Name: analysis of shear flow-induced migration of murine marginal zone b cells in vitro
Uploaded: 2018-11-26T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Shear Flow-induced Migration of Murine Marginal Zone B Cells In Vitro at JoVE.com

Detta arbete stöds av bidrag från ”Deutsche Forschungsgemeinschafts” SFB 854/TP11 till K.-D.F.

Alla experiment som inbegriper användning av djur har tidigare godkänts av den Landesverwaltungsamt Halle (Sachsen-Anhalt), Tyskland, i enlighet med alla riktlinjer för medicinska fakulteten för Magdeburgs OVGU universitet.
1. MZB Cell rening
<ol><li>
Isolera leukocyter.
	<ol>
<li>Offra en 8 till 16 veckor gamla mus och ta bort mjälten16. Separera mjälte i 5 mL iskallt cell buffert [fosfatbuffrad saltlösning (PBS) + 0,5% fettsyra-fri bovint ser...

<ol>
	<li>Alon, R., Ley, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cells+on+the+run:+shear-regulated+integrin+activation+in+leukocyte+rolling+and+arrest+on+endothelial+cells.">Cells on the run: shear-regulated integrin activation in leukocyte rolling and arrest on endothelial cells.</a> Current Opinions in Cell Biology. 20 (5), 525-532 (2008).</li><li>Dominguez, G. A., Anderson, N. R., Hammer, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+direction+of+migration+of+T-lymphocytes+under+flow+depends+upon+which+adhesion+receptors+are+engaged.">The direction of migration of T-lymphocytes under flow depends upon which adhesion receptors are engaged.</a> Integrative Biology (Cambridge). 7 (3), 345-355 (2015).</li><li>Steiner, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+roles+for+endothelial+ICAM-1,+ICAM-2,+and+VCAM-1+in+shear-resistant+T+cell+arrest,+polarization,+and+directed+crawling+on+blood-brain+barrier+endothelium.">Differential roles for endothelial ICAM-1, ICAM-2, and VCAM-1 in shear-resistant T cell arrest, polarization, and directed crawling on blood-brain barrier endothelium.</a> Journal of Immunology. 185 (8), 4846-4855 (2010).</li><li>Valignat, M. P., Theodoly, O., Gucciardi, A., Hogg, N., Lellouch, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T+lymphocytes+orient+against+the+direction+of+fluid+flow+during+LFA-1-mediated+migration.">T lymphocytes orient against the direction of fluid flow during LFA-1-mediated migration.</a> Biophysical Journal. 104 (2), 322-331 (2013).</li><li>Woolf, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymph+node+chemokines+promote+sustained+T+lymphocyte+motility+without+triggering+stable+integrin+adhesiveness+in+the+absence+of+shear+forces.">Lymph node chemokines promote sustained T lymphocyte motility without triggering stable integrin adhesiveness in the absence of shear forces.</a> Nature Immunology. 8 (10), 1076-1085 (2007).</li><li>Cinamon, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sphingosine+1-phosphate+receptor+1+promotes+B+cell+localization+in+the+splenic+marginal+zone.">Sphingosine 1-phosphate receptor 1 promotes B cell localization in the splenic marginal zone.