Name: two-photon imaging of microglial processes' attraction toward atp or serotonin in acute brain slices
Uploaded: 2019-01-31T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Two-photon Imaging of Microglial Processes' Attraction Toward ATP or Serotonin in Acute Brain Slices at JoVE.com

Wir danken der Zelle und Gewebe Imaging Facility des Institut du Fer À Moulin, wo alle Bildaufnahme und Analysen durchgeführt wurden. Diese Arbeit wurde teilweise unterstützt durch das Centre National De La Recherche Scientifique, Institut National De La Santé et De La Recherche Médicale, Université Sorbonne Wissenschaften, und durch Zuschüsse von Sorbonne Universités-Pierre et Marie Curie-Universität () Emergence-UPMC Programm 2011/2014), die Fondation pour la Recherche Sur le Cerveau, Fondation de France, die Fondation pour la Recherche Médicale "Equipe FRM DEQ2014039529", dem französischen Forschungsministerium (Agence Nationale Pour la Recherche ANR-17-CE16-0008 und des Investissements Avenir Programm "Bio-Psy Labex" ANR-11-IDEX-0004-02) und Kooperationsforschung in Computational Neuroscience Programm, National Science Foundation/Französisch National Agency for Research (Nummer: 1515686). Alles, was die Autoren angehören, um Forschung Gruppen, die Mitglieder der Paris School of Neuroscience (ENP) und der Bio-Psy Labex sind. Z.B. ist ein Ph.d. Student angegliedert Sorbonne Université, Collège Doktoranden, F-75005 Paris, Frankreich, und wird durch die Bio-Psy Labex finanziert. Caracterización ist ein Post-Doktorand geförderten Sonderforschungsbereichs Computational Neuroscience Programm, National Science Foundation/Französisch National Agency for Research (Nummer: 1515686). Die Autoren danken Marta Kolodziejczak, die bei der Initiierung des Projekts teilgenommen.

Alle Experimente wurden durch die lokale Ethikkommission genehmigt (Darwin Ausschuss, Vereinbarungen #1170 und #10921).
1. Vorbereitung von Glas Mikropipetten für die lokale Anwendung von Verbindungen
<ol><li>Bereiten Sie Pipetten aus Borosilikat dünnwandige Glaskapillaren mit einer Elektrode Abzieher. Passen Sie die Parameter um Pipetten mit 4-5 µm Durchmesser an der Extremität zu erhalten. Abb. 2D zeigt eine Pipette im Hellfeld bei kleiner Vergrößerung.<...

