Name: analysis of shear flow-induced migration of murine marginal zone b cells in vitro
Uploaded: 2018-11-26T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Shear Flow-induced Migration of Murine Marginal Zone B Cells In Vitro at JoVE.com

Dit werk werd gesteund door subsidies van de "Deutsche Forschungsgemeinschaft" SFB 854/TP11 aan K.-D.F.

Alle experimenten waarbij dieren worden gebruikt zijn eerder overeenkomstig goedgekeurd door de Landesverwaltungsamt Halle (Saksen-Anhalt), Duitsland, alle richtsnoeren van de medische faculteit van de Universiteit van de OVGU van Maagdenburg.
1. MZB cel zuivering
<ol><li>
Isoleren van leukocyten.
	<ol>
<li>Offeren een 8 tot 16 weken oude muis en verwijderen van de milt16. Distantiëren van de milt in 5 mL ijskoud cel buffer [-fosfaatgebufferde zoutop...

<ol>
	<li>Alon, R., Ley, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cells+on+the+run:+shear-regulated+integrin+activation+in+leukocyte+rolling+and+arrest+on+endothelial+cells.">Cells on the run: shear-regulated integrin activation in leukocyte rolling and arrest on endothelial cells.</a> Current Opinions in Cell Biology. 20 (5), 525-532 (2008).</li><li>Dominguez, G. A., Anderson, N. R., Hammer, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+direction+of+migration+of+T-lymphocytes+under+flow+depends+upon+which+adhesion+receptors+are+engaged.">The direction of migration of T-lymphocytes under flow depends upon which adhesion receptors are engaged.</a> Integrative Biology (Cambridge). 7 (3), 345-355 (2015).</li><li>Steiner, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+roles+for+endothelial+ICAM-1,+ICAM-2,+and+VCAM-1+in+shear-resistant+T+cell+arrest,+polarization,+and+directed+crawling+on+blood-brain+barrier+endothelium.">Differential roles for endothelial ICAM-1, ICAM-2, and VCAM-1 in shear-resistant T cell arrest, polarization, and directed crawling on blood-brain barrier endothelium.</a> Journal of Immunology. 185 (8), 4846-4855 (2010).</li><li>Valignat, M. P., Theodoly, O., Gucciardi, A., Hogg, N., Lellouch, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T+lymphocytes+orient+against+the+direction+of+fluid+flow+during+LFA-1-mediated+migration.">T lymphocytes orient against the direction of fluid flow during LFA-1-mediated migration.</a> Biophysical Journal. 104 (2), 322-331 (2013).</li><li>Woolf, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymph+node+chemokines+promote+sustained+T+lymphocyte+motility+without+triggering+stable+integrin+adhesiveness+in+the+absence+of+shear+forces.">Lymph node chemokines promote sustained T lymphocyte motility without triggering stable integrin adhesiveness in the absence of shear forces.</a> Nature Immunology. 8 (10), 1076-1085 (2007).</li><li>Cinamon, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sphingosine+1-phosphate+receptor+1+promotes+B+cell+localization+in+the+splenic+marginal+zone.">Sphingosine 1-phosphate receptor 1 promotes B cell localization in the splenic marginal zone.</a> Nature Immunology. 5 (7), 713-720 (2004).</li><li>Cinamon, G., Zachariah, M. A., Lam, O. M., Foss, F. W., Cyster, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Follicular+shuttling+of+marginal+zone+B+cells+facilitates+antigen+transport.">Follicular shuttling of marginal zone B cells facilitates antigen transport.</a> Nature Immunology. 9 (1), 54-62 (2008).</li><li>Cyster, J. G., Schwab, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sphingosine-1-phosphate+and+lymphocyte+egress+from+lymphoid+organs.">Sphingosine-1-phosphate and lymphocyte egress from lymphoid organs.</a> Annual Reviews in Immunology. 30, 69-94 (2012).</li><li>Schwab, S. R., Cyster, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Finding+a+way+out:+lymphocyte+egress+from+lymphoid+organs.">Finding a way out: lymphocyte egress from lymphoid organs.</a> Nature Immunology. 8 (12), 1295-1301 (2007).</li><li>Cerutti, A., Cols, M., Puga, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Marginal+zone+B+cells:+virtues+of+innate-like+antibody-producing+lymphocytes.">Marginal zone B cells: virtues of innate-like antibody-producing lymphocytes.</a> Nature Reviews Immunology. 13 (2), 118-132 (2013).</li><li>Mebius, R. E., Kraal, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structure+and+function+of+the+spleen.">Structure and function of the spleen.</a> Nature Reviews Immunology. 5 (8), 606-616 (2005).</li><li>Tedford, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+opposing+forces+of+shear+flow+and+sphingosine-1-phosphate+control+marginal+zone+B+cell+shuttling.">The opposing forces of shear flow and sphingosine-1-phosphate control marginal zone B cell shuttling.</a> Nature Communications. 8 (1), 2261 (2017).</li><li>ImageJ. MTrack2 Available from: <a target="_blank" href="https://imagej.net/MTrack2">https://imagej.net/MTrack2</a> (2018)</li><li>. MTrack2 Available from: <a target="_blank" href="https://valelab4.ucsf.edu/~nstuurman/IJplugins/MTrack2.html">https://valelab4.ucsf.edu/~nstuurman/IJplugins/MTrack2.html</a> (2018)</li><li>. Chemotaxis and Migration Tool Available from: <a target="_blank" href="https://ibidi.com/chemotaxis-analysis/171-chemotaxis-and-migration-tool.html">https://ibidi.com/chemotaxis-analysis/171-chemotaxis-and-migration-tool.html</a> (2018)</li><li>Reeves, J. P., Reeves, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Removal+of+lymphoid+organs.">Removal of lymphoid organs.</a> Current Protocols in Immunology. , (2001).</li><li>. Manual Tracking Available from: <a target="_blank" href="https://imagej.nih.gov/ij/plugins/manual-tracking.html">https://imagej.nih.gov/ij/plugins/manual-tracking.html</a> (2018)</li><li>. ibidi Pump System Available from: <a target="_blank" href="https://ibidi.com/perfusion-system/112-ibidi-pump-system.html">https://ibidi.com/perfusion-system/112-ibidi-pump-system.html</a> (2018)</li></ol>