</a> Nature Immunology. 5 (7), 713-720 (2004).</li><li>Cinamon, G., Zachariah, M. A., Lam, O. M., Foss, F. W., Cyster, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Follicular+shuttling+of+marginal+zone+B+cells+facilitates+antigen+transport.">Follicular shuttling of marginal zone B cells facilitates antigen transport.</a> Nature Immunology. 9 (1), 54-62 (2008).</li><li>Cyster, J. G., Schwab, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sphingosine-1-phosphate+and+lymphocyte+egress+from+lymphoid+organs.">Sphingosine-1-phosphate and lymphocyte egress from lymphoid organs.</a> Annual Reviews in Immunology. 30, 69-94 (2012).</li><li>Schwab, S. R., Cyster, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Finding+a+way+out:+lymphocyte+egress+from+lymphoid+organs.">Finding a way out: lymphocyte egress from lymphoid organs.</a> Nature Immunology. 8 (12), 1295-1301 (2007).</li><li>Cerutti, A., Cols, M., Puga, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Marginal+zone+B+cells:+virtues+of+innate-like+antibody-producing+lymphocytes.">Marginal zone B cells: virtues of innate-like antibody-producing lymphocytes.</a> Nature Reviews Immunology. 13 (2), 118-132 (2013).</li><li>Mebius, R. E., Kraal, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structure+and+function+of+the+spleen.">Structure and function of the spleen.</a> Nature Reviews Immunology. 5 (8), 606-616 (2005).</li><li>Tedford, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+opposing+forces+of+shear+flow+and+sphingosine-1-phosphate+control+marginal+zone+B+cell+shuttling.">The opposing forces of shear flow and sphingosine-1-phosphate control marginal zone B cell shuttling.</a> Nature Communications. 8 (1), 2261 (2017).</li><li>ImageJ. MTrack2 Available from: <a target="_blank" href="https://imagej.net/MTrack2">https://imagej.net/MTrack2</a> (2018)</li><li>. MTrack2 Available from: <a target="_blank" href="https://valelab4.ucsf.edu/~nstuurman/IJplugins/MTrack2.html">https://valelab4.ucsf.edu/~nstuurman/IJplugins/MTrack2.html</a> (2018)</li><li>. Chemotaxis and Migration Tool Available from: <a target="_blank" href="https://ibidi.com/chemotaxis-analysis/171-chemotaxis-and-migration-tool.html">https://ibidi.com/chemotaxis-analysis/171-chemotaxis-and-migration-tool.html</a> (2018)</li><li>Reeves, J. P., Reeves, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Removal+of+lymphoid+organs.">Removal of lymphoid organs.</a> Current Protocols in Immunology. , (2001).</li><li>. Manual Tracking Available from: <a target="_blank" href="https://imagej.nih.gov/ij/plugins/manual-tracking.html">https://imagej.nih.gov/ij/plugins/manual-tracking.html</a> (2018)</li><li>. ibidi Pump System Available from: <a target="_blank" href="https://ibidi.com/perfusion-system/112-ibidi-pump-system.html">https://ibidi.com/perfusion-system/112-ibidi-pump-system.html</a> (2018)</li></ol>

