor.</a> Nature. 389 (6652), 753-758 (1997).</li><li>Shiau, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+structural+basis+of+estrogen+receptor/coactivator+recognition+and+the+antagonism+of+this+interaction+by+tamoxifen.">The structural basis of estrogen receptor/coactivator recognition and the antagonism of this interaction by tamoxifen.</a> Cell. 95 (7), 927-937 (1998).</li><li>Yang, J., Singleton, D. W., Shaughnessy, E. A., Khan, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+F-domain+of+estrogen+receptor-alpha+inhibits+ligand+induced+receptor+dimerization.">The F-domain of estrogen receptor-alpha inhibits ligand induced receptor dimerization.</a> Molecular and Cellular Endocrinology. 295 (1-2), 94-100 (2008).</li><li>Montano, M. M., M&#252;ller, V., Trobaugh, A., Katzenellenbogen, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+carboxy-terminal+F+domain+of+the+human+estrogen+receptor:+role+in+the+transcriptional+activity+of+the+receptor+and+the+effectiveness+of+antiestrogens+as+estrogen+antagonists.">The carboxy-terminal F domain of the human estrogen receptor: role in the transcriptional activity of the receptor and the effectiveness of antiestrogens as estrogen antagonists.</a> Molecular Endocrinology. 9 (7), 814-825 (1995).</li><li>Koide, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+Regions+within+the+F+Domain+of+the+Human+Estrogen+Receptor+&#945;+that+Are+Important+for+Modulating+Transactivation+and+Protein-Protein+Interactions.">Identification of Regions within the F Domain of the Human Estrogen Receptor &#945; that Are Important for Modulating Transactivation and Protein-Protein Interactions.</a> Molecular Endocrinology. 21 (4), 829-842 (2011).</li><li>Mitry, R. R., Hughes, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Human Cell Culture Protocols. , (2011).</li><li>Arao, Y., Coons, L. A., Zuercher, W. J., Korach, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transactivation+Function-2+of+Estrogen+Receptor+&#945;+Contains+Transactivation+Function-1-regulating+Element.">Transactivation Function-2 of Estrogen Receptor &#945; Contains Transactivation Function-1-regulating Element.</a> Journal of Biological Chemistry. 290 (28), 17611-17627 (2015).</li><li>Huang, H. -. J., Norris, J. D., McDonnell, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+a+negative+regulatory+surface+within+estrogen+receptor+alpha+provides+evidence+in+support+of+a+role+for+corepressors+in+regulating+cellular+responses+to+agonists+and+antagonists.">Identification of a negative regulatory surface within estrogen receptor alpha provides evidence in support of a role for corepressors in regulating cellular responses to agonists and antagonists.</a> Molecular Endocrinology. 16 (8), 1778-1792 (2002).</li><li>Chang, C. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissection+of+the+LXXLL+nuclear+receptor-coactivator+interaction+motif+using+combinatorial+peptide+libraries:+discovery+of+peptide+antagonists+of+estrogen+receptors+alpha+and+beta.">Dissection of the LXXLL nuclear receptor-coactivator interaction motif using combinatorial peptide libraries: discovery of peptide antagonists of estrogen receptors alpha and beta.</a> Molecular and Cellular Biology. 19 (12), 8226-8239 (1999).</li><li>Arao, Y., Hamilton, K. J., Coons, L. A., Korach, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estrogen+receptor+&#945;+L543A,+L544A+mutation+changes+antagonists+to+agonists,+correlating+with+the+ligand+binding+domain+dimerization+associated+with+DNA+binding+activity.">Estrogen receptor &#945; L543A, L544A mutation changes antagonists to agonists, correlating with the ligand binding domain dimerization associated with DNA binding activity.</a> The Journal of Biological Chemistry. 288 (29), 21105-21116 (2013).</li></ol>

在此, 我们描述了 m2h 检测的方案, 重点介绍了检测 erα lbd 共读活性的检测条件。一般来说, m2h 检测是不受欢迎的评估配体依赖 erα lbd 二聚化活性。这是由于 erα lbd 具有转录激活功能;在某些情况下, 其活性会干扰 m2h 测定的结果。然而, 正如我们在这里所证明的, m2h 分析可用于分析某些不激活 lbd af-2 转化功能的物质 (例如, 4oht, serm) 的 lbd 二聚体活性。为了减少 lbd (背景活动) 的内在活性, 我?...

