Name: two-photon imaging of microglial processes' attraction toward atp or serotonin in acute brain slices
Uploaded: 2019-01-31T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Two-photon Imaging of Microglial Processes' Attraction Toward ATP or Serotonin in Acute Brain Slices at JoVE.com

Biz hücre ve doku Imaging tesis Institut du Fer à Moulin, nerede tüm resim alma ve analiz gerçekleştirilmiş, teşekkür ederim. Bu eser kısmen Centre National de la tarafından Recherche Scientifique, Institut National de la Santé desteklenen et de la Recherche Médicale, Sorbonne Université Bilimler ve hibe Sorbonne Universités Pierre tarafından et Marie Curie Üniversitesi () Emergence-UPMC programı 2011/2014), Fondation pour la Recherche sur le Cerveau, Fondation de France, Fondation pour la Recherche Médicale "Equipe FRM DEQ2014039529", araştırma (Agence Nationale pour la Recherche Fransız Bakanı ANR-17-CE16-0008 ve Investissements d'Avenir "Biyo-Psy Labex" ANR-11-IDEX-0004-02 program) ve bir ortak araştırma Ulusal Bilim Vakfı/Fransız Ulusal Ajansı araştırmaları için Hesaplamalı nörolojik programında (sayı: 1515686). Her yazarlar araştırma için bağlı olan Grup üyeleri Paris Okulu Neuroscience (ENP) ve biyo-Psy Labex olan. Fe bağlı Sorbonne Université, Collège doktora, F-75005 Paris, Fransa, ile bir doktora öğrencisi ve biyo-Psy Labex tarafından finanse edilmektedir. M. olan Ulusal Bilim Vakfı/Fransız Ulusal Ajansı araştırmaları için Hesaplamalı nörolojik programında ortak araştırma tarafından finanse edilen bir Post-Doktora Bursu (sayı: 1515686). Yazarlar proje başlama katılan Marta Kolodziejczak teşekkür ederim.

Tüm deneyleri yerel etik kurul tarafından kabul edildi (Darwin Komitesi, anlaşmalar #1170 ve #10921).
1. hazırlanması cam Mikropipetler bileşiklerin yerel uygulama için
<ol><li>Pipetler borosilikat üzerinden ince çeperli cam kılcal bir elektrot çektirme ile hazırlayın. Pipetler 4-5 µm çapında onların ekstremite, elde etmek için parametreler ayarlayın. Şekil 2B bir pipet aydınlık alan düşük büyütmede gösterir.</li>
</ol><p class="jove_...

