Name: analysis of shear flow-induced migration of murine marginal zone b cells in vitro
Uploaded: 2018-11-26T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Shear Flow-induced Migration of Murine Marginal Zone B Cells In Vitro at JoVE.com

Dette arbeidet ble støttet av tilskudd fra "Deutsche Forschungsgemeinschaft" SFB 854/TP11 til K.-D.F.

Alle eksperimenter med bruk av dyr har godkjent av den Landesverwaltungsamt Halle (Sachsen-Anhalt), Tyskland, tidligere alle retningslinjer av det medisinske fakultetet OVGU Universitetet i Magdeburg.
1. MZB celle rensing
<ol><li>
Isolere leukocytter.
	<ol>
<li>Ofre en 8 til 16 uke gamle musen og fjerne milt16. Distansere milten i 5 mL iskald celle bufferen [fosfat-bufret saltvann (PBS) + 0,5% fettstoffer syre-fri bovin serum albumin (BSA)], ved å br...

<ol>
	<li>Alon, R., Ley, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cells+on+the+run:+shear-regulated+integrin+activation+in+leukocyte+rolling+and+arrest+on+endothelial+cells.">Cells on the run: shear-regulated integrin activation in leukocyte rolling and arrest on endothelial cells.</a> Current Opinions in Cell Biology. 20 (5), 525-532 (2008).</li><li>Dominguez, G. A., Anderson, N. R., Hammer, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+direction+of+migration+of+T-lymphocytes+under+flow+depends+upon+which+adhesion+receptors+are+engaged.">The direction of migration of T-lymphocytes under flow depends upon which adhesion receptors are engaged.</a> Integrative Biology (Cambridge). 7 (3), 345-355 (2015).</li><li>Steiner, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+roles+for+endothelial+ICAM-1,+ICAM-2,+and+VCAM-1+in+shear-resistant+T+cell+arrest,+polarization,+and+directed+crawling+on+blood-brain+barrier+endothelium.">Differential roles for endothelial ICAM-1, ICAM-2, and VCAM-1 in shear-resistant T cell arrest, polarization, and directed crawling on blood-brain barrier endothelium.</a> Journal of Immunology. 185 (8), 4846-4855 (2010).</li><li>Valignat, M. P., Theodoly, O., Gucciardi, A., Hogg, N., Lellouch, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T+lymphocytes+orient+against+the+direction+of+fluid+flow+during+LFA-1-mediated+migration.">T lymphocytes orient against the direction of fluid flow during LFA-1-mediated migration.</a> Biophysical Journal. 104 (2), 322-331 (2013).</li><li>Woolf, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymph+node+chemokines+promote+sustained+T+lymphocyte+motility+without+triggering+stable+integrin+adhesiveness+in+the+absence+of+shear+forces.">Lymph node chemokines promote sustained T lymphocyte motility without triggering stable integrin adhesiveness in the absence of shear forces.</a> Nature Immunology. 8 (10), 1076-1085 (2007).</li><li>Cinamon, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sphingosine+1-phosphate+receptor+1+promotes+B+cell+localization+in+the+splenic+marginal+zone.">Sphingosine 1-phosphate receptor 1 promotes B cell localization in the splenic marginal zone.