雌激素受体α (erα) 是一种雌激素配体依赖性转录调节剂。erα的氨基酸序列在物种中高度保守。由于人类和小鼠 erα的同源性较高, 这些受体的功能被认为是相同的, 而这些物种中雌激素物质 (如他莫西芬) 的差异活性是由该物种在化学代谢, 而不是由 erα的结构差异。erα具有高度保守的域结构, 这些结构在核受体 (nr) 超家族中很常见, 被指定为 a 到 f 域。e 域或配体结合域 (lbd) 包括配体结合口袋和转录激活功能 2, 名为 af-2。f 域紧邻 e 域进行本地化, 是 nr 中变化最大的域。即使在人和小鼠 erα之间, f 域的同源性也明显低于其他域1。erα的配体 lbd 增强了 erα蛋白的同质化, 直接结合特定的雌激素反应 dna 元素, 以调节木质依赖性基因转录 (erα的经典作用)。晶体学研究揭示了螺旋 12 (af-2 核域) 与雌二醇 (e2) 或 4-羟基-他莫西芬 (4oht) 结合 lbd 二聚体2,3的差异定位。erαf 域 (45个氨基酸) 直接连接螺旋12。然而, 没有关于这种扩展45氨基酸 (f 域) 从螺旋12对 erα lbd 二聚化的影响的信息。在这项研究中, 我们证明了 f 域的贡献, 特定于物种依赖的 eα lbd 同质化使用哺乳动物双杂交 (m2h) 的分析。
m2h 检测是一种证明哺乳动物细胞中蛋白质-蛋白质相互作用的方法, 它引入了三种不同的质粒 dna: 两种蛋白表达质粒, 表达了 gal4 dna 结合域 (dbd) 融合 erαlld 和 vp16ad 融合 erαldd, 和gal4re 熔融荧光素酶表达报告质粒。当 gal4dbd 融合 erαlbd 和 vp16ad 融合 erα lbd 在细胞中相互作用 (使二聚体) 时, 这种蛋白质复合体与 gal4re 结合, 然后通过 vp16ad 相关的转活化功能激活荧光酶基因表达。lbd 共氧化水平可以通过荧光素酶活性来评价。
酵母双杂交 (y2h) 检测是一种基于与宿主环境相同的原理的替代方法。以前使用 y2h 系统的报告表明, f-域截断人 erα lbd 增加了 e2 依赖协同剂的招募, 结论是 f 域阻止 e2 介导的转录4。这一结果与其他报告不一致, 这些报告表明 f-域截断人 erα在哺乳动物细胞5,6中的衰减转录活性。最近, 我们的研究表明, 利用 m2h 系统, 人类 erαlbd 的 e2 依赖共激活剂的招募活性在哺乳动物细胞中的 f 域截断降低, 并与转录活性1一致。这些观察表明, 蛋白质-蛋白质相互作用的生理作用在细胞类型特定的方式和背景不同。m2h 检测可以在用于确定转录活性的同一细胞环境中显示蛋白质-蛋白质相互作用。与 M2H 或其他体外蛋白质-蛋白质相互作用分析相比, 这提供了 m2h 分析的优势。
关于选择性雌激素受体调节剂 (serm) (例如, 4oht) 调节 erα介导的转录的部分激动剂活性的分子机制仍存在疑问。基于 erα lbd 的 m2h 检测可用于研究各种哺乳动物细胞类型中 serm 的部分激动剂活性的机制。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:891px;" width="891">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:300px;">pG5-Luc</td>
			<td style="width:112px;">Promega</td>
			<td style="width:119px;">E249A</td>
			<td style="width:360px;">Component of CheckMate Mammalian Two-Hybrid System</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:300px;">pBIND</td>
			<td style="width:112px;">Promega</td>
			<td>E245A</td>
			<td>Component of CheckMate Mammalian Two-Hybrid System</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:300px;">pACT</td>
			<td style="width:112px;">Promega</td>
			<td>E246A</td>
			<td>Component of CheckMate Mammalian Two-Hybrid System</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">One Shot TOP10 Chemically Competent E. coli</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>C404010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Centrifuge Rotor</td>
			<td>SORVALL</td>
			<td>75006445</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Swing Buckets</td>
			<td>SORVALL</td>
			<td>75006441</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cell Resuspension Solution (CRA)</td>
			<td style="width:112px;">Promega</td>
			<td>A7112</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cell Lysis Solution (CLA)</td>
			<td style="width:112px;">Promega</td>
			<td>A7122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Neutralization Solution (NSA)</td>
			<td style="width:112px;">Promega</td>
			<td>A7131</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Column Wash Solution (CWB)</td>
			<td style="width:112px;">Promega</td>
			<td>A8102</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Wizard Midipreps DNA Purification Resin</td>
			<td style="width:112px;">Promega</td>
			<td>A7701</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Wizard Midicolumns</td>
			<td style="width:112px;">Promega</td>
			<td>A7651</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">MEM, no glutamine, no phenol red</td>
			<td>Gibco</td>
			<td style="width:119px;">51200038</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">L-glutamine (200 mM)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>A2916801</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:300px;">0.5% Trypsin-EDTA (10x)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td style="width:119px;">15400054</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:300px;">Penicillin-Streptomycin (100x)</td>
			<td style="width:112px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">P0781</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">BenchMark fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>Gemini-Bio</td>
			<td>100-106</td>
			<td>Heat inactivated</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Charcoal:dextran stripping fetal bovine serum</td>
			<td>Gemini-Bio</td>
			<td>100-119</td>
			<td>Heat inactivated</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DMEM, high glucose, no glutamine, no phenol red</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>31053028</td>
			<td>for transfection</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Lipofectamine 2000</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">11668027</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Passive Lysis 5X Buffer</td>
			<td style="width:112px;">Promega</td>
			<td>E1941</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dual-Luciferase Reporter Assay System</td>
			<td style="width:112px;">Promega</td>
			<td>E1980</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">SpectraMax L microplate reader</td>
			<td>Molecular Devices</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:300px;">SoftMax Pro Software</td>
			<td>Molecular Devices</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