<ol>
	<li>Salter, M. W., Stevens, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microglia+emerge+as+central+players+in+brain+disease.">Microglia emerge as central players in brain disease.</a> Nature Publishing Group. 23 (9), 1018-1027 (2017).</li><li>Tay, T. L., Savage, J., Hui, C. W., Bisht, K., Tremblay, M. -. &. #. 2. 0. 0. ;. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microglia+across+the+lifespan:+from+origin+to+function+in+brain+development,+plasticity+and+cognition.">Microglia across the lifespan: from origin to function in brain development, plasticity and cognition.</a> The Journal of Physiology. , (2016).</li><li>Davalos, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ATP+mediates+rapid+microglial+response+to+local+brain+injury+in+vivo.">ATP mediates rapid microglial response to local brain injury in vivo.</a> Nature Neuroscience. 8 (6), 752-758 (2005).</li><li>Nimmerjahn, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resting+Microglial+Cells+Are+Highly+Dynamic+Surveillants+of+Brain+Parenchyma+in+Vivo.">Resting Microglial Cells Are Highly Dynamic Surveillants of Brain Parenchyma in Vivo.</a> Science. 308 (5726), 1314-1318 (2005).</li><li>Dissing-Olesen, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+neuronal+NMDA+receptors+triggers+transient+ATP-mediated+microglial+process+outgrowth.">Activation of neuronal NMDA receptors triggers transient ATP-mediated microglial process outgrowth.</a> The Journal of Neuroscience: The Official Journal of the Society for Neuroscience. 34 (32), 10511-10527 (2014).</li><li>Gyoneva, S., Traynelis, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Norepinephrine+modulates+the+motility+of+resting+and+activated+microglia+via+different+adrenergic+receptors.">Norepinephrine modulates the motility of resting and activated microglia via different adrenergic receptors.</a> Journal of Biological Chemistry. 288 (21), 15291-15302 (2013).</li><li>Eyo, U. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+hyperactivity+recruits+microglial+processes+via+neuronal+NMDA+receptors+and+microglial+P2Y12+receptors+after+status+epilepticus.">Neuronal hyperactivity recruits microglial processes via neuronal NMDA receptors and microglial P2Y12 receptors after status epilepticus.</a> The Journal of Neuroscience: The Official Journal of the Society for Neuroscience. 34 (32), 10528-10540 (2014).</li><li>Hristovska, I., Pascual, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deciphering+Resting+Microglial+Morphology+and+Process+Motility+from+a+Synaptic+Prospect.">Deciphering Resting Microglial Morphology and Process Motility from a Synaptic Prospect.</a> Frontiers in Integrative Neuroscience. 9, 1231 (2016).</li><li>Avignone, E., Lepleux, M., Angibaud, J., N&#228;gerl, U. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Altered+morphological+dynamics+of+activated+microglia+after+induction+of+status+epilepticus.">Altered morphological dynamics of activated microglia after induction of status epilepticus.</a> Journal of Neuroinflammation. 12, 202 (2015).</li><li>Abiega, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+Hyperactivity+Disturbs+ATP+Microgradients,+Impairs+Microglial+Motility,+and+Reduces+Phagocytic+Receptor+Expression+Triggering+Apoptosis/Microglial+Phagocytosis+Uncoupling.">Neuronal Hyperactivity Disturbs ATP Microgradients, Impairs Microglial Motility, and Reduces Phagocytic Receptor Expression Triggering Apoptosis/Microglial Phagocytosis Uncoupling.</a> PLoS Biology. 14 (5), e1002466 (2016).</li><li>Madry, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microglial+Ramification,+Surveillance,+and+Interleukin-1&#946;+Release+Are+Regulated+by+the+Two-Pore+Domain+K+Channel+THIK-1.">Microglial Ramification, Surveillance, and Interleukin-1&#946; Release Are Regulated by the Two-Pore Domain K+Channel THIK-1.</a> Neuron. 97 (2), 299-312 (2018).</li><li>Honda, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+ATP+or+ADP+induce+chemotaxis+of+cultured+microglia+through+Gi/o-coupled+P2Y+receptors.">Extracellular ATP or ADP induce chemotaxis of cultured microglia through Gi/o-coupled P2Y receptors.</a> The Journal of Neuroscience: The Official Journal of the Society for Neuroscience. 21 (6), 1975-1982 (2001).</li><li>Haynes, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+P2Y12+receptor+regulates+microglial+activation+by+extracellular+nucleotides.">The P2Y12 receptor regulates microglial activation by extracellular nucleotides.</a> Nature Neuroscience. 9 (12), 1512-1519 (2006).</li><li>Wu, L. -. J., Vadakkan, K. I., Zhuo, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ATP-induced+chemotaxis+of+microglial+processes+requires+P2Y+receptor-activated+initiation+of+outward+potassium+currents.">ATP-induced chemotaxis of microglial processes requires P2Y receptor-activated initiation of outward potassium currents.</a> Glia. 55 (8), 810-821 (2007).</li><li>Kolodziejczak, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serotonin+Modulates+Developmental+Microglia+via+5-HT+2BReceptors:+Potential+Implication+during+Synaptic+Refinement+of+Retinogeniculate+Projections.">Serotonin Modulates Developmental Microglia via 5-HT 2BReceptors: Potential Implication during Synaptic Refinement of Retinogeniculate Projections.</a> ACS Chemical Neuroscience. 6 (7), 1219-1230 (2015).</li><li>Schafer, D. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microglia+Sculpt+Postnatal+Neural+Circuits+in+an+Activity+and+Complement-Dependent+Manner.">Microglia Sculpt Postnatal Neural Circuits in an Activity and Complement-Dependent Manner.