<ol>
	<li>Salter, M. W., Stevens, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microglia+emerge+as+central+players+in+brain+disease.">Microglia emerge as central players in brain disease.</a> Nature Publishing Group. 23 (9), 1018-1027 (2017).</li><li>Tay, T. L., Savage, J., Hui, C. W., Bisht, K., Tremblay, M. -. &. #. 2. 0. 0. ;. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microglia+across+the+lifespan:+from+origin+to+function+in+brain+development,+plasticity+and+cognition.">Microglia across the lifespan: from origin to function in brain development, plasticity and cognition.</a> The Journal of Physiology. , (2016).</li><li>Davalos, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ATP+mediates+rapid+microglial+response+to+local+brain+injury+in+vivo.">ATP mediates rapid microglial response to local brain injury in vivo.</a> Nature Neuroscience. 8 (6), 752-758 (2005).</li><li>Nimmerjahn, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resting+Microglial+Cells+Are+Highly+Dynamic+Surveillants+of+Brain+Parenchyma+in+Vivo.">Resting Microglial Cells Are Highly Dynamic Surveillants of Brain Parenchyma in Vivo.</a> Science. 308 (5726), 1314-1318 (2005).</li><li>Dissing-Olesen, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+neuronal+NMDA+receptors+triggers+transient+ATP-mediated+microglial+process+outgrowth.">Activation of neuronal NMDA receptors triggers transient ATP-mediated microglial process outgrowth.</a> The Journal of Neuroscience: The Official Journal of the Society for Neuroscience. 34 (32), 10511-10527 (2014).</li><li>Gyoneva, S., Traynelis, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Norepinephrine+modulates+the+motility+of+resting+and+activated+microglia+via+different+adrenergic+receptors.">Norepinephrine modulates the motility of resting and activated microglia via different adrenergic receptors.</a> Journal of Biological Chemistry. 288 (21), 15291-15302 (2013).</li><li>Eyo, U. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+hyperactivity+recruits+microglial+processes+via+neuronal+NMDA+receptors+and+microglial+P2Y12+receptors+after+status+epilepticus.">Neuronal hyperactivity recruits microglial processes via neuronal NMDA receptors and microglial P2Y12 receptors after status epilepticus.</a> The Journal of Neuroscience: The Official Journal of the Society for Neuroscience. 34 (32), 10528-10540 (2014).</li><li>Hristovska, I., Pascual, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deciphering+Resting+Microglial+Morphology+and+Process+Motility+from+a+Synaptic+Prospect.">Deciphering Resting Microglial Morphology and Process Motility from a Synaptic Prospect.</a> Frontiers in Integrative Neuroscience. 9, 1231 (2016).</li><li>Avignone, E., Lepleux, M., Angibaud, J., N&#228;gerl, U. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Altered+morphological+dynamics+of+activated+microglia+after+induction+of+status+epilepticus.">Altered morphological dynamics of activated microglia after induction of status epilepticus.</a> Journal of Neuroinflammation. 12, 202 (2015).</li><li>Abiega, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+Hyperactivity+Disturbs+ATP+Microgradients,+Impairs+Microglial+Motility,+and+Reduces+Phagocytic+Receptor+Expression+Triggering+Apoptosis/Microglial+Phagocytosis+Uncoupling.">Neuronal Hyperactivity Disturbs ATP Microgradients, Impairs Microglial Motility, and Reduces Phagocytic Receptor Expression Triggering Apoptosis/Microglial Phagocytosis Uncoupling.</a> PLoS Biology. 14 (5), e1002466 (2016).</li><li>Madry, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microglial+Ramification,+Surveillance,+and+Interleukin-1&#946;+Release+Are+Regulated+by+the+Two-Pore+Domain+K+Channel+THIK-1.">Microglial Ramification, Surveillance, and Interleukin-1&#946; Release Are Regulated by the Two-Pore Domain K+Channel THIK-1.</a> Neuron. 97 (2), 299-312 (2018).</li><li>Honda, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+ATP+or+ADP+induce+chemotaxis+of+cultured+microglia+through+Gi/o-coupled+P2Y+receptors.">Extracellular ATP or ADP induce chemotaxis of cultured microglia through Gi/o-coupled P2Y receptors.</a> The Journal of Neuroscience: The Official Journal of the Society for Neuroscience. 21 (6), 1975-1982 (2001).</li><li>Haynes, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+P2Y12+receptor+regulates+microglial+activation+by+extracellular+nucleotides.">The P2Y12 receptor regulates microglial activation by extracellular nucleotides.</a> Nature Neuroscience. 9 (12), 1512-1519 (2006).</li><li>Wu, L. -. J., Vadakkan, K. I., Zhuo, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ATP-induced+chemotaxis+of+microglial+processes+requires+P2Y+receptor-activated+initiation+of+outward+potassium+currents.">ATP-induced chemotaxis of microglial processes requires P2Y receptor-activated initiation of outward potassium currents.</a> Glia. 55 (8), 810-821 (2007).</li><li>Kolodziejczak, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serotonin+Modulates+Developmental+Microglia+via+5-HT+2BReceptors:+Potential+Implication+during+Synaptic+Refinement+of+Retinogeniculate+Projections.">Serotonin Modulates Developmental Microglia via 5-HT 2BReceptors: Potential Implication during Synaptic Refinement of Retinogeniculate Projections.</a> ACS Chemical Neuroscience. 6 (7), 1219-1230 (2015).</li><li>Schafer, D. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microglia+Sculpt+Postnatal+Neural+Circuits+in+an+Activity+and+Complement-Dependent+Manner.">Microglia Sculpt Postnatal Neural Circuits in an Activity and Complement-Dependent Manner.