Hier beschrijven we een methode voor het analyseren van de migratie van de cellen die ontdekken de kracht van shear stroom en reageren door een wijziging van hun migratie. Een analyse van de MZBs bleek dat MZBs migreren spontaan op ICAM-1 en in aanwezigheid van de stroom, zal migreren van de stroom. In onze eerdere werk toonden we dat MZBs niet van de stroom op VCAM-1 migreren, maar in plaats daarvan vaste in plaats blijven. De lymfkliertest milt marginale zone bevat voornamelijk ICAM-1, terwijl het rode vruchtvlees zowe...

Immune cellen zijn de meest motile cellen in het menselijk lichaam en vaak moeten vechten met schuintrekken kracht van de stroom van bloed en lymfe. Er zijn echter relatief weinig studies over schuintrekken kracht-geïnduceerde migratie van leukocyten1,2,3,4,5. Wij presenteren hier een betrouwbare en kwantitatieve protocol om te analyseren van de reactie van een immuun cel op stroom in vitro. Uitvoeren van de test vereist geen fabricage van onderdelen, en alle apparatuur en verbruiksartikelen zijn commercieel verkrijgbaar. Het protocol, met inbegrip van cel zuivering en migratie analyse, kan worden uitgevoerd in een enkele dag. Ten slotte, hoewel we beschrijven de migratie van marginale zone B cellen (MZBs), het protocol kan aangepast worden voor het analyseren van migratie tegen stroom van andere soorten immuuncellen. Daarom is het haalbaar is om met deze test kunt u systematisch analyseren een breed scala van leukocyten met een uitgebreid panel van voorwaarden.
MZBs zijn een bevolking van B-cellen, die in de muis, alleen in de milt en de shuttle gevonden worden tussen het interieur van de follikels en de marginale zones6,7,8,9. De marginale zone is een laag van immune cellen ongeveer 5-10 cellen dik. De cellaag omhult de follikel en bestaat voornamelijk uit MZBs en macrofagen maar ook invariant natuurlijke killer T (iNKT) cellen, dendritische cellen (DC's) en neutrofielen, o.a.10. De cellen in de marginale zone worden blootgesteld aan unidirectionele bloedstroom afkomstig van milt slagaders die uitkomen in een marginale sinus rondom de follikel. Het bloed stroomt uit gaten in de marginale sinus via de marginale zone en vervolgens verzameld in veneuze sinussen in het rood vruchtvlees en teruggezet naar de omloop11. De vrije stroom van bloed wast over de MZBs en hen blootstelt aan antigenen in het bloed vervoerd. De MZBs voeren het antigeen in de follikel door automatisch pendelen tussen de marginale zone en binnenkant van de follikel, die niet is blootgesteld aan bloed. Dus, als MZBs shuttle naar de follikel, moeten ze migreren van de shear kracht van de bloed stroom12 (figuur 1A).
In dit protocol, beschrijven we het kwantitatief bepalen hoe immuun cellen zoals MZBs reageren op geen stroom of de hoge stroom in vitro, om te laten zien hoe ze zijn geprogrammeerd om te migreren van in vivo. MZBs zijn in de eerste stap gezuiverd van de milt van een muis met behulp van magnetische kralen gekoppeld aan antilichamen van commercieel beschikbare kits. De vers geïsoleerde MZBs zijn ingevoerd in het putje van een stroom kamer dia, toegestaan om af te wikkelen naar integrine liganden en blootgesteld aan de stroom van migratie buffer met behulp van een pompsysteem (figuur 2A). De cellen zijn beeld met behulp van een systeem van tijd-tijdspanne videomicroscopie. De beelden worden vervolgens verwerkt voor de analyse met een gratis ImageJ plugin, MTrack213,14, automatisch bijhouden van de cellen. Tracks kunnen vervolgens worden gekwantificeerd met de gratis Ibidi Chemotaxis gereedschap15 verschillende parameters zoals snelheid, rechtheid en migratie index bepalen. Deze waarden kunnen worden gebruikt om te bepalen van de gevolgen van migratie remmers, cel stimulatoren chemokines en andere migratie-op het gebied van chemische stoffen voor de migratie van de shear-flow geïnduceerde om te begrijpen van de krachten die immuun cel beweging in vivo.