</a> Neuron. 74 (4), 691-705 (2012).</li><li>Pfeiffer, T., Avignone, E., N&#228;gerl, U. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+hippocampal+long-term+potentiation+increases+the+morphological+dynamics+of+microglial+processes+and+prolongs+their+contacts+with+dendritic+spines.">Induction of hippocampal long-term potentiation increases the morphological dynamics of microglial processes and prolongs their contacts with dendritic spines.</a> Scientific Reports. 6, 32422 (2016).</li><li>Parkhurst, C. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microglia+Promote+Learning-Dependent+Synapse+Formation+through+Brain-Derived+Neurotrophic+Factor.">Microglia Promote Learning-Dependent Synapse Formation through Brain-Derived Neurotrophic Factor.</a> Cell. 155 (7), 1596-1609 (2013).</li><li>Wu, Y., Dissing-Olesen, L., Macvicar, B. A., Stevens, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microglia:+Dynamic+Mediators+of+Synapse+Development+and+Plasticity.">Microglia: Dynamic Mediators of Synapse Development and Plasticity.</a> Trends in Immunology. 36 (10), 605-613 (2015).</li><li>Ohsawa, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=P2Y12+receptor-mediated+integrin-beta1+activation+regulates+microglial+process+extension+induced+by+ATP.">P2Y12 receptor-mediated integrin-beta1 activation regulates microglial process extension induced by ATP.</a> Glia. 58 (7), 790-801 (2010).</li><li>Kurpius, D., Wilson, N., Fuller, L., Hoffman, A., Dailey, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+activation,+motility,+and+homing+of+neonatal+microglia+to+injured+neurons+does+not+require+protein+synthesis.">Early activation, motility, and homing of neonatal microglia to injured neurons does not require protein synthesis.</a> Glia. 54 (1), 58-70 (2006).</li><li>Stence, N., Waite, M., Dailey, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamics+of+microglial+activation:+a+confocal+time-lapse+analysis+in+hippocampal+slices.">Dynamics of microglial activation: a confocal time-lapse analysis in hippocampal slices.</a> Glia. 33 (3), 256-266 (2001).</li><li>Dissing-Olesen, L., Macvicar, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fixation+and+Immunolabeling+of+Brain+Slices:+SNAPSHOT+Method.">Fixation and Immunolabeling of Brain Slices: SNAPSHOT Method.</a> Current Protocols in Neuroscience. 71, (2015).</li><li>Schindelin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fiji:+an+open-source+platform+for+biological-image+analysis.">Fiji: an open-source platform for biological-image analysis.</a> Nature Methods. 9 (7), 676-682 (2012).</li><li>de Chaumont, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Icy:+an+open+bioimage+informatics+platform+for+extended+reproducible+research.">Icy: an open bioimage informatics platform for extended reproducible research.</a> Nature Methods. 9 (7), 690-696 (2012).</li><li>Aitken, P. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparative+methods+for+brain+slices:+a+discussion.">Preparative methods for brain slices: a discussion.</a> Journal of Neuroscience Methods. 59 (1), 139-149 (1995).</li><li>Paris, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ProMoIJ:+A+new+tool+for+automatic+three-dimensional+analysis+of+microglial+process+motility.">ProMoIJ: A new tool for automatic three-dimensional analysis of microglial process motility.</a> Glia. 66 (4), 828-845 (2018).</li><li>Pagani, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defective+microglial+development+in+the+hippocampus+of+Cx3cr1+deficient+mice.">Defective microglial development in the hippocampus of Cx3cr1 deficient mice.</a> Frontiers in Cellular Neuroscience. 9 (229), 111 (2015).</li><li>Ting, J. T., Daigle, T. L., Chen, Q., Feng, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+brain+slice+methods+for+adult+and+aging+animals:+application+of+targeted+patch+clamp+analysis+and+optogenetics.">Acute brain slice methods for adult and aging animals: application of targeted patch clamp analysis and optogenetics.</a> Methods in Molecular Biology. , 221-242 (2014).</li><li>Mainen, Z. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two-photon+imaging+in+living+brain+slices.">Two-photon imaging in living brain slices.</a> Methods. 18 (2), 231-239 (1999).</li><li>Tanaka, Y., Tanaka, Y., Furuta, T., Yanagawa, Y., Kaneko, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+cutting+solutions+on+the+viability+of+GABAergic+interneurons+in+cerebral+cortical+slices+of+adult+mice.">The effects of cutting solutions on the viability of GABAergic interneurons in cerebral cortical slices of adult mice.</a> Journal of Neuroscience Methods. 171 (1), 118-125 (2008).</li><li>Gyoneva, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systemic+inflammation+regulates+microglial+responses+to+tissue+damage+in+vivo.">Systemic inflammation regulates microglial responses to tissue damage in vivo.</a> Glia. 62 (8), 1345-1360 (2014).</li><li>Heindl, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+Morphological+Analysis+of+Microglia+After+Stroke.">Automated Morphological Analysis of Microglia After Stroke.</a> Frontiers in Cellular Neuroscience. 12, 106 (2018).</li><li>Dailey, M. E., Eyo, U., Fuller, L., Hass, J., Kurpius, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+microglia+in+brain+slices+and+slice+cultures.">Imaging microglia in brain slices and slice cultures.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 12 (12), 1142-1148 (2013).</li></ol>