</a> Neuron. 74 (4), 691-705 (2012).</li><li>Pfeiffer, T., Avignone, E., N&#228;gerl, U. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+hippocampal+long-term+potentiation+increases+the+morphological+dynamics+of+microglial+processes+and+prolongs+their+contacts+with+dendritic+spines.">Induction of hippocampal long-term potentiation increases the morphological dynamics of microglial processes and prolongs their contacts with dendritic spines.</a> Scientific Reports. 6, 32422 (2016).</li><li>Parkhurst, C. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microglia+Promote+Learning-Dependent+Synapse+Formation+through+Brain-Derived+Neurotrophic+Factor.">Microglia Promote Learning-Dependent Synapse Formation through Brain-Derived Neurotrophic Factor.</a> Cell. 155 (7), 1596-1609 (2013).</li><li>Wu, Y., Dissing-Olesen, L., Macvicar, B. A., Stevens, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microglia:+Dynamic+Mediators+of+Synapse+Development+and+Plasticity.">Microglia: Dynamic Mediators of Synapse Development and Plasticity.</a> Trends in Immunology. 36 (10), 605-613 (2015).</li><li>Ohsawa, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=P2Y12+receptor-mediated+integrin-beta1+activation+regulates+microglial+process+extension+induced+by+ATP.">P2Y12 receptor-mediated integrin-beta1 activation regulates microglial process extension induced by ATP.</a> Glia. 58 (7), 790-801 (2010).</li><li>Kurpius, D., Wilson, N., Fuller, L., Hoffman, A., Dailey, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+activation,+motility,+and+homing+of+neonatal+microglia+to+injured+neurons+does+not+require+protein+synthesis.">Early activation, motility, and homing of neonatal microglia to injured neurons does not require protein synthesis.</a> Glia. 54 (1), 58-70 (2006).</li><li>Stence, N., Waite, M., Dailey, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamics+of+microglial+activation:+a+confocal+time-lapse+analysis+in+hippocampal+slices.">Dynamics of microglial activation: a confocal time-lapse analysis in hippocampal slices.</a> Glia. 33 (3), 256-266 (2001).</li><li>Dissing-Olesen, L., Macvicar, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fixation+and+Immunolabeling+of+Brain+Slices:+SNAPSHOT+Method.">Fixation and Immunolabeling of Brain Slices: SNAPSHOT Method.</a> Current Protocols in Neuroscience. 71, (2015).</li><li>Schindelin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fiji:+an+open-source+platform+for+biological-image+analysis.">Fiji: an open-source platform for biological-image analysis.</a> Nature Methods. 9 (7), 676-682 (2012).</li><li>de Chaumont, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Icy:+an+open+bioimage+informatics+platform+for+extended+reproducible+research.">Icy: an open bioimage informatics platform for extended reproducible research.</a> Nature Methods. 9 (7), 690-696 (2012).</li><li>Aitken, P. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparative+methods+for+brain+slices:+a+discussion.">Preparative methods for brain slices: a discussion.</a> Journal of Neuroscience Methods. 59 (1), 139-149 (1995).</li><li>Paris, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ProMoIJ:+A+new+tool+for+automatic+three-dimensional+analysis+of+microglial+process+motility.">ProMoIJ: A new tool for automatic three-dimensional analysis of microglial process motility.</a> Glia. 66 (4), 828-845 (2018).</li><li>Pagani, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defective+microglial+development+in+the+hippocampus+of+Cx3cr1+deficient+mice.">Defective microglial development in the hippocampus of Cx3cr1 deficient mice.</a> Frontiers in Cellular Neuroscience. 9 (229), 111 (2015).</li><li>Ting, J. T., Daigle, T. L., Chen, Q., Feng, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+brain+slice+methods+for+adult+and+aging+animals:+application+of+targeted+patch+clamp+analysis+and+optogenetics.">Acute brain slice methods for adult and aging animals: application of targeted patch clamp analysis and optogenetics.</a> Methods in Molecular Biology. , 221-242 (2014).</li><li>Mainen, Z. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two-photon+imaging+in+living+brain+slices.">Two-photon imaging in living brain slices.</a> Methods. 18 (2), 231-239 (1999).</li><li>Tanaka, Y., Tanaka, Y., Furuta, T., Yanagawa, Y., Kaneko, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+cutting+solutions+on+the+viability+of+GABAergic+interneurons+in+cerebral+cortical+slices+of+adult+mice.">The effects of cutting solutions on the viability of GABAergic interneurons in cerebral cortical slices of adult mice.</a> Journal of Neuroscience Methods. 171 (1), 118-125 (2008).</li><li>Gyoneva, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systemic+inflammation+regulates+microglial+responses+to+tissue+damage+in+vivo.">Systemic inflammation regulates microglial responses to tissue damage in vivo.</a> Glia. 62 (8), 1345-1360 (2014).</li><li>Heindl, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+Morphological+Analysis+of+Microglia+After+Stroke.">Automated Morphological Analysis of Microglia After Stroke.</a> Frontiers in Cellular Neuroscience. 12, 106 (2018).</li><li>Dailey, M. E., Eyo, U., Fuller, L., Hass, J., Kurpius, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+microglia+in+brain+slices+and+slice+cultures.">Imaging microglia in brain slices and slice cultures.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 12 (12), 1142-1148 (2013).</li></ol>