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>VWR Cell Strainer, 70 &#181;m</td>
			<td>VWR</td>
			<td>10199-656</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pre-Separation Filters, 30 &#181;m</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-095-823</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MZB and FOB cell isolation kit</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-100-366</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B220 CD45R, clone RA3-6B2, FITC</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>103206</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD21 / CD 35, clone 7G6, APC</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>558658</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD23, clone B3B4, PE</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>101608</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBSS</td>
			<td>Biochrom</td>
			<td>L2035</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-PBS 1x</td>
			<td>Gibco by Life Technologies</td>
			<td>14190-094</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA albumin fraction V, fatty acid-free</td>
			<td>Roth</td>
			<td>&#34;0052.3&#34;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ICAM-1</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>796-IC-050</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ibidi &#181;-slides VI 0.4, hydrophobic, uncoated</td>
			<td>Ibidi</td>
			<td>80601</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Perfusion set, white, 50 cm, 0.8 mm</td>
			<td>Ibidi</td>
			<td>10963</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ibidi Pump system</td>
			<td>Ibidi</td>
			<td>10902</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

analysis of shear flow-induced migration of murine marginal zone b cells in vitro

Marginaal zone B cellen (MZBs) zijn een bevolking van B-cellen die zich bevinden in de muis milt marginale zones die follikels omhullen. Om de follikels te halen, moet MZBs migreren van de shear kracht van de bloedstroom. Wij presenteren hier een methode voor het analyseren van deze stroom-geïnduceerde MZB migratie in vitro. Ten eerste, MZBs zijn geïsoleerd van de milt van de muis. Ten tweede, MZBs zijn verrekend op integrine liganden in flow kamer dia's blootgesteld als u wilt schuintrekken stroom en beeld onder een Microscoop tijdens de migratie. Ten derde, beelden van de migratie MZBs worden verwerkt met behulp van de automatische cel van MTrack2 plugin voor ImageJ bijhouden, en de resulterende cel tracks worden gekwantificeerd aan de hand van de Ibidi chemotaxis tool. De migratiegegevens onthullen hoe snel de cellen verplaatst, hoe vaak ze richting wijzigen of de shear stroom vector is van invloed op de richting van hun migratie en welke integrine liganden zijn betrokken. Hoewel we MZBs gebruiken, kan de methode gemakkelijk worden aangepast voor het analyseren van de migratie van eventuele leukocyte die op de kracht van shear stroom reageert.

