Name: two-photon imaging of microglial processes' attraction toward atp or serotonin in acute brain slices
Uploaded: 2019-01-31T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Two-photon Imaging of Microglial Processes' Attraction Toward ATP or Serotonin in Acute Brain Slices at JoVE.com

אנו מודים את התא ואת רקמת מתקן הדמיה של ה-Institut du Fer à מולן, איפה כל ייבוא תמונות וניתוח בוצעו. עבודה זו בתמיכתם באופן חלקי המרכז הלאומי דה לה של רשרש, Santé de la הלאומי אינסטיטוט et de la Médicale רשרש, המדעים אוניברסיטת סורבון, ועל -ידי מענקים מן הסורבון Universités-פייר ואח (מארי קירי אוניברסיטת תוכנית Emergence-UPMC 2011/2014), Fondation למזוג לה Recherche sur le Cerveau, Fondation דה פראנס, שופכים Fondation la Médicale רשרש "Equipe עקרות DEQ2014039529", משרד הצרפתי של מחקר (סוכנות הידיעות נאסיונאל pour la Recherche ANR-17-CE16-0008, d'Avenir Investissements את תוכנית "ביו-פסיכולוגיים Labex" ANR-11-IDEX-0004-02), מחקר שיתופי בתוכנית בנוירוביולוגיה חישובית, לאומי-הסוכנות הלאומית של המדע קרן/צרפתית, למחקר (המספר: 1515686). כל הכותבים מזוהים לחקור קבוצות אשר הם חברים של הספר פריז of Neuroscience (ENP) ושל את Labex ביו-פסיכולוגיים. הקיבולות נשמר תלמיד דוקטורט המזוהה עם אוניברסיטת סורבון, קולז דוקטורט, F-75005 בפריז, צרפת, ממומן על ידי Labex ביו-פסיכולוגיים. V.M. הוא פוסט-דוקטורנט במימון מחקר שיתופי בתוכנית בנוירוביולוגיה חישובית, לאומי-הסוכנות הלאומית של המדע קרן/צרפתית, למחקר (המספר: 1515686). המחברים תודה מרתה Kolodziejczak שהשתתפו אתחול של הפרויקט.

כל ניסויים אושרו על-ידי הוועדה המקומית אתית (דרווין הוועדה, הסכמי #1170, #10921).
1. הכנת Micropipettes זכוכית עבור יישום מקומי של תרכובות
<ol><li>להכין פיפטות מ בורוסיליקט נימים דק-קיר זכוכית עם פולר אלקטרודה. כוונן את הפרמטרים כדי להשיג פיפטות בקוטר 4-5 מיקרומטר ב ממעמדם. איור דו...