İçinde ayrışmış aksine tutarak, veya organotypic dilim kültür, yapısal bütünlük ve sınırlı bir ağ ayarlamaları, akut beyin dilimleri araştırmacılar microglia fizyolojik onların ortamında çalışmaya izin. Ancak, bir büyük sınırlamaları Dilimleme yordam hızla özellikle yetişkin beyindeki nöronların canlılığı olumsuz etkileyebilir yaralanma oluşturur gerçektir. Microglia olduğu gibi özellikle hücre hasarı için reaktif nöronal hücre ölümü microglia fizyolojik durumlarına yak...

Mikroglial hücreleri beynin ikamet makrofajlar vardır ve her iki fizyolojik ve patolojik koşulları1,2' bir rol oynamaktadır. Onlar çok dallı bir kara delik var ve sürekli genişletme ve onların işlemleri3,4geri çeker. "Tarama" Bu davranış ilgili ve onların çevre araştırması için gerekli olduğuna inanılıyor. Microglia morfolojik plastisite üç modda ifade edilir. İlk olarak, bazı bileşikler modüle hızla mikroglial Morfoloji: ATP5,6 veya NMDA5,7 akut beyin dilimleri banyo orta eklenmesi mikroglial etkileri, karmaşıklığını artırır Oysa norepinefrin6azalır. Bu efektleri (ATP ve norepinefrin) mikroglial reseptörler tarafından doğrudan aracılı veya nöronlar bir ATP sürümü (NMDA) gerektirir. İkinci olarak, mikroglial işlemleri, motilite veya "gözetim", olarak adlandırılan büyüme ve geri çekme hızı hücre dışı Etkenler8, homeostasis kesintileri9,10veya mutasyonlar9tarafından etkilenebilir, 10,11. Üçüncü olarak, Morfoloji ve hareketliliği bu izotropik değişikliklerin yanı sıra, onların oluşum directionally bir pipet ATP3,5,12, teslim doğru genişletmek için kapasite var microglia 13 , 14, kültür, akut beyin dilimler veya içinde vivo veya teslim 5-HT akut beyin dilimleri15dakika sonra. Tür odaklı büyüme yönlü hareketliliği, adı da verilen mikroglial süreçlerinin ilk yerel lazer lezyon3,4yanıt olarak tanımlanmıştır. Böylece, fizyolojik olarak, yanıt sakatlığı ile ilgili veya olabilir mikroglial süreçleri sinapslarda doğru hedeflemek için gerekli veya ayıklama geliştirme15,16sırasında veya fizyolojik17 gerektiren beyin bölgeleri ,18,19 veya erişkin dönemde patolojik durumlar9,18,19,20 . Morfolojik değişiklikler üç tür farklı hücre içi mekanizmalar11,13,20tarihinde itimat ve bir verilen bileşik mutlaka hepsini (dolaylı olarak üzerinde hareket eden Örneğin, NMDA, modüle değil microglia, kara delik üzerinde bir etkisi yoktur ancak yön hareketliliği5,7teşvik değil). Bu nedenle, bir bileşik, bir mutasyon veya bir patoloji etkisi microglia karakterize amaçlayan zaman onların morfolojik plastisite üç bileşenden karakterize etmek önemlidir. Burada, mikroglial işlemleri burada olan bir yerel kaynak bileşik, ATP veya 5-HT doğru yönlü gelişimini incelemek için bir yöntem açıklanmaktadır.
Microglia süreçleri cazibe çalışmaya çeşitli modelleri vardır: birincil kültürler 3D çevre6,18,19, akut beyin dilimleri6,13,15ve vivo 3,13görüntüleme. İçinde vivo yaklaşım en iyisi microglia fizyolojik durumunu korumak için. Ancak, derin bölgeler intravital görüntüleme karmaşık cerrahi işlemler gerektirir ve bu nedenle, bu kez yüzeysel kortikal katmanlara sınırlıdır. Microglia birincil kültür koşulları ile sınırlı sayıda hayvan, çok sayıda test etmek için en kolay tekniği kullanılır. Yine de, aynı hücre morfolojisi vivo olduğu gibi elde edebilmek mümkün değildir ve fizyolojik ilişkileri nöronlar ve astrocytes hücreleri kaybetmek. Bu iki yaklaşım arasında bir uzlaşma akut beyin dilimleri temsil eder. Bu modeli araştırmacılar Transkraniyal mikroskobu çoğunlukla yetişkinlik gerçekleştirilir, ancak Aksi takdirde zor ulaşmak için ve içinde vivo yüksek çözünürlükte görüntü ve dilimleri yenidoğan aşamaları, üzerinden araştırmak için beyin yapıları çalışmaya izin verir. Son olarak, bu gerçek zamanlı olarak yerel uyuşturucu uygulama etkilerini gözlemlemek ve deney hayvanları sınırlı sayıda kullanırken tekrar mümkün kılar. Yine de, hangi sırasında kalmak hücreleri saat21,22 canlı fareler iki hafta ve microglia morfoloji olası değişikliği büyük dilim için özellikle sınırlı bir süre (birkaç saat) akut beyin dilimleri ile ilgili bir sorun olduğunu .
Burada, biz genç ve yetişkin Cx3cr1 dilim akut beyin hazırlamak için bir protokol tarifGFP / + fareler eski microglia Morfoloji ve motilite korunması için birkaç saat ile iki aya kadar. Biz, sonra bu dilimler mikroglial süreçleri ATP veya 5-HT gibi bileşikler doğru cazibe çalışma için nasıl kullanılacağını açıklar.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>for pipettes preparation</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clark Borosilicate Thin Wall Capillaries</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>30-0065</td>
			<td>Borosilicate Thin Wall without Filament, 1.5 mm OD, 1.17 mm ID, 75 mm L , Pkg. of 225</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMZ Universal Puller</td>
			<td>Zeitz Instrumente</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>for solutions</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium Chloride dihydrate (CaCl2)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C5080</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Choline Chloride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C7527</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-(+)-Glucose</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G8270</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Ascorbic acid</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A5960</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium Chloride solution 1M (MgCl2)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>63020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium chloride SigmaUltra &#62;99,0% (KCl)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P9333</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium bicarbonate (NaHCO3)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S5761</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride (NaCl)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S5886</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium phosphate monobasic</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S5011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium pyruvate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P2256</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrapure water</td>
			<td>MilliQ</td>
			<td></td>
			<td>for all the solutions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>for slice preparation</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2x 200 mL crystalizing dishes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>80 mL Pyrex beaker</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antlia-3C Digital Peristaltic pump</td>
			<td>DD Biolab</td>
			<td>178961</td>
			<td>For mice perfusion and 2-photon chamber perfusion (aCSF)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbogen 5% CO2/95% O2</td>
