Name: two-photon imaging of microglial processes' attraction toward atp or serotonin in acute brain slices
Uploaded: 2019-01-31T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Two-photon Imaging of Microglial Processes' Attraction Toward ATP or Serotonin in Acute Brain Slices at JoVE.com

ونحن نشكر الخلايا والأنسجة مرفق التصوير من معهد دو Fer à مولان، حيث تم إجراء جميع الحصول على الصور وتحليل. تم دعم هذا العمل جزئيا خلال المركز الوطني "البحث العلمي"، المعهد الوطني الصحة et de la "ميديكال البحوث"، "العلوم في جامعة السوربون"، ومن المنح المقدمة من جامعة السوربون جامعتا بيير et (جامعة ماري كوري برنامج اميرجينسيوبمك 2011/2014)، والمؤسسة من أجل البحوث la sur le الدماغ، فرنسا مؤسسة، المؤسسة من أجل البحوث ميديكال "ايكيب FRM DEQ2014039529"، الوزارة الفرنسية للبحوث (الوكالة الوطنية للبحوث ANR-17-CE16-0008 ودعفينير يشرف برنامج "بيو-Psy لابيكس" ANR-11-معرض أيدكس-0004-02) و "البحوث التعاونية" في برنامج "علم الأعصاب الحسابية"، المؤسسة الفرنسية "العلم الوطني والوكاله الوطنية" للبحوث (رقم: 1515686). جميع المؤلفين وينتسب إلى البحوث المجموعات التي هي أعضاء في مدرسة باريس لعلم الأعصاب (سياسة الجوار الأوروبية) ومن "لابيكس" بيو-Psy. هو طالب دكتوراه والمنتسب إلى جامعة السوربون، دكتوراه في كوليج، F-75005 باريس، فرنسا، وتموله "لابيكس" بيو-Psy. وعين زميل ما بعد دكتوراه تمول "البحوث التعاونية" في برنامج "علم الأعصاب الحسابية"، المؤسسة الفرنسية "العلم الوطني والوكاله الوطنية" للبحوث (رقم: 1515686). يشكر المؤلفون كولودجيساك مارتا الذين شاركوا في البدء في المشروع.

جميع التجارب التي أقرتها اللجنة الأخلاقية المحلية (اللجنة داروين، اتفاقات #1170 و #10921).
1-إعداد ميكروبيبيتيس الزجاج للتطبيق المحلي للمركبات
<ol><li>إعداد الماصات من البورسليكات الشعيرات الدموية رقيقة الجدار الزجاج مع ساحبة كهربائي. ضبط معلمات للحصول على الماصات يبلغ قطرها 4-5 م?...