</a> Nature Immunology. 5 (7), 713-720 (2004).</li><li>Cinamon, G., Zachariah, M. A., Lam, O. M., Foss, F. W., Cyster, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Follicular+shuttling+of+marginal+zone+B+cells+facilitates+antigen+transport.">Follicular shuttling of marginal zone B cells facilitates antigen transport.</a> Nature Immunology. 9 (1), 54-62 (2008).</li><li>Cyster, J. G., Schwab, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sphingosine-1-phosphate+and+lymphocyte+egress+from+lymphoid+organs.">Sphingosine-1-phosphate and lymphocyte egress from lymphoid organs.</a> Annual Reviews in Immunology. 30, 69-94 (2012).</li><li>Schwab, S. R., Cyster, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Finding+a+way+out:+lymphocyte+egress+from+lymphoid+organs.">Finding a way out: lymphocyte egress from lymphoid organs.</a> Nature Immunology. 8 (12), 1295-1301 (2007).</li><li>Cerutti, A., Cols, M., Puga, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Marginal+zone+B+cells:+virtues+of+innate-like+antibody-producing+lymphocytes.">Marginal zone B cells: virtues of innate-like antibody-producing lymphocytes.</a> Nature Reviews Immunology. 13 (2), 118-132 (2013).</li><li>Mebius, R. E., Kraal, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structure+and+function+of+the+spleen.">Structure and function of the spleen.</a> Nature Reviews Immunology. 5 (8), 606-616 (2005).</li><li>Tedford, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+opposing+forces+of+shear+flow+and+sphingosine-1-phosphate+control+marginal+zone+B+cell+shuttling.">The opposing forces of shear flow and sphingosine-1-phosphate control marginal zone B cell shuttling.</a> Nature Communications. 8 (1), 2261 (2017).</li><li>ImageJ. MTrack2 Available from: <a target="_blank" href="https://imagej.net/MTrack2">https://imagej.net/MTrack2</a> (2018)</li><li>. MTrack2 Available from: <a target="_blank" href="https://valelab4.ucsf.edu/~nstuurman/IJplugins/MTrack2.html">https://valelab4.ucsf.edu/~nstuurman/IJplugins/MTrack2.html</a> (2018)</li><li>. Chemotaxis and Migration Tool Available from: <a target="_blank" href="https://ibidi.com/chemotaxis-analysis/171-chemotaxis-and-migration-tool.html">https://ibidi.com/chemotaxis-analysis/171-chemotaxis-and-migration-tool.html</a> (2018)</li><li>Reeves, J. P., Reeves, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Removal+of+lymphoid+organs.">Removal of lymphoid organs.</a> Current Protocols in Immunology. , (2001).</li><li>. Manual Tracking Available from: <a target="_blank" href="https://imagej.nih.gov/ij/plugins/manual-tracking.html">https://imagej.nih.gov/ij/plugins/manual-tracking.html</a> (2018)</li><li>. ibidi Pump System Available from: <a target="_blank" href="https://ibidi.com/perfusion-system/112-ibidi-pump-system.html">https://ibidi.com/perfusion-system/112-ibidi-pump-system.html</a> (2018)</li></ol>