			<td>Air Liquide France Industrie</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dolethal</td>
			<td>Vetoquinol</td>
			<td>Dolethal 50 mg/mL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter papers (Whatman)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>WHA1001042</td>
			<td>Whatman qualitative filter paper, Grade 1 (Pore size: 11&#181;M)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine Scissors - Sharp</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14060-60</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Food box 10 cm diameter, 8 cm Height</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>glue (ethyl cyanoacrylate)</td>
			<td>Loctite</td>
			<td>super glue 3 power flex</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hippocampal Tool (spatula)</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>10099-15</td>
			<td>The largest extremity has to be angled at 90 &#176;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ice</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iris Forceps (curved)</td>
			<td>Moria</td>
			<td>MC31</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lens cleaning tissue</td>
			<td>THOR LABS</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nylon mesh strainer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>diameter 7 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Razor blades</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>72000</td>
			<td>For the slicer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>scalpel blade</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slice interface holder</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>home-made, the file for 3D printing is provided in Supplemental Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Scissors - Sharp</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14002-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vibrating slicer</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>720-2709</td>
			<td>Model: HM 650V (Vibrating blade microtome)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water bath</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Set at 32&#176;C (first recovery step)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>for slice imaging</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#215; 25 0.95 NA water-immersion objective</td>
			<td>Leica Microsystems (Germany)</td>
			<td>HCX Irapo</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-photon MP5 upright microscope with resonant scanners (8 kHz) and two HyD Hybrid detectors</td>
			<td>Leica Microsystems (Germany)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antlia-3C Digital Peristaltic pump</td>
			<td>DD Biolab</td>
			<td>178961</td>
			<td>For 2-photon chamber perfusion with aCSF</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbogen 5% CO2/95% O2</td>
			<td>Air Liquide France Industrie</td>
			<td>I1501L50R2A001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chameleon Ultra2 Ti:sapphire laser</td>
			<td>Coherent (Germany)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>disposable transfer pipettes , wide mouth</td>
			<td>ThermoFischer scientific</td>
			<td>for example : 232-11</td>
			<td>5.8ml with fin tip, but we cut it (approx 7cm) to have a 4 mm diameter mouth</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>emission filter SP680</td>
			<td>Leica Microsystems (Germany)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>fluorescent cube containing a 525/50 emission filter and a 560 dichroic filter (for fluorescence collection)</td>
			<td>Leica Microsystems (Germany)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>glass beaker with 50 mL of ACSF to maintain constant perfusion of the slice</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating system</td>
			<td>Warner Instrument Corporation</td>
			<td>Automatic Heater Controller TC-324B</td>
			<td>to maintain perfusion solution at 32&#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>perfusion chamber</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>home-made, the file for 3D printing is provided in Supplemental Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>slice holder (&#34;harp&#34;)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>home made : hairpin made of platinum with the two branches joined by parallel nylon threads</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>for slice stimulation </td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adenosine 5&#8242;-triphosphate disodium salt hydrate (ATP)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A-26209</td>
			<td>to be prepared ex-temporaneously : 1mg/ml (3mM) stock solution prepared the day of the experiment, kept at 4&#176;C (a few hours) and diluted just before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescein (optional)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>F-6377</td>
			<td>use at 1 &#181;M final</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micromanipulator</td>
			<td>Luigs and Neumann</td>
			<td>SM7</td>
			<td>connected to the micropipette holde</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micropipette holder</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>same as for eletrophysiology</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Serotonin hydrochloride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>H-9523</td>
			<td>aliquots of 50mM stock solution in H20 kept at -20&#176;C. 500&#181;M solution prepared the day of the experiment.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe 5mL (without needle)</td>
			<td>Terumo medical products</td>
			<td>SS+05S1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transparent tubing</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>11750105</td>
			<td>Saint Gobain Performance Plastics&#8482; Tygon&#8482; E-3603 Non-DEHP Tubing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>for image analysis</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fiji</td>
			<td></td>
			<td>https://fiji.sc</td>
			<td>Schindelin, J. et al Nat. Methods (2012) doi 10.1038</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Icy</td>
			<td>Institut Pasteur</td>
			<td>http://icy.bioimageanalysis.org</td>
			<td>de Chaumont, F. et al. Nat. Methods (2012)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mice</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CX3CR1-GFP mice</td>
			<td>Jung et al, 2000</td>
			<td></td>
			<td>male or females, P3 to 2 months-old ; we have backcrossed these mice on 129sv background.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CX3CR1creER-YFP mice</td>
			<td>Parkhurst et al 2013</td>
			<td></td>
			<td>male or females, P3 to 2 months-old ; we have backcrossed these mice on 129sv background.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

