Name: left atrial stenosis induced pulmonary venous arterialization and group 2 pulmonary hypertension in rat
Uploaded: 2018-11-18T14:00:00
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Os autores reconhecem a sociedade Mitacs-Japão para a promoção da ciência (JSPS) programa de verão. Ping Yu Xiong foi suportado pelo financiamento do programa de Verão de Mitacs-JSPS para visitar o Jikei University School of Medicine. Dr. Minamisawa é suportado em parte pelo Ministério da educação, cultura, esportes, ciência e tecnologia do Japão (S.M.), o programa de MEXT-Supported para a Fundação de pesquisa estratégica em particular as universidades (S.M.), o veículo de corrida comemorativa Fundação (S.M.) e The Jikei University Graduate pesquisa fundo (S.M.) com apoio financeiro para este projeto. Dr. Archer é suportado em parte pelos E.U. National Institutes of Health (NIH) bolsas NIH 1R01HL113003-01A1 (fevereiro) e NIH 2R01HL071115-08 (fevereiro), a Fundação do Canadá para a inovação, Tier 1 Canadá cadeira de pesquisa em dinâmica mitocondrial e Translational Medicina (fevereiro), a Fundação William J. Henderson, a canadense rede Vascular e unidade cardiopulmonar da Rainha (QCPU).
Os autores reconhecem o Sr. Tadashi Kokubo, chefe de serviços fotográficos do centro de informações acadêmicas no Jikei University School of Medicine, para filmar o vídeo.

O protocolo experimental de LAS foi aprovado pelo Jikei University escola de medicina Animal conta Comité e a pesquisa universitária e o Comitê de ética (protocolo #2015-118).
1. pré-operatório preparação
<ol><li>Depois de chegar à instalação de animais, fornecem ratos Sprague Dawley masculinos de 5 semanas entre 150 a 200 g com 1 semana se adaptar à sua nova casa antes da operação.</li>
	<li>Preparar os seguintes equipamentos antes da cirurgia em autoclave: 1) é um pequeno an...

<ol>
	<li>McGuire, L. B., Nolan, T. B., Reeve, R., Dammann Jr, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cor+Triatriatum+as+a+Problem+of+Adult+Heart+Disease.">Cor Triatriatum as a Problem of Adult Heart Disease.</a> Circulation. 31, 263-272 (1965).</li><li>Strange, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pulmonary+hypertension:+prevalence+and+mortality+in+the+Armadale+echocardiography+cohort.">Pulmonary hypertension: prevalence and mortality in the Armadale echocardiography cohort.</a> Heart. 98 (24), 1805-1811 (2012).</li><li>Moreira, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevalence+of+Pulmonary+Hypertension+in+the+General+Population:+The+Rotterdam+Study.">Prevalence of Pulmonary Hypertension in the General Population: The Rotterdam Study.</a> PLoS ONE. 10 (6), e0130072 (2015).</li><li>Wijeratne, D. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increasing+Incidence+and+Prevalence+of+World+Health+Organization+Groups+1+to+4+Pulmonary+Hypertension:+A+Population-Based+Cohort+Study+in+Ontario,+Canada.">Increasing Incidence and Prevalence of World Health Organization Groups 1 to 4 Pulmonary Hypertension: A Population-Based Cohort Study in Ontario, Canada.</a> Circulation: Cardiovascular Quality and Outcomes. 11 (2), (2018).