<ol>
	<li>Salter, M. W., Stevens, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microglia+emerge+as+central+players+in+brain+disease.">Microglia emerge as central players in brain disease.</a> Nature Publishing Group. 23 (9), 1018-1027 (2017).</li><li>Tay, T. L., Savage, J., Hui, C. W., Bisht, K., Tremblay, M. -. &. #. 2. 0. 0. ;. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microglia+across+the+lifespan:+from+origin+to+function+in+brain+development,+plasticity+and+cognition.">Microglia across the lifespan: from origin to function in brain development, plasticity and cognition.</a> The Journal of Physiology. , (2016).</li><li>Davalos, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ATP+mediates+rapid+microglial+response+to+local+brain+injury+in+vivo.">ATP mediates rapid microglial response to local brain injury in vivo.</a> Nature Neuroscience. 8 (6), 752-758 (2005).</li><li>Nimmerjahn, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resting+Microglial+Cells+Are+Highly+Dynamic+Surveillants+of+Brain+Parenchyma+in+Vivo.">Resting Microglial Cells Are Highly Dynamic Surveillants of Brain Parenchyma in Vivo.</a> Science. 308 (5726), 1314-1318 (2005).</li><li>Dissing-Olesen, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+neuronal+NMDA+receptors+triggers+transient+ATP-mediated+microglial+process+outgrowth.">Activation of neuronal NMDA receptors triggers transient ATP-mediated microglial process outgrowth.</a> The Journal of Neuroscience: The Official Journal of the Society for Neuroscience. 34 (32), 10511-10527 (2014).</li><li>Gyoneva, S., Traynelis, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Norepinephrine+modulates+the+motility+of+resting+and+activated+microglia+via+different+adrenergic+receptors.">Norepinephrine modulates the motility of resting and activated microglia via different adrenergic receptors.</a> Journal of Biological Chemistry. 288 (21), 15291-15302 (2013).</li><li>Eyo, U. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+hyperactivity+recruits+microglial+processes+via+neuronal+NMDA+receptors+and+microglial+P2Y12+receptors+after+status+epilepticus.">Neuronal hyperactivity recruits microglial processes via neuronal NMDA receptors and microglial P2Y12 receptors after status epilepticus.</a> The Journal of Neuroscience: The Official Journal of the Society for Neuroscience. 34 (32), 10528-10540 (2014).</li><li>Hristovska, I., Pascual, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deciphering+Resting+Microglial+Morphology+and+Process+Motility+from+a+Synaptic+Prospect.">Deciphering Resting Microglial Morphology and Process Motility from a Synaptic Prospect.</a> Frontiers in Integrative Neuroscience. 9, 1231 (2016).</li><li>Avignone, E., Lepleux, M., Angibaud, J., N&#228;gerl, U. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Altered+morphological+dynamics+of+activated+microglia+after+induction+of+status+epilepticus.">Altered morphological dynamics of activated microglia after induction of status epilepticus.</a> Journal of Neuroinflammation. 12, 202 (2015).</li><li>Abiega, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+Hyperactivity+Disturbs+ATP+Microgradients,+Impairs+Microglial+Motility,+and+Reduces+Phagocytic+Receptor+Expression+Triggering+Apoptosis/Microglial+Phagocytosis+Uncoupling.">Neuronal Hyperactivity Disturbs ATP Microgradients, Impairs Microglial Motility, and Reduces Phagocytic Receptor Expression Triggering Apoptosis/Microglial Phagocytosis Uncoupling.</a> PLoS Biology. 14 (5), e1002466 (2016).</li><li>Madry, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microglial+Ramification,+Surveillance,+and+Interleukin-1&#946;+Release+Are+Regulated+by+the+Two-Pore+Domain+K+Channel+THIK-1.">Microglial Ramification, Surveillance, and Interleukin-1&#946; Release Are Regulated by the Two-Pore Domain K+Channel THIK-1.</a> Neuron. 97 (2), 299-312 (2018).</li><li>Honda, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+ATP+or+ADP+induce+chemotaxis+of+cultured+microglia+through+Gi/o-coupled+P2Y+receptors.">Extracellular ATP or ADP induce chemotaxis of cultured microglia through Gi/o-coupled P2Y receptors.</a> The Journal of Neuroscience: The Official Journal of the Society for Neuroscience. 21 (6), 1975-1982 (2001).</li><li>Haynes, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+P2Y12+receptor+regulates+microglial+activation+by+extracellular+nucleotides.">The P2Y12 receptor regulates microglial activation by extracellular nucleotides.</a> Nature Neuroscience. 9 (12), 1512-1519 (2006).</li><li>Wu, L. -. J., Vadakkan, K. I., Zhuo, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ATP-induced+chemotaxis+of+microglial+processes+requires+P2Y+receptor-activated+initiation+of+outward+potassium+currents.">ATP-induced chemotaxis of microglial processes requires P2Y receptor-activated initiation of outward potassium currents.</a> Glia. 55 (8), 810-821 (2007).</li><li>Kolodziejczak, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serotonin+Modulates+Developmental+Microglia+via+5-HT+2BReceptors:+Potential+Implication+during+Synaptic+Refinement+of+Retinogeniculate+Projections.">Serotonin Modulates Developmental Microglia via 5-HT 2BReceptors: Potential Implication during Synaptic Refinement of Retinogeniculate Projections.</a> ACS Chemical Neuroscience. 6 (7), 1219-1230 (2015).</li><li>Schafer, D. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microglia+Sculpt+Postnatal+Neural+Circuits+in+an+Activity+and+Complement-Dependent+Manner.">Microglia Sculpt Postnatal Neural Circuits in an Activity and Complement-Dependent Manner.