Durch die Beibehaltung, anders als in dissoziiert oder organotypischen schneiden Kultur, eine strukturelle Integrität mit begrenzten Anpassungen, akute Gehirnscheiben erlauben Forschern, Mikroglia in ihrer physiologischen Umgebung zu studieren. Eine wichtige Einschränkung ist jedoch die Tatsache, dass die Slice Prozedur Verletzungen erstellt, die schnell die Lebensfähigkeit von Neuronen, besonders im erwachsenen Gehirn beeinträchtigen können. Mikroglia sind besonders reaktiv zu Zellschäden, ist es wichtig, neuronal...

Mikroglia-Zellen sind resident Makrophagen des Gehirns und eine Rolle in beiden physiologischen und pathologischen Bedingungen1,2. Sie sind haben eine stark verzweigte Morphologie und ständig erweitern und ihre Prozesse3,4einfahren. Dieses "Scan" Verhalten wird geglaubt, um Verwandte und notwendig, um den Überblick über ihre Umgebung werden. Die morphologische Plastizität der Mikroglia drückt sich in drei Modi. Zunächst einige Verbindungen schnell modulieren Mikroglia Morphologie: die Zugabe von ATP5,6 oder NMDA5,7 mittelfristig akute Gehirnscheiben Baden erhöht die Komplexität der Mikroglia Verzweigungen während Noradrenalin es6 sinkt. Diese Effekte sind direkt vermittelt durch Mikroglia-Rezeptoren (für ATP und Noradrenalin) oder erfordern eine ATP-Freisetzung von Neuronen (NMDA). Zweitens kann die Wachstum und Retraktion Geschwindigkeit der Mikroglia Prozesse, Motilität oder "Surveillance", genannt extrazellulären Faktoren8, Homöostase Störungen9,10oder Mutationen9betroffen sein, 10,11. Drittens: Neben diesen isotropen Änderungen der Morphologie und Motilität Mikroglia haben die Fähigkeit, ihre Prozesse gerichtet in Richtung einer Pipette liefert ATP3,5,12, zu verlängern 13 , 14, in der Kultur, in akuten Gehirnscheiben oder in vivo, oder liefern 5-HT in akuten Gehirn Scheiben15. Solches orientierte Wachstum Mikroglia Prozesse, auch genannt gerichtete Motilität, wurde als Reaktion auf eine lokale Laser Läsion3,4erstbeschrieben. Also physiologisch, es kann im Zusammenhang mit der Reaktion auf eine Verletzung oder erforderlich für targeting Mikroglia Prozesse in Richtung Synapsen oder Hirnregionen erfordern Rebschnitt während Entwicklung15,16, oder im physiologischen17 ,18,19 oder pathologischen Situationen9,18,19,20 im Erwachsenenalter. Die drei Arten von morphologischen Veränderungen setzen auf verschiedene intrazelluläre Mechanismen11,13,20, und einer bestimmte Verbindung nicht unbedingt modulieren alle von ihnen (z. B. NMDA, die indirekt auf wirkt Mikroglia, wirkt auf die Morphologie aber nicht dazu veranlassen, direktionale Motilität5,7). Mit dem Ziel, die Wirkung des eine Verbindung, eine Mutation oder eine Pathologie auf Mikroglia charakterisieren, ist es daher wichtig, die drei Komponenten ihre morphologische Plastizität zu charakterisieren. Hier beschreiben wir eine Methode zur Untersuchung der gerichteten Wachstums der Mikroglia Prozesse in Richtung einer lokalen Quelle Verbindung, was hier ist, ATP oder 5-HT.
Es gibt mehrere Modelle, Mikroglia Prozesse Attraktion zu studieren: Primärkulturen 3D-Umgebung6,18,19, akute Gehirn Scheiben6,13,15, und in Vivo Imaging-3,13. Der in-vivo-Ansatz ist die beste, die physiologische Zustand der Mikroglia zu bewahren. Allerdings intravitalen Bildgebung des tiefen Regionen erfordert komplexe chirurgische Eingriffe und daher ist es oft auf oberflächliche kortikalen Schichten beschränkt. Die Verwendung von Mikroglia Primärkultur ist die einfachste Technik, um eine große Anzahl von Bedingungen mit einer begrenzten Anzahl von Tieren zu testen. Dennoch ist es unmöglich, die gleiche Zelle Morphologie wie in Vivo zu erhalten, und Zellen verlieren ihre physiologischen Wechselwirkungen mit Neuronen und Astrozyten. Akute Gehirnscheiben sind ein Kompromiss zwischen diesen beiden Ansätzen. Dieses Modell erlaubt Forschern, Hirnstrukturen zu studieren, die sonst schwer zu erreichen und zu Bild mit hoher Auflösung in-vivo und Scheiben von Neugeborenen Stadien zu untersuchen sind, während die transkranielle Mikroskopie meistens im Erwachsenenalter durchgeführt wird. Schließlich macht es möglich, die Auswirkungen von lokalen Zulassungsantrag in Echtzeit zu beobachten, und versuche zu wiederholen, wobei eine begrenzte Anzahl von Tieren. Dennoch ist ein Problem mit akuten Gehirnscheiben der begrenzten Zeit (einige Stunden), während die Zellen am Leben, insbesondere für Scheiben von Mäusen, die älter als zwei Wochen, und die mögliche Änderung der Mikroglia Morphologie über Zeit21,22 bleiben .
Hier beschreiben wir ein Protokoll zur akuten Hirnschnitten von jungen und Erwachsenen Cx3cr1 bereitenGLP / + Mäuse bis zu zwei Monate alt, mit der Erhaltung der Mikroglia Morphologie und Motilität für mehrere Stunden. Wir beschreiben, wie diese Scheiben zu verwenden, um die Anziehungskraft der Mikroglia Prozesse in Richtung Verbindungen wie ATP oder 5-HT zu studieren.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>for pipettes preparation</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clark Borosilicate Thin Wall Capillaries</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>30-0065</td>
			<td>Borosilicate Thin Wall without Filament, 1.5 mm OD, 1.17 mm ID, 75 mm L , Pkg. of 225</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMZ Universal Puller</td>
			<td>Zeitz Instrumente</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>for solutions</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium Chloride dihydrate (CaCl2)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C5080</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Choline Chloride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C7527</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-(+)-Glucose</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G8270</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Ascorbic acid</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A5960</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium Chloride solution 1M (MgCl2)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>63020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium chloride SigmaUltra &#62;99,0% (KCl)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P9333</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium bicarbonate (NaHCO3)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S5761</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride (NaCl)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S5886</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium phosphate monobasic</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S5011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium pyruvate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P2256</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrapure water</td>
			<td>MilliQ</td>
			<td></td>
			<td>for all the solutions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>for slice preparation</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2x 200 mL crystalizing dishes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>80 mL Pyrex beaker</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antlia-3C Digital Peristaltic pump</td>