detecting the ligand-binding domain dimerization activity of estrogen receptor alpha using the mammalian two-hybrid assay

雌激素受体α (erα) 是一种雌激素配体依赖性转录调节剂。在物种中, erα蛋白的序列高度保守。人们认为人和小鼠的 erα功能是相同的。我们证明了差异 4-羟基他莫西芬 (4oht) 对小鼠和人 erα配体结合域 (lbd) 二聚化活性的影响, 使用哺乳动物双杂交 (m2h) 法。m2h 分析可以利用两个蛋白质表达质粒 (gal4 dna 结合域 [dbd] 融合 lbd 和 vp16 转活化域 [vp16ad] 融合 lbd) 的转染, 证明 lbd 在哺乳动物细胞中的共读活性的有效性。gal4 反应元件 (gal4re) 熔融荧光素酶报告质粒。当 gal4dbd 融合 lbd 和 vp16ad 融合 lbd 在细胞中产生二聚体时, 这种蛋白质复合体与 gal4re 结合, 然后通过 vp16ad 依赖转录活性激活荧光酶基因表达。用小鼠 erαlbd 融合蛋白表达质粒转染的 hepg2 细胞的 4 oh 介导的荧光素酶激活率高于人 erαlbd 融合蛋白表达质粒转染细胞。结果表明, 4oht 依赖性小鼠 erαlbd 共读活性高于人 erαlbd。一般来说, m2h 分析的使用并不理想于评估核受体 lbd 二聚化活性, 因为抗性配体增强了 lbd 活性的基础水平, 并阻碍了 lbd 二聚体活性的检测。我们发现4oht 不能增强 erα lbd 的基础活性。这是能够确定和检测与4oht 相关的 lbd 二聚化活性的关键因素, 以便成功地使用 m2h 检测。基于 erα lbd 的 m2h 检测可用于研究选择性雌激素受体调节剂 (如4oht) 在不同哺乳动物细胞类型中的部分激动剂活性。