<ol>
	<li>Salter, M. W., Stevens, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microglia+emerge+as+central+players+in+brain+disease.">Microglia emerge as central players in brain disease.</a> Nature Publishing Group. 23 (9), 1018-1027 (2017).</li><li>Tay, T. L., Savage, J., Hui, C. W., Bisht, K., Tremblay, M. -. &. #. 2. 0. 0. ;. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microglia+across+the+lifespan:+from+origin+to+function+in+brain+development,+plasticity+and+cognition.">Microglia across the lifespan: from origin to function in brain development, plasticity and cognition.</a> The Journal of Physiology. , (2016).</li><li>Davalos, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ATP+mediates+rapid+microglial+response+to+local+brain+injury+in+vivo.">ATP mediates rapid microglial response to local brain injury in vivo.</a> Nature Neuroscience. 8 (6), 752-758 (2005).</li><li>Nimmerjahn, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resting+Microglial+Cells+Are+Highly+Dynamic+Surveillants+of+Brain+Parenchyma+in+Vivo.">Resting Microglial Cells Are Highly Dynamic Surveillants of Brain Parenchyma in Vivo.</a> Science. 308 (5726), 1314-1318 (2005).</li><li>Dissing-Olesen, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+neuronal+NMDA+receptors+triggers+transient+ATP-mediated+microglial+process+outgrowth.">Activation of neuronal NMDA receptors triggers transient ATP-mediated microglial process outgrowth.</a> The Journal of Neuroscience: The Official Journal of the Society for Neuroscience. 34 (32), 10511-10527 (2014).</li><li>Gyoneva, S., Traynelis, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Norepinephrine+modulates+the+motility+of+resting+and+activated+microglia+via+different+adrenergic+receptors.">Norepinephrine modulates the motility of resting and activated microglia via different adrenergic receptors.</a> Journal of Biological Chemistry. 288 (21), 15291-15302 (2013).</li><li>Eyo, U. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+hyperactivity+recruits+microglial+processes+via+neuronal+NMDA+receptors+and+microglial+P2Y12+receptors+after+status+epilepticus.">Neuronal hyperactivity recruits microglial processes via neuronal NMDA receptors and microglial P2Y12 receptors after status epilepticus.</a> The Journal of Neuroscience: The Official Journal of the Society for Neuroscience. 34 (32), 10528-10540 (2014).</li><li>Hristovska, I., Pascual, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deciphering+Resting+Microglial+Morphology+and+Process+Motility+from+a+Synaptic+Prospect.">Deciphering Resting Microglial Morphology and Process Motility from a Synaptic Prospect.</a> Frontiers in Integrative Neuroscience. 9, 1231 (2016).</li><li>Avignone, E., Lepleux, M., Angibaud, J., N&#228;gerl, U. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Altered+morphological+dynamics+of+activated+microglia+after+induction+of+status+epilepticus.">Altered morphological dynamics of activated microglia after induction of status epilepticus.</a> Journal of Neuroinflammation. 12, 202 (2015).</li><li>Abiega, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+Hyperactivity+Disturbs+ATP+Microgradients,+Impairs+Microglial+Motility,+and+Reduces+Phagocytic+Receptor+Expression+Triggering+Apoptosis/Microglial+Phagocytosis+Uncoupling.">Neuronal Hyperactivity Disturbs ATP Microgradients, Impairs Microglial Motility, and Reduces Phagocytic Receptor Expression Triggering Apoptosis/Microglial Phagocytosis Uncoupling.</a> PLoS Biology. 14 (5), e1002466 (2016).</li><li>Madry, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microglial+Ramification,+Surveillance,+and+Interleukin-1&#946;+Release+Are+Regulated+by+the+Two-Pore+Domain+K+Channel+THIK-1.">Microglial Ramification, Surveillance, and Interleukin-1&#946; Release Are Regulated by the Two-Pore Domain K+Channel THIK-1.</a> Neuron. 97 (2), 299-312 (2018).</li><li>Honda, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+ATP+or+ADP+induce+chemotaxis+of+cultured+microglia+through+Gi/o-coupled+P2Y+receptors.">Extracellular ATP or ADP induce chemotaxis of cultured microglia through Gi/o-coupled P2Y receptors.</a> The Journal of Neuroscience: The Official Journal of the Society for Neuroscience. 21 (6), 1975-1982 (2001).</li><li>Haynes, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+P2Y12+receptor+regulates+microglial+activation+by+extracellular+nucleotides.">The P2Y12 receptor regulates microglial activation by extracellular nucleotides.</a> Nature Neuroscience. 9 (12), 1512-1519 (2006).</li><li>Wu, L. -. J., Vadakkan, K. I., Zhuo, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ATP-induced+chemotaxis+of+microglial+processes+requires+P2Y+receptor-activated+initiation+of+outward+potassium+currents.">ATP-induced chemotaxis of microglial processes requires P2Y receptor-activated initiation of outward potassium currents.</a> Glia. 55 (8), 810-821 (2007).</li><li>Kolodziejczak, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serotonin+Modulates+Developmental+Microglia+via+5-HT+2BReceptors:+Potential+Implication+during+Synaptic+Refinement+of+Retinogeniculate+Projections.">Serotonin Modulates Developmental Microglia via 5-HT 2BReceptors: Potential Implication during Synaptic Refinement of Retinogeniculate Projections.</a> ACS Chemical Neuroscience. 6 (7), 1219-1230 (2015).</li><li>Schafer, D. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microglia+Sculpt+Postnatal+Neural+Circuits+in+an+Activity+and+Complement-Dependent+Manner.">Microglia Sculpt Postnatal Neural Circuits in an Activity and Complement-Dependent Manner.