Här beskriver vi en metod för att analysera migration av celler som upptäcka styrkan av skjuvning flöde och svara genom att ändra deras migration. En analys av MZBs visade att MZBs migrera spontant på ICAM-1 och i närvaro av flödet, kommer att flytta upp flödet. I vårt tidigare arbete visade vi att MZBs inte flyttar upp flödet på VCAM-1 men istället vara fast på plats. Murina mjälten marginell zonen innehåller främst ICAM-1, medan den röda massan innehåller både ICAM-1 och VCAM-1. Från dessa data, ku...

Immuncellerna är de mest motila cellerna i människokroppen och ofta måste brottas med tvärkraften från blod och lymfa flödet. Men finns det förhållandevis få studier om shear kraft-inducerad migration av leukocyter1,2,3,4,5. Vi presenterar här ett tillförlitliga och kvantitativa protokoll för att analysera en immunceller reagerar på flödet in vitro. Utför analysen kräver inte tillverkning av komponenter och all utrustning och förbrukningsvaror är kommersiellt tillgängliga. Protokollet, inklusive cell rening och migration analys, kan utföras på en enda dag. Slutligen, även om vi beskriver migrering av marginella zon B-celler (MZBs), protokollet kan anpassas för att analysera migration mot flödet av andra typer av immunceller. Därför är det möjligt att använda denna analys att systematiskt analysera ett stort antal leukocyter med en heltäckande panel av villkor.
MZBs är en population av B-celler som i musen, finns bara i mjälte och transfer mellan insidan av folliklar och den marginella zoner6,7,8,9. Den marginella zon är ett lager av immunceller cirka 5 – 10 celler tjocka. Celllagrar omsluter hårsäcken och består främst av MZBs och makrofager men också invariant naturliga killer (iNKT) celler, dendritiska celler (DCs) och neutrofiler, bland annat10. Cellerna i den marginella zon utsätts för enkelriktad blodflödet med ursprung från mjälten artärer som avslutar i en marginell sinus som omger follikeln. Blodet rinner från hål i marginell sinus genom den marginella zon och sedan samlas i venös bihålor i röda massan och återställas till omsättning11. Gratis-flödet av blod sköljer över MZBs och utsätter dem för antigener som transporteras i blodet. MZBs bär antigenet i follikeln genom shuttling automatiskt mellan den marginella zon och inuti follikeln, som inte utsätts för blod. Således som MZBs flygplatstransfer mot follikeln, måste de migrera upp tvärkraften av blod flöde12 (figur 1A).
I detta protokoll, beskrivs hur man kvantitativt bestämma hur immunsystemet celler som MZBs besvara antingen inget flöde eller högt flöde in vitro-, för att avslöja hur de är programmerade för att migrera in vivo. I det första steget renas MZBs från en mus mjälte med magnetiska pärlor kopplat till antikroppar från kommersiellt tillgängliga kit. De färska isolerad MZBs är införs i brunnen av en flöde kammare bild, får sedimentera på integrin ligander och utsätts för flödet av migration buffert med ett pumpsystem (figur 2A). Cellerna är avbildade med hjälp av en time-lapse video mikroskopi system. Bilderna bearbetas sedan för analys med en gratis ImageJ plugin, MTrack213,14, att automatiskt spåra cellerna. Spår kan då kvantifieras med gratis Ibidi Chemotaxis verktyg15 att bestämma olika parametrar inklusive hastighet, rakhet och migration index. Dessa värden kan användas för att avgöra effekterna av migration-hämmare, cell stimulatorer, chemokiner och andra migration-påverkar kemikalier för skjuvning-flöde inducerad migration för att förstå de krafter som styr immunceller rörelse i vivo.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>VWR Cell Strainer, 70 &#181;m</td>
			<td>VWR</td>
			<td>10199-656</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pre-Separation Filters, 30 &#181;m</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-095-823</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MZB and FOB cell isolation kit</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-100-366</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B220 CD45R, clone RA3-6B2, FITC</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>103206</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD21 / CD 35, clone 7G6, APC</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>558658</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD23, clone B3B4, PE</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>101608</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBSS</td>
			<td>Biochrom</td>
			<td>L2035</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-PBS 1x</td>
			<td>Gibco by Life Technologies</td>
			<td>14190-094</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA albumin fraction V, fatty acid-free</td>
			<td>Roth</td>
			<td>&#34;0052.3&#34;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ICAM-1</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>796-IC-050</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ibidi &#181;-slides VI 0.4, hydrophobic, uncoated</td>
			<td>Ibidi</td>
			<td>80601</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Perfusion set, white, 50 cm, 0.8 mm</td>
			<td>Ibidi</td>
			<td>10963</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ibidi Pump system</td>
			<td>Ibidi</td>
			<td>10902</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

analysis of shear flow-induced migration of murine marginal zone b cells in vitro

Marginella zon B celler (MZBs) är en population av B-celler som finns i de mus mjälten marginella zoner som omsluter folliklar. För att nå hårsäckarna, måste MZBs migrera upp tvärkraften av blodflödet. Vi presenterar här en metod för att analysera detta flöde-inducerad MZB migration in vitro. Första är MZBs isolerade från mus mjälte. MZBs är andra bosatte sig på integrin ligander i flow avdelningen bilder, utsatt om du vill skeva flöde och avbildas i Mikroskop medan migrera. Tredje, bilder av de migrerar MZBs bearbetas med cellen MTrack2 automatisk spårning plugin för ImageJ, och de resulterande cellen spår kvantifieras med hjälp av verktyget Ibidi Kemotaxis. Migreringsdata avslöja hur snabbt flytta cellerna, hur ofta de ändrar riktning, om skjuvning flöde vektorn påverkar deras migration riktning och som integrin ligander är inblandade. Även om vi använder MZBs, kan metoden enkelt anpassas för att analysera migration av alla leukocyter som svarar på styrkan av skjuvning flöde.