We gebruikt het protocol om te vergelijken van de migratie van MZBs op ICAM-1-coated dia's zonder stroom (0 dyn/cm2) hierboven beschreven en blootgesteld als u wilt schuintrekken flow (4 dyn/cm2). Cellen werden automatisch bijgehouden met MTrack2, en de resulterende track bestanden werden bedekt op de cel migratie films van geen stroom (0 dyn/cm2) en (4 dyn/cm2) om te laten zien van de verdeling en de vorm van de tracks (fig...

Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Shear Flow-induced Migration of Murine Marginal Zone B Cells In Vitro at JoVE.com

Analysis of Shear Flow-induced Migration of Murine Marginal Zone B Cells In Vitro

Marginaal zone B cellen (MZBs) reageren op de kracht van shear stroom door heroriëntering op hun migratiepad van de stroom. Dit protocol laat zien hoe om te registreren en analyseren van het migratie met behulp van een fluidics eenheid, pomp, Microscoop imaging systeem en vrije software.

Analyse van Shear Flow-geïnduceerde migratie van RattenUitrustingen Marginal Zone B cellen In Vitro

Marginal zone B cells (MZBs) are a population of B cells that reside in the mouse splenic marginal zones that envelop follicles. To reach the follicles, ...

Deze methode kan helpen bij het begrijpen van belangrijke vragen in het gebied van immuuncelmigratie, zoals hoe het cytoskelet schuifkrachten stuurt en hoe integrin liganden en chemokines de door stroom veroorzaakte migratie van leukocyten beïnvloeden. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat het een nieuw type migratietest is dat gemakkelijk is voor beginners om uit te voeren. Het maakt alleen gebruik van commercieel beschikbare apparatuur en reagentia, evenals vrije software.Hoewel deze methode inzicht kan geven in marginale zone B-cellen, kan deze ook worden toegepast op andere immuuncellen, zoals geactiveerde T-cellen. Ontdooi op de dag voor het experiment een aliquot ICAM-1 en verdun deze in PBS tot een uiteindelijke concentratie van vijf microgram per milliliter. Voeg vervolgens 30 microliter ICAM-1 toe aan de gewenste kamers van een stroomdia.Plaats de glijbaan in een vochtige kamer, en zet het op vier graden Celsius om 's nachts uit te broeden. De volgende dag, was de kamer door het toevoegen van 100 microliter pbs aan een put en vervolgens trekken 100 microliters uit de andere put van de kamer. Voeg vervolgens 100 microliter blokkeerbuffer toe aan een kamer en broed de dia 90 minuten in een vochtige kamer bij kamertemperatuur.Vervolgens was de kamer door het toevoegen van 100 microliter pbs aan een put, trekken het uit de andere put, en voeg vervolgens 100 microliter migratie buffer aan de kamer. De dia is nu klaar voor gebruik. Bewaar het in een vochtige kamer op kamertemperatuur tot het experiment.Sluit eerst een vloeistofpomp aan en bevestig de fluidics unit. Schakel vervolgens de pompsoftware in. Was vervolgens de slang een keer met vijf tot 10 milliliter migratiebuffer.Dit duurt ongeveer een minuut. Voeg vervolgens 11,7 milliliter migratiebuffer gelijkmatig toe aan beide reservoirs en verwijder de luchtbellen. Klem nu de slang ongeveer 10 centimeter van het connectorstuk en plaats de vloeibare eenheid in de verwarmde incubatiekamer op de microscoop.Stel in de software de diakeuze in op micro-slide VI 0.4 en de slangoptie op wit. Stel ook de gewenste afschuifspanning in op ongeveer vier dynes per vierkante centimeter en de beeldtijd op 30 minuten. Stel vervolgens de gewenste debiet en afschuifstress in door de waarden in de pompsoftware in te voeren.Vervolgens, pre-warm de microscoop incubatiekamer, fluidics unit, en migratie buffer aliquots tot 37 graden Celsius. Test de vloeistofpomp, test de vloeistofpomp en zorg ervoor dat de migratiebuffer heen en weer stroomt in de reservoirs en dat er geen luchtbellen in het systeem zitten. Isoleer eerst leukocyten en zuiver de marginale zone B-cellen zoals beschreven in het bijbehorende tekstprotocol.Maak vervolgens de onderkant van de glijbaan schoon met een ethanol-gedempt weefsel. Voeg 30 microliter van de celsuspensie toe aan een put van de kamer en trek 30 microliter van de opgeslagen migratiebuffer uit de andere put. Dek de dia af en broed deze gedurende 30 minuten uit om de cellen te kunnen bevestigen.Voeg vervolgens langzaam de voorverwarmde migratiebuffer toe aan elke put van de dia totdat er een positieve meniscus uit de put opkomt. Verwijder eventuele luchtbellen met de pipetpunt. Het is belangrijk om