</a> Neuron. 74 (4), 691-705 (2012).</li><li>Pfeiffer, T., Avignone, E., N&#228;gerl, U. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+hippocampal+long-term+potentiation+increases+the+morphological+dynamics+of+microglial+processes+and+prolongs+their+contacts+with+dendritic+spines.">Induction of hippocampal long-term potentiation increases the morphological dynamics of microglial processes and prolongs their contacts with dendritic spines.</a> Scientific Reports. 6, 32422 (2016).</li><li>Parkhurst, C. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microglia+Promote+Learning-Dependent+Synapse+Formation+through+Brain-Derived+Neurotrophic+Factor.">Microglia Promote Learning-Dependent Synapse Formation through Brain-Derived Neurotrophic Factor.</a> Cell. 155 (7), 1596-1609 (2013).</li><li>Wu, Y., Dissing-Olesen, L., Macvicar, B. A., Stevens, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microglia:+Dynamic+Mediators+of+Synapse+Development+and+Plasticity.">Microglia: Dynamic Mediators of Synapse Development and Plasticity.</a> Trends in Immunology. 36 (10), 605-613 (2015).</li><li>Ohsawa, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=P2Y12+receptor-mediated+integrin-beta1+activation+regulates+microglial+process+extension+induced+by+ATP.">P2Y12 receptor-mediated integrin-beta1 activation regulates microglial process extension induced by ATP.</a> Glia. 58 (7), 790-801 (2010).</li><li>Kurpius, D., Wilson, N., Fuller, L., Hoffman, A., Dailey, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+activation,+motility,+and+homing+of+neonatal+microglia+to+injured+neurons+does+not+require+protein+synthesis.">Early activation, motility, and homing of neonatal microglia to injured neurons does not require protein synthesis.</a> Glia. 54 (1), 58-70 (2006).</li><li>Stence, N., Waite, M., Dailey, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamics+of+microglial+activation:+a+confocal+time-lapse+analysis+in+hippocampal+slices.">Dynamics of microglial activation: a confocal time-lapse analysis in hippocampal slices.</a> Glia. 33 (3), 256-266 (2001).</li><li>Dissing-Olesen, L., Macvicar, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fixation+and+Immunolabeling+of+Brain+Slices:+SNAPSHOT+Method.">Fixation and Immunolabeling of Brain Slices: SNAPSHOT Method.</a> Current Protocols in Neuroscience. 71, (2015).</li><li>Schindelin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fiji:+an+open-source+platform+for+biological-image+analysis.">Fiji: an open-source platform for biological-image analysis.</a> Nature Methods. 9 (7), 676-682 (2012).</li><li>de Chaumont, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Icy:+an+open+bioimage+informatics+platform+for+extended+reproducible+research.">Icy: an open bioimage informatics platform for extended reproducible research.</a> Nature Methods. 9 (7), 690-696 (2012).</li><li>Aitken, P. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparative+methods+for+brain+slices:+a+discussion.">Preparative methods for brain slices: a discussion.</a> Journal of Neuroscience Methods. 59 (1), 139-149 (1995).</li><li>Paris, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ProMoIJ:+A+new+tool+for+automatic+three-dimensional+analysis+of+microglial+process+motility.">ProMoIJ: A new tool for automatic three-dimensional analysis of microglial process motility.</a> Glia. 66 (4), 828-845 (2018).</li><li>Pagani, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defective+microglial+development+in+the+hippocampus+of+Cx3cr1+deficient+mice.">Defective microglial development in the hippocampus of Cx3cr1 deficient mice.</a> Frontiers in Cellular Neuroscience. 9 (229), 111 (2015).</li><li>Ting, J. T., Daigle, T. L., Chen, Q., Feng, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+brain+slice+methods+for+adult+and+aging+animals:+application+of+targeted+patch+clamp+analysis+and+optogenetics.">Acute brain slice methods for adult and aging animals: application of targeted patch clamp analysis and optogenetics.</a> Methods in Molecular Biology. , 221-242 (2014).</li><li>Mainen, Z. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two-photon+imaging+in+living+brain+slices.">Two-photon imaging in living brain slices.</a> Methods. 18 (2), 231-239 (1999).</li><li>Tanaka, Y., Tanaka, Y., Furuta, T., Yanagawa, Y., Kaneko, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+cutting+solutions+on+the+viability+of+GABAergic+interneurons+in+cerebral+cortical+slices+of+adult+mice.">The effects of cutting solutions on the viability of GABAergic interneurons in cerebral cortical slices of adult mice.</a> Journal of Neuroscience Methods. 171 (1), 118-125 (2008).</li><li>Gyoneva, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systemic+inflammation+regulates+microglial+responses+to+tissue+damage+in+vivo.">Systemic inflammation regulates microglial responses to tissue damage in vivo.</a> Glia. 62 (8), 1345-1360 (2014).</li><li>Heindl, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+Morphological+Analysis+of+Microglia+After+Stroke.">Automated Morphological Analysis of Microglia After Stroke.</a> Frontiers in Cellular Neuroscience. 12, 106 (2018).</li><li>Dailey, M. E., Eyo, U., Fuller, L., Hass, J., Kurpius, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+microglia+in+brain+slices+and+slice+cultures.">Imaging microglia in brain slices and slice cultures.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 12 (12), 1142-1148 (2013).</li></ol>