			<td>DD Biolab</td>
			<td>178961</td>
			<td>For mice perfusion and 2-photon chamber perfusion (aCSF)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbogen 5% CO2/95% O2</td>
			<td>Air Liquide France Industrie</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dolethal</td>
			<td>Vetoquinol</td>
			<td>Dolethal 50 mg/mL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter papers (Whatman)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>WHA1001042</td>
			<td>Whatman qualitative filter paper, Grade 1 (Pore size: 11&#181;M)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine Scissors - Sharp</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14060-60</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Food box 10 cm diameter, 8 cm Height</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>glue (ethyl cyanoacrylate)</td>
			<td>Loctite</td>
			<td>super glue 3 power flex</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hippocampal Tool (spatula)</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>10099-15</td>
			<td>The largest extremity has to be angled at 90 &#176;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ice</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iris Forceps (curved)</td>
			<td>Moria</td>
			<td>MC31</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lens cleaning tissue</td>
			<td>THOR LABS</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nylon mesh strainer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>diameter 7 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Razor blades</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>72000</td>
			<td>For the slicer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>scalpel blade</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slice interface holder</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>home-made, the file for 3D printing is provided in Supplemental Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Scissors - Sharp</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14002-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vibrating slicer</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>720-2709</td>
			<td>Model: HM 650V (Vibrating blade microtome)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water bath</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Set at 32&#176;C (first recovery step)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>for slice imaging</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#215; 25 0.95 NA water-immersion objective</td>
			<td>Leica Microsystems (Germany)</td>
			<td>HCX Irapo</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-photon MP5 upright microscope with resonant scanners (8 kHz) and two HyD Hybrid detectors</td>
			<td>Leica Microsystems (Germany)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antlia-3C Digital Peristaltic pump</td>
			<td>DD Biolab</td>
			<td>178961</td>
			<td>For 2-photon chamber perfusion with aCSF</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbogen 5% CO2/95% O2</td>
			<td>Air Liquide France Industrie</td>
			<td>I1501L50R2A001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chameleon Ultra2 Ti:sapphire laser</td>
			<td>Coherent (Germany)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>disposable transfer pipettes , wide mouth</td>
			<td>ThermoFischer scientific</td>
			<td>for example : 232-11</td>
			<td>5.8ml with fin tip, but we cut it (approx 7cm) to have a 4 mm diameter mouth</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>emission filter SP680</td>
			<td>Leica Microsystems (Germany)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>fluorescent cube containing a 525/50 emission filter and a 560 dichroic filter (for fluorescence collection)</td>
			<td>Leica Microsystems (Germany)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>glass beaker with 50 mL of ACSF to maintain constant perfusion of the slice</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating system</td>
			<td>Warner Instrument Corporation</td>
			<td>Automatic Heater Controller TC-324B</td>
			<td>to maintain perfusion solution at 32&#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>perfusion chamber</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>home-made, the file for 3D printing is provided in Supplemental Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>slice holder (&#34;harp&#34;)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>home made : hairpin made of platinum with the two branches joined by parallel nylon threads</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>for slice stimulation </td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adenosine 5&#8242;-triphosphate disodium salt hydrate (ATP)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A-26209</td>
			<td>to be prepared ex-temporaneously : 1mg/ml (3mM) stock solution prepared the day of the experiment, kept at 4&#176;C (a few hours) and diluted just before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescein (optional)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>F-6377</td>
			<td>use at 1 &#181;M final</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micromanipulator</td>
			<td>Luigs and Neumann</td>
			<td>SM7</td>
			<td>connected to the micropipette holde</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micropipette holder</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>same as for eletrophysiology</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Serotonin hydrochloride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>H-9523</td>
			<td>aliquots of 50mM stock solution in H20 kept at -20&#176;C. 500&#181;M solution prepared the day of the experiment.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe 5mL (without needle)</td>
			<td>Terumo medical products</td>
			<td>SS+05S1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transparent tubing</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>11750105</td>
			<td>Saint Gobain Performance Plastics&#8482; Tygon&#8482; E-3603 Non-DEHP Tubing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>for image analysis</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fiji</td>
			<td></td>
			<td>https://fiji.sc</td>
			<td>Schindelin, J. et al Nat. Methods (2012) doi 10.1038</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Icy</td>
			<td>Institut Pasteur</td>
			<td>http://icy.bioimageanalysis.org</td>
			<td>de Chaumont, F. et al. Nat. Methods (2012)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mice</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CX3CR1-GFP mice</td>
			<td>Jung et al, 2000</td>
			<td></td>
			<td>male or females, P3 to 2 months-old ; we have backcrossed these mice on 129sv background.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CX3CR1creER-YFP mice</td>
			<td>Parkhurst et al 2013</td>
			<td></td>
			<td>male or females, P3 to 2 months-old ; we have backcrossed these mice on 129sv background.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