</a> Neuron. 74 (4), 691-705 (2012).</li><li>Pfeiffer, T., Avignone, E., N&#228;gerl, U. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+hippocampal+long-term+potentiation+increases+the+morphological+dynamics+of+microglial+processes+and+prolongs+their+contacts+with+dendritic+spines.">Induction of hippocampal long-term potentiation increases the morphological dynamics of microglial processes and prolongs their contacts with dendritic spines.</a> Scientific Reports. 6, 32422 (2016).</li><li>Parkhurst, C. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microglia+Promote+Learning-Dependent+Synapse+Formation+through+Brain-Derived+Neurotrophic+Factor.">Microglia Promote Learning-Dependent Synapse Formation through Brain-Derived Neurotrophic Factor.</a> Cell. 155 (7), 1596-1609 (2013).</li><li>Wu, Y., Dissing-Olesen, L., Macvicar, B. A., Stevens, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microglia:+Dynamic+Mediators+of+Synapse+Development+and+Plasticity.">Microglia: Dynamic Mediators of Synapse Development and Plasticity.</a> Trends in Immunology. 36 (10), 605-613 (2015).</li><li>Ohsawa, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=P2Y12+receptor-mediated+integrin-beta1+activation+regulates+microglial+process+extension+induced+by+ATP.">P2Y12 receptor-mediated integrin-beta1 activation regulates microglial process extension induced by ATP.</a> Glia. 58 (7), 790-801 (2010).</li><li>Kurpius, D., Wilson, N., Fuller, L., Hoffman, A., Dailey, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+activation,+motility,+and+homing+of+neonatal+microglia+to+injured+neurons+does+not+require+protein+synthesis.">Early activation, motility, and homing of neonatal microglia to injured neurons does not require protein synthesis.</a> Glia. 54 (1), 58-70 (2006).</li><li>Stence, N., Waite, M., Dailey, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamics+of+microglial+activation:+a+confocal+time-lapse+analysis+in+hippocampal+slices.">Dynamics of microglial activation: a confocal time-lapse analysis in hippocampal slices.</a> Glia. 33 (3), 256-266 (2001).</li><li>Dissing-Olesen, L., Macvicar, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fixation+and+Immunolabeling+of+Brain+Slices:+SNAPSHOT+Method.">Fixation and Immunolabeling of Brain Slices: SNAPSHOT Method.</a> Current Protocols in Neuroscience. 71, (2015).</li><li>Schindelin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fiji:+an+open-source+platform+for+biological-image+analysis.">Fiji: an open-source platform for biological-image analysis.</a> Nature Methods. 9 (7), 676-682 (2012).</li><li>de Chaumont, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Icy:+an+open+bioimage+informatics+platform+for+extended+reproducible+research.">Icy: an open bioimage informatics platform for extended reproducible research.</a> Nature Methods. 9 (7), 690-696 (2012).</li><li>Aitken, P. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparative+methods+for+brain+slices:+a+discussion.">Preparative methods for brain slices: a discussion.</a> Journal of Neuroscience Methods. 59 (1), 139-149 (1995).</li><li>Paris, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ProMoIJ:+A+new+tool+for+automatic+three-dimensional+analysis+of+microglial+process+motility.">ProMoIJ: A new tool for automatic three-dimensional analysis of microglial process motility.</a> Glia. 66 (4), 828-845 (2018).</li><li>Pagani, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defective+microglial+development+in+the+hippocampus+of+Cx3cr1+deficient+mice.">Defective microglial development in the hippocampus of Cx3cr1 deficient mice.</a> Frontiers in Cellular Neuroscience. 9 (229), 111 (2015).</li><li>Ting, J. T., Daigle, T. L., Chen, Q., Feng, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+brain+slice+methods+for+adult+and+aging+animals:+application+of+targeted+patch+clamp+analysis+and+optogenetics.">Acute brain slice methods for adult and aging animals: application of targeted patch clamp analysis and optogenetics.</a> Methods in Molecular Biology. , 221-242 (2014).</li><li>Mainen, Z. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two-photon+imaging+in+living+brain+slices.">Two-photon imaging in living brain slices.</a> Methods. 18 (2), 231-239 (1999).</li><li>Tanaka, Y., Tanaka, Y., Furuta, T., Yanagawa, Y., Kaneko, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+cutting+solutions+on+the+viability+of+GABAergic+interneurons+in+cerebral+cortical+slices+of+adult+mice.">The effects of cutting solutions on the viability of GABAergic interneurons in cerebral cortical slices of adult mice.</a> Journal of Neuroscience Methods. 171 (1), 118-125 (2008).</li><li>Gyoneva, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systemic+inflammation+regulates+microglial+responses+to+tissue+damage+in+vivo.">Systemic inflammation regulates microglial responses to tissue damage in vivo.</a> Glia. 62 (8), 1345-1360 (2014).</li><li>Heindl, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+Morphological+Analysis+of+Microglia+After+Stroke.">Automated Morphological Analysis of Microglia After Stroke.</a> Frontiers in Cellular Neuroscience. 12, 106 (2018).</li><li>Dailey, M. E., Eyo, U., Fuller, L., Hass, J., Kurpius, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+microglia+in+brain+slices+and+slice+cultures.">Imaging microglia in brain slices and slice cultures.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 12 (12), 1142-1148 (2013).</li></ol>