על ידי שמירה על, שלא כמו בחלופה מועדפת או organotypic לחתוך תרבות, המבנית עם התאמות רשת מוגבל, פרוסות המוח חריפה לאפשר לחוקרים ללמוד מיקרוגלייה בסביבה הפיזיולוגית שלהם. עם זאת, אחת המגבלות הגדולות היא העובדה כי ההליך עם פרוסות יוצר פציעות במהירות יכול לסכן את הכדאיות של נוירונים, במיוחד במוח למב...

Microglial תאים מקרופאגים תושב של המוח, לשחק תפקיד שני מצבים פיזיולוגיים ופתולוגיים1,2. הם יש מורפולוגיה מסועף מאוד ואני כל הזמן הארכת, היציבה שלהם3,של תהליכים4. זו התנהגות "סריקה" הוא האמין להיות קשורים צורך הסקר של סביבתם. הפלסטיות מורפולוגי של מיקרוגלייה מתבטאת בשלושה מצבים. ראשית, תרכובות מסוימות במהירות לווסת את microglial מורפולוגיה: התוספת של ATP5,6 או5,NMDA7 במדיום רחצה פרוסות המוח חריפה מגביר את המורכבות של השלכות microglial, ואילו נוראדרנלין מקטין אותה6. תופעות אלה הן ישירות מתווך על ידי קולטנים microglial (עבור ATP ונוראפינפרין) או לדרוש שחרור ATP של נוירונים (עבור NMDA). שנית, מהירות הצמיחה, הכחשה של תהליכים microglial, שנקרא תנועתיות או "מעקב", יושפעו על-ידי גורמים חוץ-תאית8, הומאוסטזיס שיבושים9,10או מוטציות9, 10,11. שלישית, שבנוסף לשינויים איזוטרופיות הללו של חיות וצורות מיקרוגלייה יש את היכולת להרחיב את תהליכי שלהם directionally לכיוון פיפטה אספקת ATP3,5,12, 13 , 14, בתרבות, פרוסות המוח חריפה או ויוו, או מתן 5-HT-במוח חריפה פרוסות15. כזה הצמיחה אוריינטציה של תהליכים microglial, הנקרא גם תנועתיות כיוונית, תוארה לראשונה בתגובה המקומית לייזר הנגע3,4. לכן, מבחינה פיזיולוגית, זה ייתכן הקשורים התגובה לפגיעה או נדרש מיקוד microglial תהליכים לכיוון הסינפסות או אזורים במוח הדורשים גיזום במהלך פיתוח15,16, או פיזיולוגיות17 ,18,19 -מצבים פתולוגיים9,18,19,20 בבגרות. שלושת סוגי שינויים מורפולוגיים להסתמך על מנגנונים תאיים שונים11,13,20, מתחם נתון אחד לא בהכרח לווסת את כולן (למשל, NMDA, אשר פועל בעקיפין על מיקרוגלייה, יש השפעה על מורפולוגיה אבל לא לגרום תנועתיות כיוונית5,7). לכן, כאשר, במטרה לאפיין את ההשפעה של תרכובת, מוטציה או פתולוגיה על מיקרוגלייה חשוב לאפיין את שלושת המרכיבים של פלסטיות מורפולוגית שלהם. כאן, אנו מתארים שיטה ללמוד את צמיחת microglial תהליכים לכיוון מקור מקומי של המתחם, אשר, כאן, ATP או 5-HT-כיוונית.
ישנם מספר מודלים ללמוד משיכה מיקרוגלייה תהליכים: תרבויות ראשי בסביבה תלת-ממד6,18,19, המוח חריפה פרוסות6,13,15, וב -vivo הדמיה3,13. הגישה ויוו הוא הטוב ביותר כדי לשמר את מצב פיזיולוגי מיקרוגלייה. עם זאת, intravital הדמיה של אזורים עמוקים דורש הליכים כירורגיים מורכבים, לכן לעיתים קרובות מוגבל לשכבות קורטיקלית שטחית. השימוש מיקרוגלייה התרבות העיקרית היא הטכניקה הפשוטה ביותר לבדוק מספר רב של מצבים עם מספר מצומצם של בעלי חיים. בכל זאת, זה אפשרי להשיג המורפולוגיה תא אותו כמו vivo, תאים לאבד את יחסי הגומלין פיזיולוגיים נוירונים, האסטרוציטים. פרוסות המוח חריפה מייצגים מעין פשרה בין שתי גישות אלה. דגם זה מאפשר לחוקרים ללמוד מבנים במוח אשר אחרת קשה להגיע, כדי תמונה עם רזולוציה גבוהה ויוו, וכדי לחקור פרוסות שלבים neonatal, ואילו טראנס מיקרוסקופית מבוצע בעיקר-לבגרות. בסופו של דבר, זה מאפשר להתבונן בזמן אמת את ההשפעות של סמים מקומי יישום, וכדי לחזור על ניסויים תוך שימוש במספר מצומצם של בעלי חיים. למרות זאת, בעיה עם פרוסות המוח חריפה זה הזמן מוגבל (מספר שעות) במהלכו התאים נשארים בחיים, ובמיוחד עבור פרוסות של עכברים שגילן עולה על שבועיים, ואת השינוי פוטנציאליים מיקרוגלייה מורפולוגיה של מעל הזמן21,22 .
כאן, אנו מתארים את פרוטוקול להכין פרוסות המוח חריפה של צעירים ומבוגרים Cx3cr1GFP / + עכברים זקנים, עם שימור מיקרוגלייה וצורות למשך מספר שעות עד חודשיים. ואז, נתאר כיצד להשתמש פרוסות אלה ללמוד האטרקציה של תהליכים microglial לכיוון תרכובות כמו ATP או 5-HT.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>for pipettes preparation</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clark Borosilicate Thin Wall Capillaries</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>30-0065</td>
			<td>Borosilicate Thin Wall without Filament, 1.5 mm OD, 1.17 mm ID, 75 mm L , Pkg. of 225</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMZ Universal Puller</td>
			<td>Zeitz Instrumente</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>for solutions</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium Chloride dihydrate (CaCl2)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C5080</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Choline Chloride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C7527</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-(+)-Glucose</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G8270</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Ascorbic acid</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A5960</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium Chloride solution 1M (MgCl2)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>63020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium chloride SigmaUltra &#62;99,0% (KCl)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P9333</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium bicarbonate (NaHCO3)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S5761</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride (NaCl)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S5886</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium phosphate monobasic</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S5011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium pyruvate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P2256</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrapure water</td>
			<td>MilliQ</td>
			<td></td>
			<td>for all the solutions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>for slice preparation</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2x 200 mL crystalizing dishes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>80 mL Pyrex beaker</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antlia-3C Digital Peristaltic pump</td>
			<td>DD Biolab</td>
			<td>178961</td>
			<td>For mice perfusion and 2-photon chamber perfusion (aCSF)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbogen 5% CO2/95% O2</td>
			<td>Air Liquide France Industrie</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dolethal</td>
			<td>Vetoquinol</td>
			<td>Dolethal 50 mg/mL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter papers (Whatman)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>WHA1001042</td>
			<td>Whatman qualitative filter paper, Grade 1 (Pore size: 11&#181;M)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine Scissors - Sharp</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14060-60</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Food box 10 cm diameter, 8 cm Height</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>glue (ethyl cyanoacrylate)</td>