two-photon imaging of microglial processes' attraction toward atp or serotonin in acute brain slices

Sürekli onların çevre onların uzun süreçleri ile inceden inceye gözden geçirmek ve homeostasis kesintiye uğraması, hızlı morfolojik değişiklikleri meydana ikamet doğuştan gelen bağışıklık hücreleri beynin mikroglial hücrelerdir. Örneğin, bir lazer lezyon birkaç dakika içinde bir odaklı büyüme yaralanma site doğru "yön hareketliliği" olarak da adlandırılır mikroglial süreçlerin neden olmaktadır. ATP veya serotonin (5-hydroxytryptamine [5-HT]) yerel olarak sunarak benzer bir etki elde edilebilir. Bu makalede, biz mikroglial işlemlerin ATP veya 5-HT genç ve yetişkin mice akut beyin dilim içinde yerel bir uygulama doğru bir yön büyümesini teşvik ve zaman içinde bu cazibe tarafından multiphoton mikroskopi olabilir görüntü için bir iletişim kuralı tanımlamak. Miktar ücretsiz ve açık kaynak görüntü analiz yazılımı ile basit bir yöntem önerdi. Hala akut beyin dilimleri karakterize bir meydan okuma ile yaş sırasında hücreleri fizyolojik bir durumda kalır, azalan sınırlı zamanı. Bu iletişim kuralı, böylece, mikroglial hücre canlılığı başta dilimleri yetişkin fareler üzerinden birkaç saat içinde en iyi duruma getirme bazı teknik gelişmeler (orta, hava-sıvı arayüzey odası, oda bir çift kişilik perfüzyon ile görüntüleme) yönelik vurgular.

Bu iletişim kuralı ikna etmek, gözlemlemek ve yerel olarak uygulanan bir bileşik doğru mikroglial süreçlerin odaklı büyüme ölçmek için bir yöntem açıklanır, örneğin, ATP veya 5-HT, akut beyin genç veya yetişkin dilimler (hiç olmazsa ilâ iki aylık) fareler. Beyin dilimleri sağlıklı bir devlet yetişkin hayvanlardan birkaç saat için korumak açısından katkıda bulunan etkenleri arasında iki araçları hücre hayatta kalma iki adım at Protokolü'nün en iyi d...

Watch this Scientific Journal Video about Two-photon Imaging of Microglial Processes' Attraction Toward ATP or Serotonin in Acute Brain Slices at JoVE.com

Two-photon Imaging of Microglial Processes' Attraction Toward ATP or Serotonin in Acute Brain Slices

Microglia, yerleşik bağışıklık hücreleri beynin, çabuk morfolojik değişiklikler ile çevrenin değişiklikler cevap. Bu protokol iki fotonlu mikroskobu serotonin veya ATP doğru mikroglial süreçlerinde fareler dilim akut beyin cazibe çalışmak için nasıl kullanılacağını açıklar.

Mikroglial süreçleri cazibe ATP veya Serotonin akut beyin dilimleri içinde doğru iki fotonlu görüntüleme

Microglial cells are resident innate immune cells of the brain that constantly scan their environment with their long processes and, upon disruption of ...