بالمحافظة على، على خلاف في فصلها أو شريحة أورجانوتيبيك الثقافة، سلامة هيكلية مع تعديلات شبكة محدودة، شرائح الدماغ الحادة السماح للباحثين بدراسة ميكروجليا في بيئتهم الفسيولوجية. ومع ذلك، أحد القيود الرئيسية التي هي حقيقة أن ينشئ إجراء تشريح على الإصابات التي يمكن أن تنال من سرعة صلاحية ا...

خلايا Microglial الضامة المقيم في الدماغ وتلعب دوراً في كل الظروف الفسيولوجية والمرضية1،2. لديهم مورفولوجيا الغاية تشعبت ويتم باستمرار توسيع والتراجع عن العمليات3،4. ويعتقد هذا السلوك "المسح" أن تكون ذات صلة وضرورية لدراسة البيئة المحيطة بهم. يتم التعبير عن اللدونة المورفولوجية ل microglia في ثلاث طرق. أولاً، أن بعض المركبات تعدل سرعة مورفولوجيا microglial: إضافة ATP5،6 أو5،نمدا7 في الأجلين المتوسط والاستحمام شرائح المخ الحاد يزيد من تعقيد تشعبات ميكروجليال، وفي حين يقلل من إفراز6. هذه الآثار أما مباشرة توسط مستقبلات ميكروجليال (ل ATP وإفراز) أو المطالبة بإطلاق سراح ATP من الخلايا العصبية (نمدا). ثانيا، بسرعة النمو وتراجع عمليات ميكروجليال، تسمى حركية أو "المراقبة"، يمكن أن تتأثر بعوامل خارج الخلية8أو9،اختلالات التوازن10الطفرات9، 10،11. وثالثاً، بالإضافة إلى هذه التغييرات الخواص مورفولوجيا وحركية، microglia لديها القدرة على توسيع عملياتها توجه نحو ماصة إيصال ATP3،5،12، 13 , 14، في الثقافة، في شرائح الدماغ الحادة أو في الحية، أو تسليم 5-HT في الدماغ الحادة شرائح15. ووصفت هذا النمو الموجه لعمليات ميكروجليال، وتسمى أيضا حركية اتجاهي، أولاً كاستجابة لليزر محلي آفة3،4. وهكذا، الفيزيولوجية، يجوز أن تتعلق بالاستجابة للإصابة أو اللازمة لاستهداف العمليات microglial تجاه الاشتباكات العصبية أو مناطق الدماغ التي تحتاج إلى التقليم خلال التنمية15،16، أو فيالفسيولوجية 17 ،،من1819 أو الحالات المرضية9،،من1819،20 في مرحلة البلوغ. ثلاثة أنواع من التغييرات الشكلية التي تعتمد على مختلف الآليات داخل الخلايا11،،من1320، ومجمع معين واحد ليس بالضرورة تعدل كل منهم (مثل نمدا، الذي يعمل بشكل غير مباشر على microglia، له تأثير على مورفولوجيا ولكن عدم حمل حركية اتجاهي5،7). ولذلك، عندما تهدف لوصف تأثير مركب أو طفرة أو علم أمراض على microglia، من المهم أن تميز المكونات الثلاثة لما اللدونة المورفولوجية. وهنا يصف لنا أسلوباً لدراسة اتجاهات نمو عمليات microglial تجاه مصدر محلي للمجمع، و، هنا، ATP أو 5-HT.
وهناك عدة نماذج لدراسة الجذب microglia العمليات: الثقافات الأولية في بيئة 3D6،،من1819، الدماغ الحادة شرائح6،،من1315، وفي فيفو التصوير3،13. المجراة في النهج الذي هو الأفضل للحفاظ على الحالة الفسيولوجية ل microglia. بيد أن التصوير إينترافيتال من المناطق العميقة يتطلب إجراءات جراحية معقدة، وذلك، أنها غالباً ما تقتصر على الطبقات القشرية السطحية. استخدام الثقافة الأولية microglia هو أسلوب أسهل لاختبار عدد كبير من الشروط مع عدد محدود من الحيوانات. ومع ذلك، فإنه من المستحيل الحصول على مورفولوجية الخلية نفسها كما هو الحال في فيفو، والخلايا تفقد تلك التفاعلات الفسيولوجية مع الخلايا العصبية و astrocytes. شرائح الدماغ الحادة تمثل حلاً وسطا بين هذين النهجين. هذا النموذج يسمح للباحثين لدراسة هياكل الدماغ التي خلاف الصعب للوصول إلى وصورة بدقة عالية في الحية، والتحقيق في شرائح من مراحل الأطفال حديثي الولادة، بينما transcranial مجهرية تتم غالباً في مرحلة البلوغ. وأخيراً، فإنه يجعل من الممكن لمراقبة في الوقت الحقيقي آثار التطبيق المحلي للمخدرات، وتكرار التجارب أثناء استخدام عدد محدود من الحيوانات. ومع ذلك، هو مسألة مع شرائح الدماغ الحادة ضيق الوقت (بضع ساعات) خلالها الخلايا البقاء على قيد الحياة، خاصة بالنسبة لشرائح من الفئران التي مضى عليها أكثر من أسبوعين، واحتمال تغير مورفولوجيا microglia على مر الوقت21،22 .
هنا، يمكننا وصف بروتوكول لإعداد شرائح الدماغ الحادة من Cx3cr1 الصغار والكبارالتجارة والنقل/+ الفئران تصل إلى شهرين من العمر، مع الحفاظ على مورفولوجيا microglia وحركية لعدة ساعات. ثم، ونحن تصف كيفية استخدام هذه الشرائح لدراسة جاذبية عمليات microglial تجاه المركبات مثل ATP، أو 5-HT.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>for pipettes preparation</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clark Borosilicate Thin Wall Capillaries</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>30-0065</td>
			<td>Borosilicate Thin Wall without Filament, 1.5 mm OD, 1.17 mm ID, 75 mm L , Pkg. of 225</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMZ Universal Puller</td>
			<td>Zeitz Instrumente</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>for solutions</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium Chloride dihydrate (CaCl2)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C5080</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Choline Chloride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C7527</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-(+)-Glucose</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G8270</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Ascorbic acid</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A5960</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium Chloride solution 1M (MgCl2)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>63020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium chloride SigmaUltra &#62;99,0% (KCl)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P9333</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium bicarbonate (NaHCO3)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S5761</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride (NaCl)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S5886</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium phosphate monobasic</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S5011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium pyruvate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P2256</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrapure water</td>
			<td>MilliQ</td>
			<td></td>
			<td>for all the solutions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>for slice preparation</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2x 200 mL crystalizing dishes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>80 mL Pyrex beaker</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antlia-3C Digital Peristaltic pump</td>
			<td>DD Biolab</td>
			<td>178961</td>
			<td>For mice perfusion and 2-photon chamber perfusion (aCSF)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbogen 5% CO2/95% O2</td>
			<td>Air Liquide France Industrie</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dolethal</td>
			<td>Vetoquinol</td>
			<td>Dolethal 50 mg/mL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter papers (Whatman)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>WHA1001042</td>