two-photon imaging of microglial processes' attraction toward atp or serotonin in acute brain slices

Mikroglia-Zellen sind resident angeborenen immunen Zellen des Gehirns, die ständig ihre Umgebung mit ihren langen Prozessen absuchen und bei Störung der Homöostase, schnelle morphologische Veränderungen durchlaufen. Zum Beispiel induziert eine Laser-Läsion in wenigen Minuten eine ausgerichtete Wachstum von Mikroglia Prozesse, auch genannt "direktionale Motilität", in Richtung der Stelle der Verletzung. Eine ähnliche Wirkung kann erzielt werden, durch die Bereitstellung lokal ATP oder Serotonin (5-Hydroxytryptamine [5-HT]). In diesem Artikel beschreiben wir ein Protokoll eine gerichtete Wachstum der Mikroglia Prozesse in Richtung einer lokalen Anwendung von ATP oder 5-HT in akuten Hirnschnitten von jungen und Erwachsenen Mäusen zu induzieren, um diese Attraktion im Laufe der Zeit durch multiphoton Mikroskopie Bild. Eine einfache Methode zur Quantifizierung mit freien und Open-Source Bildanalyse-Software wird vorgeschlagen. Eine Herausforderung, die nach wie vor akuten Gehirnscheiben charakterisiert ist die begrenzte Zeit, verringern mit dem Alter, in dem die Zellen in einem physiologischen Zustand bleiben. Dieses Protokoll ist somit Höhepunkte einige technischen Verbesserungen (Mittel, Luft-Flüssigkeit Schnittstelle Kammer, Kammer mit einer doppelten Perfusion imaging) zur Optimierung der Lebensfähigkeit der Mikroglia-Zellen über mehrere Stunden, vor allem in Scheiben von Erwachsenen Mäusen.

Dieses Protokoll beschreibt eine Methode zum auslösen, zu beobachten und zu quantifizieren das orientierte Wachstum der Mikroglia Prozesse in Richtung einer lokal applizierten Verbindung, z. B. ATP oder 5-HT, in akuten Gehirn Scheiben von Jugendlichen oder Erwachsenen (mindestens bis zu zwei Monate alten) Mäuse. Zu den Faktoren, die zur Aufrechterhaltung Hirnschnitten von erwachsenen Tieren in einem gesunden Zustand für mehrere Stunden ist die Verwendung von zwei Tools zur Optimierung ...

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Two-photon Imaging of Microglial Processes' Attraction Toward ATP or Serotonin in Acute Brain Slices

Mikroglia, die ansässigen Immunzellen des Gehirns, reagieren schnell auf Änderungen ihrer Umgebung mit morphologischen Veränderungen. Dieses Protokoll beschreibt, wie zwei-Photonen-Mikroskopie zu verwenden, um die Anziehungskraft der Mikroglia Prozesse gegenüber Serotonin oder ATP in akuten Hirnschnitten von Mäusen zu studieren.

Zwei-Photon Imaging der Mikroglia Prozesse Anziehung in Richtung ATP oder Serotonin im akuten Gehirnscheiben

Microglial cells are resident innate immune cells of the brain that constantly scan their environment with their long processes and, upon disruption of ...