			<td>Loctite</td>
			<td>super glue 3 power flex</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hippocampal Tool (spatula)</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>10099-15</td>
			<td>The largest extremity has to be angled at 90 &#176;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ice</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iris Forceps (curved)</td>
			<td>Moria</td>
			<td>MC31</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lens cleaning tissue</td>
			<td>THOR LABS</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nylon mesh strainer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>diameter 7 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Razor blades</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>72000</td>
			<td>For the slicer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>scalpel blade</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slice interface holder</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>home-made, the file for 3D printing is provided in Supplemental Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Scissors - Sharp</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14002-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vibrating slicer</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>720-2709</td>
			<td>Model: HM 650V (Vibrating blade microtome)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water bath</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Set at 32&#176;C (first recovery step)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>for slice imaging</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#215; 25 0.95 NA water-immersion objective</td>
			<td>Leica Microsystems (Germany)</td>
			<td>HCX Irapo</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-photon MP5 upright microscope with resonant scanners (8 kHz) and two HyD Hybrid detectors</td>
			<td>Leica Microsystems (Germany)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antlia-3C Digital Peristaltic pump</td>
			<td>DD Biolab</td>
			<td>178961</td>
			<td>For 2-photon chamber perfusion with aCSF</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbogen 5% CO2/95% O2</td>
			<td>Air Liquide France Industrie</td>
			<td>I1501L50R2A001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chameleon Ultra2 Ti:sapphire laser</td>
			<td>Coherent (Germany)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>disposable transfer pipettes , wide mouth</td>
			<td>ThermoFischer scientific</td>
			<td>for example : 232-11</td>
			<td>5.8ml with fin tip, but we cut it (approx 7cm) to have a 4 mm diameter mouth</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>emission filter SP680</td>
			<td>Leica Microsystems (Germany)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>fluorescent cube containing a 525/50 emission filter and a 560 dichroic filter (for fluorescence collection)</td>
			<td>Leica Microsystems (Germany)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>glass beaker with 50 mL of ACSF to maintain constant perfusion of the slice</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating system</td>
			<td>Warner Instrument Corporation</td>
			<td>Automatic Heater Controller TC-324B</td>
			<td>to maintain perfusion solution at 32&#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>perfusion chamber</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>home-made, the file for 3D printing is provided in Supplemental Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>slice holder (&#34;harp&#34;)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>home made : hairpin made of platinum with the two branches joined by parallel nylon threads</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>for slice stimulation </td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adenosine 5&#8242;-triphosphate disodium salt hydrate (ATP)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A-26209</td>
			<td>to be prepared ex-temporaneously : 1mg/ml (3mM) stock solution prepared the day of the experiment, kept at 4&#176;C (a few hours) and diluted just before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescein (optional)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>F-6377</td>
			<td>use at 1 &#181;M final</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micromanipulator</td>
			<td>Luigs and Neumann</td>
			<td>SM7</td>
			<td>connected to the micropipette holde</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micropipette holder</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>same as for eletrophysiology</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Serotonin hydrochloride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>H-9523</td>
			<td>aliquots of 50mM stock solution in H20 kept at -20&#176;C. 500&#181;M solution prepared the day of the experiment.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe 5mL (without needle)</td>
			<td>Terumo medical products</td>
			<td>SS+05S1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transparent tubing</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>11750105</td>
			<td>Saint Gobain Performance Plastics&#8482; Tygon&#8482; E-3603 Non-DEHP Tubing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>for image analysis</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fiji</td>
			<td></td>
			<td>https://fiji.sc</td>
			<td>Schindelin, J. et al Nat. Methods (2012) doi 10.1038</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Icy</td>
			<td>Institut Pasteur</td>
			<td>http://icy.bioimageanalysis.org</td>
			<td>de Chaumont, F. et al. Nat. Methods (2012)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mice</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CX3CR1-GFP mice</td>
			<td>Jung et al, 2000</td>
			<td></td>
			<td>male or females, P3 to 2 months-old ; we have backcrossed these mice on 129sv background.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CX3CR1creER-YFP mice</td>
			<td>Parkhurst et al 2013</td>
			<td></td>
			<td>male or females, P3 to 2 months-old ; we have backcrossed these mice on 129sv background.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