			<td>Whatman qualitative filter paper, Grade 1 (Pore size: 11&#181;M)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine Scissors - Sharp</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14060-60</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Food box 10 cm diameter, 8 cm Height</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>glue (ethyl cyanoacrylate)</td>
			<td>Loctite</td>
			<td>super glue 3 power flex</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hippocampal Tool (spatula)</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>10099-15</td>
			<td>The largest extremity has to be angled at 90 &#176;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ice</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iris Forceps (curved)</td>
			<td>Moria</td>
			<td>MC31</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lens cleaning tissue</td>
			<td>THOR LABS</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nylon mesh strainer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>diameter 7 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Razor blades</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>72000</td>
			<td>For the slicer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>scalpel blade</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slice interface holder</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>home-made, the file for 3D printing is provided in Supplemental Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Scissors - Sharp</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14002-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vibrating slicer</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>720-2709</td>
			<td>Model: HM 650V (Vibrating blade microtome)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water bath</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Set at 32&#176;C (first recovery step)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>for slice imaging</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#215; 25 0.95 NA water-immersion objective</td>
			<td>Leica Microsystems (Germany)</td>
			<td>HCX Irapo</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-photon MP5 upright microscope with resonant scanners (8 kHz) and two HyD Hybrid detectors</td>
			<td>Leica Microsystems (Germany)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antlia-3C Digital Peristaltic pump</td>
			<td>DD Biolab</td>
			<td>178961</td>
			<td>For 2-photon chamber perfusion with aCSF</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbogen 5% CO2/95% O2</td>
			<td>Air Liquide France Industrie</td>
			<td>I1501L50R2A001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chameleon Ultra2 Ti:sapphire laser</td>
			<td>Coherent (Germany)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>disposable transfer pipettes , wide mouth</td>
			<td>ThermoFischer scientific</td>
			<td>for example : 232-11</td>
			<td>5.8ml with fin tip, but we cut it (approx 7cm) to have a 4 mm diameter mouth</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>emission filter SP680</td>
			<td>Leica Microsystems (Germany)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>fluorescent cube containing a 525/50 emission filter and a 560 dichroic filter (for fluorescence collection)</td>
			<td>Leica Microsystems (Germany)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>glass beaker with 50 mL of ACSF to maintain constant perfusion of the slice</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating system</td>
			<td>Warner Instrument Corporation</td>
			<td>Automatic Heater Controller TC-324B</td>
			<td>to maintain perfusion solution at 32&#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>perfusion chamber</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>home-made, the file for 3D printing is provided in Supplemental Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>slice holder (&#34;harp&#34;)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>home made : hairpin made of platinum with the two branches joined by parallel nylon threads</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>for slice stimulation </td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adenosine 5&#8242;-triphosphate disodium salt hydrate (ATP)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A-26209</td>
			<td>to be prepared ex-temporaneously : 1mg/ml (3mM) stock solution prepared the day of the experiment, kept at 4&#176;C (a few hours) and diluted just before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescein (optional)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>F-6377</td>
			<td>use at 1 &#181;M final</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micromanipulator</td>
			<td>Luigs and Neumann</td>
			<td>SM7</td>
			<td>connected to the micropipette holde</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micropipette holder</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>same as for eletrophysiology</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Serotonin hydrochloride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>H-9523</td>
			<td>aliquots of 50mM stock solution in H20 kept at -20&#176;C. 500&#181;M solution prepared the day of the experiment.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe 5mL (without needle)</td>
			<td>Terumo medical products</td>
			<td>SS+05S1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transparent tubing</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>11750105</td>
			<td>Saint Gobain Performance Plastics&#8482; Tygon&#8482; E-3603 Non-DEHP Tubing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>for image analysis</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fiji</td>
			<td></td>
			<td>https://fiji.sc</td>
			<td>Schindelin, J. et al Nat. Methods (2012) doi 10.1038</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Icy</td>
			<td>Institut Pasteur</td>
			<td>http://icy.bioimageanalysis.org</td>
			<td>de Chaumont, F. et al. Nat. Methods (2012)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mice</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CX3CR1-GFP mice</td>
			<td>Jung et al, 2000</td>
			<td></td>
			<td>male or females, P3 to 2 months-old ; we have backcrossed these mice on 129sv background.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CX3CR1creER-YFP mice</td>
			<td>Parkhurst et al 2013</td>
			<td></td>
			<td>male or females, P3 to 2 months-old ; we have backcrossed these mice on 129sv background.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