</li><li>Briongos Figuero, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Predictors+of+persistent+pulmonary+hypertension+after+mitral+valve+replacement.">Predictors of persistent pulmonary hypertension after mitral valve replacement.</a> Heart and Vessels. 31 (7), 1091-1099 (2016).</li><li>Jiang, B. H., Tardif, J. C., Shi, Y., Dupuis, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bosentan+does+not+improve+pulmonary+hypertension+and+lung+remodeling+in+heart+failure.">Bosentan does not improve pulmonary hypertension and lung remodeling in heart failure.</a> European Respiratory Society. 37 (3), 578-586 (2011).</li><li>Dayeh, N. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Echocardiographic+validation+of+pulmonary+hypertension+due+to+heart+failure+with+reduced+ejection+fraction+in+mice.">Echocardiographic validation of pulmonary hypertension due to heart failure with reduced ejection fraction in mice.</a> Scientific Reports. 8, (2018).</li><li>Yin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sildenafil+preserves+lung+endothelial+function+and+prevents+pulmonary+vascular+remodeling+in+a+rat+model+of+diastolic+heart+failure.">Sildenafil preserves lung endothelial function and prevents pulmonary vascular remodeling in a rat model of diastolic heart failure.</a> Circulation: Heart Failure. 4 (2), 198-206 (2011).</li><li>Wang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Effects+and+Mechanism+of+Atorvastatin+on+Pulmonary+Hypertension+Due+to+Left+Heart+Disease.">The Effects and Mechanism of Atorvastatin on Pulmonary Hypertension Due to Left Heart Disease.</a> PLoS ONE. 11 (7), e0157171-e0157171 (2016).</li><li>Hunt, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pulmonary+veins+in+the+normal+lung+and+pulmonary+hypertension+due+to+left+heart+disease.">Pulmonary veins in the normal lung and pulmonary hypertension due to left heart disease.</a> American Journal of Physiology - Lung Cellular and Molecular Physiology. 305 (10), L725-L736 (2013).</li><li>Fujimoto, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pulmonary+hypertension+due+to+left+heart+disease+causes+intrapulmonary+venous+arterialization+in+rats.">Pulmonary hypertension due to left heart disease causes intrapulmonary venous arterialization in rats.</a> The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 154 (5), 1742-1753 (2017).</li><li>Katz, M. G., Fargnoli, A. S., Hajjar, R. J., Hadri, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pulmonary+hypertension+arising+from+left+heart+disease+causes+intrapulmonary+venous+arterialization+in+rats.">Pulmonary hypertension arising from left heart disease causes intrapulmonary venous arterialization in rats.</a> The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 155 (1), 281-282 (2018).</li><li>Alsoufi, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Not+a+Cinderella+story.">Not a Cinderella story.</a> The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 155 (1), 282-284 (2018).</li><li>Kato, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pulmonary+vein+stenosis+and+the+pathophysiology+of+&amp;#34;upstream&amp;#34;+pulmonary+veins.">Pulmonary vein stenosis and the pathophysiology of &amp;#34;upstream&amp;#34; pulmonary veins.</a> The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 148 (1), 245-253 (2014).</li></ol>