de consistentie met factoren die van invloed zijn op de celhechting te behouden, dus houd de buffers en de cellen op 37 graden, en vermijd het gebruik van overmatige kracht bij het pipetten van de buffer in de kamer.Klem de schuif vast aan het microscoopstadium en verwijder de ongemarkeerde kant van de vloeistofbuizen uit het verbindingsstuk. Vul vervolgens het einde van de slang met migratiebuffer tot een positieve meniscus zonder luchtbellen uit het einde stijgt. Draai het uiteinde van de slang om en plaats deze in de bovenste put van de stroomkamer.Herhaal de procedure voor het gemarkeerde uiteinde van de slang terwijl u de slang vastkleed houdt. Schakel nu het beeldsysteem in naar de modus Live en selecteer een gezichtsveld dat zich in het midden van de dia bevindt. Hier, stel de focus op de cellen, en vervolgens de-focus iets om de zwarte omtrek van de cellen te verbeteren en een wit interieur te produceren.De zwarte achtergrond en het witte midden zullen gemakkelijker te gebruiken zijn in het geautomatiseerde trackingprogramma. Stel het programma voor beeldvormingsreeks in om gedurende 30 minuten gedurende 30 minuten één beeld op te nemen met behulp van een 10x droge doelstelling. Begin dan met opnemen.Haal de klem uit de slang en zet de pomp aan. Hierdoor worden de niet-aanhangende cellen afgewassen en beginnen de cellen te migreren. Aan het einde van het beeldvormingsprogramma, label en sla de film op.Als u een remmer of een modifier van celmigratie gebruikt, kan deze worden toegevoegd aan de cellen in de celsuspensie voordat u ze op de dia plaatst of aan de migratiebuffer in de fluidics-eenheid. Open het ImageJ-programma om te beginnen met de automatische analyse van het migratiespoor. Kopieer het MTrack2_kt Java-bestand naar de map ImageJ Plugins.Selecteer Compile en Run onder het menu Plug-ins. Start vervolgens ImageJ opnieuw op en de plug-in moet worden weergegeven in het menu Plug-ins. Open de afbeeldingsstack van de celmigratiefilm in ImageJ en verwerk de afbeeldingen zoals hier weergegeven om de video om te zetten van kleurenframes naar afbeeldingen met een hoog contrast met de cellen als zwarte objecten op een witte achtergrond.Verscherp vervolgens de beelden twee keer, despeckle de beelden, en zet de beelden naar acht bit. Ga in het menu Afbeelding naar het submenu Helderheid/contrast aanpassen en zet de schuifregelaar Contrast op maximaal contrast. Hierdoor worden de cellen weergegeven als witte objecten op een zwarte achtergrond.Ga vervolgens terug naar het submenu Drempelwaarde aanpassen om ervoor te zorgen dat de cellen worden weergegeven als zwarte objecten op een witte achtergrond. Voer nu de automatische cel tracking plugin MTrack2 kt. Stel op het optiescherm de deeltjesgrootte in op minimaal één pixel en de deeltjesgrootte maximaal op maximaal 30 pixels.Stel de snelheidswaarde in op 10 pixels, hoewel marginale zone B-cellen over het algemeen niet meer dan twee pixels hoger zijn dan opeenvolgende frames die vijf seconden uit elkaar liggen. De celsporen zijn nu klaar voor analyse met behulp van de ibidi Chemotaxis Tool. Deze twee velden tonen de migratiepaden van marginale zone B-cellen die zijn gezaaid op ICAM-1-gecoate dia's.De cellen werden automatisch gevolgd met MTrack2 met behulp van de methoden beschreven in dit artikel. Aan de linkerkant werden cellen afgebeeld onder statische omstandigheden, en aan de rechterkant werden cellen blootgesteld aan een schuifstroom van vier dynes per vierkante centimeter. De afzonderlijke cel tracks kunnen worden geïmporteerd in de ibidi Chemotaxis Tool om track plots van elke film te genereren.Hier zijn de afzonderlijke celsporen rood gekleurd om aan te geven dat ze stroomafwaarts van hun oorsprongspunt of zwart zijn geëindigd als ze stroomopwaarts terecht zijn gekomen. De analyse van celtracks van vier afzonderlijke films voor zowel stroom als geen stroomomstandigheden worden hier weergegeven. Dit omvat de gemiddelde directionele migratie-index, celsnelheid, padrechtheid en de laatste rechte lijnafstand voor beide omstandigheden.Na het bekijken van deze video, moet u een goed begrip van hoe de directionele migratie van marginale zone B cellen beeld naar schuifstroom en hoe automatisch volgen van de cellen. Tijdens deze procedure kunnen andere methoden zoals TIRF-microscopie worden uitgevoerd om aanvullende vragen te beantwoorden, zoals hoe het cytoskelet en de integrins reageren op schuifstress?