two-photon imaging of microglial processes' attraction toward atp or serotonin in acute brain slices

خلايا Microglial هي الخلايا المناعية الفطرية المقيم في الدماغ باستمرار مسح البيئة الخاصة بهم مع عملياتها طويلة، وعند اختلال التوازن، الخضوع للتغيرات المورفولوجية. على سبيل المثال، يدفع آفة ليزر في بضع دقائق إلى نمو موجه من عمليات ميكروجليال، وتسمى أيضا "اتجاهي الحركة"، تجاه الموقع للإصابة. يمكن الحصول على تأثير مماثل بإيصال محلياً ATP أو السيروتونين (5-هيدروكسيتريبتاميني [5-HT]). في هذه المقالة، نحن تصف وضع بروتوكول للحث على نمو اتجاهات العمليات microglial تجاه تطبيق محلي ATP أو 5-HT في شرائح الدماغ الحادة للفئران الصغار والكبار وصورة هذا الجذب على مر الزمن بالفحص المجهري مولتيفوتون. طريقة بسيطة للقياس الكمي بصورة حرة ومفتوحة المصدر برمجيات التحليل المقترح. هو تحدي الذي لا يزال يميز شرائح الدماغ الحادة الوقت المحدود، تتناقص مع التقدم في العمر، خلالها الخلايا تظل في حالة فيزيولوجية. هذا البروتوكول، وبالتالي، يسلط الضوء على بعض التحسينات التقنية (الدائرة المتوسطة، الهواء السائل واجهة، التصوير الدائرة مع نضح مزدوجة) تهدف إلى تحسين جدوى خلايا microglial على مدى ساعات عدة، لا سيما في الشرائح من الفئران الكبار.

هذا البروتوكول وصف أسلوب الحث ومراقبة وقياس نمو موجه العمليات microglial تجاه مركب المطبقة محلياً، على سبيل المثال، ATP أو 5-HT، في الدماغ الحادة شرائح من الشباب أو البالغين (على الأقل تصل إلى يومين شهرا) الفئران. ومن العوامل التي تسهم في الحفاظ على شرائح الدماغ من الحيوانات الكب...

Watch this Scientific Journal Video about Two-photon Imaging of Microglial Processes' Attraction Toward ATP or Serotonin in Acute Brain Slices at JoVE.com

Two-photon Imaging of Microglial Processes' Attraction Toward ATP or Serotonin in Acute Brain Slices

Microglia، الخلايا المناعية المقيمين من الدماغ، والاستجابة بسرعة مع التغيرات المورفولوجية لإدخال تعديلات على بيئتهم. هذا البروتوكول توضح كيفية استخدام اثنين-فوتون الفحص المجهري لدراسة جاذبية عمليات microglial تجاه السيروتونين أو ATP في الدماغ الحادة شرائح من الفئران.

اثنين-فوتون تصوير الجذب Microglial العمليات تجاه ATP أو السيروتونين في الدماغ الحادة شرائح

Microglial cells are resident innate immune cells of the brain that constantly scan their environment with their long processes and, upon disruption of ...