Her beskriver vi en metode for å analysere migrering av celler som gjenkjenner kraft av skjær flyt og svare ved å endre deres migrasjon. En analyse av MZBs viste at MZBs overføre spontant på ICAM-1 og i nærvær av flyt, vil migrere flyten. I vår tidligere arbeid viste vi at MZBs overfører ikke flyten på VCAM-1 men i stedet forblir fast på plass. Murine splenic marginale sonen inneholder hovedsakelig ICAM-1, mens rød masse inneholder både ICAM-1 og VCAM-1. Fra disse dataene, kan det konkluderes at MZBs ville o...

Immunceller er mest motile cellene i kroppen og ofte må kjempe med skjæring kraft fra blod og lymfe. Men er det relativt få studier på skjær kraft-indusert migrasjon av leukocytter,1,,2,,3,,4,,5. Vi presenterer her en pålitelig og kvantitative protokoll for å analysere responsen på en immun cellen flyt i vitro. Utfører analysen krever ikke fabrikasjon av komponenter, og alt utstyr og forbruksmateriell er kommersielt tilgjengelig. Protokollen, inkludert celle rensing og migrasjon analyse, kan utføres på én dag. Til slutt, selv om vi beskrive overføring av marginal sone B-celler (MZBs), protokollen kan tilpasses analysere migrering mot strømmen av andre typer immunceller. Derfor er det mulig å bruke denne analysen til å systematisk analysere et bredt spekter av leukocytter med en omfattende forhold.
MZBs er en befolkning av B-celler som i musen, finnes bare i milten og transport mellom innsiden av hårsekkene og marginale soner6,7,8,9. Marginale sonen er et lag av immunceller ca 5-10 celler tykk. Cellen laget omslutter hårsekken, og består hovedsakelig av MZBs og makrofager, men også konstant naturlig killer T (iNKT) celler, dendrittiske celler (DCs) og nøytrofile, blant annet10. Cellene i marginale sonen er utsatt for enveis blodstrøm som stammer fra splenic arteries som avsluttet i en marginal sinus rundt hårsekken. Blodet er strømmer fra hull i marginale sinus gjennom marginale sonen samlet i venøse bihulene i rød cellulose og restaurert til sirkulasjon11. Fri-flyt av blod vasker over MZBs og viser dem mot antigener i blodet. MZBs la antigen i hårsekken ved skytling automatisk mellom marginale sonen og inne i hårsekken, som ikke utsettes for blod. Dermed som MZBs Flyplasstransport mot hårsekken, må de overføre opp skjær kraften av blodet flyt12 (figur 1A).
I denne protokollen, vi beskriver kvantitativt fastslå hvordan immunceller som MZBs svarer ikke flyte eller høy flow i vitro, for å avsløre hvordan de er programmert til å overføre i vivo. I det første trinnet, er MZBs renset fra en mus milt med magnetiske perler koblet til antistoffer fra kommersielt tilgjengelige kits. De ferske isolert MZBs introdusert i av en flow chamber lysbildet, slå seg ned på integrin ligander og utsatt til flyt av migrasjon buffer med en pumpesystem (figur 2A). Cellene er avbildet med en time-lapse video mikroskopi system. Bildene behandles deretter for analyse med en gratis ImageJ plugin, MTrack213,14, automatisk spore cellene. Spor kan deretter kvantifiseres med gratis Ibidi Chemotaxis verktøyet15 å bestemme ulike parametere inkludert hastighet, rett linje og migrasjon indeks. Disse verdiene kan brukes til å fastslå effekten av overføringen hemmere, celle stimulators, chemokines og andre overføring-påvirker kjemikalier på skjær-flow indusert overføringen for å forstå krefter kontrollere immun celle bevegelse i vivo.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>VWR Cell Strainer, 70 &#181;m</td>
			<td>VWR</td>
			<td>10199-656</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pre-Separation Filters, 30 &#181;m</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-095-823</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MZB and FOB cell isolation kit</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-100-366</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B220 CD45R, clone RA3-6B2, FITC</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>103206</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD21 / CD 35, clone 7G6, APC</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>558658</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD23, clone B3B4, PE</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>101608</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBSS</td>
			<td>Biochrom</td>
			<td>L2035</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-PBS 1x</td>
			<td>Gibco by Life Technologies</td>
			<td>14190-094</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA albumin fraction V, fatty acid-free</td>
			<td>Roth</td>
			<td>&#34;0052.3&#34;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ICAM-1</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>796-IC-050</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ibidi &#181;-slides VI 0.4, hydrophobic, uncoated</td>
			<td>Ibidi</td>
			<td>80601</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Perfusion set, white, 50 cm, 0.8 mm</td>
			<td>Ibidi</td>
			<td>10963</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ibidi Pump system</td>
			<td>Ibidi</td>
			<td>10902</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

analysis of shear flow-induced migration of murine marginal zone b cells in vitro

Marginal sone B celler (MZBs) er en befolkning på B celler som befinner seg i musen splenic marginale soner som innhylle follikler. For å nå follikler, må MZBs overføre opp skjær styrken av blodstrøm. Vi presenterer her en metode for å analysere dette flyt-indusert MZB migrasjon i vitro. Først er MZBs isolert fra mus milten. Andre er MZBs avgjort på integrin ligander i flow chamber lysbilder, utsatt for å skråstille flyt, og fotografert under et mikroskop under overføring. Tredje bilder av de overfører MZBs behandles med MTrack2 automatiske cellen sporing plugin for ImageJ, og resultatet celle spor er kvantifisert ved hjelp av verktøyet Ibidi chemotaxis. Migrasjon data avslører hvor raskt cellene flytte, hvor ofte de endre retning, om skjær flyt vektoren påvirker deres migrasjon retning og hvilke integrin ligander er involvert. Selv om vi bruker MZBs, kan lett metoden tilpasses for å analysere migrering av noen leukocytter som svarer til styrken av skjær.