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Murine Model of CD40-activation of B cells

Muizenmodel van CD40-activatie van B-cellen

Research on B cells has shown that CD40 activation improves their antigen presentation capacity. When stimulated with interleukin-4 and CD40 ligand ...

Human T Lymphocyte Isolation, Culture and Analysis of Migration In Vitro

Human T Lymphocyte Isolation, Culture and Analysis of Migration In Vitro

Human T-lymfocyt Isolatie, Cultuur en Analyse van de migratie In Vitro</em

The migration of T lymphocytes involves the adhesive interaction of cell surface integrins with ligands expressed on other cells or with extracellular ...

Induction and Assessment of Class Switch Recombination in Purified Murine B Cells

Inductie en beoordeling van klasse Switch recombinatie in gezuiverd Murine B-cellen

Humoral immunity is the branch of the immune system maintained by B cells and mediated through the secretion of antibodies. Upon B cell activation, the ...

Flow Cytometry Analysis of Immune Cells Within Murine Aortas

Flowcytometrie-analyse van de immuuncellen Binnen Murine aorta

Atherosclerosis is a chronic inflammatory process of medium and large size vessels that is characterized by the formation of plaques consisting of foam ...

In vitro Uncoating of HIV-1 Cores

In vitro Uncoating of HIV-1 Cores

In vitro uncoating van HIV-1 Kernen

The genome of the retroviruses is encased in a capsid surrounded by a lipid envelope. For lentiviruses, such as HIV-1, the conical capsid shell is ...

Isolation, Processing and Analysis of Murine Gingival Cells

Isolatie, verwerking en analyse van Muriene Gingival Cells

We have developed a technique to precisely isolate and process murine gingival tissue for flow cytometry and molecular studies. The gingiva is a unique ...

Rapid Analysis of Chromosome Aberrations in Mouse B Lymphocytes by PNA-FISH

Snelle analyse van chromosoomafwijkingen in Muis B-lymfocyten door PNA-FISH

Defective DNA repair leads to increased genomic instability, which is the root cause of mutations that lead to tumorigenesis. Analysis of the frequency ...

A Murine Model of Group B Streptococcus Vaginal Colonization

A Murine Model of Group B Streptococcus Vaginal Colonization

Een muizenmodel van groep B<em&gt; Streptococcus</em&gt; Vaginale Kolonisatie

Streptococcus agalactiae (group B Streptococcus, GBS), is a Gram-positive, asymptomatic colonizer of the human gastrointestinal tract and vaginal tract of ...

Detection and Enrichment of Rare Antigen-specific B Cells for Analysis of Phenotype and Function

Detectie en Verrijking van zeldzame antigeen-specifieke B-cellen voor analyse van fenotype en functie

B cells reactive with a specific antigen usually occur at a frequency of &lt;0.05% of lymphocytes. For decades researchers have sought methods to isolate ...

A Novel In Vitro Wound Healing Assay to Evaluate Cell Migration

A Novel In Vitro Wound Healing Assay to Evaluate Cell Migration

Een roman In Vitro wond genezing Assay om te evalueren van de cel migratie

The aim of this work is to show a novel method to evaluate the ability of some immunomodulatory molecules, such as antimicrobial peptides (AMPs), to ...