Name: a plate competition assay as a quick preliminary assessment of disease suppression
Uploaded: 2018-10-28T15:00:00
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वरमोंट कृषि प्रयोग स्टेशन प्रतिस्पर्धी हैच कार्यक्रम VT-HO1609 अनुसंधान वित्त पोषित । लिन फेंग6वरमोंट विश्वविद्यालय में उसे M.S. थीसिस के भाग के रूप में विधि का इस्तेमाल किया ।

1. पहले से तैयार करें
<ol><li>मास्टर कवक संस्कृति (परीक्षण जीव)<ol>
<li>अमेरिकी प्रकार संस्कृति संग्रह से आदेश, माइक्रोबायोलॉजी संग्रह9, अपने teleomorph Thanatephorus cucumeris (फ्रैंक) द्वारा (ATCC १०१५४) या म्या ४०३१.</li>
		<li>वै...

<ol>
	<li>Gonzalez Garcia, G., Onco, M. A. P., Susan, V. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Review.+Biology+and+systematics+of+the+form+genus+Rhizoctonia.">Review. Biology and systematics of the form genus Rhizoctonia.</a> Spanish Journal of Agricultural Research. 4 (1), 55-79 (2006).</li><li>Bonanomi, G., Antignani, V., Pane, C., Scala, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Suppression+of+soilborne+fungal+diseases+with+organic+amendments.">Suppression of soilborne fungal diseases with organic amendments.</a> Journal of Plant Pathology. 89, 311-324 (2007).</li><li>Noble, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Risks+and+benefits+of+soil+amendment+with+composts+in+relation+to+plant+pathogens.">Risks and benefits of soil amendment with composts in relation to plant pathogens.</a> Australasian Plant Pathology. 40, 157-167 (2011).</li><li>Wichuk, K. M., McCartney, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Compost+stability+and+maturity+evaluation+-+a+literature+review.">Compost stability and maturity evaluation - a literature review.</a> Canadian Journal of Civil Engineering. 37, 1505-1523 (2010).</li><li>Alfano, G., Lustrato, G., Lima, G., Vitullo, D., Ranalli, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+composted+olive+mill+wastes+to+predict+potential+plant+disease+suppressiveness.">Characterization of composted olive mill wastes to predict potential plant disease suppressiveness.</a> Biological Control. 3, 199-207 (2011).</li><li>Fang, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Biological indicators of compost-mediated disease suppression against the soilborne plant pathogen Rhizoctonia solani. , (2015).</li><li>Bonanomi, G., Antignani, V., Capodilupo, M., Scala, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identifying+the+characteristics+of+organic+soil+amendments+that+suppress+soilborne+plant+diseases.">Identifying the characteristics of organic soil amendments that suppress soilborne plant diseases.</a> Soil Biology and Biochemistry. 42, 136-144 (2010).</li><li>Neher, D. A., Fang, L., Weicht, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ecoenzymes+as+indicators+of+compost+to+suppress+Rhizoctonia+solani.">Ecoenzymes as indicators of compost to suppress Rhizoctonia solani.</a> Compost Science and Utilization. 25 (4), 251-261 (2017).</li><li>. ATCC&#174; Mycology Culture Guide Available from: <a target="_blank" href="https://www.atcc.org/~/media/PDFs/Culture%20Guides/Mycology_Guide.ashx">https://www.atcc.org/~/media/PDFs/Culture%20Guides/Mycology_Guide.ashx</a> (2018)</li><li>Berns, A. E., Phillip, H., Narres, H. -. D., Burauel, P., Vereecken, H., Tappe, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+gamma-sterilization+and+autoclaving+on+soil+organic+matter+structure+as+studied+by+solid+state+NMR,+UV+and+fluorescence+spectroscopy.">Effect of gamma-sterilization and autoclaving on soil organic matter structure as studied by solid state NMR, UV and fluorescence spectroscopy.</a> European Journal of Soil Science. 59, (2008).</li></ol>

हम पिछले अनुसंधान से पता है, कि कुछ खाद आर सोलानी को दबाने में प्रभावी रहे है और है कि दमन प्रभाव खाद में रहने वाले रोगाणुओं के कारण कर रहे हैं, नहीं खाद6,8के अजैव गुण । microbiota को ' किल ' ...