two-photon imaging of microglial processes' attraction toward atp or serotonin in acute brain slices

Microglial תאים הם תושב מולדת תאים חיסוניים של המוח ללא הרף לסרוק את הסביבה שלהם עם תהליכים ארוכים שלהם, על הפרעה של הומאוסטזיס, עוברים שינויים מורפולוגיים מהירה. לדוגמה, פצע הלייזר גורם בעוד כמה דקות גידול מונחה של תהליכים microglial, נקרא גם "תנועתיות כיוונית", לכיוון האתר של פציעה. ניתן להשיג אפקט דומה על-ידי אספקת מקומית ATP או סרוטונין (5-hydroxytryptamine [5-HT]). במאמר זה, אנו מתארים פרוטוקול לזירוז גידול כיוונית של תהליכים microglial לקראת יישום מקומי של ATP או 5-HT-פרוסות המוח חריפה של עכברים צעירים וכדי תמונה משיכה זו לאורך זמן על ידי מיקרוסקופ multiphoton. שיטה פשוטה של כימות עם תוכנת ניתוח תמונות בחינם, קוד פתוח מוצע. אתגר המאפיינת עדיין פרוסות המוח חריפה זה הזמן מוגבל, יורד עם הגיל, במהלכו התאים ישארו במצב פיזיולוגי. פרוטוקול זה, לפיכך, מדגיש כמה שיפורים טכניים (חדר בינוני, אוויר נוזלי ממשק, הדמיה קאמרית עם זלוף כפול) שמטרתם ייעול הכדאיות של תאים microglial על פני מספר שעות, במיוחד בפרוסות של עכברים בוגרים.

פרוטוקול זה מתאר שיטה כדי לגרום, להתבונן, לכמת את הצמיחה אוריינטציה של תהליכים microglial לכיוון מתחם מקומית יישומית, לדוגמה, ATP או 5-HT, במוח חריפה פרוסות צעיר או מבוגר (לפחות עד בן חודש שני) עכברים. בין הגורמים התורמים לשמירה על המוח פרוסות מחיות למבוגרים במצב בריא במשך כמה שעות ...

Watch this Scientific Journal Video about Two-photon Imaging of Microglial Processes' Attraction Toward ATP or Serotonin in Acute Brain Slices at JoVE.com

Two-photon Imaging of Microglial Processes' Attraction Toward ATP or Serotonin in Acute Brain Slices

מיקרוגלייה, תאים חיסוניים תושב של המוח, להגיב במהירות עם שינויים מורפולוגיים שינויים של סביבתם. פרוטוקול זה מתאר כיצד להשתמש מיקרוסקופ שני הפוטונים כדי לחקור את המשיכה של תהליכים microglial לכיוון סרוטונין או ATP פרוסות המוח חריפה של עכברים.

שני הפוטונים הדמיה של תהליכים Microglial המשיכה לכיוון ATP או סרוטונין המוח חריפה פרוסות

Microglial cells are resident innate immune cells of the brain that constantly scan their environment with their long processes and, upon disruption of ...