Vi använde det protokoll som beskrivs ovan för att jämföra migration av MZBs på ICAM-1-coated bilder utan flöde (0 dyn/cm2) och utsätts för skeva flöde (4 dyn/cm2). Cellerna var spåras automatiskt med MTrack2 och resulterande banan filer var överlagras på cell migration filmer av inget flöde (0 dyn/cm2) och (4 dyn/cm2) för att Visa fördelningen och formen på spåren (figur 4A). Cell spår var sedan i...

Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Shear Flow-induced Migration of Murine Marginal Zone B Cells In Vitro at JoVE.com

Analysis of Shear Flow-induced Migration of Murine Marginal Zone B Cells In Vitro

Marginella zon B celler (MZBs) svarar på styrkan av skjuvning flöde genom att omorientera sina migreringssökväg upp flödet. Detta protokoll visar hur att registrera och analysera migreringen med hjälp av en flödesteknik enhet, pump, Mikroskop bildsystem och fri programvara.

Analys av skjuvning flöde-inducerad Migration av murin marginella zon B-celler In Vitro

Marginal zone B cells (MZBs) are a population of B cells that reside in the mouse splenic marginal zones that envelop follicles. To reach the follicles, ...

Denna metod kan hjälpa till att förstå viktiga frågor i immuncellsmigrationsfältet, till exempel hur cytoskelettet skickar skjuvkrafter och hur integrin ligander och kemokiner påverkar flödesinducerad migration av leukocyter. Den största fördelen med denna teknik är att det är en ny typ av migration analys som är lätt för nybörjare att utföra. Den använder endast kommersiellt tillgänglig utrustning och reagenser, samt fri programvara.Även om denna metod kan ge insikt i marginella zon B-celler, kan den också appliceras på andra immunceller, såsom aktiverade T-celler. Dagen före experimentet tina en alikvot av ICAM-1, och späd den i PBS till en slutlig koncentration av fem mikrogram per milliliter. Lägg sedan till 30 mikroliter av ICAM-1 till de önskade kamrarna i en flödesrutschbana.Placera bilden i en fuktig kammare, och ställ in den på fyra grader Celsius för att inkubera över natten. Nästa dag, tvätta kammaren genom att lägga till 100 mikroliter PBS till en brunn och sedan dra tillbaka 100 mikroliter från den andra brunnen i kammaren. Lägg sedan till 100 mikroliter av blockerande buffert till en kammare, och inkubera bilden i en fuktig kammare vid rumstemperatur i 90 minuter.Därefter tvätta kammaren genom att lägga till 100 mikroliter PBS till en brunn, dra tillbaka den från den andra brunnen, och sedan lägga till 100 mikroliter av migration buffert till kammaren. Bilden är nu klar att användas. Förvara den i en fuktig kammare i rumstemperatur fram till experimentet.Först, koppla in en fluid pump, och fäst fluidikenheten. Sedan slår du på pumpens programvara. Därefter tvätta slangen en gång med fem till 10 milliliter migration buffert.Det här tar ungefär en minut. Lägg sedan till 11,7 milliliter migrationsbuffert lika mycket till båda reservoarerna och ta bort luftbubblorna. Nu, klämma slangen ca 10 centimeter från kontakten bit, och placera fluidic enheten i den uppvärmda inkubationskammaren på mikroskopet.I programvaran ställer du in glidvalet på mikro-skjut VI 0.4 och slangalternativet till vitt. Ställ också in önskad skjuvningsstress till runt fyra dynes per kvadratcentimeter och bildtagningstiden till 30 minuter. Ställ sedan in önskad flödeshastighet och skjuvning stress genom att skriva in värdena i pumpens programvara.Därefter för varm mikroskop inkubation kammare, fluidik enhet och migration buffert alikvoter till 37 grader Celsius. När den är varm, testa den fluidiska pumpen, se till att migrationsbufferten flyter fram och tillbaka i reservoarerna och att det inte finns några luftbubblor i systemet. Först isolera leukocyter, och rena ut de marginella zon B-cellerna som beskrivs i den medföljande textprotokoll.Rengör sedan undersidan av objektglaset med en etanoldämpad vävnad. Tillsätt 30 mikroliter av cellupphängningen i en brunn i kammaren, och dra tillbaka 30 mikroliter av den lagrade migreringsbufferten från den andra brunnen. Täck täck du glidglaset och inkubera den i 30 minuter så att cellerna kan fästa.Därefter lägger långsamt till förvörd migration