Rhizoctonia कवक का एक व्यापक परिसर का प्रतिनिधित्व करता है, जिनमें से Thanatephorus cucumeris (फ्रैंक) Donk (anamorph = Rhizoctonia सोलानी Kühn) जड़ सड़ांध और भिगोने के कारण रोगज़नक़ है-बंद1। Rhizoctonia सोलानी एक आक्रामक रोगज़नक़ और एक saprophyte है कि प्रतिकूल पर्यावरण की स्थिति के तहत sclerotia के रूप में जीवित रह सकते है1। नतीजतन, यह एक वैश्विक वितरण किया है और Solanaceae, फैबेसी, झाड़ सहित संयंत्र मेजबान की व्यापक रेंज पर रोग पैदा कर सकता है, और गंभीर आर्थिक नुकसान में जिसके परिणामस्वरूप Brassicaceae ।
खाद कुछ संयंत्र के लिए नियंत्रण एजेंटों बंदरगाह की क्षमता है2रोगजनकों । हालांकि, नहीं सभी खाद एक जैसे है और न ही वे सभी रोगजनकों को प्रभावित इसी तरह3। लकड़ी आधारित कार्बन उच्च lignin घास या पुआल कार्बन आधारित खाद से अनुपात फाइबर है । आर सोलानी आसानी से उपलब्ध भूसे में पाया कार्बन पसंद करते हैं । इसके विपरीत, जैविक नियंत्रण कवक, जैसे ट्राइकोडर्मा एसपीपी., अधिक प्रभावी रहे है जब कार्बन कम आसानी से उपलब्ध है । लाभकारी कवक और खाद में बैक्टीरिया प्रतियोगिता के माध्यम से संयंत्र रोग को दबा सकते हैं, विरोध या संयंत्र विकास को विनियमित3. प्रस्तावित परख मुख्यतः एंटीबायोटिक दवाओं, ecoenzymes या chelators है कि रोगज़नक़ के लिए हानिकारक है के उत्पादन के द्वारा बनाई गई विरोध का पता लगाता है ।
संयंत्र परख एक सोने के मानक निर्धारित करने के लिए कि क्या खाद एहसान या संयंत्र विकास रोकते4हैं । हालांकि, संयंत्र परख समय लेने वाले है (सप्ताह के महीने) को पूरा करने के लिए जो अब से वांछित हो सकता है और अधिक परिश्रम की आवश्यकता के लिए जड़ों के साथ पौधों को निकालने के लिए रूट सिस्टम की गंभीरता को बढ़ाता है । तुलना मजबूत है, लेकिन जल्दी (दिन) परख गुणवत्ता नियंत्रण कार्यक्रमों के लिए आदर्श होगा । इस कागज के लक्ष्य के लिए एक अपेक्षाकृत जल्दी और सही परीक्षण के लिए खाद की दमन क्षमता की भविष्यवाणी है । विधि Alfano एट अल के बाद नमूनों था । 5 दो अपवादों के साथ, खाद का अर्क पतला किया गया और पानी आगर आलू डेक्सट्रोज आगर (पीडीए) के स्थान पर इस्तेमाल हुआ । आर. सोलानी सरल जल आगर मीडिया पर तेजी से बढ़ता है, जबकि पीडीए बैक्टीरिया और अंय कवक है कि संस्कृति6प्रदूषित के विकास को बढ़ावा दिया ।
इस प्लेट परख दमन का एक संकेतक है कि संयंत्र रोगजनकों कि आर सोलानी7, ओल्टेर्नेरिया जल्दी तुषार, फ़्यूज़ेरियम टूटेगी, फाईटोप्थोरा जड़ सड़ांध, और Pythium जड़ सड़ांध सहित saprophytes के रूप में मिट्टी में जीवित रहने की एक सीमा पर लागू होता है के रूप में कार्य करता है । थाली प्रतियोगिता परख रोगाणुओं के समुदायों कि मिट्टी रोगजनकों के जैविक नियंत्रण एजेंटों के रूप में सेवा के लिए खाद उत्पादों की एक सीमा स्क्रीन उपयोगी है । परख वाणिज्यिक खाद6,8उत्पादों में रोग दमन के सबसे सुसंगत संकेतकों में से एक था । उत्पाद नुस्खा, परिपक्वता, और उत्पादन की प्रक्रिया में उनकी भिन्नता के लिए चुना गया था.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>autoclavable narrow-neck glass conical flask</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>10-040D</td>
			<td>125-mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dehydrated granulated agar</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>DF0145-17-0</td>
			<td>500 g quantity</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>heat resistant gloves</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>MEMGG1314WL</td>
			<td>several brands available</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Parafilm (strips of 2-3 cm wide)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>PM992 13-374-16</td>
			<td>5 or 10 cm widths work</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>disposable polystyrene petri dishes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>R80116</td>
			<td>comes in sleeves of 20/ea or cases of 500</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dehydrated potato dextrose agar</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>DF0013-15-8</td>
			<td>comes in quantities of 100, 500 and 2000 grams</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>benchtop reciprocal shaker</td>
			<td>Thomas Scientific</td>
			<td>1227Y31</td>
			<td>other models will work</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>water bath</td>
			<td>ThermoScientific</td>
			<td>S37363</td>
			<td>5L general purpose</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>clear ruler, flat, at least 10 cm</td>
			<td>Any</td>
			<td></td>
			<td>use metric rule</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ATCC culture</td>
			<td>American Type Culture Collection</td>
			<td>ATCC 10154</td>
			<td>teleomorph Thanatephorus cucumeris (Frank) (ATCC 10154) or MYA 4031;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>lab tape</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>15935</td>
			<td>autoclavable and removable, 1&#34; wide preferred</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>water resistant marker</td>
			<td>office or scientific supply</td>
			<td>Sharpie fine tip</td>
			<td>write sample number on tape</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a plate competition assay as a quick preliminary assessment of disease suppression