O rato-LAS é um modelo de PH de romance grupo 2 que já recebeu um interesse substancial de pesquisadores no campo12,13. Comparando com os dois modelos de grupo 2 existentes, nomeadamente a veia pulmonar estenose (PVS) modelo14, usando leitões e a supracoronary da aorta bandas (SAB) rato modelo8,9,10, o modelo do rato de LAS tem vários vantagen...

O objetivo deste artigo é demonstrar o procedimento passo a passo de como realizar a cirurgia de LAS em ratos. Cirurgicamente induzido LAS estreitamente imita MS e cor triatriatum em seres humanos, que envolvem a criação de uma obstrução mecânica no átrio esquerdo1. Obstrução da afluência de (LV) ventricular esquerda muitas vezes faz com que uma congestão da circulação venosa pulmonar, e os pacientes desenvolvem gradualmente o PH. A Organização Mundial de saúde classifica o PH devido a doenças do coração esquerdas no grupo 2, que é o grupo mais prevalente de PH2,3,4. O diagnóstico de PH em pacientes com doenças do coração esquerdos é associado com um maior do que um aumento de sete vezes na mortalidade padronizada de 1 ano4. Atualmente, não há nenhuma terapia aprovada para o grupo 2 PH além de tratamento à base deixou de doenças do coração (por exemplo, cirurgicamente, substituindo a válvula mitral estenóticas). No entanto, nem eficaz da válvula mitral substituição não resolver PH totalmente em até a metade dos pacientes com MS5. Este PH persistente é devido adverso pulmonar vascular remodelação, que é mal compreendido. Portanto, modelos animais são importantes para melhorar a nossa compreensão dos mecanismos moleculares subjacentes de adversos remodelamento vascular pulmonar no grupo 2 PH.
Existem alguns modelos animais do grupo 2 pH arterial coronariana ligadura6,7 e transversal da aorta faixas8,9,10 em roedores são os mais usados modelos animais do grupo 2 PH. A grande desvantagem destes modelos é o envolvimento de LV, que faz com que o resultado dos estudos de PH do grupo 2 difíceis de interpretar. Em contraste, a LV permanece intacta no modelo de LAS. Além disso, o modelo de LAS é clinicamente relevante, porque resulta na evolução lenta e progressiva do PH durante um período de 10 semanas11. Em humanos, MS é considerada significativa se a velocidade de fluxo Doppler transmitral for superior a 2,0 m/s11, e também utilizamos este número como um disco de corte para determinar se a cirurgia de LAS produziu estenose significativa. Além disso, embora o modelo de LAS gera PH ligeira ou moderada, ele demonstra alterações histológicas características, semelhantes em pacientes humanos, nomeadamente o desenvolvimento de arterialization venoso intrapulmonar11. O modelo do rato de LAS é um modelo de PH clinicamente relevante grupo 2 com função preservada de LV e romance. É apropriado para o estudo da fisiopatologia de remodelamento vascular pulmonar persistente, identificando alvos moleculares e testes de novas terapias para o grupo 2 PH.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:635px;" width="634">
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:159px;">5-0 Prolene Suture</td>
			<td style="width:132px;">Johnson &#38; Johnson - Ethicon</td>
			<td style="width:123px;">8725H</td>
			<td style="width:222px;">Polypropylene suture with HEMO-SEAL Technology</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:159px;">Anaesthesia Machine</td>
			<td style="width:132px;">Wakenyaku Co., Ltd.</td>
			<td style="width:123px;">BRTK-100A</td>
			<td>Air pump and anaethesia machine</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:159px;">Angiocatheter guidewire</td>
			<td style="width:132px;">Self-made</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td>10 cm guidewire glued to a 1 cc syringe&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="62">
			<td height="62" style="height:63px;width:159px;">Chest retractor</td>
			<td style="width:132px;">Natsume Seisakusho Co., Ltd.</td>
			<td style="width:123px;">F-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:159px;">Chest tube 23G</td>
			<td style="width:132px;">Self-made</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td>10 cc syringe attached to a 23G needle plus plastic tube</td>
		</tr>
		<tr height="62">
			<td height="62" style="height:63px;width:159px;">Curved forceps</td>
			<td style="width:132px;">Natsume Seisakusho Co., Ltd.</td>
			<td style="width:123px;">A-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:159px;">Heating pad</td>
			<td style="width:132px;">Vivaria</td>
			<td style="width:123px;">MP-916-NV</td>
			<td>Keep body temperature at 37 degree celsius</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Horizon Ligating Clips</td>
			<td style="width:132px;">Teleflex</td>
			<td style="width:123px;">REF 003200</td>
			<td>Size Medium-Large</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Horizon Manual-Load Ligating Clip Applier For Medium-Large Size Horizon</td>
			<td style="width:132px;">Teleflex</td>
			<td>REF 337085</td>
			<td>Ligation Clips Angled Jaw, (20cm)</td>
		</tr>
		<tr height="62">
			<td height="62" style="height:63px;width:159px;">Needle holder</td>
			<td style="width:132px;">Natsume Seisakusho Co., Ltd.</td>
			<td style="width:123px;">MC-40</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:159px;">Rodent Respirator</td>
			<td style="width:132px;">CWE Inc</td>
			<td style="width:123px;">SAR-830/P</td>
			<td>Small animal ventilator</td>
		</tr>
		<tr height="62">
			<td height="62" style="height:63px;width:159px;">Scissors</td>
			<td style="width:132px;">Natsume Seisakusho Co., Ltd.</td>
			<td style="width:123px;">B-12</td>
			<td>Straight scissors ideally with round tips</td>
		</tr>
		<tr height="62">
			<td height="62" style="height:63px;width:159px;">Straight forceps</td>
			<td style="width:132px;">Natsume Seisakusho Co., Ltd.</td>
			<td style="width:123px;">A-7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:159px;">Tongue depressor</td>
			<td style="width:132px;">Uchida Yoko Co., Ltd.</td>
			<td style="width:123px;">8-615-2417</td>
			<td>Use the wide end</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

left atrial stenosis induced pulmonary venous arterialization and group 2 pulmonary hypertension in rat