图 3显示了组合 (i) 和组合 (ii) 等离子体转染细胞中可能的响应方案。实验结果如图 4所示。组合 (i) (pg5-luc + pbind-merαef + pact) 的活性显示 10 nm e2 的刺激 (图 4a), 因为 erα lbd 包含配体依赖性的失活功能域 af-2。与 erα lbd 结合的农学体 (例如e2) 招募转录共动剂到 af-2 域。此事件导致转录激?...

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Detecting the Ligand-binding Domain Dimerization Activity of Estrogen Receptor Alpha Using the Mammalian Two-Hybrid Assay

我们提出了一种方法来分析 4-羟基他莫西芬依赖雌激素受体α配体结合域二聚化活性的哺乳动物双杂交法。

利用哺乳动物双杂交法检测雌激素受体α的配联域二维化活性

Estrogen receptor alpha (ER&#945;) is an estrogenic ligand-dependent transcription regulator. The sequence of ER&#945; protein is highly conserved among ...

因此，此方法可以帮助回答有关雌激素配体调节雌激素受体α的能力和选择性雌激素受体调节剂机制的关键问题。这种技术的主要优点是，它是一个简单的方法。它演示了与配体相关的雌激素受体α配体结合域在细胞中的二化活性。演示这个程序的将是坦纳杰斐逊，一个博士后学生从我们小组。此方法使用三种不同的质粒来检测雌激素受体配体结合域在细胞中的二化活性。pG5-Luc 是用于检测二化活性功效的荧光酶报告质粒。pBIND小鼠雌激素受体α EF是一种半乳糖反应转录因子GAL4 DNA结合到一个主要熔融小鼠雌激素α配体结合域表达质粒，与GAL4响应元素结合在pG5-Luc记者。pACT小鼠雌激素受体α EF是一种单纯疱疹病毒转活段蛋白VP16激活域融合小鼠雌激素受体α配体结合域表达质粒，不直接绑定到pG5-Luc记者。当适当的配体存在时，从pBIND小鼠雌激素受体α EF和pACT小鼠雌激素受体α EF质粒中提取的蛋白质通过雌激素受体α配体结合域。二化效率由荧光素酶活性决定。最重要的步骤是控制pBIND小鼠雌激素受体α EF衍生蛋白的活性。在分析配体依赖雌激素受体配体结合域活性之前，必须评估没有 pACT 雌激素受体 Alpha EF 质粒的每个配体中 pBIND 衍生雌激素受体 alpha 配体结合域的活性。首先将适当的质粒组合添加到两个 1.5 毫升的微离心管中。准备DNA混合物的两种组合。第一管包含pG5-Luc、pBIND-雌激素受体-阿尔法EF和空pACT质粒。第二管包含pG5-Luc、pBIND-雌激素受体-阿尔法EF和pACT-雌激素受体-αEF质粒。为了沉淀DNA，将三摩尔醋酸钠的DNA混合物体积和20X三摩尔醋酸钠的体积添加到每个管中的DNA混合物中，并涡旋管。将混合物储存在20摄氏度过夜，然后在第二天早上以最大速度离心。丢弃超自然剂，将每管75%乙醇的120微升中隐形颗粒重新暂停，注意冲洗任何粘在管内内的DNA。在相同条件下进行第二次离心后，丢弃中继物，在真空浓缩器中干燥DNA30分钟。