लक्ष्य को विकसित करने और एक सरल, सस्ती, और प्रभावी परख soilborne कवक Rhizoctonia सोलानीके खिलाफ एक विशिष्ट खाद की बीमारी दमन क्षमता का पता लगाने के लिए किया गया था । आर सोलानी संयंत्र दुनिया भर में मेजबान की एक विस्तृत श्रृंखला का एक रोगज़नक़ है । कवक एक saprophyte के रूप में मिट्टी में जीवित रहता है और सरल जल आगर मीडिया पर तेजी से बढ़ता है । थाली परख एक तीव्र विधि के लिए उनकी क्षमता आर सोलानीके विकास को धीमा करने के लिए खाद की तुलना है । परख भी अंय soilborne कवक रोगजनकों के दमन के साथ अच्छी तरह से संबद्ध है कि मिट्टी में saprophytes जैसे ओल्टेर्नेरिया जल्दी तुषार के रूप में जीवित है, फ़्यूज़ेरियम टूटेगी, फाईटोप्थोरा जड़ सड़ांध, और Pythium जड़ सड़ांध ।

समाप्त खाद स्थिर और परिपक्व होना चाहिए, दो शब्दों है कि अक्सर interchangeably उपयोग किया जाता है, तो यह सुरक्षित रूप से पैक किया और पहुंचाया जा सकता है, और इसके अंत का उपयोग4के दौरान प्रतिकूल प...

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A Plate Competition Assay As a Quick Preliminary Assessment of Disease Suppression

प्रस्तुत एक प्लेट प्रतियोगिता परख के लिए एक प्रोटोकॉल की पहचान है कि क्या एक विशिष्ट खाद बैक्टीरिया और कवक है कि Rhizoctonia सोलानीके विकास को रोकने की संभावना है ।

रोग दमन के एक त्वरित प्रारंभिक आकलन के रूप में एक थाली प्रतियोगिता परख

The goal was to develop and optimize a simple, affordable, and effective bioassay to detect disease suppressive ability of a specific compost against ...