Bir mikroglial fenotipi tam olarak karakterize etmek için hem bazal hem de yönlü hareketliliği ele almak önemlidir. Bu protokol, özelleştirilmiş 3D baskı arayüzü ve perfüzyon odaları kullanarak, farelerin beyin dilimlerinde iki foton görüntüleme ile mikroglia yön hareketliliğini test etmek için kullanılabilir. Prosedürü gösteren Fanny Etienne, bir doktora öğrencisi, ve Vincenzo Mastriolia, bir doktora sonrası araştırmacı, her ikisi de laboratuvarlarından olacaktır.Diseksiyon dan en az 30 dakika önce, 70 mililitre kolin yapay beyin omurilik sıvısı veya kolin aCSF'yi buz üzerinde köpürmeye başlayın. 32 santigrat derecede 150 mililitre kolin aCSF ekleyin, karbogen ile. Kapalı bir gıda kutusuna bir bar mıknatısı ile 200 mililitrelik kristalize çanak yerleştirin ve çanak için aCSF 200 mililitre ekleyin.Kabın üzerine 3B baskılı bir arayüz dilimi tutucusu yerleştirin ve arayüz kaydırağı tutucunun örgüsünün üzerini kaplayan ince bir çözüm filmi kalana kadar, kristalize çanaktan fazla sıvıyı çıkarın. Gıda kutusunun altına birkaç milimetre aCSF ekleyin ve karbogen ile sıvı köpürmeye başlayın. Daha sonra, nemlendirilmiş, %95 oksijen, %5 karbondioksit açısından zengin arayüz odası oluşturmak için sürekli karbogenasyon sağlarken mühürlü kutuyu kapatın.Hasattan sonra, beyni aCSF'ye batırılmış filtre kağıdının üzerine yerleştirin ve tercih edilen dilimleme açısına göre ilgi bölgesini inceleyin. Koronal dilimler için, pozisyon ve tutkal beynin kaudal yüz 10 santimetre Petri çanak üzerine bir titreşimli dilimleyici kesme bloğu bağlı ve buz dolu büyük bir oda içinde titreşimli dilimleyici rezervuar odasında blok konumlandırmak. Buz gibi kolin aCSF ile çanak doldurun ve her dilim toplamak için bıçak her geçişsonra dört milimetre çapında tek kullanımlık transfer pipet kullanarak, 300 mikrometre kalınlığında beyin dilimleri elde etmek için dilimleyici kullanın.Her dilim elde edildikten sonra yaklaşık 10 dakika boyunca 32 derece santigrat kolin aCSF kurtarmak izin, lens temizleme kağıdı parçaları üzerine dilimleri aktarmadan önce, kolin aCSF bir damla ile tepesinde. Sonra aşırı kolin aCSF aspirate ve dilimler arayüz odasının örgü üzerine aktarmak için bir spatula kullanın, dilimleri en az 30 dakika boyunca bu ortamda kurtarmak için izin. Kaydı başlatmadan 30 dakika önce, doku dilimlerinin oksijenasyon unu ve canlılığını optimize etmek için peristaltik pompayı üst ve alt perfüzyonlu özelleştirilmiş bir kayıt odasına bağlayın ve tüm perfüzyon sistemini 50 mililitre ultrasaf su ile temizleyin.Temizleme döngüsünün sonunda, sürekli karbogenasyon altında bir cam kabın içinde 50 mililitre aCSF ile kayıt odasıperfüzyon u başlatın ve lens kağıdını çıkarmak için görüntülenecek ilk dilimi beher'e aktarmak için tek kullanımlık, geniş ağızlı transfer pipeti kullanın. Bölüm kabın dibine battığında, bölümü kayıt odasına aktarın ve perfüzyon akışının neden olduğu hareketi en aza indirmek için dilim tutucuyu dilime yerleştirin. Beş ila 10 x büyütme altında ilgi beyin bölgesihedef parlak alan aydınlatma kullanın.Ardından, görüntüleme alanının konumunu ayarlamak için 0,35x su daldırma lensi ile 25x'lik bir hedef kullanın. Floresan mikroglial hücreleri bulmak ve son konsantrasyonda ilgi bileşiği içeren 10 mikrolitre aCSF ile pipet dolum floresan aydınlatma kullanın. Uçta sıkışmış hava kabarcıklarını çıkarmak için hafifçe sallayarak ucu aşağı doğru çevirin ve doldurulmuş pipeti beş mililitrelik pozisyonda konumlandırılmış ve üç eksenli bir mikromanipülatöre monte edilmiş pistonlu beş mililitrelik şırıngaya bağlı bir pipet tutucuya monte edin.Pipet ucu dilimin yüzeyine hafifçe dokunana kadar, pipeti dilime doğru hafifçe indirin, hedefi aynı anda kontrol edin ve ayarlayın. Şimdi lazeri ayarlayın ve mikroskobu multifoton moduna geçirin. Odanın herhangi bir ışık kaynağından tarandığından emin olun ve descanned olmayan dedektörleri açın.Kazancı ayarlayın ve görüntüdeki pikselleri doymak için renk kodlu bir üst sınıra sahip bir arama tablosu kullanın. Daha sonra, en az 30 dakika toplam süre için kayıt başlayın, yavaş yavaş beş ila bir mililitre pozisyonda şırınga piston depresif, beş dakika sonra, beş saniye lik bir süre içinde, bölüme bileşik uygulamak için. Görüntü analizi için, ilk ilgi dosyasında ImageJ ile z-projeksiyon ve sürüklenme düzeltme gerçekleştirin.Daha sonra, buzlu modifiye dosyayı açın ve enjeksiyon sitesi üzerinde merkezli bir dairesel, 35 mikrometre çapında ilgi bölgesi çizin. İyi konumlandırılmış olduğundan emin olmak için filmi Yatırım Getirisi ile yeniden çalıştırın. Daha sonra, ilgi alanının zaman içinde ortalama yoğunluğunu ölçmek ve sonuçları xls dosyası olarak kaydetmek için ilgi yoğunluğu evrim eklentisi bölgesini kullanın.Bu protokol farklı bileşikler tarafından indüklenen tepkileri sağlar, ATP veya serotonin gibi, ölçülecek. ATP enjeksiyonu floresan bir artış ortaya çıkar rağmen, en ATP enjeksiyonları sonra, birkaç dakika sonra geri gelen doku bozulması nedeniyle floresan hemen, hafif bir azalma vardır. İlgi alanının büyüklüğü, çapın artırılması deneyler arasındaki değişkenliği azalttığından, algılanan yanıtın doğruluğunu ve büyüklüğünü azalttığı için niceliği de etkiler.Mikroglial yanıtın belirli bir zaman noktasında değerlendirilmesi, farklı bileşiklerin istatistiksel karşılaştırması veya perfüzyon çözeltisine eklenen spesifik antagonistlerin etkilerini test etmek için yararlı olabilir. Hareketliliği üç boyutlu olarak ölçmek için, analiz gereksinimlerine uyacak şekilde z adım aralığını ve edinmenin örnekleme oranını değiştirmeniz gerekebileceğini bilin.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