Um einen mikrogliaalen Phänotyp vollständig zu charakterisieren, ist es wichtig, sowohl die basale als auch die richtungsweisende Motilität anzusprechen. Dieses Protokoll kann verwendet werden, um die Richtungsbeweglichkeit von Mikroglia durch Zwei-Photonen-Bildgebung in Mäuse-Gehirnscheiben zu testen, mit maßgeschneiderten 3D-Druck-Schnittstelle und Perfusionskammern. Das Verfahren wird Fanny Etienne, eine Doktorandin, und Vincenzo Mastriolia, ein Postdoktorand, beide aus unseren Laboratorien demonstrieren.Mindestens 30 Minuten vor der Zerlegung, beginnen sprudeln 70 Milliliter Cholin künstliche Zerebrospinalflüssigkeit, oder Cholin aCSF, auf Eis. Fügen Sie 150 Milliliter Cholin aCSF bei 32 Grad Celsius, mit Carbogen. Legen Sie eine 200 Milliliter Kristallisationsschale mit einem Stabmagneten in eine versiegelte Futterbox und fügen Sie 200 Milliliter ACSF in die Schale.Legen Sie einen 3D-gedruckten Interface-Scheibenhalter auf die Schale und entfernen Sie überschüssige Flüssigkeit aus der kristallisierenden Schale, bis nur noch ein dünner Lösungsfilm verbleibt, der das Netz des Interface-Diahalters abdeckt. Fügen Sie ein paar Millimeter aCSF an der Unterseite der Food-Box und beginnen, die Flüssigkeit mit Autobogen zu sprudeln. Schließen Sie dann die versiegelte Box, während Sie eine konstante Karbogenation beibehalten, um eine befeuchtete, 95%Sauerstoff, 5% Kohlendioxid-reiche Grenzkammer zu erzeugen.Legen Sie das Gehirn nach der Ernte auf ein Stück mit CSF-getränktem Filterpapier und sezieren Sie den Interessenbereich entsprechend dem bevorzugten Schnittwinkel. Für koronare Scheiben positionieren und kleben Sie das kaudale Gesicht des Gehirns auf eine 10 Zentimeter lange Petrischale, die am Schneidblock eines vibrierenden Schneideschneiders befestigt ist, und positionieren Sie den Block in der Reservoirkammer des vibrierenden Schneidschneiders in einer großen, mit Eis gefüllten Kammer. Füllen Sie die Schale mit eiskaltem Cholin aCSF und verwenden Sie den Slicer, um 300 Mikrometer dicke Gehirnscheiben zu erhalten, wobei Sie eine Einweg-Übertragungspipette mit einem Durchmesser von vier Millimetern nach jedem Durchgang der Klinge verwenden, um jede Scheibe zu sammeln.Lassen Sie jede Scheibe in der 32 Grad Celsius Cholin aCSF für etwa 10 Minuten erholen, nachdem es erhalten wurde, bevor Sie die Scheiben auf Stücke von Linsenreinigungspapier übertragen, mit einem Tropfen Cholin aCSF gekrönt. Dann aspirieren Sie das überschüssige Cholin aCSF und verwenden Sie einen Spachtel, um die Scheiben auf das Netz der Schnittstellenkammer zu übertragen, so dass die Scheiben in dieser Umgebung für mindestens 30 Minuten erholen können. 30 Minuten vor Beginn der Aufnahme die peristaltische Pumpe an eine kundenspezifische Aufnahmekammer mit Ober- und Unterperfusion anschließen, um die Sauerstoffversorgung und Lebensfähigkeit der Gewebescheiben zu optimieren, und reinigen Sie das gesamte Perfusionssystem mit 50 Milliliterr Reinstwasser.Beginnen Sie am Ende des Reinigungszyklus die Durchblutung der Aufnahmekammer mit 50 Millilitern aCSF in einem Glasbecher unter ständiger Karbogenation, und verwenden Sie eine Einweg-Breitmaul-Transferpipette, um die erste zu bebilderte Scheibe in das Becherglas zu übertragen, um das Linsenpapier zu entfernen. Wenn der Abschnitt auf den Boden des Bechers gesunken ist, übertragen Sie den Abschnitt in die Aufnahmekammer und positionieren Sie den Scheibenhalter auf die Scheibe, um die durch den Durchfluss induzierte Bewegung zu minimieren. Verwenden Sie hellfeldbezogene Beleuchtung, um die von Interesse befindliche Hirnregion unter einer fünf- bis zehnfachen Vergrößerung anzusprechen.Verwenden Sie dann ein 25-faches Objektiv mit einer 0,35-fachen Wasser-Tauchlinse, um die Position des Sichtfeldes anzupassen. Verwenden Sie Fluoreszenzbeleuchtung, um die fluoreszierenden Mikrogliazellen zu lokalisieren und die Pipette mit 10 Mikrolitern aCSF zu füllen, die die Verbindung von Interesse in ihrer endgültigen Konzentration enthalten. Zeigen Sie die Spitze mit sanftem Schütteln nach unten, um alle in der Spitze eingeschlossenen Luftblasen zu entfernen, und montieren Sie die gefüllte Pipette in einen Pipettenhalter, der mit einer Fünf-Milliliter-Spritze verbunden ist, wobei der Kolben an der Fünf-Milliliter-Position positioniert und auf einem dreiachsigen Mikromanipulator montiert ist.Senken Sie die Pipette sanft in Richtung der Scheibe, steuern und passen Sie das Objektiv zur gleichen Zeit, bis die Pipette Spitze leicht berührt die Oberfläche der Scheibe. Stimmen Sie nun den Laser ab und schalten Sie das Mikroskop in den Multiphotonenmodus. Stellen Sie sicher, dass die Kammer von jeder Lichtquelle abgeschirmt wird, und schalten Sie die nicht gescannten Detektoren ein.Legen Sie die Verstärkung fest, und verwenden Sie eine Nachsuchtabelle mit einer farbcodierten Obergrenze, um zu vermeiden, dass die Pixel im Bild gesättigt werden. Beginnen Sie dann mit der Aufnahme für eine Gesamtdauer von mindestens 30 Minuten, indem Sie den Spritzenkolben nach fünf Minuten über einen Zeitraum von fünf Sekunden langsam von der Fünf-Milliliter-Position deprimieren, um die Verbindung auf den Abschnitt aufzutragen. Für die Bildanalyse führen Sie zunächst z-Projektion und Driftkorrektur mit ImageJ in der Interessensdatei durch.Öffnen Sie dann die geänderte Datei in Eis und zeichnen Sie einen kreisförmigen Bereich mit einem Durchmesser von 35 Mikrometern, der über der Injektionsstelle zentriert ist. Führen Sie den Film erneut mit dem ROI aus, um sicherzustellen, dass er gut positioniert ist. Verwenden Sie dann das Bereich der Interessenintensität Evolution Plugin, um die mittlere Intensität im Laufe der Zeit in der Region von Interesse zu messen, und speichern Sie die Ergebnisse als xls-Datei.Dieses Protokoll ermöglicht es, die Reaktionen, die durch verschiedene Verbindungen induziert werden, wie ATP oder Serotonin, zu messen. Obwohl die Injektion von ATP eine Erhöhung der Fluoreszenz hervorruft, gibt es nach den meisten ATP-Injektionen eine sofortige, leichte Abnahme der Fluoreszenz aufgrund von Gewebeverzerrungen, die nach einigen Minuten zurückkommen. Die Größe des Interessenbereichs wirkt sich auch auf die Quantifizierung aus, da die Erhöhung des Durchmessers die Variabilität zwischen den Experimenten verringert, aber die Genauigkeit und Größe der erkannten Reaktion verringert.Die Beurteilung der mikroglialen Reaktion zu einem bestimmten Zeitpunkt kann für den statistischen Vergleich verschiedener Verbindungen oder für die Untersuchung der Wirkungen spezifischer Antagonisten, die der Perfusionslösung zugesetzt werden, nützlich sein. Um die Beweglichkeit in drei Dimensionen zu quantifizieren, müssen Sie möglicherweise das Z-Schritt-Intervall und die Abtastrate der Erfassung ändern, um in die Analyseanforderungen zu passen.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