Vi brukte protokollen skissert ovenfor sammenligne migrering av MZBs på ICAM-1-belagt lysbilder uten strøm (0 dyn/cm2) og utsatt for å skråstille flyt (4 dyn/cm2). Cellene ble sporet automatisk med MTrack2 og den resulterende banen filer ble lagt på celle migrasjon filmer av ingen flyt (0 dyn/cm2) og (4 dyn/cm2) for å vise distribusjonen og formen på sporene (figur 4A). Cellen spor ble deretter importeres til...

Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Shear Flow-induced Migration of Murine Marginal Zone B Cells In Vitro at JoVE.com

Analysis of Shear Flow-induced Migration of Murine Marginal Zone B Cells In Vitro

Marginal sone B celler (MZBs) svarer på styrken av skjær flyt ved å reorientere sine overføringsbane flyten. Denne protokollen viser hvordan du registrerer og analysere overføring ved hjelp av en fluidics enhet, pumpe, mikroskop tenkelig system og fri programvare.

Analyse av skjær flyt-indusert migrering av murint Marginal sone B celler In Vitro

Marginal zone B cells (MZBs) are a population of B cells that reside in the mouse splenic marginal zones that envelop follicles. To reach the follicles, ...

Denne metoden kan bidra til å forstå viktige spørsmål i immuncellemigrasjonsfeltet, for eksempel hvordan cytoskeleton sender skjærkrefter og hvordan integrinske ligands og chemokines påvirker strømningsindusert migrering av leukocytter. Den største fordelen med denne teknikken er at det er en ny type migrasjon analyse som er lett for nybegynnere å utføre. Den bruker bare kommersielt tilgjengelig utstyr og reagenser, samt fri programvare.Selv om denne metoden kan gi innsikt i marginale sone B-celler, kan den også brukes på andre immunceller, for eksempel aktiverte T-celler. Dagen før eksperimentet tiner du en aliquot av ICAM-1, og fortynner det i PBS til en endelig konsentrasjon på fem mikrogram per milliliter. Deretter legger du til 30 mikroliter i ICAM-1 til de ønskede kamrene i et strømningslysbilde.Plasser lysbildet i et fuktig kammer, og sett den på fire grader Celsius for å inkubere over natten. Neste dag, vask kammeret ved å legge til 100 mikroliter PBS til en brønn og deretter trekke 100 mikroliter fra den andre brønnen av kammeret. Deretter legger du til 100 mikroliter blokkerer buffer til et kammer, og inkubere lysbildet i et fuktig kammer ved romtemperatur i 90 minutter.Deretter vasker du kammeret ved å legge til 100 mikroliter PBS til en brønn, trekke det fra den andre brønnen, og deretter legge til 100 mikroliter migrasjonsbuffer til kammeret. Lysbildet er nå klart til bruk. Oppbevar det i et fuktig kammer ved romtemperatur til eksperimentet.Først plugger du inn en væskepumpe, og fest fluidics-enheten. Deretter slår du på pumpeprogramvaren. Deretter vasker du slangen en gang med fem til 10 milliliter migrasjonsbuffer.Dette vil ta omtrent ett minutt. Deretter legger du til 11,7 milliliter migrasjonsbuffer likt til begge reservoarene, og fjerner luftboblene. Nå klemmer slangen ca 10 centimeter fra koblingsstykket, og plasser den fluidiske enheten i det oppvarmede inkubasjonskammeret på mikroskopet.I programvaren setter du lysbildevalget til mikrosklie VI 0.4 og slangealternativet til hvitt. Sett også ønsket skjærstress til rundt fire fargestoffer per kvadratcentimeter og bildetiden til 30 minutter. Deretter angir du ønsket strømningshastighet og skjærstress ved å skrive inn verdiene i pumpeprogramvaren.Deretter forvarmer mikroskopinkubasjonskammeret, fluidics-enheten og migrasjonsbufferen aliquots til 37 grader Celsius. Når den er varm, test den fluidiske pumpen, og sørg for at migreringsbufferen strømmer frem og tilbake i reservoarene, og at det ikke er noen luftbobler i systemet. Først isolere leukocytter, og rense ut marginal sone B celler som beskrevet i den medfølgende tekstprotokollen.Rengjør deretter bunnen av lysbildet med et etanolfuktet vev. Tilsett 30 mikroliter av cellesuspensjonen i den ene brønnen av kammeret, og trekk ut 30 mikroliter av den lagrede migrasjonsbufferen fra den andre brønnen. Dekk lysbildet, og inkuber det i 30 minutter for å la cellene feste.Deretter legger du sakte til forhåndsoppvarmet migrasjonsbuffer til