In vivo Imaging of the Mouse Spinal Cord Using Two-photon Microscopy

In vivo Imaging of the Mouse Spinal Cord Using Two-photon Microscopy

Fare Omurilik İki foton Mikroskop kullanarak in vivo Görüntüleme

In vivo imaging using two-photon microscopy 1 in mice that have been genetically engineered to express fluorescent proteins in specific cell types 2-3 has ...

Preparation of Acute Subventricular Zone Slices for Calcium Imaging

Kalsiyum Görüntüleme için akut subventricular dilimi Dilimleri hazırlanması

The subventricular zone (SVZ) is one of the two neurogenic zones in the postnatal brain. The SVZ contains densely packed cells, including neural ...

In Vivo Two-photon Imaging Of Experience-dependent Molecular Changes In Cortical Neurons

In Vivo Two-photon Imaging Of Experience-dependent Molecular Changes In Cortical Neurons

Kortikal Nöronlar In Vivo İki foton Of Görüntüleme Deneyimi bağımlı Moleküler Değişiklikler

The brain's ability to change in response to experience is essential for healthy brain function, and abnormalities in this process contribute to a variety ...

In vivo Postnatal Electroporation and Time-lapse Imaging of Neuroblast Migration in Mouse Acute Brain Slices

In vivo Postnatal Electroporation and Time-lapse Imaging of Neuroblast Migration in Mouse Acute Brain Slices

Fare Akut Beyin Dilimleri Neuroblast Göç vivo Doğum Sonrası Elektroporasyonla ve Time-lapse Görüntüleme

The subventricular zone (SVZ) is one of the main neurogenic niches in the postnatal brain. Here, neural progenitors proliferate and give rise to ...

Two-photon Imaging of Cellular Dynamics in the Mouse Spinal Cord

Fare Omurilik Hücresel Dynamics İki foton Görüntüleme

Two-photon (2P) microscopy is utilized to reveal cellular dynamics and interactions deep within living, intact tissues. Here, we present a method for ...

Recording Synaptic Plasticity in Acute Hippocampal Slices Maintained in a Small-volume Recycling-, Perfusion-, and Submersion-type Chamber System

Sinaptik plastisite akut Hipokampal dilimleri bir küçük hacimli geri dönüşüm-, perfüzyon- ve batma-tipi oda sistemi içinde tutulan kayıt

Even though experiments on brain slices have been in use since 1951, problems remain that reduce the probability of achieving a stable and successful ...

Two-photon Calcium Imaging in Neuronal Dendrites in Brain Slices

Nöronal Dendrites beyin dilimleri içinde iki fotonlu kalsiyum görüntüleme

Calcium (Ca2+) imaging is a powerful tool to investigate the spatiotemporal dynamics of intracellular Ca2+ signals in neuronal dendrites. Ca2+ ...

In Vivo Two-photon Imaging of Cortical Neurons in Neonatal Mice

In Vivo Two-photon Imaging of Cortical Neurons in Neonatal Mice

Vivo Yenidoğan farelerde kortikal nöronların iki fotonlu görüntüleme

Two-photon imaging is a powerful tool for the in vivo analysis of neuronal circuits in the mammalian brain. However, a limited number of in vivo imaging ...

Imaging of Intracellular ATP in Organotypic Tissue Slices of the Mouse Brain using the FRET-based Sensor ATeam1.03YEMK

Imaging of Intracellular ATP in Organotypic Tissue Slices of the Mouse Brain using the FRET-based Sensor ATeam1.03YEMK

FRET tabanlı Sensör ATeam1.03YEMK kullanılarak Fare Beyninin Organotipik Doku Dilimlerinde Hücre İçi ATP'nin Görüntülenmesi

Neuronal activity in the central nervous system (CNS) evokes a high demand on cellular energy provided by the breakdown of adenosine triphosphate (ATP). A ...

Transpupillary Two-Photon In Vivo Imaging of the Mouse Retina

Transpupiller İki Foton Fare Retinasının In vivo Görüntülenmesi

The retina transforms light signals from the environment into electrical signals that are propagated to the brain. Diseases of the retina are prevalent ...