对于转染，每次洗净时，用0.5毫升室温PBS洗涤两次，用0.5毫升新鲜37摄氏度的酚类红M为细胞喂气，辅以10%炭脱热活化胎儿牛血清和两毫摩尔L-谷氨酰胺。接下来，在单个1.5毫升微离群管中，将干质粒DNA混合物和转染试剂悬浮在适当体积的DMEM中。在每个DMEM悬浮质粒DNA混合物管中加入同等体积的转染试剂介质。在室温下孵育5至10分钟后，在24孔人类肝细胞细胞培养板的适当实验井中加入25微升DNA混合物，在细胞培养箱中进行6小时的转染。孵育结束时，用0.5毫升的新鲜37摄氏度无酚类红M代替转染培养基，辅以10%木炭脱热灭活 FBS、2毫摩尔L-谷氨酰胺、1%青霉素链霉素和每井配体，将细胞再返回细胞培养箱16至18小时。第二天早上，用每井一毫升PBS清洗细胞，用每井100微升无源解液缓冲液连接细胞，用涡流搅拌机剧烈摇晃。然后在液氮中冷冻细胞。在双荧光素酶测定的当天，摇动摇床上的落酸，直到板达到室温，并转移10微升的莱沙酸盐到96孔的白色塑料板的个别孔。然后阅读微孔板读取器上每个细胞的荧光素酶活性。pBIND小鼠雌激素受体α EF和pACT质粒转染细胞与10纳米摩尔雌二醇刺激荧光素酶活性，因为雌激素受体α配体结合域包含配体依赖性转活功能域，AF-2。然而，1和10纳米摩尔浓度，诱导白西拉酶活性在细胞中通过pBIND和pACT小鼠雌激素受体α EF质粒的组合转染，建议这一程序的可行性，评估雌激素受体α配体结合域二化活性在高达一纳米摩尔的雌二醇治疗。4-羟基-塔莫西芬的治疗不会引起pBIND小鼠雌激素受体αEF和pACT质粒转染细胞中的荧光素酶活性，这表明雌激素受体α的AF-2功能不是由这种配体激活的。然而，高达10纳米摩尔浓度，诱导白西拉酶活性的细胞转染与pBIND和pACT小鼠雌激素受体α EF质粒的组合，表明这个程序是可行的评估雌激素受体α配体结合域二化活性在高达10纳米摩尔4羟基-塔莫西芬治疗。pBIND和pACT小鼠雌激素受体α配体结合域表达质粒与4-羟基-塔莫西芬的组合活性明显高于pBIND和pACT人类雌激素受体α配体结合域表达质粒的组合。这表明小鼠雌激素受体α配体结合域的4-羟基-塔莫西芬依赖性同化活性比人类雌激素受体α配体结合域更有效。此外，含有人类F域的小鼠雌激素受体α配体结合域的4-羟基-塔莫西芬依赖性同化活性明显低于野生型小鼠雌激素受体α配体结合域。相比之下，含有小鼠F域的人类雌激素受体α配体结合域的4-羟基-塔莫西芬依赖性同化活性明显高于野生型人类雌激素受体α配体结合域。这表明F域对物种特异性4-羟基-塔莫西芬依赖雌激素受体α配体结合域同质化活性有影响。在尝试此过程时，重要的是要记住测试 GAL4 DNA 结合域的基础活性熔融雌激素受体 Alpha 配体结合域活性与您的配体。该活动应与车辆处理相同。

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Mapping the Structure-Function Relationships of Disordered Oncogenic Transcription Factors Using Transcriptomic Analysis

使用转录组学分析绘制无序致癌转录因子的结构-功能关系

Many cancers are characterized by chromosomal translocations which result in the expression of oncogenic fusion transcription factors. Typically, these ...