buffert till varje brunn av bilden tills en positiv menisk stiger ur brunnen. Ta bort eventuella luftbubblor med pipettspetsen. Det är viktigt att upprätthålla konsistensen med faktorer som påverkar cellens vidhäftning, så håll buffertarna och cellerna på 37 grad, och undvik att använda överdriven kraft när du pipetterar bufferten in i kammaren.Kläm fast glidbanan till mikroskopstadiet, och ta bort den omärkta sidan av fluidic tubing från kontaktstycket. Fyll sedan upp änden av slangen med migrationsbuffert tills en positiv menisk utan luftbubblor stiger ur änden. Vänd i änden av slangen över, och sätt in den i den övre brunnen i flödeskammaren.Medan du håller slangen fastklämd, upprepa proceduren för den markerade änden av slangen. Nu växlar du bildsystemet till Live-läge, och väljer ett synfält som är mitt i bilden. Här, ställa in fokus på cellerna, och sedan de-fokus något för att förbättra den svarta konturerna av cellerna och producera en vit interiör.Den svarta bakgrunden och vita centrum kommer att vara lättare att använda i den automatiserade spårningsprogram. Ställ in bildsekvensprogrammet för att spela in en bild var femte sekund i 30 minuter med hjälp av ett 10x torrt mål. Sedan börjar spela in.Ta bort klämman från slangen, och slå på pumpen. Detta kommer att orsaka icke-anhängare celler att tvätta bort och anhängare celler att börja migrera. I slutet av bildprogrammet, etikett och spara filmen.Om du använder en inhibitor eller en modifiering av cellmigration kan den läggas till antingen cellerna i cellupphängningen innan de läggs på objektglaset eller till migreringsbufferten i fluidikenheten. Om du vill påbörja automatisk migreringsspåranalys öppnar du Programmet ImageJ. Kopiera MTrack2_kt Java-filen till mappen ImageJ Plugins.Välj Kompilera och kör under menyn Plugins. Sedan, starta om ImageJ, och plugin ska visas i Plugins menyn. Öppna bildstacken från cellmigreringsfilmen i ImageJ och bearbeta bilderna som visas här för att kunna konvertera videon från färgramar till bilder med hög kontrast som visar cellerna som svarta objekt på en vit bakgrund.Därefter skärpa bilderna två gånger, despeckle bilderna och sedan konvertera bilderna till åtta bitar. Gå till undermenyn Justera ljusstyrka/kontrast i bild-menyn och sätt reglaget Kontrast på maximal kontrast. Detta kommer att få cellerna att visas som vita objekt på en svart bakgrund.Gå sedan tillbaka till undermenyn Justera tröskelvärdet för att se till att cellerna visas som svarta objekt på en vit bakgrund. Nu, kör den automatiska cellen spårning plugin MTrack2 kt. På alternativskärmen ställer du in partikelstorlekens minimum till en pixel och partikelstorleken maximalt till 30 pixlar.Ställ in hastighetsvärdet på 10 pixlar, även om marginella zon B-celler i allmänhet inte kommer att överstiga två pixlar på på varandra följande bildrutor som är fem sekunders mellanrum. Cellspåren är nu redo för analys med hjälp av ibidi Chemotaxis Tool. Dessa två fält visar migreringsvägarna för marginella zon B-celler som såddes på ICAM-1-belagda bilder.Cellerna spårades automatiskt med MTrack2 med hjälp av de metoder som beskrivs i den här artikeln. Till vänster var celler avbildas under statiska förhållanden, och på rätt celler utsattes för en skjuvning flöde av fyra dynes per kvadratcentimeter. De enskilda cellspåren kan importeras till ibidi Chemotaxis Tool för att generera spårritningar av varje film.Här är de enskilda cellspåren färgade röda för att indikera att de slutade nedströms sin ursprungspunkt eller svart om de hamnade uppströms. Analysen av cellspår från fyra enskilda filmer för både flöde och inga flödesförhållanden visas här. Detta inkluderar det genomsnittliga riktningsmigreringsindexet, cellhastigheten, banans rakhet och det slutliga raklinjens avstånd för båda förhållandena.Efter att ha sett den här videon bör du ha en god förståelse för hur du ska avbilda riktningsmigrationen av marginella zon B-celler mot skjuvningsflödet och hur du automatiskt spårar cellerna. Under denna procedur kan andra metoder såsom TIRF-mikroskopi utföras för att svara på ytterligare frågor, såsom hur cytoskelettet och integrins reagerar på skjuvning stress?