لتوصيف النمط الظاهري الصغير الغليلي بشكل كامل، من المهم معالجة الحركة القاعدية والاتجاهية على حد سواء. يمكن استخدام هذا البروتوكول لاختبار الحركة الاتجاهية للميكروليا من خلال التصوير باثنين من الفوتونات في شرائح الدماغ الفئران ، وذلك باستخدام واجهة الطباعة ثلاثية الأبعاد المخصصة وغرف التسريب. ومن خلال هذا الإجراء، سيكون فاني إتيان، طالب الدكتوراه، وفينتشنزو ماستروليا، باحث ما بعد الدكتوراه، وكلاهما من مختبراتنا.على الأقل 30 دقيقة قبل تشريح, بدء محتدما 70 ملليلتر من السائل النخاعي الاصطناعي الكولين, أو الكولين aCSF, على الجليد. إضافة 150 ملليلتر من الكولين aCSF في 32 درجة مئوية, مع كاربوجين. ضع طبق تبلور 200 ملليلتر مع مغناطيس شريط في صندوق طعام مختومة وأضيف 200 ملليلتر من aCSF إلى الطبق.ضع حامل شريحة واجهة مطبوعة ثلاثية الأبعاد على قمة الطبق وأزل السوائل الزائدة من الطبق المتبلور، حتى يبقى فقط طبقة رقيقة من الحل تغطي شبكة حامل شريحة الواجهة. إضافة بضعة ملليمترات من aCSF في الجزء السفلي من مربع الغذاء والبدء في محتدما السائل مع كاربوجين. ثم، إغلاق مربع مختومة مع الحفاظ على carbogenation المستمر لإنشاء مرطب، 95٪ الأكسجين، 5٪ غرفة واجهة ثاني أكسيد الكربون الغنية.بعد الحصاد، ضع الدماغ على قطعة من ورق التصفية الغارقة في ACSF وتشريح المنطقة ذات الاهتمام، وفقًا للزاوية المفضلة لتشريح. بالنسبة لشرائح الإكليل ، ضع وجه الدماغ السدبي ولصقه على طبق بيتري طوله 10 سنتيمترات متصل بالقطعة من مقسم شرائح تهتز ، ووضع الكتلة في غرفة الخزان من مقسم الشرائح المتذبذب داخل غرفة كبيرة مليئة بالثلج. ملء الطبق مع الجليد الباردة الكولين aCSF واستخدام تقطيع اللحم للحصول على شرائح الدماغ سميكة 300 ميكرومتر, باستخدام ماصة نقل قطرها أربعة ملليمتر يمكن التخلص منها بعد كل تمريرة من شفرة لجمع كل شريحة.السماح لكل شريحة استرداد في 32 درجة مئوية الكولين aCSF لحوالي 10 دقائق بعد الحصول عليها, قبل نقل شرائح على قطعة من ورق تنظيف العدسة, وتصدرت مع قطرة من الكولين aCSF. ثم pirate الزائدة الكولين aCSF واستخدام ملعقة لنقل شرائح على شبكة من غرفة واجهة, السماح لشرائح لاسترداد في هذه البيئة لمدة 30 دقيقة على الأقل. قبل 30 دقيقة من بدء التسجيل، قم بتوصيل المضخة ال peristaltic إلى غرفة تسجيل مخصصة مع ضخ أعلى وأسفل لتحسين الأوكسجين وقابلية لشرائح الأنسجة، وتنظيف نظام النفخ بأكمله مع 50 ملليلتر من الماء فائقة السخ.في نهاية دورة التنظيف، ابدأ في ضخ غرفة التسجيل مع 50 ملليلتر من aCSF في كوب زجاجي تحت كاربوجينيشن مستمر، واستخدم ماصة نقل واسعة الفم يمكن التخلص منها لنقل الشريحة الأولى ليتم تصويرها إلى الكأس لإزالة ورق العدسة. عندما يكون القسم قد غرقت إلى الجزء السفلي من beaker، نقل المقطع إلى غرفة التسجيل ووضع حامل الشريحة على شريحة لتقليل الحركة الناجمة عن تدفق التسريب. استخدام الإضاءة في الميدان مشرق لاستهداف منطقة الدماغ من الفائدة تحت التكبير 5-10x.ثم استخدم هدفًا 25x مع عدسة غمر الماء 0.35x لضبط موضع حقل المشاهدة. استخدام الإضاءة الفلورية لتحديد موقع الخلايا الفلورية microglial والردم على ماصة مع 10 ميكرولترات من ACSF تحتوي على مركب الفائدة في تركيزها النهائي. نقطة تلميح إلى أسفل مع اهتزاز لطيف لإزالة أي فقاعات الهواء المحاصرين في الطرف وجبل ماصة مملوءة في حامل ماصة متصلة حقنة خمسة ملليلتر مع المكبس المتمركزة في موقف خمسة ملليلتر وشنت على ميكرومانبولاتور ثلاثة محاور.خفض الماصات بلطف نحو شريحة، والسيطرة على وتعديل الهدف في نفس الوقت، حتى تلميح ماص تلامس طفيفة سطح الشريحة. الآن ضبط الليزر والتبديل المجهر إلى وضع متعدد الصور. تأكد من أن يتم فحص هذه الغرفة من أي مصدر الضوء والتبديل على أجهزة الكشف غير descanned.تعيين الربح واستخدام جدول بحث مع حد أعلى مرمزة اللون لتجنب تشبع بكسل في الصورة. ثم، بدء التسجيل لمدة إجمالية لا تقل عن 30 دقيقة، والاكتئاب ببطء المكبس حقنة من خمسة إلى وضع مليلتر واحد، بعد خمس دقائق، على مدى فترة خمس ثوان، لتطبيق المجمع على القسم. لتحليل الصورة، قم أولاً بإجراء z-projection وتصحيح الانجراف مع ImageJ على ملف الاهتمام.ثم، فتح الملف المعدلة في الجليدية ورسم دائري، 35 ميكرومتر قطر المنطقة من الفائدة، تركزت على موقع الحقن. تشغيل الفيلم مرة أخرى مع العائد على الاستثمار، لضمان أن يكون في وضع جيد. ثم ، استخدم المنطقة من كثافة الفائدة تطور البرنامج المساعد لقياس كثافة المتوسط على مر الزمن في المنطقة ذات الاهتمام ، وحفظ النتائج كملف xls.يسمح هذا البروتوكول بالاستجابات التي تسببها مركبات مختلفة، مثل ATP أو السيروتونين، أن تقاس. على الرغم من أن حقن ATP يثير زيادة في الفلور، بعد معظم حقن ATP، هناك انخفاض فوري، طفيف في الفلوريس بسبب تشويه الأنسجة التي تعود بعد بضع دقائق. ويؤثر حجم المنطقة موضع الاهتمام أيضاً على القياس الكمي، حيث أن زيادة القطر تقلل من التباين بين التجارب، ولكنها تقلل من دقة وحجم الاستجابة المكتشفة.تقييم الاستجابة microglial في نقطة زمنية محددة يمكن أن تكون مفيدة للمقارنة الإحصائية من المركبات المختلفة، أو لاختبار آثار الخصوم محددة تضاف إلى حل الضخ. لتحديد الحركة في ثلاثة أبعاد، أعرف أنه قد تضطر إلى تغيير الفاصل الزمني خطوة ع ومعدل أخذ العينات من اكتساب لتتناسب مع متطلبات التحليل.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