כדי לאפיין באופן מלא פנוטיפ מיקרוגליאלי, חשוב להתייחס הן לתנימוס הבסיסי והן לתוחמיות כיוונית. פרוטוקול זה יכול לשמש כדי לבדוק את תנועתיות כיוונית של microglia על ידי הדמיה דו פוטון בפרוסות המוח עכברים, באמצעות ממשק הדפסה 3D מותאם אישית ותאי זלוב. הדגמת ההליך תהיה פאני אטיין, דוקטורנטית, ווינצ'נזו מסטריוליה, חוקר פוסט-דוקטורט, שניהם מהמעבדות שלנו.לפחות 30 דקות לפני הניתוח, להתחיל מבעבע 70 מיליליטר של נוזל השדרתי המלאכותי כולין, או aCSF כולין, על קרח. הוסף 150 מיליליטר של כולין aCSF ב 32 מעלות צלזיוס, עם קרבוגן. מניחים צלחת התגבשות 200 מיליליטר עם מגנט בר לתוך קופסת מזון אטומה ומוסיפים 200 מיליליטר של aCSF לצלחת.מניחים מחזיק פרוסת ממשק מודפס בתלת-ממד על גבי המנה ומסירים נוזל עודף מהצלחת המגבשת, עד שנותר רק סרט דק של פתרון המכסה את רשת הרשת של מחזיק השקופיות של הממשק. מוסיפים כמה מילימטרים של aCSF בתחתית קופסת המזון ומתחילים לבעבע את הנוזל עם פחמימן. לאחר מכן, סגור את התיבה האטומה תוך שמירה על פחמימות קבועות כדי ליצור תא ממשק לח, 95%, 5%פחמן דו חמצני עשיר.לאחר הקציר, מניחים את המוח על פיסת נייר סינון ספוג aCSF ול לנתח את האזור של עניין, על פי הזווית המועדפת של חיתוך. לפרוסות קורונטל, מקם והדבק את הפנים הקאודאליות של המוח על צלחת פטרי באורך 10 ס"מ המחוברת לגוש החיתוך של כלי פריסה רוטט, וממקם את הבלוק בתא המאגר של כלי הפריסה הרוטט בתוך תא גדול מלא בקרח. ממלאים את המנה עם aCSF כולין קר כקרח ולהשתמש בכלי הפריסה כדי להשיג פרוסות מוח עבות 300 מיקרומטר, באמצעות פיפטה העברה חד פעמית בקוטר ארבעה מילימטר לאחר כל מעבר של הלהב כדי לאסוף כל פרוסה.תן לכל פרוסה להתאושש 32 מעלות צלזיוס כולין aCSF במשך כ 10 דקות לאחר שהוא מתקבל, לפני העברת הפרוסות על חתיכות של נייר ניקוי עדשה, עם טיפה של כולין aCSF. לאחר מכן שאפו את עודף כולין aCSF ולהשתמש מרית להעביר את הפרוסות על הרשת של תא הממשק, המאפשר את הפרוסות להתאושש בסביבה זו לפחות 30 דקות. 30 דקות לפני תחילת ההקלטה, חבר את המשאבה הפריסטולית לתא הקלטה מותאם אישית עם זלוב עליון ותחתון לאופטימיזציה של החמצון והכדאיות של פרוסות הרקמה, ונקה את כל מערכת הזלבה עם 50 מיליליטר של מים אולטרה-חמים.בסוף מחזור הניקוי, להתחיל את תדלוק של תא ההקלטה עם 50 מיליליטר של aCSF ב זכוכית תחת קרבוגניים קבועים, ולהשתמש חד פעמי, פיפית העברה רחבת פה כדי להעביר את הפרוסה הראשונה להיות בתמונה לתוך כדי להסיר את נייר העדשה. כאשר החלק שקע לתחתית המזימה, מעבירים את החלק לתא ההקלטה וממקמים את מחזיק הפרוסה על הפרוסה כדי למזער את התנועה הנגרמת על ידי זרימת התדלוק. השתמש בתאורה של שדה בהיר כדי למקד את אזור העניין במוח תחת הגדלה של פי 5 עד 10.לאחר מכן, השתמש במטרה 25x עם עדשת טבילה במים 0.35x כדי להתאים את המיקום של שדה הצפייה. השתמש תאורת פלואורסצנטיות כדי לאתר את התאים המיקרוגליאליים פלואורסצנטיים ול מילוי אחורי פיפטה עם 10 microliters של aCSF המכיל את המתחם של עניין בריכוז הסופי שלה. כוון את הקצה כלפי מטה עם רעידות עדינות כדי להסיר את כל בועות האוויר לכודים בקצה ולהוות את פיפטה מלא לתוך מחזיק פיפטה מחובר מזרק חמישה מיליליטר עם הבוכנה ממוקם בעמדה חמישה מיליליטר מותקן על מיקרו מניפולטור שלושה צירים.מנמיכים את הפיפיטה בעדינות לכיוון הפרוסה, שולטים ומתאימת את המטרה בו זמנית, עד שטיפ הפיפיגט נוגע קלות במשטח הפרוסה. עכשיו לכוון את הלייזר ולעבור את המיקרוסקופ למצב multiphoton. ודא כי התא מוקרן מכל מקור אור ולהדליק את הגלאים שאינם descanned.הגדר את הרווח ולהשתמש בטבלת בדיקת מידע עם גבול עליון מקודד בצבע כדי למנוע רוויה של הפיקסלים בתמונה. לאחר מכן, להתחיל להקליט במשך משך כולל של לפחות 30 דקות, לאט מדכא את הבוכנה מזרק מן המיקום חמישה למיליליטר אחד, לאחר חמש דקות, על פני תקופה של חמש שניות, כדי להחיל את המתחם על החלק. לניתוח תמונה, בצע תחילה תיקון z-הקרנה ו להיסחף עם ImageJ בקובץ העניין.לאחר מכן, פתח את הקובץ שהשתנה ב- Icy וצייר אזור עניין מעגלי בקוטר 35 מיקרומטר, שבמרכזו אתר ההזרקה. הפעל את הסרט שוב עם ROI, כדי להבטיח שהוא ממוקם היטב. לאחר מכן, השתמש באזור של תוסף אבולוציה בעוצמת עניין כדי למדוד את העוצמה הממוצעת לאורך זמן באזור העניין, ולשמור את התוצאות כקובץ xls.פרוטוקול זה מאפשר למדוד את התגובות הנגרמות על ידי תרכובות שונות, כמו ATP או סרוטונין. למרות הזרקת ATP מעוררת עלייה של פלואורסצנטיות, לאחר רוב זריקות ATP, יש ירידה מיידית, קלה פלואורסצנטיות עקב עיוות רקמות חוזר לאחר כמה דקות. גודלו של אזור העניין משפיע גם על הכימות, גם הגדלת הקוטר מפחיתה את השונות בין הניסויים, אך מקטינה את הדיוק והעוצמה של התגובה שזוהתה.הערכה של התגובה microglial בנקודת זמן מסוימת יכול להיות שימושי עבור השוואה סטטיסטית של תרכובות שונות, או כדי לבדוק את ההשפעות של אנטגוניסטים ספציפיים הוסיף פתרון זלורים. כדי לכמת את תנועתיות בשלושה ממדים, דע כי ייתכן שיהיה עליך לשנות את מרווח z-step ואת קצב הדגימה של הרכישה כדי להתאים לדרישות הניתוח.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