Desconhece-se o mecanismo de arterialization de venosa pulmonar induzida por estenose mitral e hipertensão pulmonar do grupo 2 (PH). Não há nenhum modelo de roedor do grupo 2 de PH, devido à estenose mitral (MS), para facilitar a investigação dos mecanismos da doença e possíveis estratégias terapêuticas. Apresentamos um modelo do rato de romance de pulmonar venosa induzida por congestão pulmonar venosa arterialization e grupo 2 PH causada por estenose atrial esquerdo (LAS). LAS é conseguida pela constrição do átrio esquerdo usando um clipe de titânio semi-cerrados. Após a cirurgia de LAS, um rato modelo com uma velocidade de fluxo transmitral maior que ou igual a 2,0 m/s na ecocardiografia se desenvolve gradualmente arterialization venoso pulmonar e grupo 2 PH ao longo de um período de 8 a 10 semanas. Neste protocolo, nós fornecemos o procedimento passo a passo de como realizar a cirurgia de LAS. O modelo de rato de LAS apresentado imita MS em humanos e é útil para estudar o mecanismo molecular subjacente de arterialization venosa pulmonar e para a avaliação pré-clínica de terapias para o grupo 2 PH.

A eficácia da LAS é confirmada usando a Ecocardiografia, 2 semanas de pós-operatório. Ratos com uma velocidade de influxo de LV superior a 2,0 m/s, medidos com uma visão de quatro câmaras, são considerados desenvolveram estenose significativa (Figura 1) e confiantemente desenvolver PH moderado e a arterialization venosa pulmonar 8-10 semanas pós-LAS cirurgia.
Cirurgia pós-LAS de dez semanas...

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Left Atrial Stenosis Induced Pulmonary Venous Arterialization and Group 2 Pulmonary Hypertension in Rat

Estenose atrial esquerdo (LAS) é uma nova técnica cirúrgica para estudar os mecanismos subjacentes arterialization venoso pulmonar e hipertensão pulmonar do grupo 2 (PH). Aqui, apresentamos um protocolo para contrair o átrio esquerdo usando um clipe de titânio para causar arterialization venoso pulmonar e moderar o PH em um rato.

Estenose Atrial Esquerdo induzida Arterialization venoso pulmonar e hipertensão pulmonar do grupo 2 no rato

The mechanism of mitral stenosis-induced pulmonary venous arterialization and group 2 pulmonary hypertension (PH) is unclear. There is no rodent model of ...