In vivo Imaging of the Mouse Spinal Cord Using Two-photon Microscopy

In vivo Imaging of the Mouse Spinal Cord Using Two-photon Microscopy

في التصوير المجراة من الحبل الشوكي عن طريق الماوس ثنائي الفوتون المجهري

In vivo imaging using two-photon microscopy 1 in mice that have been genetically engineered to express fluorescent proteins in specific cell types 2-3 has ...

Preparation of Acute Subventricular Zone Slices for Calcium Imaging

إعداد شرائح الحاد المنطقة Subventricular للتصوير الكالسيوم

The subventricular zone (SVZ) is one of the two neurogenic zones in the postnatal brain. The SVZ contains densely packed cells, including neural ...

In Vivo Two-photon Imaging Of Experience-dependent Molecular Changes In Cortical Neurons

In Vivo Two-photon Imaging Of Experience-dependent Molecular Changes In Cortical Neurons

في الجسم الحي ثنائي الفوتون التصوير من الخبرة التي تعتمد على التغيرات الجزيئية في الخلايا العصبية القشرية

The brain's ability to change in response to experience is essential for healthy brain function, and abnormalities in this process contribute to a variety ...

In vivo Postnatal Electroporation and Time-lapse Imaging of Neuroblast Migration in Mouse Acute Brain Slices

In vivo Postnatal Electroporation and Time-lapse Imaging of Neuroblast Migration in Mouse Acute Brain Slices

في الجسم الحي بعد الولادة التثقيب الكهربائي والوقت الفاصل بين التصوير من أرومة عصبية الهجرة في الدماغ الحادة ماوس شرائح

The subventricular zone (SVZ) is one of the main neurogenic niches in the postnatal brain. Here, neural progenitors proliferate and give rise to ...

Two-photon Imaging of Cellular Dynamics in the Mouse Spinal Cord

التصوير ثنائي الفوتون الخلوية ديناميكية في الحبل الشوكي ماوس

Two-photon (2P) microscopy is utilized to reveal cellular dynamics and interactions deep within living, intact tissues. Here, we present a method for ...

Recording Synaptic Plasticity in Acute Hippocampal Slices Maintained in a Small-volume Recycling-, Perfusion-, and Submersion-type Chamber System

تسجيل اللدونة متشابك في شرائح هيبوكامبال الحاد تحتفظ في صغيرة الحجم-إعادة التدوير، ونضح-، وغمر من نوع نظام الدائرة

Even though experiments on brain slices have been in use since 1951, problems remain that reduce the probability of achieving a stable and successful ...

Two-photon Calcium Imaging in Neuronal Dendrites in Brain Slices

تصوير الكالسيوم اثنين-فوتون في Dendrites العصبية في الدماغ شرائح

Calcium (Ca2+) imaging is a powerful tool to investigate the spatiotemporal dynamics of intracellular Ca2+ signals in neuronal dendrites. Ca2+ ...

In Vivo Two-photon Imaging of Cortical Neurons in Neonatal Mice

In Vivo Two-photon Imaging of Cortical Neurons in Neonatal Mice

في فيفو اثنين-فوتون تصوير الخلايا العصبية القشرية في الفئران حديثي الولادة

Two-photon imaging is a powerful tool for the in vivo analysis of neuronal circuits in the mammalian brain. However, a limited number of in vivo imaging ...

Imaging of Intracellular ATP in Organotypic Tissue Slices of the Mouse Brain using the FRET-based Sensor ATeam1.03YEMK

Imaging of Intracellular ATP in Organotypic Tissue Slices of the Mouse Brain using the FRET-based Sensor ATeam1.03YEMK

التصوير من ATP داخل الخلايا في شرائح الانسجه العضوية من الدماغ الماوس باستخدام الاستشعار القائم علي التاكل ATeam 1.03يمك

Neuronal activity in the central nervous system (CNS) evokes a high demand on cellular energy provided by the breakdown of adenosine triphosphate (ATP). A ...

Transpupillary Two-Photon In Vivo Imaging of the Mouse Retina

تصوير الفوتون عبر الحدقة في الجسم الحي لشبكية العين الفأرية

The retina transforms light signals from the environment into electrical signals that are propagated to the brain. Diseases of the retina are prevalent ...