In vivo Imaging of the Mouse Spinal Cord Using Two-photon Microscopy

In vivo Imaging of the Mouse Spinal Cord Using Two-photon Microscopy

In-vivo-Imaging von der Maus Spinal Cord mit Zwei-Photonen-Mikroskopie

In vivo imaging using two-photon microscopy 1 in mice that have been genetically engineered to express fluorescent proteins in specific cell types 2-3 has ...

Forschung

Neurowissenschaften

Preparation of Acute Subventricular Zone Slices for Calcium Imaging

Vorbereitung der akuten Subventrikulärzone Slices für Calcium Imaging

The subventricular zone (SVZ) is one of the two neurogenic zones in the postnatal brain. The SVZ contains densely packed cells, including neural ...

In Vivo Two-photon Imaging Of Experience-dependent Molecular Changes In Cortical Neurons

In Vivo Two-photon Imaging Of Experience-dependent Molecular Changes In Cortical Neurons

In Vivo Zwei-Photonen-Imaging Of Experience-abhängigen molekularen Veränderungen in kortikalen Neuronen

The brain's ability to change in response to experience is essential for healthy brain function, and abnormalities in this process contribute to a variety ...

In vivo Postnatal Electroporation and Time-lapse Imaging of Neuroblast Migration in Mouse Acute Brain Slices

In vivo Postnatal Electroporation and Time-lapse Imaging of Neuroblast Migration in Mouse Acute Brain Slices

In-vivo-Elektroporation und Postnatale Zeitraffer-Imaging Neuroblast von Migration in Maus Akute Hirnschnitten

The subventricular zone (SVZ) is one of the main neurogenic niches in the postnatal brain. Here, neural progenitors proliferate and give rise to ...

Two-photon Imaging of Cellular Dynamics in the Mouse Spinal Cord

Zwei-Photonen-Imaging von Zelluläre Dynamik in der Maus Spinal Cord

Two-photon (2P) microscopy is utilized to reveal cellular dynamics and interactions deep within living, intact tissues. Here, we present a method for ...

Recording Synaptic Plasticity in Acute Hippocampal Slices Maintained in a Small-volume Recycling-, Perfusion-, and Submersion-type Chamber System

Aufnahme synaptische Plastizität in akuten Hippocampal Scheiben gepflegt in einem kleinvolumigen Recycling - Perfusions- und untertauchen-Typ-Kammer-System

Even though experiments on brain slices have been in use since 1951, problems remain that reduce the probability of achieving a stable and successful ...

Two-photon Calcium Imaging in Neuronal Dendrites in Brain Slices

Zwei-Photonen-Kalzium Imaging in neuronalen Dendriten in Hirnschnitten

Calcium (Ca2+) imaging is a powerful tool to investigate the spatiotemporal dynamics of intracellular Ca2+ signals in neuronal dendrites. Ca2+ ...

In Vivo Two-photon Imaging of Cortical Neurons in Neonatal Mice

In Vivo Two-photon Imaging of Cortical Neurons in Neonatal Mice

In Vivo Zwei-Photon Imaging der kortikalen Neuronen bei Neugeborenen Mäusen

Two-photon imaging is a powerful tool for the in vivo analysis of neuronal circuits in the mammalian brain. However, a limited number of in vivo imaging ...

Imaging of Intracellular ATP in Organotypic Tissue Slices of the Mouse Brain using the FRET-based Sensor ATeam1.03YEMK

Imaging of Intracellular ATP in Organotypic Tissue Slices of the Mouse Brain using the FRET-based Sensor ATeam1.03YEMK

Bildgebung von intrazellulärem ATP in organotypischen Gewebescheiben des Maushirns mit dem FRET-basierten Sensor ATeam1.03YEMK

Neuronal activity in the central nervous system (CNS) evokes a high demand on cellular energy provided by the breakdown of adenosine triphosphate (ATP). A ...

Transpupillary Two-Photon In Vivo Imaging of the Mouse Retina

Transpupille Zwei-Photonen-In-vivo-Bildgebung der Netzhaut der Maus

The retina transforms light signals from the environment into electrical signals that are propagated to the brain. Diseases of the retina are prevalent ...