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Murine Model of CD40-activation of B cells

Murina Modell av CD40-aktivering av B-celler

Research on B cells has shown that CD40 activation improves their antigen presentation capacity. When stimulated with interleukin-4 and CD40 ligand ...

Human T Lymphocyte Isolation, Culture and Analysis of Migration In Vitro

Human T Lymphocyte Isolation, Culture and Analysis of Migration In Vitro

Humana T-lymfocyter Isolering, Kultur och analys av migration In Vitro</em

The migration of T lymphocytes involves the adhesive interaction of cell surface integrins with ligands expressed on other cells or with extracellular ...

Induction and Assessment of Class Switch Recombination in Purified Murine B Cells

Induktion och Bedömning av klass Switch rekombination i Renad mus B-celler

Humoral immunity is the branch of the immune system maintained by B cells and mediated through the secretion of antibodies. Upon B cell activation, the ...

Flow Cytometry Analysis of Immune Cells Within Murine Aortas

Flödescytometrisk analys av immunceller Inom Murine artärer

Atherosclerosis is a chronic inflammatory process of medium and large size vessels that is characterized by the formation of plaques consisting of foam ...

In vitro Uncoating of HIV-1 Cores

In vitro Uncoating of HIV-1 Cores

In vitro Uncoating av HIV-1 kärnor

The genome of the retroviruses is encased in a capsid surrounded by a lipid envelope. For lentiviruses, such as HIV-1, the conical capsid shell is ...

Isolation, Processing and Analysis of Murine Gingival Cells

Isolering, bearbetning och analys av murina Gingival Cells

We have developed a technique to precisely isolate and process murine gingival tissue for flow cytometry and molecular studies. The gingiva is a unique ...

Rapid Analysis of Chromosome Aberrations in Mouse B Lymphocytes by PNA-FISH

Snabb analys av kromosomavvikelser hos mus B lymfocyter från PNA-FISH

Defective DNA repair leads to increased genomic instability, which is the root cause of mutations that lead to tumorigenesis. Analysis of the frequency ...

A Murine Model of Group B Streptococcus Vaginal Colonization

A Murine Model of Group B Streptococcus Vaginal Colonization

En musmodell av grupp B<em&gt; Streptococcus</em&gt; Vaginal Colonization

Streptococcus agalactiae (group B Streptococcus, GBS), is a Gram-positive, asymptomatic colonizer of the human gastrointestinal tract and vaginal tract of ...

Detection and Enrichment of Rare Antigen-specific B Cells for Analysis of Phenotype and Function

Detection och anrikning av sällsynta antigenspecifika B-celler för analys av Fenotyp och funktion

B cells reactive with a specific antigen usually occur at a frequency of &lt;0.05% of lymphocytes. For decades researchers have sought methods to isolate ...

A Novel In Vitro Wound Healing Assay to Evaluate Cell Migration

A Novel In Vitro Wound Healing Assay to Evaluate Cell Migration

En roman In Vitro Wound Healing analys för att utvärdera cellmigration

The aim of this work is to show a novel method to evaluate the ability of some immunomodulatory molecules, such as antimicrobial peptides (AMPs), to ...