Obrigado por assistir nossos vídeos. Sou Susumu Minamisawa, da Escola de Medicina da Universidade Jikei, em Tóquio, Japão. Nossa oportunidade de hipertensão pulmonar animal devido a doença cardíaca de rato que é classificada como hipertensão pulmonar do Grupo Dois.A Organização Mundial da Saúde classifica a hipertensão pulmonar em cinco grupos. O rato de estenose atrial esquerda é um grupo modelo animal dois hipertensão pulmonar que é a forma mais prevalente de hipertensão pulmonar e atualmente não há terapias aprovadas para este grupo de hipertensão pulmonar. Nestes vídeos estamos demonstrando o passo a passo de como realizar a cirurgia de estenose atrial esquerda em rato.A estenose atrial criada cirurgicamente imita estenose mitral em humano. Quando o usamos para estudar a possibilidade e sob o grupo dois hipertensão pulmonar. Vamos começar.Prepare o seguinte equipamento antes da cirurgia, um pequeno respirador animal e uma máquina anestésico. Um kit de incubação compõe um par de fórceps hemostat, um depressor de língua e um angio-cateter de 18 bitolas. Os instrumentos cirúrgicos incluem um par de fórceps curvos, um par de fórceps retos, um driver de agulha, um retrátil torácico, um par de tesouras, uma sutura monofilamento 5-0, um aplicador de clipe, um clipe médio grande e um tubo torácico calibre 23.Anestesiar o rato em uma câmara de indução com 5% de isoflurane misturado com dois metros por minuto de ar da sala. Antes da intubação raspar o cabelo do peito. Aplique creme de depilação para remover cabelos finos não removidos pela máquina de barbear.Enganche os dentes da frente com uma corda e fixe as cordas nos pinos. Depois que a corda for presa, abra a boca com as fórceps hemostat e insira o depressor da língua na boca. Levante o depressor da língua para visualizar a corda vocal.Insira o angio-cateter de 18 bitolas como tubo endotraqueal na traqueia e, em seguida, conecte rapidamente o cateter ao respirador. Ajuste o volume da maré para 10 microliter por grama com uma taxa respiratória de 100 respirações por minuto. Mantenha a anestesia com 2% de isoflurane misturado com dois metros por minuto de ar da sala.Esterilize o local cirúrgico com esfoliantes alternados de clorexidina e álcool. Dê a Buprenorfina 01 miligramas por quilograma subcutâneamente. Cubra o rato com uma cortina estéril.Verifique o reflexo do pedal para confirmar a anestesia bem sucedida antes da cirurgia. Marque o local da incisão dois centímetros abaixo da axila. Faça uma incisão lateral lateral de dois centímetros com uma tesoura.Separe cuidadosamente o músculo intercostal entre a quarta e a quinta costela usando um fórceps reto e curvo até entrar na cavidade torácica. Insira o retrátil do peito na cavidade torácica. Use alguma força para abrir o retrátil do peito para dividir a quarta e quinta costela em cerca de um centímetro.Levante o timo com um par de fórceps retos. Remova cuidadosamente o timo que cobre o coração com uma tesoura. Passe cuidadosamente uma sutura de monofilamento 5-0 através da superfície do ventrículo esquerdo logo abaixo do apêndice atrial esquerdo.Deve-se tomar cuidado para evitar passar a agulha pelas principais artérias coronárias. Depois que a sutura estiver no lugar e não houver uma gravata de sangramento significativa um nó solto. Puxe o fio de sutura para cima e para a frente para levantar o coração para fora do peito.Uma vez que o coração é levantado fora do peito, aplique rapidamente um clipe médio grande no átrio esquerdo logo acima da válvula mitral. Remova cuidadosamente a sutura de permanência usada para levantar o coração. Comece a fechar o peito com uma sutura de monofilamento 5-0 usando um padrão simples interrompido.Insira um tubo torácico de calibre 23 preso a uma seringa de 10cc na cavidade torácica. E então proceder com o fechamento do peito. Desenhe qualquer derrame de ar, sangue e pleurae perto do tubo torácico inserido usando a seringa de 10cc anexada.E então puxe o tubo quando nada está saindo. Feche a área da pele com sutura de monofilamento 5-0 usando um padrão simples interrompido. Remova a cortina cirúrgica.Dê a Buprenorfina 01 miligramas por quilograma subcutâneamente. Desligue o isoflurane. Escavar o rato quando ele começar a acordar.Duas semanas após a operação usam a ecografia para confirmar o sucesso da cirurgia de estenose atrial esquerda. A eficácia da estenose atrial esquerda é confirmada usando a cardiografia ecológica duas semanas após a operação. Acredita-se que ratos com velocidade de entrada do ventrículo esquerdo superiores a dois metros por segundo medidos em quatro câmaras tenham desenvolvido estenose significativa.10 semanas após a cirurgia de estenose atrial esquerda os ratos do grupo LAS mostram alargamento atrial esquerdo, congestão pulmonar, sobrecarga de pressão ventrículo direita e aumento do fluxo venoso pulmonar em comparação com os ratos do grupo operado falso. Além disso, há um aumento significativo da pressão sistólica ventricular direita no grupo de estenose atrial esquerda versus o grupo operado por sham. No entanto, a pressão sistólica do ventrículo esquerdo permanece a mesma em ambos os grupos.Exame histológico de longa seção transversal manchada com van gieson elástico mostra aumento da doença arterial pulmonar e venosa pulmonar. Uma dimensão venosa pulmonar aumentada o grupo de estenose atrial esquerda versus o grupo operado falso foi mais uma atuação muscular suave na coloração mostra aumento do número de células musculares lisas na artéria pulmonar e na veia pulmonar do grupo de estenose atrial esquerda versus o grupo controle. Espero que tenham gostado de ver este vídeo.Embora a cirurgia seja relativamente simples, deve-se tomar cuidado ao aplicar a sutura no ventrículo esquerdo para evitar atingir as principais artérias coronárias. Ao levantar o coração puxe a sutura em direção à cabeça do rato para que o átrio esquerdo sua estrutura de corrida possa ser claramente visualizada. Aplicando o clipe no átrio esquerdo, o aperto do clipe deve ser suficiente para causar estenose atrial esquerda significativa, mas não muito apertada para induzir edema pulmonar agudo e insuficiência cardíaca direita.Obrigado por assistir este vídeo. E boa sorte com sua experiência.

Research

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