In vivo Imaging of the Mouse Spinal Cord Using Two-photon Microscopy

In vivo Imaging of the Mouse Spinal Cord Using Two-photon Microscopy

בתחום ההדמיה vivo של חוט השדרה בעזרת עכבר דו פוטון מיקרוסקופית

In vivo imaging using two-photon microscopy 1 in mice that have been genetically engineered to express fluorescent proteins in specific cell types 2-3 has ...

Preparation of Acute Subventricular Zone Slices for Calcium Imaging

הכנת Slices האזור Subventricular החריף להדמית סיד

The subventricular zone (SVZ) is one of the two neurogenic zones in the postnatal brain. The SVZ contains densely packed cells, including neural ...

In Vivo Two-photon Imaging Of Experience-dependent Molecular Changes In Cortical Neurons

In Vivo Two-photon Imaging Of Experience-dependent Molecular Changes In Cortical Neurons

In vivo שני פוטוני הדמיה של שינויים מולקולריים ניסיון תלוי בנוירונים בקליפת מוח

The brain's ability to change in response to experience is essential for healthy brain function, and abnormalities in this process contribute to a variety ...

In vivo Postnatal Electroporation and Time-lapse Imaging of Neuroblast Migration in Mouse Acute Brain Slices

In vivo Postnatal Electroporation and Time-lapse Imaging of Neuroblast Migration in Mouse Acute Brain Slices

In vivo electroporation ואחרי הלידה וזמן לשגות הדמיה של neuroblast הגירה בעכבר חריפה פרוסות המוח

The subventricular zone (SVZ) is one of the main neurogenic niches in the postnatal brain. Here, neural progenitors proliferate and give rise to ...

Two-photon Imaging of Cellular Dynamics in the Mouse Spinal Cord

הדמיה שני פוטונים של Dynamics הסלולרי בחוט השדרה העכבר

Two-photon (2P) microscopy is utilized to reveal cellular dynamics and interactions deep within living, intact tissues. Here, we present a method for ...

Recording Synaptic Plasticity in Acute Hippocampal Slices Maintained in a Small-volume Recycling-, Perfusion-, and Submersion-type Chamber System

הקלטה הפלסטיות הסינפטית בפרוסות בהיפוקמפוס חריפה, בהשתתפות של מיחזור - בנפח מצומצם, זלוף- ומערכת ועלייתו-סוג תא

Even though experiments on brain slices have been in use since 1951, problems remain that reduce the probability of achieving a stable and successful ...

Two-photon Calcium Imaging in Neuronal Dendrites in Brain Slices

שני הפוטונים סידן הדמיה של דנדריטים עצביים במוח פרוסות

Calcium (Ca2+) imaging is a powerful tool to investigate the spatiotemporal dynamics of intracellular Ca2+ signals in neuronal dendrites. Ca2+ ...

In Vivo Two-photon Imaging of Cortical Neurons in Neonatal Mice

In Vivo Two-photon Imaging of Cortical Neurons in Neonatal Mice

אין ויוו שני הפוטונים הדמיה של נוירונים בקליפת המוח בעכברים Neonatal

Two-photon imaging is a powerful tool for the in vivo analysis of neuronal circuits in the mammalian brain. However, a limited number of in vivo imaging ...

Imaging of Intracellular ATP in Organotypic Tissue Slices of the Mouse Brain using the FRET-based Sensor ATeam1.03YEMK

Imaging of Intracellular ATP in Organotypic Tissue Slices of the Mouse Brain using the FRET-based Sensor ATeam1.03YEMK

הדמיה של ATP תאיים בפרוסות רקמה אורגנותית של המוח העכבר באמצעות חיישן מבוסס-הסריג ATeam 1.03ימק

Neuronal activity in the central nervous system (CNS) evokes a high demand on cellular energy provided by the breakdown of adenosine triphosphate (ATP). A ...

Transpupillary Two-Photon In Vivo Imaging of the Mouse Retina

הדמיה טרנס-אימונית של שני פוטונים In vivo של רשתית העכבר

The retina transforms light signals from the environment into electrical signals that are propagated to the brain. Diseases of the retina are prevalent ...