hver brønn av lysbildet til en positiv menisk stiger ut av brønnen. Fjern eventuelle luftbobler med pipettespissen. Det er viktig å opprettholde konsistens med faktorer som påvirker celle vedheft, så hold bufferne og cellene i 37 grader, og unngå å bruke overdreven kraft når du rører bufferen inn i kammeret.Klem skyven til mikroskopstadiet, og fjern den umerkede siden av det fluidiske slangen fra kontaktstykket. Fyll deretter opp enden av slangen med migrasjonsbuffer til en positiv menisk uten luftbobler stiger ut av enden. Snu enden av slangen over, og sett den inn i den øverste brønnen av strømningskammeret.Mens du holder slangen fastklemt, gjentar du prosedyren for den markerte enden av slangen. Nå bytter du bildesystemet til Live-modus, og velger et visningsfelt som er midt på lysbildet. Her setter du fokus på cellene, og deretter de-fokuserer litt for å forbedre den svarte omrisset av cellene og produsere et hvitt interiør.Den svarte bakgrunnen og det hvite senteret vil være enklere å bruke i det automatiserte sporingsprogrammet. Konfigurer bildesekvensprogrammet til å ta opp ett bilde hvert femte sekund i 30 minutter ved hjelp av et 10x tørt mål. Deretter begynner du opptaket.Fjern klemmen fra slangen, og slå på pumpen. Dette vil føre til at de ikke-tilhengerne cellene vasker av og holder celler til å begynne å migrere. På slutten av bildebehandlingsprogrammet, merke og lagre filmen.Hvis du bruker en hemmer eller en modifikator for cellemigrasjon, kan den legges til enten cellene i cellesuspensjonen før du setter dem på lysbildet eller til migreringsbufferen i fluidics-enheten. Åpne ImageJ-programmet for å starte automatisk overføringssporanalyse. Kopier MTrack2_kt Java-filen til mappen ImageJ Plugins.Velg Kompiler og Kjør under Plugins-menyen. Start deretter ImageJ på nytt, og plugin-modulen skal vises i Plugins-menyen. Åpne bildestakken fra celleoverføringsfilmen i ImageJ, og behandle bildene som vist her for å konvertere videoen fra fargerammer til bilder med høy kontrast som viser cellene som svarte objekter på en hvit bakgrunn.Deretter skjerper du bildene to ganger, despeckle bildene, og deretter konvertere bildene til åtte bit. Gå til undermenyen Juster lysstyrke/kontrast på Bilde-menyen, og sett kontrastglidebryteren med maksimal kontrast. Dette vil få cellene til å vises som hvite objekter på en svart bakgrunn.Deretter går du tilbake til undermenyen Juster terskel for å sikre at cellene vises som svarte objekter på en hvit bakgrunn. Nå kjører du den automatiske cellesporing plugin MTrack2 kt. På alternativskjermen angir du partikkelstørrelsen minimum til én piksel og partikkelstørrelsen maksimalt til 30 piksler.Sett hastighetsverdien til 10 piksler, selv om marginale sone B-celler vanligvis ikke vil overstige to piksler på etterfølgende rammer som er fem sekunder fra hverandre. Cellesporene er nå klare for analyse ved hjelp av ibidi Chemotaxis Tool. Disse to feltene viser overføringsbanene til marginale sone B-celler som ble seeded på ICAM-1-belagte lysbilder.Cellene ble sporet automatisk med MTrack2 ved hjelp av metodene som er beskrevet i denne artikkelen. Til venstre ble cellene avbildet under statiske forhold, og på de høyre cellene ble de utsatt for en skjærstrøm på fire fargestoffer per kvadratcentimeter. De enkelte cellesporene kan importeres til ibidi Chemotaxis Tool for å generere sporplott av hver film.Her er de enkelte cellesporene farget rødt for å indikere at de endte nedstrøms av opprinnelsespunktet eller svart hvis de endte oppstrøms. Analysen av cellespor fra fire individuelle filmer for både flyt og ingen flytforhold vises her. Dette inkluderer den gjennomsnittlige retningsoverføringsindeksen, cellehastigheten, banens retthet og den endelige rette linjeavstanden for begge betingelsene.Etter å ha sett denne videoen, bør du ha en god forståelse av hvordan du kan bilde retningsbestemt migrering av marginale sone B-celler mot skjærflyt og hvordan du automatisk sporer cellene. Under denne prosedyren kan andre metoder som TIRF mikroskopi utføres for å svare på flere spørsmål, for eksempel hvordan reagerer cytoskeleton og integrins på skjærstress?