यह विधि मृदाय पौधों के रोगजनकों के जैविक नियंत्रण से संबंधित प्रमुख प्रश्नों के उत्तर देने में मदद कर सकती है। खाद की तरह सामग्री के परीक्षण के लिए सोने के मानक के लिए एक संयंत्र बायोसे का परीक्षण है कि क्या यह पौधों के लिए विषाक्त है । हालांकि, इसमें तीन सप्ताह लगते हैं ।यह तरीका करीब दो से तीन दिन में किया जा सकता है। इस तकनीक का मुख्य लाभ यह है कि यह सरल, सस्ती और प्रभावी है। यह परख राइजोक्टोनिया सोलानी के विकास को दबाने के लिए विशिष्ट खाद की तेजी से स्क्रीनिंग है।हालांकि, इस परख का उपयोग अन्य मृदापित पौधों के रोगजनकों, जैसे फ्यूसरियम, पाइथियम और फाइटोफथोरास के खिलाफ भी किया जा सकता है। इस विधि का दृश्य प्रदर्शन महत्वपूर्ण है क्योंकि संदूषण से बचने के दौरान कवक की शुद्ध संस्कृति को अलग करने और बनाए रखने का ख्याल रखता है। अलगाव प्रक्रिया का प्रदर्शन टेलर Readyhough, मेरी प्रयोगशाला से एक स्नातक छात्र होगा ।एम्मा राइट, मेरी प्रयोगशाला से एक स्नातक छात्र, प्रतियोगिता परख का प्रदर्शन करेंगे । शुरू करने के लिए, आर. सोलानी के कारण होने वाली बीमारी का इतिहास ज्ञात मिट्टी में लाल मूली के बीज बोएं। तीन से चार सप्ताह के बाद, रोपण को मिट्टी से हटा दें, और उन्हें नल के पानी से कुल्ला करें।रेजर ब्लेड का उपयोग करके, हाइपोकॉटाइल और रूट के एक सेंटीमीटर खंडों को काटें जिसमें भूरे रंग का रंग होता है। फिर, एक मिनट के लिए 10% ब्लीच समाधान में खंडों को डुबकी लगाने के लिए लौ-निष्फल संदंश का उपयोग करें। इसके बाद बाँझ पानी में खंडों को खंगाल लें।इसके बाद, खंडों को कागज के तौलिया में स्थानांतरित करने के लिए लौ-निष्फल संदंश का उपयोग करें। खंडों को सूखा करें, और उन्हें पानी आगर के साथ पेट्री डिश में स्थानांतरित करें। एक ढक्कन के साथ एक कंटेनर के अंदर पेट्री पकवान रखें, और कमरे के तापमान पर खंडों को इनक्यूबेट करें।एक बेटी संस्कृति स्थापित करने के लिए, एक खंड को आलू डेक्सट्रोस एगर की एक ताजा प्लेट के केंद्र में स्थानांतरित करें। इसके बाद ऑटोक्लाई 25 मिलीलीटर टेस्ट ट्यूब जिसमें 10 मिलीलीटर पानी होता है। 10 मिलीलीटर बाँझ पानी के साथ ऑटोक्लेवेड टेस्ट ट्यूबों की एक जोड़ी के लिए प्रत्येक परीक्षण नमूने के दो ०.५ ग्राम नमूने जोड़ें, और रात भर टेस्ट ट्यूब हिला ।24 घंटे के बाद, शंकु फ्लास्क की एक जोड़ी में 1.5 ग्राम सादा आगार और 90 मिलीलीटर आसुत पानी जोड़ें। फ्लास्क को ऑटोक्लेव करने के बाद, उन्हें 30 मिनट के लिए 45 डिग्री सेल्सियस पानी स्नान में रखें। इसके बाद, पिघले हुए आगार में ऑटोक्लेव संदर्भ नमूना और जीवित नमूना डालें।प्रत्येक फ्लास्क से मिश्रण को पांच पेट्री व्यंजनों में डालें। स्वदेशी रोगाणुओं की रक्षा के लिए, यह महत्वपूर्ण है कि खाद को न जोड़ें जबकि आगर बहुत गर्म है। इसलिए, खाद जोड़ने से पहले एगर को 45 डिग्री सेल्सियस तक ठंडा होने दें।एसेप्टिक तकनीक का उपयोग करके, नमूना प्लेटों की प्रत्येक जोड़ी में आर. सोलानी के टुकड़े स्थानांतरित करें। इसके बाद एक से दो दिन तक कमरे के तापमान पर प्लेटों को इनक्यूबेट करें। अंत में, प्रत्येक प्लेट में माइसेलियम के त्रिज्या को निकटतम मिलीमीटर तक मापने के लिए एक स्पष्ट, सपाट शासक और एक स्टीरियो माइक्रोस्कोप का उपयोग करें।इस प्रोटोकॉल में, जीवित कॉन्पोस्ट से अर्क ने आर. सोलानी विकास को ऑटोक्लेव नमूनों की तुलना में काफी अधिक दबा दिया, यह प्रदर्शित करता है कि प्रभाव माइक्रोबियल था न कि पोषक तत्व आधारित। दमन को ऑटोक्लेव नियंत्रण की तुलना में विकास में कमी के रूप में मापा जाता है। विकास परिपक्वता या खाद के इलाज की अवधि से प्रभावित नहीं था।विकास खाद विधि और नुस्खा सामग्री से काफी प्रभावित था, विशेष रूप से वर्मीकंपोस्ट, विंडरो प्रक्रियाओं और दृढ़ लकड़ी की छाल के साथ व्यंजनों के साथ। इसके विकास के बाद, यह तकनीक रोग-दमनकारी गुणों के लिए खाद के वाणिज्यिक प्रमाणीकरण के लिए एक उम्मीदवार हो सकती है।

Research

JoVE Journal

Biology

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