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Murine Model of CD40-activation of B cells

Research on B cells has shown that CD40 activation improves their antigen presentation capacity. When stimulated with interleukin-4 and CD40 ligand ...

Human T Lymphocyte Isolation, Culture and Analysis of Migration In Vitro

Human T Lymphocyte Isolation, Culture and Analysis of Migration In Vitro

The migration of T lymphocytes involves the adhesive interaction of cell surface integrins with ligands expressed on other cells or with extracellular ...

Induction and Assessment of Class Switch Recombination in Purified Murine B Cells

Humoral immunity is the branch of the immune system maintained by B cells and mediated through the secretion of antibodies. Upon B cell activation, the ...

Flow Cytometry Analysis of Immune Cells Within Murine Aortas

Atherosclerosis is a chronic inflammatory process of medium and large size vessels that is characterized by the formation of plaques consisting of foam ...

In vitro Uncoating of HIV-1 Cores

In vitro Uncoating of HIV-1 Cores

In vitro Uncoating av HIV-1 Cores

The genome of the retroviruses is encased in a capsid surrounded by a lipid envelope. For lentiviruses, such as HIV-1, the conical capsid shell is ...

Isolation, Processing and Analysis of Murine Gingival Cells

Isolering, bearbeiding og analyse av Murine Gingival Cells

We have developed a technique to precisely isolate and process murine gingival tissue for flow cytometry and molecular studies. The gingiva is a unique ...

Rapid Analysis of Chromosome Aberrations in Mouse B Lymphocytes by PNA-FISH

Rapid Analyse av kromosomavvik i Mouse B-lymfocytter ved PNA-FISH

Defective DNA repair leads to increased genomic instability, which is the root cause of mutations that lead to tumorigenesis. Analysis of the frequency ...

A Murine Model of Group B Streptococcus Vaginal Colonization

A Murine Model of Group B Streptococcus Vaginal Colonization

En Murine modell av gruppe B<em&gt; Streptococcus</em&gt; Vaginal Colonization

Streptococcus agalactiae (group B Streptococcus, GBS), is a Gram-positive, asymptomatic colonizer of the human gastrointestinal tract and vaginal tract of ...

Detection and Enrichment of Rare Antigen-specific B Cells for Analysis of Phenotype and Function

Oppdagelse og berikelse av Rare antigen-spesifikke B-celler for analyse av fenotype og funksjon

B cells reactive with a specific antigen usually occur at a frequency of &lt;0.05% of lymphocytes. For decades researchers have sought methods to isolate ...

A Novel In Vitro Wound Healing Assay to Evaluate Cell Migration

A Novel In Vitro Wound Healing Assay to Evaluate Cell Migration

En roman In Vitro sår helbredelse analysen for å vurdere celle migrasjon

The aim of this work is to show a novel method to evaluate the ability of some immunomodulatory molecules, such as antimicrobial peptides (AMPs), to ...